CC BY
8©Коллектив авторов, 2014 Вопросы онкологии, 2014. Том 60, № 6
УДК 616.006.34-612.017.1
И.А. Балдуева, А.Б. Данилова, A.B. Новик, Ю.И. Комаров, Т.Л. Нехаева, С.А. Проценко, А.И. Семенова, Н.П. Пита, E.B. Воробейников, А.П. Карицкий, В.Ф. Климашевский, E.H. Имянитов,
А.М. Беляев
Дендритные клетки, активированные раково-тестикулярными антигенами (РТА+), в лечении метастатических сарком мягких тканей
ФБГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Представлены результаты клинического и иммунологического исследования активной специфической иммунотерапии РТА+-активированными аутологичными ДК больных метастатичекими формами сарком мягких тканей. В исследование было включено 9 больных, получавших лечение в НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова с 2012 по 2014 г. Технология приготовления противоопухолевой РТА+ ДК- вакцины заключается в диф-ференцировке ДК из адгезионной CD14+ мо-ноцитарной фракции периферической крови пациентов, нагрузке и специфической активации CD1a+ незрелых ДК путем добавления коктейля лизированных аутологичных и/или аллогенных опухолевых клеток, получении зрелых CD83+ вакцинных ДК.
Больные получали в/м циклофосфамид (ЦФ) в дозе 300 мг за три дня до введения РТА+ ДК-вакцины для элиминации регуля-торных Т-лимфоцитов и интерлейкин-1 бета (Беталейкин) 40000 МЕ в качестве иммунологического адъюванта. Проведено в среднем по 7 введений вакцины. Полный или частичный регресс у больных не зарегистрирован. Стабилизация опухолевого процесса после окончания курса вакцинотерапии наблюдалась у 5 (56%) больных, при этом стабилизация более 6 мес. была зарегистрирована у 4 (44%) пациентов, более 12 мес. — у 2 (22,2%) больных и у одного пациента эффект сохранялся более 17 мес. Прогрес-сирование заболевания было отмечено у 4 (44%) пациентов. Установлено, что вакцина не вызывает нежелательных явлений (НЯ) 3 и 4 ст.; НЯ 1 и 2 ст. наблюдались у 6/9 больных. Реакция ГЗТ зарегистрирована у 77,7% (7 из 9) первично иммунизированных пациентов. Иммунологический мониторинг РТА+ ДК -вакцинотерапии выявил тенденцию к увеличению абсолютного содержания активированных Т- хелперов и цитотоксиче-ских Т-лимфоцитов в периферической крови на фоне снижения содержания регуляторных Т-лимфоцитов.
Ключевые слова: дендритные клетки, иммунотерапия, вакцинотерапия, раково-тести-кулярные антигены, саркома мягких тканей
Введение
Таргетная иммунотерапия (моноклональные антитела, вакцины, клоны цитотоксических лимфоцитов), механизм действия которой направлен на прямое или опосредованное клетками иммунной системы разрушение опухоли, в последнее время становится одной из наиболее значимых в лечении распространенных форм злокачественных новообразований. Результаты клинических исследований позволяют надеяться на ее решающую роль в лечении онкологических больных, в том числе, пациентов с саркомами мягких тканей. В течение многих лет иммунотерапия сарком мягких тканей обсуждается в качестве одного из возможных способов лечения этих сложных гистотипически многообразных злокачественных новообразований [2, 14, 15]. Достижения иммунотерапии в лечении солидных опухолей не вызывают сомнения, и становится очевидной необходимость разработки новых более эффективных схем применения при саркомах мягких тканей.
В настоящее время получены вакцины для лечения синовиальных сарком, иммуногенность которых направлена на продукты мутированных генов, в том числе саркома-специфические гибридные SYT-SSX белки [8]. При саркоме Капоши используют иммуногенные эпитопы вируса Эпштейн-Барр, ассоциированные с вирусом герпеса человека 8-го типа (ННУ8) [9], применяют ганглиозиды, аутологичные опухолевые клетки с ^N-7 или GM-CSF в качестве иммунологических адъювантов [16]. Вместе с тем, до настоящего времени эти методы остаются недостаточно разработанными и не могут быть внедрены в клиническую практику в качестве стандартного лечения. Более того, есть ряд проблем, связанных с коррекцией противоопухолевого иммунного ответа, так как известно более 50 типов сарком мягких тканей, и
то, что может быть иммуногенным для одного типа, окажется ареактивным (толерантным) для другого. По тем же причинам трудно определить единые мишени для иммунотерапии этой «многоликой» опухоли.
Общепризнанный успех в иммунотерапии диссеминированной меланомы создает платформу для разработки терапевтических вакцин на основе раково-тестикулярных антигенов (РТА) для метастатических форм сарком мягких тканей, резистентных к стандартным методам лечения.
РТА представляют собой группу белков, которые считаются одними из наиболее перспективных в качестве мишеней для иммунотерапии. Начиная с 70-х годов, были описаны клоны Т-лимфоцитов, распознающие иммуно-генные эпитопы раково-тестикулярного антигена MAGE-1 (Melanoma antigen-1). Установлено, что РТА экспрессируются в ткани яичек, плаценте и отсутствуют в нормальных тканях. В настоящее время известно более 70 семейств генов РТА, многие из которых изучаются в качестве мишеней для вакцинотерапии и адоптивной клеточной терапии [5].
Вместе с тем иммуногенные по определению РТА, могут оказаться малоиммуногенными или неиммуногенными у некоторых групп пациентов. Это связано с тем, что эпитопы РТА могут быть ассоциированы с довольно редкими специфичностями главного комплекса гистосов-местимости человека (HLA — от англ. Human Leukocyte Antigen). В то же время, некоторые молекулы HLA I класса выявляются относительно часто, например, HLA *0201 обнаружен у половины лиц европейской популяции. Показано, что среди РТА, ассоциированных с HLA*0201 эпитопами, присутствуют иммуно-генные антигеныЮ^О-1, LAGE-1, PRAME, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A9, SSX-2. Их зкспрессия наиболее часто выявляется в синовиальной саркоме, липосаркоме, саркоме Юинга и др.
Недавно выявлены эпитопы NY-ESO-1 антигена, ассоциированные с аллелями DRB1, DRB4, DRB5 HLA II класса и распознаваемые CD4+ Т-лимфоцитами у пациентов с диссеминирован-ной меланомой кожи. Установлена центральная роль CD4+ Т-клеток в индукции и регуляции антиген-специфических CD8+ цитотоксических лимфоцитов (ЦТЛ) [17]. Менее известным остается значение CD4+ Т-клеток в реализации клеточного и гуморального иммунитета инициированного NY-ESO-1 антигеном у больных саркомами мягких тканей. можно предположить, что NY-ESO-1/CD4+ Т-лимфоциты модулируют направленность Th1 клеточного и Th2 гуморального иммунного ответа, определяя профиль про-
дукции цитокинов, в том числе, в опухолевом микроокружении. Кроме того, антиген-презен-тирующие ДК в опухолевом микроокружении могут повлиять на активность Th0 (наивные Т-хелперы) и реализацию вакциноопосредован-ного противоопухолевого иммунного ответа.
Актуальность данной проблемы обусловила необходимость проведения клинического исследования специфической иммунотерапии на основе РТА+ активированных ДК у больных диссеминированными саркомами мягких тканей.
Материалы и методы
В исследование включено 9 больных с морфологически верифицированным диагнозом одного из подтипов саркомы мягких тканей (синовиальная саркома, злокачественная фиброзная гистиоцитома, лейомиосаркома, внескелетная хондросаркома, злокачественная шванома, рабдомиосар-кома), получавших лечение в НИИ онкологии им. H.H. Петрова с 2012 по 2014 г. Критериями включения были возраст старше 18 лет, наличие саркомы мягких тканей с экспрессией MAGE-A3 и/или NY-ESO-1 в опухоли или их отсутствие, измеряемые или неизмеряемые опухолевые очаги, проведение химиотерапии по поводу диссеминиро-ванного заболевания. Клиническая характеристика больных представлена в табл. 1.
Таблица 1
Клиническая характеристика больных саркомами мягких тканей, получивших ДК-вакцинотерапию
Характеристика Количество пациентов (n=9)
Средний возраст, годы 49,6±12,43 (от 23 до 64)
Пол:
мужчины 2 (22%)
женщины 7 (78%)
Локализация первичного
очага: 3 (33%)
конечность 1 (11%)
туловище 5 (55%)
внутренние органы
Местастазы в легких:
есть 8 (88%)
нет 1 (11%)
Характеристика опухоли: 2 (22%)
лейомиосаркома
злокачественная фиброзная 1 (11,%)
гистиоцитома 2 (22%)
синовиальная саркома 1 (11%)
злокачественная шваннома 1 (11%)
эмбриональная рабдомиосар- 1 (11%)
кома 1 (11%)
эпителиоидная саркома
Предшествующее лечение
хирургическое 9 (100%)
химиотерапия 9 (100%)
А 1 (11%)
АР 1 (11%)
CyVADIC 3 (33%)
AI 4 (44%)
IE 3 (33%)
MAID 3 (33%)
СМ 2 (22%)
GT 1 (11%)
лучевая терапия 2 (22%)
Количество линий предшеству-
ющей терапии:
1 4 (44%)
2 4 (44%)
3 1 (11%)
А — монотерапия доксорубицином; АР — доксорубицин с цисплатином, CyVADIC — циклофосфамид, доксорубицин, дакарбазин, AI — доксорубицин и ифосфамид, IE — ифосфамид и этопозид, MAID — ифосфамид, доксорубицин, дакарбазин, СМ — циклофосфамид с метотрексатом в ме-трономном режиме, GT — гемцитабин и паклитаксел
Все больные, включенные в исследование, получили хирургическое лечение. Трем больным проводились лапарото-мия и удаление опухоли, 5 пациентов получили лечение в виде иссечения мягких тканей и 1 больному выполнена ампутация нижней конечности. Двум больным в адъювантном режиме была проведена лучевая терапия на область послеоперационного рубца и ложа опухоли в суммарной дозе 50 Гр. До начала ДК-вакцинотерапии все пациенты получили стандартное лекарственное лечение. Первая линия химиотерапии была проведена 4 больным, вторая линия — 4. Один больной получил 3 линии химиотерапии до начала лечения. Перечень применявшихся лечебных режимов представлен в табл.1.
Молекулярно-генетический анализ уровня экспрессии РТА NY-ESO-1 и MAGE-A3 был выполнен всем больным. Источником мРНК служили образцы опухолевой ткани. Выделение мРНК проводили, как описано ранее [12]. Последовательности кДНК гена-мишени и гена-рефери (SDHA) амплифицировали при помощи специфических праймеров в присутствии TaqMan-зондов или красителя SYBR Green. ПЦР в режиме реального времени осуществляли на оборудовании BioRad CFX96 Real-time PCR Detection System в лаборатории молекулярной онкологии НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова (рук. проф. Е.Н. Имянитов). Для оценки уровня экспрессии вычисляли соотношение относительных количеств копий кДНК гена-мишени и гена-рефери; данные значения определяли при помощи построения стандартных кривых.
Технология приготовления вакцины на основе аутоло-гичных ДК, нагруженных РТА+ опухолевым лизатом, заключалась в дифференцировке ДК из адгезионной моноци-тарной фракции (CD14+) периферической крови больных саркомами мягких тканей в условиях 37°С, 5% CO2 и 98% влажности в адгезионных культуральных флаконах (Sarstedt, Германия), сбалансированной бессывороточной среде «Cell-Gro DC» (CellGenix, Германия). Ростовые факторы и факторы дифференцировки — GM-CSF (72 нг/мл) и IL-4 (20 нг/мл) (CellGenix, Германия) вносили на 1-й, 3-й и 5-й дни культивирования.
Для нагрузки и специфической активации незрелых ДК (CD14-CD1a+) на 7-й день добавляли коктейль лизиро-ванных аутологичных и/или аллогенных опухолевых клеток, экспрессирующих иммуногенные РТА+ (NY-ESO-1+, MAGE+, HAGE+, GAGE+) в соотношении 1 (ДК) к 3 (лизи-рованные опухолевые клетки), ростовые факторы: GM-SCF (72 нг/мл), IL-4 (20 нг/мл) и TNF-a (20 нг/мл). Через 48 ч ДК (CD1a-CD83+) собирали, осаждали центрифугированием, отмывали в 10 мл 0,9% раствора хлорида натрия, содержащего альбумин человека (конечная концентрация 2%), переносили в стерильный флакон и доставляли в клиническое отделение для введения больному [4].
Вакцину вводили внутрикожно паравертебрально в дозе 5-15 млн. клеток на одну инъекцию в сочетании с иммунологическим адъювантом (Беталейкин, РФ) 40000 МЕ с интервалом в 2 (1-2 вакцинации), 3 (3-4 вакцинации) и 4 (5-12 вакцинации) недели в 3 точки на расстоянии 3 см друг от друга, в 4-ю контрольную точку вводили антигенный опухолевый материал (опухолевый лизат). Перед каждой вакцинацией за 3 дня до введения вакцины пациент получал циклофосфамид (ЦФ) внутримышечно в дозе 300 мг для элиминации регуляторных Т-лимфоцитов.
Через 24 и 48 ч измеряли реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) в ответ на введение ДК-вакцины и РТА+ опухолевый лизат.
Методом проточной цитометрии на приборе Facs Calibur (BD, США) оценивали количественное содержание основных популяций и субпопуляций лимфоцитов в периферической крови больных: T-лимфоцитов CD3+CD19-, В-лимфоцитов CD3-CD19+, Т-хелперов CD3+CD4+, активированных Т-хелперов CD3+CD4+HLADR+, CD3+CD4+CD25+, цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) CD3+CD8+, активированных ЦТЛ CD3+CD8+HLADR+, двойных положи-
тельных Т-лимфоцитов CD3+CD4+CD8+, NK-клеток CD3-CD16+CD56+, NKT-клеток CD3+CD16+CD56+, регуляторных T-лимфоцитов CD4+CD25brightCD127low.
Статистический анализ полученных данных проводили с использованием систем статистической обработки IBM SPSS Statistics v. 21. Для анализа использованы методы описательной статистики.
Результаты и обсуждение
Ниже представлены результаты клинической и иммунологической оценки эффективности активной специфической иммунотерапии на основе РТА+-активированных аутологичных ДК для лечения больных диссеминированными формами сарком мягких тканей. Индивидуальная характеристика больных, получавших ДК-вакцинотерапию, приведена в табл. 2.
Нежелательные явления (НЯ) 1-2 ст. наблюдали у 2/3 больных в виде лихорадки 1 ст. (4/9 больных, 44%) и гриппоподобного синдрома 1 ст. у 4 больных (субфебрильная температура, ознобы, артралгии и миалгии). Эти НЯ не требовали прерывания лечения или применения лекарственных средств для их купирования. изменения риска развития НЯ в процессе терапии выявлено не было.
Полных и частичных регрессов зафиксировано не было, стабилизацию заболевания (SD) наблюдали у 5 (55,6%) больных. При этом стабилизация более 6 мес. была зарегистрирована у 4 (44,4%) пациентов, стабилизация более 12 мес. — у 2 (22,2%) больных, и у одного больного эффект сохранялся 17 мес., после чего отмечено крайне медленное прогрессирование заболевания, позволившее продолжить лечение и выполнить полное удаление опухолевых очагов хирургическим путем. Дальнейшее прогресси-рование заболевания (PD) через 1-2 мес. было отмечено у 4 (44,4%) больных.
Необходимо отметить, что другие исследования, посвященные изучению клинической эффективности вакцин на основе ДК, нагруженных лизатом опухолевых клеток или различными пептидами, для лечения сарком, немногочисленны и демонстрируют неоднозначные результаты. так, в работе J.D. Geiger и соавт. [10], по изучению эффектов применения ДК-вакцин, нагруженных аутологичным опухолевым лизатом, был зарегистрирован полный регресс метастатических очагов фибросаркомы в легких у одного пациента из десяти. В исследовании R.Dagher и соавт. из 16 больных с распространенными формами сарком мягких тканей, получивших вакцины на основе ДК, нагруженных опухолеспецифически-ми пептидами, у четырех пациентов наблюдали стабилизацию заболевания [6]. При использовании вакцин на основе ДК, активированных тремя синтетическими пептидами, которые являются фрагментами опухолеспецифических белков
синовиальной саркомы и саркомы Юинга, для лечения 5 пациентов был достигнут полный регресс у одного больного саркомой Юинга с продолжительным эффектом более 77 мес. Еще у двух пациентов зарегистрировали непродолжительную стабилизацию заболевания [19].
В нашем исследовании все больные с метастазами, затрагивающими жизненно важные органы, после хирургического лечения получили одну (4/9, 44%) или более (5/9, 56%) линий лекарственного лечения. Таким образом, отсутствие полного и частичного регресса в нашем исследовании может быть связано с рядом причин: распространённостью опухолевого процесса, интенсивной предшествующей терапией и резистентным характером опухолей у больных.
У 7 из 9 больных (77,7% ) зарегистрирована реакция ГЗТ через 24 ч уже после первого введения ДК-вакцины, в том числе в контрольной точке, куда вводили РТА+-опухолевый лизат. В процессе ДК-вакцинотерапии наблюдали увеличение размеров реакции ГЗТ практически у всех пациентов (рис.1). В ряде исследований различных типов вакцин для лечения сарком мягких тканей авторы оценивали положительную динамику реакции ГЗТ в процессе вакцинотерапии как демонстрацию иммунного ответа in vivo. В частности, при введении вакцин на основе ау-тологичных опухолевых клеток с адъювантами (GM-CSF и INF-y) медиана общей выживаемости больных с хорошо выраженной реакцией ГЗТ со-
ставила 16,6 мес. по сравнению с больными, не ответившими на лечение (8,2 мес.) [7]. Вместе с тем, описаны случаи отсутствия ГЗТ у пациентов, получавших неклеточные вакцины на основе пептидов, несмотря на обнаружение специфически активированных ЦТЛ в периферической крови [11, 13]. Таким образом, реакция ГЗТ в процессе вакцинотерапии является важным, но недостаточным условием успешного лечения [3].
При определении экспрессии РТА NY-ESO-1 и MAGE-A3 в опухоли у двух больных она была зарегистрирована для обоих антигенов, у четырех пациентов экспрессировался один из изучаемых антигенов, в образцах опухолевой ткани двух больных мы не обнаружили экспрессии. Корреляции между экспрессией NY-ESO-1 и MAGE A3 и эффектом проводимой терапии не наблюдали. Выбор исследуемых рТА был продиктован данными литературы о достаточно частой встречаемости этих белков в клетках солидных опухолей. Отсутствие изучаемой корреляции связано, вероятно, с малой численностью наблюдений и в то же время указывает на необходимость более полного и комплексного обследования больных на предмет экспрессии РТА. Установлено, что саркомы мягких тканей способны экспрессировать широкий спектр рТА, и, например, в клетках синовиальной саркомы и лейомиосаркомы чаще встречается MAGE A4 и SSX-2, а клетки хондросарком чаще экспресси-руют LAGE-1 [18].
Таблица 2
Индивидуальная характеристика больных саркомами мягких тканей, получавших ДК-вакцину
Больной Диагноз Предшествующее лечение Локализация метастазов Экспрессия Кол-во вакцинаций Ответ на вакцинотерапию
№ Возраст, пол т'-ЕвОИ MAGE A3 ГЗТ Клинический эффект Время до прогресси- рования
1 Ш., 43, Ж Злокачественная фиброзная гистиоцитома ХЛ, ХТ Легкие, за-брюшинные л/у Есть Есть 1 + PD 1 мес.
2 М., 46, Ж Синовиальная саркома ХЛ, ХТ Легкие, за-брюшинные л/у, мягкие ткани Есть Нет 2 + PD 1 мес.
3 К., 51, Ж Злокачественная шваннома ХЛ, ХТ ЛТ Легкие, л/у средостения Есть Нет 4 + PD 2 мес.
4 Н., 64, Ж Лейомиосар-кома ХЛ, ХТ л/у малого таза, локальный рецидив Нет Есть 6 + SD 5 мес.
5 К., 23, Ж Синовиальная саркома ХЛ, ХТ ЛТ Легкие Есть Нет 16 + SD 15 мес.
6 Г., 50, М Хондросаркома ХЛ, ХТ Легкие Нет Нет 18 + SD 17 мес.
7 Х., 62, Ж Лейомиосар-кома ХЛ, ХТ Легкие - - 7 + SD 9 мес.
8 Е., 60, М Эмбриональная рабдомиосар- кома ХЛ, ХТ ЛТ Легкие, л/у средостения Есть Есть 3 + PD 2 мес.
9 Т., 48, Ж Эпителиоидная саркома ХЛ, ХТ Легкие, за-брюшинные л/у, мягкие ткани Нет Нет 10 + SD 11 мес.
ЛТ - лучевая терапия, ХЛ - хирургическое лечение, ХТ - химиотерапия, PD - прогрессирование заболевания, SD - стабилизация заболевания
Рис.1 Динамика размеров реакции ГЗТ больного Г., 50 л., в процессе лечения ДК-вакциной
Рис.2 Динамика абсолютного содержания Т-хелперов и активированных Т-хелперов (HI_A-DR+) в периферической крови больных саркомами мягких тканей с различным клиническим эффектом в процессе ДК-вакцинотерапии
Рис.3 Динамика абсолютного содержания цитотоксических Т-лимфоцитов и активированных цитотоксических Т-лимфоцитов (H_A-DR+) в периферической крови больных саркомами мягких тканей с различным клиническим эффектом в процессе ДК-вакцинотерапии
При анализе результатов лабораторного иммунологического обследования наблюдали различную динамику иммунологических показателей у больных с SD и PD (табл.3). Введение изучаемой дозы ЦФ было достаточным для поддержания малой численности субпопуляции регуляторных Т-лимфоцитов (CD4+CD25bпghtCD127low), не превышающей референтных значений у больных с SD. В то же время, у пациентов с PD количество этих лимфоцитов увеличивалось в ходе лечения, и у одного больного превысило референтные показатели в процентном соотношении. Кроме того, больных с SD характеризовала тенденция к увеличению в периферической крови абсолютного содержания Т-лимфоцитов и NK-клеток, а так же к сохранению количества В-лимфоцитов в пределах нормы, в то время как у больных с PD наблюдали снижение количества Т- и В-лимфоцитов в процессе лечения. Интересно, что пациенты с SD демонстрировали волнообразную динамику содержания Т-хелперов и ЦТЛ в процессе ДК-вакцинотерапии, но даже при уменьшении количества этих клеток в периферической крови нарастала их активность, о чем можно судить по увеличению абсолютного содержания лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности антигены HLA-DR (рис. 2 и 3).
Заслуживает внимания недавно описанный случай успешного применения комбинации ДК-вакцины, активированной аутологичным опухолевым лизатом, и цитокин-индуцированных киллеров для лечения больного недифференцированной эмбриональной саркомой печени, когда в процессе вакцинотерапии осуществляли мониторинг состояния клеточного иммунитета и обнаружили также значительное увеличение количества лимфоцитов с экспрессией CD3+, CD4+, CD8+ антигенов [20].
В нашем исследовании наблюдалось сниженное содержание клеток с иммунофенотипом CD3+CD16+CD56+ у больных с PD и сохранение этого показателя в пределах референсных значений у больных с положительным клиническим эффектом. Учитывая, что лимфоциты с данными поверхностными антигенами играют важную роль в индукции противоопухолевого иммунного ответа за счет продукции 1ЕК-у, активирующего NK-клетки, ЦТЛ и макрофаги, можно рассматривать тенденцию к снижению численности этой субпопуляции клеток как неблагоприятную [1]. У четырех больных из пяти с SD наблюдали низкий иммунорегуляторный индекс (CD4/CD8) за счет численного преобладания субпопуляции ЦТЛ, в то время как у двух больных из трех с PD имела место противоположная тенденция. Таким образом, обнаруживается связь между динамикой показателей клеточного иммунитета больных саркомами мягких тканей, определяемых методом проточной цито-метрии, и признаками клинической эффективности РТА+ ДК-иммунотерапии.
Заключение
результаты, полученные при использовании РТА+-активированных ДК для лечения больных диссеминированными формами сарком мягких тканей, указывают на перспективность этого подхода для терапии пациентов с исчерпанными возможностями стандартного лечения, в частности, в случае химиорезистентных форм опухоли. Существует необходимость совершенствовать критерии выбора тактики лечения пациентов при назначении специфической иммунотерапии, основанные на гистологической, молекулярно-генетической, иммунологической характеристике
Таблица 3
Анализ субпопуляций лимфоцитов периферической крови больных саркомами мягких тканей в процессе ДК-вакцинотерапии
№ Измеряемый показатель (х109 кл/л) SD (п=5) PD (п=3)
1 2 3 4 7 1 2 3 4
1 CD3+CD19- 1,61±0,17 1,62±0,30 1,46±0,22 1,73±0,11 1,71±0,13 1,07±0,16 О,88±О,О7 1,04±0,58 О,37±О,О5
2 CD3-CD19+ 0,13±0,02 0,18±0,06 0,18±0,09 0,19±0,09 0,19±0,08 0,11±0,04 0,18±0,03 О,ОО2 О,ОО2
3 CD3+CD4+ 0,79±0,06 0,85±0,09 0,72±0,13 0,80±0,10 0,86±0,06 О,49±О,12 О,48±О,12 0,80±0,09 О,11±О,О2
4 CD3+CD4+HLADR+ 0,054±0,01 0,057±0,01 0,036±0,006 0,069±0,021 0,085±0,018 0,049±0,003 0,015 0,041±0,016 0,012
5 CD4+CD25+ 0,26±0,06 0,31±0,09 0,17±0,03 0,21±0,03 0,32±0,04 0,07±0,01 О,13±О,О6 О,12±О,О9 0,03
6 CD3+CD8+ 0,76±0,13 0,76±0,23 0,63±0,13 0,83±0,15 0,78±0,11 0,52±0,02 О,35±О,О2 0,46±0,04 О,1О
7 CD3+CD8+HLADR+ 0,06±0,02 0,07±0,02 0,04±0,01 0,20±0,05 0,17±0,01 0,16±0,01 О,ОО4 0,064±0,022 0,021
8 CD3+CD4+CD8+ 0,028±0,009 0,032±0,008 0,027±0,003 0,032±0,005 0,033±0,004 О,О11±О,ОО1 О,О11±О, ОО5 0,015±0,001 О,ОО3
9 CD3-CD16+CD56+ 0,38±0,09 0,31±0,12 0,19±0,04 0,24±0,03 0,33±0,12 0,25±0,07 0,16±0,01 0,22±0,04 0,07
10 CD3+CD16+CD56+ 0,11±0,03 0,11±0,05 0,11±0,04 0,12±0,05 0,10±0,05 О,О5±О,ОО3 О,О2±О,ОО6 О,О6±О,ОО2 О,О3
11 CD4+CD25Ьгi0htCD127low 0,044±0,003 0,057±0,010 0,044±0,006 0,05±0,004 0,052±0,001 0,046±0,009 0,053±0,009 0,067±0,003 0,087
000-повышенный показатель, ООО-пониженный показатель, 000-показатель в пределах референсных значений
первичной опухоли и ее метастазов. Изучение иммунологических особенностей отдельных подтипов сарком мягких тканей и последовательная разработка новых подходов иммунотерапии позволит повысить эффективность лечения этой сложной, гистотипически многообразной группы злокачественных новообразований.
ЛИТЕРАТУРА
1. Акинфиева О.В., Бубнова Л.М., Бессмельцев С.С. NKT-клетки: характерные свойства и функциональная значимость для регуляции иммунного ответа // Онко-гематология. — 2010. — № 4. — Р. 39-48
2. Барышников А.Ю., Демидов Л.В., Михайлова И.Н., Пе-тенко Н.Н. Вакцинотерапия рака: от эксперимента к клинике // Вестн. Росс. Акад. Мед. наук. — 2007. — № 10. — C. 46-48.
3. Михайлова И.Н., Иванов П.В., Петенко Н.Н. Внутри-кожная клеточная реакция на фоне вакцинотерапии меланомы кожи // Росс. биотерап. журнал. — 2010. — № 1. — С. 63-67.
4. Нехаева Т.Л. Оптимизация аутологичных дендритно-клеточных вакцин для лечения больных злокачественными новообразованиями // Сиб. онкол. журнал. — 2013. — № 3 (57). — С. 52—56.
5. Caballero O.L., Chen YT. Cancer/testis (CT) antigens: potential targets for immunotherapy // Cancer Sci. — 2009. — Vol. 100 (11). — P. 2014-2021.
6. Dagher R., Long L.M., Read E.J. et al. Pilot trial of tumor-specific peptide vaccination and continuous infusion inter-leukin-2 in patients with recurrent Ewing sarcoma and alveolar rhabdomyosarcoma: an inter-institute NIH study // Med. Pediatric Oncol. — 2002. — Vol. 38 (3). — P. 158-164.
7. Dillman R., Barth N., Selvan S., et al. Phase I/II trial of au-tologous tumor cell line-derived vaccines for recurrent or metastatic sarcomas // Cancer Biother. Radiopharm. —
2004. — Vol. 19 (5). — P. 581-588.
8. Emori M., Tsukahara T., Kawaguchi S., Wada T. Peptide vaccination therapy for bone and soft tissue sarcoma // Nihon Rinsho. — 2011. — Vol. 69 (9). — P. 1670-1673.
9. Ferry J.A., Sohani A.R., Longtine J.A. et al. HHV8-positive, EBV-positive Hodgkin lymphoma-like large B-cell lymphoma and HHV8-positive intravascular large B-cell lymphoma // Mod. Pathol. — 2009. — Vol. 22 (5). — P. 618-626.
10. Geiger J.D., Hutchinson R.J., Hohenkirk L.F. et al. Vaccination of pediatric solid tumor patients with tumor lysate-pulsed dendritic cells can expand specific T cells and mediate tumor regression // Cancer Research. — 2001. — Vol .61 (23). — P. 8513-8519.
11. Ida K., Kawaguchi S., Sato Y et al. Crisscross CTL induction by SYT-SSX junction peptide and its HLA-A2402 anchor substitute // J.Immunol. — 2004. — Vol. 173(2). — P. 1436-1443.
12. Imyanitov E.N., Suspitsin E.N., Buslov K.G. et al. Isolation of nucleic acids from paraffin-embedded archival tissues and other difficult sources / in Kieleczawa J. (ed): The DNA Book: Protocols and Procedures for the Modern Molecular Biology Laboratory // Sudbury, MA, Jones and Bartlett Publishers, 2006. — P. 85-97.
13. Kawaguchi S., Wada T., Ida K. et al. Phase I vaccination trial of SYT-SSX junction peptide in patients with disseminated synovial sarcoma // J. Translational Med. —
2005. — Vol. 3. — P. 1.
14. Maki R.G. Soft tissue sarcoma as a model disease to examine cancer immunotherapy // Curr. Opin. Oncol. — 2001. — Vol. 13 (4). — P. 270-274.
15. Maki R.G. Future directions for immunotherapeutic intervention against sarcomas // Curr. Opin. Oncol. — 2006. — Vol. 18 (4). — P. 363-368.
16. Pollack S.M., Loggers E.T., Rodler E.T. et al. Immune-based therapies for sarcoma // Sarcoma. — 2011. — Vol. 2011. — P. 438940.
17. Robbins P.F., Morgan R.A., Feldman S.A. et al. Tumor regression in patients with metastatic synovial cell sarcoma and melanoma using genetically engineered lymphocytes reactive with NY-ESO-1 // J. Clin. Oncol. — 2011. — Vol. 1; 29 (7). — P. 917-924.
18. Skubitz K.M., Pambuccian S., Carlos J.C., Skubitz A.P.N. Identification of heterogeneity among soft tissue sarcomas by gene expression profiles from different tumors // J. Translational Medicine. — 2008. — Vol. 6. — P. 23.
19. Suminoe A., Matsuzaki A., Hattori H. et al. Immunotherapy with autologous dendritic cells and tumor antigens for children with refractory malignant solid tumors // Pediatric Transplantation. — 2009. — Vol. 13 (6). — P. 746-753.
20. Xie S., Wu X., Zhang G. et al. Remarkable regression of a lung recurrence from an undifferentiated embryonal sarcoma of the liver treated with a DC vaccine combined with immune cells: A case report // Cell Immunol.- 2014. — Vol. 290 (2). — P. 185-189.
Поступила в редакцию 30.10. 2014 г.
I.A.Baldueva, A.B.Danilova, A.V.Novik, Yu.I.Komarov, T.L.Nekhaeva, S.A.Protsenko, A.I.Semenova, N.P.Pipia,
E.VVorobeichikov, A.P.Karitsky, V.F.Klimashevsky, E.N.Imyanitov, A.M.Belyaev
Dendritic cells activated by cancer-testis antigens (CTA+) in treatment of metastatic soft tissue sarcomas
N.N.Petrov Research Institute of Oncology St. Petersburg
Results of clinical and immunological assessment of autologous dendritic cells (DC) primed with cancer-testis antigens (CTA+DC) are presented in this paper. Nine patients were treated from 2012 to 2014. CTA+DC were obtained from adhesive CD14+ monocytes fraction from peripheral blood of patients. Tumor cell lysate of autologous and/or allogeneic tumor cells expressing immunogenic CTA were used for immature CD1a+ DC load. Mature CD83+ DC were injected intradermal 3 days after IM injection of 300 mg of cyclophosphamide for T-regu-latory cells depletion. Interleukin-lbeta (Betaleukin) was used as immunologic adjuvant (40000 ME). Nine patients received from 1 to 24 injections of CTA+DC (average - 7) and were evaluable for toxicity and efficacy (bot clinical and immunologic). No objective responses were seen. Stable disease was obtained in 5 (56%) patients. In 4 patients (44%) disease was stable >6 month, in 2 (22%) patients - >12 month. One patient was stable for 17 month. Neither serious adverse events nor grade 3 or 4 adverse events (AE) were registered. Grade 1 or 2 AE were seen in 6/9 patients. No therapy for this AE was needed. DHT reactions was registered in 7/9 patients (78%). Tendency for increasing number of activated T-cells and decreasing of regulatory T-cells was seen in peripheral blood during patients' vaccination.
Key words: dendritic cells, immunotherapy, vaccinothera-py, cancer-testis antigens, soft tissue sarcoma
