CC BY
20
Научни трудове на Съюза на учените в България-Пловдив, серия Г.Медицина, фармация и дентална медицина т. XVIII. ISSN 1311-9427. Научна сесия „Медицина и дентална медицина", 5 - 6 ноември 2015. Scientific works of the Union of Scientists in Bulgaria-Plovdiv, series G. Medicine, Pharmacy and Dental medicine, Vol. XVIII, ISSN 1311-9427 Medicine and Dental medicine Session, 5-6 November 2015.
CAUSAL EVALUATION OF THE RELATIONSHIP BETWEEN T-LYM-PHOCYTE SUBPOPULATIONS AND DIASTOLIC BLOOD PRESSURE IN PREGNANT WOMEN WITH PRE-ECLAMPSIA ELENA DIMITRAKOVA, MD, PhD DEPARTMENT OF OBSTETRICS AND GYNECOLOGY, MEDICAL
UNIVERSTIY, PLOVDIV
ABSTRACT
THE OBJECTIVE of this work was to evaluate causal relationships between T-lymphocyte subpopulations and diastolic blood pressure (DBP) in 40 pregnant women with severe preeclampsia and 30 women with normal pregancy.
METHODS: Immunophenotyping of lymphocytes in peripheral blood was performed using laser flowcytometry with Epics XL-MCL, Coulter, USA. All measurements were done at the Central Clinical Lab of the Medical University, Plovdiv. BP measurement and severity were evaluated based on the 2002 ACOC Criteria.
RESULTS: T-lymphocyte subpopulation changes were observed only in women with preeclampsia. The hypertension syndrome manifested at the very first day of disease in women with the disease after day 21. BP was higher than 160/110 mmHg and mean ABP was 141,651 mmHg. Those women had consistently high BP at all time-points during the day. There was a significant correlation between DBP and immunocompetent and T-helper lymphocyte subpopulations. Significant correlation was present between the immunocompetent subpopulation TCD3+ (r=0,550), the T-helper subpopulations CD3+ CD4+ (r=0,590), the Th/Ts ratio CD4: CD8 % (r=0,570) and DBP (Pd mmHg).
CONCLUSION: T-Lymphocyte subpopulations are a major factor of the cellular immune response in pre-eclampsia. Elevated BP is the most important clinical symptom which occurs very early and is the cause of all the major complications in the mother and the fetus. The correlation we demonstrated between some T-lymphocyte subpopulations and the major clinical syndrome of DBP shows their inter-relation and their active participation in the mechanisms of pre-eclampsia. KEY WORDS: pre-eclampsia, T-lymphocyte subpopulations, diastolic blood presurre (DBP)
ПРИЧИННО-СЛЕДСТВЕНИ ЗАВИСИМОСТИ МЕЖДУ НЯКОИ Т-ЛИМФОЦИТНИ СУБПОПУЛАЦИИ И ДИАСТОЛНОТО АРТЕРИАЛНО НАЛЯГАНЕ ПРИ БРЕМЕННИ ЖЕНИ С ПРЕЕКЛАМПСИЯ Д-Р ЕЛЕНА ДИМИТРАКОВА КЛИНИКА ПО АКУШЕРСТВО УМБАЛ "СВЕТИ ГЕОРГИ", МЕДИЦИНСКИ УНИВЕРСИТЕТ
ПЛОВДИВ
Резюме.
Цел на проучането е да се изследват причинно-следствените зависимости между някои Т-лимфоцитни субпопулации и диастолното артериално налягане при 40 бременни с тежка прееклампсия и 30 с нормално протичаща бременност.
Методи. Имунофенотипизирането на лимфоцитите в периферната кръв е извършено чрез лазерна флоуцитометрия с флоуцитометър Epics XL-MCL, Coulter, USA. Изследванията са правени в ЦИКЛ на МУ-Пловдив. Определянето на артериалното налягане и дифенирането на хипертонията на бремеността се извършваха по правилата на Американския колеж по акушерство и гинекология (AGOGA) 2002 година.
Резултати. Установиха се промени в Т-лимфоцитни субпопулации само при бременни-те с прееклампсия в сравнение с здравите бременни жени. При всички бременни с прееклампсия хипертоничният синдром е проявен още в първия ден от началото на заболяването,,след 20-та гестационна седмица. При всички изследвани артериалното налягане беше > 160/110 mmHg^ средното артериално налягане - 141,651 mmHg. Те имаха постоянно високо кръвно налягане,през всички часове на денонощието. Коре-лационната връзка между диастолното артериално налягане с имонокомпетентните Т-лимфоцити и хелперната субпопулация е значима. Особено значима права корелация е установена между имунокомпетентните T-лимфоцити - TCD3+ (r=0,550), хелперната субпопулация -CD3+ CD4+ (r=0,590 и съотношението между хелпери и супресори - CD4: CD8 % (r=0,570) със стойностите на диастолното артериално налягане (Pd mmHg).
Заключение. Т-лимфоцитите и техните субпопулации са главен фактор в клетъчно-медии-рания имунен отговор при прееклампсия.Повишеното артериално налягане е безспорно най-важния клиничен симптом на прееклампсията,появява се най-рано,причина е за всички сериозни усложнения у майката и детето. Установената от нас корелация между някои от Т-лимфоцитните субпопулации и основния клиничен синдром диастолното арте-риално налягане показва тяхнота взаимна връзка и активно участие в интимния еханизъм на прееклампсита
Ключови думи: прееклампсия,Т-лимфоцитни субпопулации,диастолно артериално наля-гане
Посавихме за цел в настоящето проучане да се изследват причинно-следствените зависимости между някои Т-лимфоцитни субпопулации и диастолното артериално налягане при 40 бременни с тежка прееклампсия и 30 с нормално протичаща бременност.
Изследвахме лимфоцитните популации и субпопулации в кръвта на 40 бременни с тежка прееклампсия, като получените резултати съпоставихме с тези на контролна група от 30 бременни с нормална бременност и сходно разпределение по възраст между двете групи. Имунофенотипизирането на лимфоцитите в периферната кръв беше извършено с лазерна флоуцитометрия с флоуцитометър Epics XL-MCL,Coulter,USA, в ЦИКЛ на МУ Пловдив[3]/. Определянето на артериалното налягане и дифенирането на хипертонията на бремеността се извършваха по правилата на Американския колеж по акушерство и гинекология (AGOGA) 2002 година[7].
Изследвани са лимфоцити /общо/, CD19+ /В-лимфоцити/, CD2+ /тотални Т-лимфо-цити/,CD3+/имунокомпетентниТ-клетки/,CD3+CD4+/хелпери/, CD3+CD8+/супресорцито-
токсичнилимфоцити/,CD3+:CD8+ratю/,CD4+CD45RA+/супресор-индюсерна субпопула-ция на хелперни Т-лимфоцити/ - таблица 1.
Таблица1. Лимфоцитни популации и субпопулации ( X ± Sx.
x )при жени с нормална
бременност и прееклампсия.
Пациенти lym- Нормална бременност Прееклампсия u Р
phocytes
Lymphocytes n-1939±61.18 n-2369±137.13 2.86 <0.001
- n/брой/, % %-24.68±1.97 %-30.158±1.96 4.93 <0.001
CD19+ n-163.62±18.0 n-216.50±21.06 1.52 <0.02
%-8.28±0.77 %-8.70±0.72 0.46 >0.05
CD2+ n-1597.7±78.2 n-2380.5±142.5 5.17 <0.001
%-82.52±0.98 %-83.71±1.22 0.68 >0.05
CD3+ n-1457.6±72.1 n-2306±185.86 5.20 <0.05
%-75.38±1.11 %-75.60±2.01 0.10 >0.05
CD3+CD4+ n-795.0±32.7 n-1283.67±49.8 8.19 <0.001
%-42.08±1.39 %-48.35±2.32 2.35 <0.05
CD3+CD8+ n-536.64±41.9 n-670.58±91.09 1.48 >0.05
%-27.35±1.15 %-23.19±1.32 2.38 <0.05
CD4+CD45 n-259.86±25.7 n-529.9±72.9 4.39 <0.001
RA+ %-13.78±1.25 %-18.45±2.03 2.01 <0.05
CD4+ : CD8+ n-1.57±0.09 n-2.25±0.30 2.29 <0.05
%-1.61±0.08 %-2.30±0.29 2.97 <0.01
А. Основните лимфоцитни популации брой клетки /п в ц/1/ са значително променени при изследваните бременни жени с прееклампсия. В-лимфоцитите /CD19+/, тоталните /CD2+/ и имунокомпетентните Т-лимфоцити /CD3+/ са статистически достоверно по-високи от тези на жените с нормално протичаща бременност.
Т-хелперите /CD3+CD4+/ показват статистически достоверно повишение спрямо контролната група на здравите бременни,а супресор-цитотоксичните Т-лимфоцити / CD3+CD8+/ - остават без промяна р>0.05. На фона на значителните количествени проме-ни на хелперните Т-лимфоцити е налице статистическо повишение на супрес-индюсерите /CD4+CD45RA+/.Това се свързва със стимулиране на супресорните Т-клетки от масивна-та плацентарна антигенемия,а ниското им ниво в кръвта - с активното участие на цито-токсичните популации в органа източник на болестния процес - плацентата.
В. Относителният дял на основните лимфоцитни популации /%/ показва несъществени промени за В-лимфоцитите/CD19+/ ,за тоталните Т-лимфоцити /CD2+/ и имунокомпетентните Т-клетки /CD3+/. Налице е статистическо повишение делът на Т-хелперите / CD3+CD4+/ и същевременно снижение на относителния дял на супресор-цитоксичната Т-популация /CD3+CD8+/. Супресор-индюсер-ната субпопулация е повишена при бре-менните с прееклампсия
Таблица № 2. Лимфоцитни субпопулации с предимно килърна функция и активирани имунокомпетентни Т лимфоцити при бременни с нормална бременност и с прееклампсия.
Пациенти Параметры Брой % Нормална бременост Прееклампсия t Р
CD8-CD56+ Брой % 38.25±6.77 1.96±0.44 54.67±13.69 1.99±0.54 1.37 1.01 п.X п..х
CD8+CD56+ Брой % 9.75±1.68 0.43±0.07 10.58±2.51 0.38±0.09 1.43 0.31
CD3+HLA-DR+ Брой % 17.32±2.56 0.86±0.11 28.17±4.97 1.38±0.14 8.37 3.60 <0.001 <0.001
CD3+CD25+ Брой % 3.4±0.51 0.28±0.06 6.18±1.32 0.31±0.07 2.50 0.38 <0.02 >0.05
Активираните имунокомпетентни Т- лимфоцти CD3+HLA-DR+ са повишени при бременните с прееклампсия в сравнение с тези с нормална бременност. Повишението е статистическо значимо не само за абсолютния брой, но и за относителния им дял. Увеличената експресия на CD3+CD25+ подкрепя активирането и клоналната пролиферация на Т-лимфоцитите.
Прееклампсията се счита за болест на съдовата система, а повишеното артериално кръвно налягане е безспорно най-важният клиничен симптом на прееклампсията, появява се най-рано /служи за ранна диагностика/, причина е за всички сериозни усложнения у майката и плода, определящ фактор е за прогнозата на майката /Ка-цулов[4.]Стойностите на систолното, диастолното и средното артериално налягане спрямо тези на бременните с нормална бременност са представени на таблица №:3
Таблица З.Стойности на артериалното налягане при прееклампсия и здрави бременни (X ± Sx}.
Стойности на артериалното налягане при прееклампсия и здрави бременни.
Артериално налягане Систолно налягане ттНд Диастолно налягане т тНд Средно налягане т тНд
Показатели Прееклам пгнчкн Здравн одеменнн Преекпймптмчкн Здрави г- Здравн Преекламгтнчкн Вр^,6ннн
40 40 30 40 30 40 30
X 185.0 106.33 100.067 73.07 141.651 91.1
5к 2.653 0.674 0.893 0.792 0.301 0.513
5х 16.544 3.609 5.650 4.339 1.906 2.810
1 29.133 30.176 85.55
Р <0.001 <0.001 <0.001
При всички бременни с прееклампсия хипертоничният синдром е проявен още в първия ден от началото на заболяването, което е регистрирано рано след 20-та
181
гестационна седмица. Повишени стойности на артериалното налягане са установени при всички включени в проучването /100%/.
При 32 /80%/ от бременните бе установена тежка прееклампсия, като при тях стойностите на систолното и диастолно налягане бяха над 160/110 mmHg, а средното артериално налягане - 141.651 mmHg. Те имаха постоянно високо кръвно налягане през всички часове на денонощието, което при някои от бременните се повишаваше и по време на сън. Неслучайно някои от тях настояваха кръвното им налягане да се измерва и през нощта. Възрастовата характеристика на бременните от тази група показва,че при жените до 20-годишна възраст,заедно с всички останали от групата 2025 години са с тежка прееклампсия,което потвърждава възрастовата обусловеност на прееклампсията,поддържана от редица автори.
При 8 /20%/ от бременните в началото се установи нетежка /лека/ прееклампсия. При тях стойностите на артериалното кръвно налягане бяха > 90 mmHg за диастолното и >140-mmHg за систолното налягане. Вътрегруповият анализ показва, че всички от тази група в края на бременността са преминали в групата на тежка прееклампсия. със трайно повишени стойности,отговарящи на изискванията за тежка форма на прееклампсия. Възрастовата характеристика на тези болни показва,че всички те са над 25 години,което потвърждава възрастовата обусловеност на това заболяване поддържано от някои автори[1].
Корелационната връзка между артериалното налягане/диастолното кръвно налягане/ с имунокомпетентните Т-лимфоцити и техните хелперна субпопулация е представена на фигурите1,2,3.3начителна,права е корелационната връзка с TCD3+(r=0,550) и особено с хелперите (CD3+CD4+) e значителна - права .r=0,590.
Фигура 1.Корелация между имунокомпетентните TCD3+ и диастолното артерално налягане Pd mmHg
130
125
120
115
1 110 и
сл 105 Е
Е 100 Ct
Q> 95
1000 1500 2000 2500 3000 3500 400Q СОЗ+/П/ V = 101.35+ 0.006Х
Коредация между имунокомпонентите Т лимфоцита (CD3+) и диастолното артериално налягане
г = 0 .55 ; р < 0.01
Фигура №2.
Зависимост между CD3+CD4+ /хелпери/идиастолното артериално налягане.
г = 0.59; р < 0.01
400 600 вбо 1000 1200 1400
CD3+ CD4+ /п/ Y = Э5.79 + 0.015Х
Зависимост между CD3+CD4+ (хелпери) и диастол но артериално налягане
Фигура 3.
Корелационна зависимост между отношението CD4:CD8% и диастолното артериално
налягане при бременни с прееклалтсия._
CD4/CD8 ratio Ш г - 0.57 ; р <0.05
(^щшшшонна зависимост между отношението CD4/CD8 % и диастолното артериално налягане при бременни с прееклампсия
Възможно е това да е част от общия имунен отговор при прееклампсия,която се потвърждава и от установената положителна корелационна зависимост между диастолното артериално налягане и отношението CD4:CD8 -фигура 3.
Широко разпространена хипотеза за възникване на прееклампсия е нарушената имунна адаптация. Установено е,че първораждащи жени, са шест до осем пъти по-податливи и съставляват 75% от всички случаи на прееклампсия. Представлява интерес фактът, че предпазващия ефект на поредното раждане се загубва при смяна на партньора. Така прееклампсията е проблем на поредността на партньора, а не на поредността на бременността. Това подчертава имунологичната основа на първоначалните стадии на заболяването,тъй като изглежда,че срещата на майката с бащините антигени преди зачатието, осигурява известно предпазване и е полезно. Счита се,че нормалната бременност съвпада с промяна на две отделни взаимнопотискащи се популации Т-хелперни клетки, като настъпва превключване между Thl/асоциирани с клетъчно-медиирания имунитет/ към Th2 / асоции-рани с антителния отговор/. Установено е, че Th1 клетките преобладават при прееклампсия и това може да доведе до преобладаваща секреция на цитотоксични цитокини(Т№-а,1Ь-1, IL- 6), а повишените маркери за активиране на комплемента водят до неутрофилна и последваща ендотелна активация[1,2]/.При прееклампсия неутрофилната активация е зна-чително повишена в сравнение с нормална бременност и се съпоставя c общия майчин възпалителен отговор/5,6/.
Redman CW et al. считат, че ендотелната дисфункция е само един аспект на генерализирания възпалителен отговор и предполагат, че прееклампсията е може би крайният стадий на лек възпалителен отговор, установим при нормална бременност. Стимул за този феномен е големият товар от клетъчни и молекулярни разпадни продукти,отделяни от синцитиотрофобласта на плацентата по време на оксидативен стрес[5].
La Marca B. et al./ свързват нарушението на клетъчния и антителен имунен отговор при прееклампсия с проинфламаторните цитокини, Т-хелперната и В-лимфоцитна активация, АТ1 рецепторната активация. На по-късен етап се включват директно или чрез повишаване на антиангиогенните фактори sFltl и ендотелин 1, които водят до преекламптична хи-пертония[6]. (Cur Open Pharmacology 2011;11:175-179 )
Заключение.
Данните ог нашето проучване показват,че един от главните механизми на клетъчно-медиирания имунен отговор при прееклампсия са Т -лимфоцитите.Установените количествени промени на Т-хелперните лимфоцитни субпопупации показват уастието им в патогенезата на прееклампсия.Хипертонията е най-важният диагностчен признак по който се извършва класификацията на прееклампсията по тежест и чрез който се определя прогнозата на предстоящето раждане.Установената от нас корелация между някои от Т-лимфоцитните субпопулации и основния клиничен синдром -диастолното артериално налягане според нас показва тяхната взаимна връзка и участие в интимния механизъм на прееклампсията
Библиография.
1.Димитракова Е. Нови аспекти в майчинофеталните взаимоотношения, Пловдив,2014
2. Михайлова А.Изследване на клетъчния имунен отговор. Кн."Клинична имунология" Под ред на Е.Наумова, и А.Алтънкова,София,2001;69-75
З.Цветкова Т.,М.Огнянов. Имунофенотипна характеристика на кръвните клет ки,1995:107-161.
4.Кацулов А. Прееклампсия-еклампсия,София,Мед и физк,1988:50-184
5.Redman CW, P,Sargent..AmJ.Reprod. Immunol.2010,63,6,534-543.
6.LaMarca B, K.Wallace,J.Gander. Curr.Opin Pharmacol,2011,11,175-179
7.American College of Obstetricians and gynecologists (AG)GA).Committee on Obstetric Practice,2002;77:67-75.
184
