CC BY
1УДК 615.281.9 И.С. ЧЕРНЕЙ
ассистент кафедры биохимии и биоинформатики, магистр биологических наук1
A.И. ЛИСОВСКАЯ
студент кафедры биотехнологии1
B.Т. ЧЕЩЕВИК, канд. биол. наук, доцент, доцент кафедры биотехнологии1
1Полесский государственный университет, г. Пинск, Республика Беларусь
Статья поступила 10 апреля 2024 г.
БИОИНФОРМАЦИОННЫЙ АНАЛИЗ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ КОМПОНЕНТОВ FILIPENDULA ULMARIA С БЕЛКОМ БИОПЛЕНКИ TASA МИКРООРГАНИЗМА BACILLUS SUBTILIS
В последнее десятилетие в сфере здравоохранения существует проблема образования биопленок различными микроорганизмами. Bacillus subtilis является одним из модельных микроорганизмов, способным образовывать биопленку, устойчивую к антибиотикам. В свое очередь, компоненты Filipendula ulmaria, в частности водные экстракты флавоноидов, обладают противомикробной активностью в отношении B.subtilis, что вызывает интерес в поиске белка-мишени. Используя методы биоинформатики, был проведен молекулярный докинг и анализ взаимодействия компонентов F. ulmaria в отношении белка TasA, который является ключевым фактором в формировании биопленки B. subtilis. Были выявлены молекулы с высокой аффинностью к TasA, которые могут нарушать образование биопленки, что дает основу для дальнейших исследований in vitro и in vivo. Данная работа расширяет понимание противомикробного потенциала F. ulmaria и предлагает перспективные направления в разработке новых противомикробных препаратов, направленных на ингибирование биопленок.
Ключевые слова: Filipendula ulmaria, Bacillus subtilis, молекулярный докинг, виртуальный скрининг, биопленка, белок TasA
CHERNEI I.S., Assistant of the Department of Biochemistry and Bioinformatics1
LISOVSKAYA A.I., Student of the Department of Biotechnology,
CHESCHEVIK V.T., PhD in Biol. Sc., Associate Professor, Associate Professor of the Department of Biotechnology1 1Polessky State University, Pinsk, Republic of Belarus
BIOINFORMATIC ANALYSIS OF THE INTERACTION OF FILIPENDULA ULMARIA COMPONENTS WITH THE BIOFILM PROTEIN TASA OF BACILLUS SUBTILIS
Biofilm formation by various microorganisms has emerged as a significant challenge in healthcare over the past decade. Bacillus subtilis is a model microorganism known for its ability to form antibiotic-resistant biofilms. Components of Filipendula ulmaria, particularly flavonoid-rich aqueous extracts, exhibit antimicrobial activity against B. subtilis, prompting interest in identifying target proteins. Employing bioinformatic methods, we conducted molecular docking and interaction analysis of F. ulmaria components against TasA, a key protein involved in B. subtilis biofilm formation. We identified molecules with high affinity for TasA, potentially disrupting biofilm formation, providing a foundation for further in vitro and in vivo studies. This work enhances our understanding of the antimicrobial potential
of F. ulmaria and offers promising avenues for developing novel antimicrobial agents targeting biofilm inhibition.
Keywords: Filipendula ulmaria, Bacillus subtilis, molecular docking, virtual screening, biofilm, TasA protein.
Введение. Рост микроорганизмов, связанный с биопленкой, является основной причиной проблем с окружающей средой, промышленностью и здоровьем населения. Биопленки микроорганизмов обладают высокой устойчивостью к антибиотикам и иммунной защите хозяина. Повышенная устойчивость биопленки к традиционным методам лечения усиливает необходимость поиска и разработки новых эффективных антибиопленочных стратегий.
Ингибирование биопленки рассматривается в качестве основной лекарственной мишени для лечения различных бактериальных и грибковых инфекций. Фармакологическая разработка данных препаратов в настоящее время широко изучается. Одним из перспективных направлений является поиск соединений растительного происхождения, способных блокировать образование биопленки [1].
Исторически растительные экстракты и их биологически активные соединения были ценным источником натуральных продуктов, которые играли важную роль в профилактике и лечении различных заболеваний. Кроме того, они получили широкое признание из-за их низкого уровня токсичности и меньшего количества побочных эффектов, а также с древних времен они имеют долгую историю использования в народной медицине для лечения болезней и недомоганий. Примером лекарственного растения, способного оказывать различные терапевтические эффекты, может послужить Filipendula ulmaria. Лечебные свойства лабазника вязолистного, или таволги, используются людьми уже более 400 лет. Традиционно таволгу использовали как пищевое растение. Все части растения идеально подходят для сладких фруктовых блюд, а также напитков, которым она придает сладко-терпкий вкус. Чаще всего используется в бельгийской и французской кухне. Все части растения применяют для ароматизации сладкого десерта, а также напитков [2].
Лабазник вязолистный имеет разнообразный химический состав и представляет инте-
рес для медицины и фармации. Он привлекает внимание исследователей характерной биологической активностью его цветков, листьев и корней, которые являются лекарственным растительным сырьем.
Лечебные свойства лабазника определяются преимущественным действием дубильных веществ, фенольных соединений (салициловый альдегид), фенолкарбоновых кислот, катехинов, эфирных масел и многими другими компонентами [3].
В траве лабазника присутствуют флаво-ноиды (4,0-9,8 %): кверцетин и 5 его глико-зидов (рутин, гиперозид, авикулярин, спи-реозид, кверцетин-З-глюкуронид) и кемпфе-рол-4-глюкозида. Отмечено, что спиреозид преимущественно (3,5 %) содержится в цветах и плодах, а гиперозид - в листьях. Причем общее количество флавоноидов составляет 6% в цветах, 3% в плодах и 1% в листьях и стеблях.
Лабазник вязолистный отличается богатым химическим составом, что обуславливает его разнообразные фармакологические свойства.
Противовоспалительное действие растения объясняется наличием полифенолов, таких как апигенин, кверцетин, и салициловой кислоты. Экстракты лабазника обладают высоким ДНК-протекторным потенциалом и антиоксидантными свойствами, которые связаны с содержанием комплекса полифенолов. Кроме того, им присущи цитотоксическое и иммуномодулирующее действие. Иммуно-модулирующая активность связана с присутствием танинов в комплексе с другими биологически активными веществами. Эфирное масло лабазника обладает выраженной антимикробной и антифунгальной активностью. Воднометанольное извлечение из лабазника содержит различные фенольные соединения, такие как кофейная, п-кумариновая и ванилиновая кислоты, мирицетин, обладающие антибактериальной активностью. Экстракты лабазника, полученные с использованием экстрагентов с увеличивающейся полярно-
стью (ацетон, метанол и вода), проявляют антиоксидантные свойства [4].
Экстракты растения обладают широким спектром фармакологических действий: общеукрепляющим, антиканцерогенным, диуретическим, гипогликемическим, седатив-ным, противогеморройным, антисептическим, бактериостатическим, способствующим грануляции и эпителизации.
Антимикробная активность, выраженная в виде минимальной ингибирующей концентрации, находилась в диапазоне от 2,5 до 10 мг/мл. Экстракты продемонстрировали антибактериальную активность против как грам-положительных (Staphylococcus aureus ATCC 25923), так и грамотрицательных (Proteus mirabilis) бактерий.
Экспертиза концентраций фенолов, фла-воноидов и дубильных веществ в разных частях органов растений показывает, что большое их содержание было в листьях, а между стеблем и корнем наблюдается небольшая разница концентраций. Также было установлено, что водные извлечения флаваноидов из соцветий лабазника вязолистного проявляют выраженную бактерицидную активность в отношении к Bacillus polymixa - 80%, Bacillus subtilis - 60%, Sarcina lutea - 50% [5].
В свою очередь, наше внимание привлекла антимикробная активность флаваноидов в отношении Bacillus subtilis, который служит модельным организмом для изучения регуляции биопленкообразования. Болезнетворные бактерии, такие как золотистый стафилококк, прячутся в биопленках B. subtilis, укрываясь от обширных методов дезинфекции. Бактериальные клетки обладают способностью образовывать биопленку на поверхности пищевых матриц и на оборудовании для пищевой промышленности, что приводит к источнику загрязнения пищевых продуктов, а впоследствии и заболеваниям человека и животных [6].
Структура биопленки регулируется как физико-химическими взаимодействиями с факторами внешней среды, так и генетическими механизмами самих бактерий. Для создания биопленки клетки переходят из планктонного состояния в иное состояние, подавляя экспрессию жгутиковых генов одновременно с повышением экспрессии генов, участвующих в производстве внеклеточного матрикса. У B. subtilis это переключение
происходит за счет усиления внешних сигналов, таких как истощение питательных веществ, низкий уровень кислорода или поверхностная адгезия. Сидячие клетки начинают образовывать цепи за счет подавления гидролаз клеточной стенки, и цепи заключаются в самостоятельно производимый внеклеточный матрикс, который обеспечивает жесткость и необходим для формирования прочных биопленок [7].
Жесткий внеклеточный матрикс, составляющий биопленки B. subtilis, содержит эк-зополисахариды и белки. Гены, ответственные за выработку экзополисахаридов, являются частью гена-оперона epsA-O (eps). Два секретируемых белка TasA и TapA, которые кодируются трехгенным опероном tapA-sipW-tasA (оперон tapA) обеспечивают целостность структуры биопленки [8].
TasA представляет собой функциональный амилоидный белок, который синтезируется как мономер, собирается в длинные волокна (фибриллы) и транслоцируется через мембрану с участием сигнальной пептидазы SipW. Снаружи TasA с помощью белка-помощника TapA волокнами прикрепляются к клеточной стенке. Белок TasA участвует в упорядоченном созревании биопленки Bacillus. Его отсутствие приводит к ряду физиологических изменений, связанных со стабильностью мембран, их динамики, а также снижением жизнеспособности клеток при взаимодействии за счет отсутствия структурированного матрикса, что ограничивает возможности адаптации клеток к стрессу [9].
В настоящее время компьютерные методы прогноза биологической активности химических соединений, обозначаемые общим термином in silico, используются на одном из первоначальных этапов поиска новых веществ, обладающих фармакологической активностью. In silico-скрининг позволяет прогнозировать биологическую активность и эффективность молекул на ранних стадиях разработки. Это оптимизирует оценки in vitro, максимизирует их успешность и повышает общую эффективность разработки продукта. Более того, скрининг in silico может помочь выявить новые применения известных соединений, открывая новые возможности для репозиционирования продуктов и поиска активных ингредиентов из природных источников.
Таким образом, цель данной работы -оценить влияния компонентов лекарственного растения Filipendula ulmaria на белок биопленки TasA с использованием биоинформационных подходов.
Материалы и методы. Для исследования были выбраны 5 соединений из Filipendula ulmaria: кверцетин, рутин, кемпферол, гипе-розид и спиреозид. В исследовании использовали программное обеспечение ADME online (http://www.swissadme.ch) для прогнозирования следующих физико-химические свойства компонентов: размер, липофиль-ность, полярность, растворимость, а также определения фармакокинетических свойств.
В данном исследовании для проведения молекулярного докинга молекул-мишеней с лигандами применяли программные пакеты UCSF Chimera 1.11 и AutoDock Vina. 3D-структуры биоактивных соединений из Filipendula ulmaria были получены из он-лайн-базы данных PubChem и были переведены в формат mol2 с помощью веб-ресурса OpenBabel: кверцетин (CID:5280343), рутин (CID:5280805), кемпферол (CID:5280863), гиперозид (CID:5281643) и спиреозид (CID:5320844).
Белок Bacillus subtilis - TasA был загружен из банка данных белков RCSB PDB (идентификатор в базе данных: 5OF2) в фор-
мате PDB. Белок был подготовлен с использованием UCSF Chimera 1.11. Молекулы, не принадлежащие белку, были исключены. Структура файла с белком была сохранена в формате PDB. Данный программный пакет также был использован для выявления кон-формационных изменений в структуре белка, обусловленных взаимодействием кверцетина, кемпферола, рутина, гиперозида и спиреози-да с белком TasA.
После добавления белка-мишени и лиган-да в программу, была задана "коробка докинга" для белка с размером и центром связывания в каждом случае с использованием Autodock Tools, где были определены торсионные углы вращения лигандов (таблица 1). После этого, выбранные фитохимические вещества были состыкованы с рецепторными белками.
Результаты и их обсуждение. Биодоступность соединений оценивали по следующим физико-химическим параметрам: молекулярная масса, липофильность (log P), площадь полярной поверхности (TPSA) и растворимость (log S) (табл. 2).
Молекулярная масса компонентов варьировала от 286,24 г/моль до 464,38 г/моль, не превышая пределов, исключение - рутин (610,52 г/моль).
Таблица 1. - Определение области молекулярного докинга
Белок-мишень Размер коробки (x,y,z) Центр связывания (x,y,z)
TasA 35,8301, 36,3536, 63,5463 -9,9368, -2,92751, -23,4124
34,365, 30,7252, 64,4166 -12,1517, -4,35152, -22,509
53,8659, 39,2123, 65,242 -10,2325, -6,29728, -23,0366
34,365, 35,1252, 64,38 -11,8855, -3,53604, -22,73
35,8473, 30,945, 64,9014 -12,6267, -4,2045, -23,1584
Таблица 2. - Физико-химические свойства лигандов из Filipendula ulmaria
Hазвание компонента Размер (150-500 г\моль) Липофильность XLOGP3 (от -0,7 до +5) Полярность (TPSA 20-130 Е2) Растворимость (log S не выше 6)
^ерцетин 302,24 1,54 131,36 -3,16
Рутин 610,52 -0,33 269,43 -3,30
^мпферол 286,24 1,90 111,13 -3,31
Гиперозид 432,38 0,52 170,05 -3,66
Спиреозид 464,38 1,31 210,51 -3,64
Все молекулы являются липофильными и находились в пределах допустимых значений, что, в свою очередь, показывает высокую проходимость через клеточную мембрану.
Обнаружено, что у всех соединений площадь полярной поверхности (TPSA) превышает установленные значения: кверцетин -131,36 Б2, рутин - 269,43 Б2, гиперозид -170,05 Е2, спиреозид - 210,51 Е2, кроме кемпферола (111,13 Е2).
Из этого следует, что данные компоненты не обладают необходимой полярностью для биодоступности. Все молекулы являются растворимыми: log S не превышала 6.
При оценке фармакокинетических свойств проводился анализ показателей коэффициента проницаемости кожи (log Kp). Чем более отрицательное логарифмическое значение, тем менее проникающей через кожу становится молекула. Также проводился анализ взаимодействия молекул с цитохромами Р450 (CYP), которые играют ключевую роль в элиминации лекарств посредством метаболической биотрансформации. Ингибирование этих изоферментов приводит к токсическим и нежелательным побочным эффектам из-за накопления лекарственного средства или его метаболитов. Поэтому для разработки лекарств очень важно предсказать склонность, с которой молекула будет вызывать значительные лекарственные взаимодействия путем ингибирования CYP, и определить, какие изоформы затронуты. Параметр синтетической доступности (СД) является основным при выборе наиболее перспективных виртуальных молекул, которые будут синтезированы и подвергнуты биологическим анализам. Оценка данного параметра варьируется
от 1 до 10 (от очень легкой до очень сложной доступности) [10].
Результаты фармакокинетического анализа представлены в таблице 3.
Лучшим коэффициентом проницаемости кожи (log Kp), из выбранных компонентов, является кверцетин и кемпферол, хуже всего проницаемость наблюдалась у рутина.
При анализе взаимодействия молекул ли-гандов с цитохромами CYP1A2, CYP2C19, CYP2C9, CYP2D6, CYP3A4 наиболее благоприятным оказались рутин, гиперозид и спи-реозид, так как они не являлись ингибиторами важнейших цитохромов.
Основываясь на показателе синтетической доступности (СД) кемпферол является наиболее перспективной виртуальной молекулой. Остальные компоненты могут потенциально быть ингибиторами одной или нескольких изоформ цитохрома P450.
Молекулярный докинг был выполнен для понимания ингибирующего механизма и режима взаимодействия выбранных фитохими-ческих веществ с рецепторным белком. В результате анализа были получены 3D-изображения структуры комплекса белок-лиганд.
Исследования in silico показали, что ли-ганды Filipendula ulmaria были состыкованы с белком TasA и давали хорошую энергию связи: для кверцетина (-6,9 ккал/моль), рутина (-6,8 ккал/моль), кемпферола (-6,5 ккал/моль), гиперозида (-6,5 ккал/моль), спиреозида (-6,9 ккал/моль). Все лиганды продемонстрировали хорошее сродство к белку.
Взаимодействие белок-лиганд имело водородные связи и различные гидрофобные взаимодействия.
Таблица 3. - Фармокинетика соединений Filipendula ulmaria
Название компонента log Kp (cm\s) Ингибитор CYP1A2 Ингибитор CYP2C19 Ингибитор CYP2C9 Ингибитор CYP2D6 Ингибитор CYP3A4 СД
Кверцетин -6,70 Да Нет Нет Да Да 3,21
Рутин -10,26 Нет Нет Нет Нет Нет 6,52
Кемпферол -6,70 Да Нет Нет Да Да 3,14
Гиперозид -8,57 Нет Нет Нет Нет Нет 5,27
Спиреозид -8,20 Нет Нет Нет Нет Нет 5,23
Результаты молекулярной стыковки TasA с лигандами представлены на рисунке ниже: кверцетином (а), рутином (б), кемпферолом (в), гиперозидом (г) и спиреозидом (д).
Прочность комплекса белка и лиганда определяется энергией лиганда в поле белка. Чем ниже энергия, тем прочнее комплекс белок-лиганд. Поэтому при анализе результатов молекулярного докинга, программа выдавала таблицу связывания компонентов из чего можно сделать вывод, что лучшими вариантами связывания для всех соединений были положения с минимальной энергией связи в первой строке из 10 вариаций.
Помимо энергии связывания скоринговая функция в AutoDock Vina присваивает благоприятные оценки, взаимодействиям водородных связей, отражая энергетически вы-
годную природу этих связей в стабилизирующих лиганд-рецепторных комплексах. И наоборот, столкновения между донорами и акцепторами водородных связей наказываются, чтобы гарантировать, что прогнозируемые конформации связывания соответствуют принципам благоприятной геометрии водородной связи [10].
Водородные связи играют решающую роль в молекулярном распознавании, опосредуя специфические взаимодействия между лигандом и его рецептором-мишенью. AutoDock Vina признает важность, как доноров, так и акцепторов водородных связей в этом процессе. В связи с чем, были определено количество водородных связей и расстояние связи между белком-мишенью и ли-гандом (таблица 4)
Щ¡5
WPx А V^L^V^r • i
' ¡ ,,->? —- /
пи
Рисунок - Взаимодействие флаваноидных соединений Filipendula ulmaria с белком TasA: а - кверцетин, б - рутином, в- кемпферолом, г-гиперозидом, д - спиреозидом
Таблица 4. - Результаты молекулярной стиковки
Белок- Hазвание Энергия связыва- Расстояние связи ^личество
мишень лиганда ния (ккал/моль) (Â) водородных связей
Kверцетин -6,9 2,199 7
Рутин -6,8 2,527 25
TasA Kемпферол -6,5 2,254 6
Гиперозид -6,5 2,669 18
Спиреозид -6,9 2,064 30
Из данных таблиц следует, что наилучшими показателями энергии связывания между белком и лигандом обладают кверце-тин и спиреозид. Минимальное расстояние связи наблюдалось у спиреозида, максимальное - у гиперозида. Наибольшее число водородных связей имел спиреозид, наименьшее - кемпферол.
Заключение. В ходе исследования была определена оценка влияния компонентов лекарственного растения Filipendula ulmaria на белок биопленки TasA с использованием биоинформационных подходов.
Исследование in silico, в частности с использованием молекулярного докинга, дало представление об ингибирующих свойствах, эффективности фитохимических веществ, полученных из Filipendula ulmaria. Соединения продемонстрировали оптимальные показатели связывания с белком-мишенью. Кроме того, ADME-профилирование идентифицированных фитосоединений подтверждает их потенциальные свойства в качестве терапевтических препаратов с многообещающими фармакокинетическими свойствами.
Список литературы
1. Плакунов, В. К. Антибиопленочные агенты: неоднозначность терминологии и стратегии поиска / В. К. Плакунов [и др.] // Микробиология. - 2019. - №6. - С. 705709.
2. Antioxidant, anti-inflammatory and gastroprotective activity of Filipendula ulmaria (L.) Maxim. and Filipendula vulgaris Moench / S. Samardzic [et al.] // Journal of Ethnopharmacology. - 2018. - №213. -P.132-137. DOI: 10.1016/j.jep.2017.11.013
3. Gut microbiota-assisted isolation of flavonoids with a galloyl moiety from flowers of meadowsweet, Filipendula ulmaria (L.) Maxim / D. Popowski [et al.] // Phytochem Lett. - 2019. - P. 223
4. Гудкова, Н. Ю. О перспективах интродукции представителей рода лабазник (Filipendula Mill.) в качестве источников лекарственного сырья / Н. Ю. Гудкова // Cельскохозяйственная биология. - 2012. -№2. - С.73-79 c.
5. Соколов, Н. С. Сравнительная антимикробная активность водных извлечений из надземных органов лабазника вязолистно-
го (Filipendula ulmaria (L.) Maxim.) и лабазника шестилепестного (Filipendula hexapetala Gilib) / Н.С. Соколов [и др.] // Аспирантский вестник Поволжья. - 2022. - №4.- С.63-68.
6. Биостабильность и формирование матрик-са биопленки как механизмы адаптации B. subtilis в стационарной фазе / М.Р. Шари-кова [и др.] // Микробиология. - 2021. - № 1. - С. 24-42.
7. Thinking about Bacillus subtilis as a multicellular organism / C. Aguilar [et al.] // Curr. Opin. Microbiol. - 2007. -P.643.
8. Harris, K. D. Applying the handicap principle to biofilms: Condition-dependent signalling in Bacillus subtilis microbial communities / K. D. Harris, I. Kolodkin // Gal, Environ. Microbiol. - 2019. - P.540.
9. Kovacs, A. T. Bacterial differentiation via gradual activation of global regulators / A. T. Kovacs // Curr. Genet. - 2016. - №62. -P.128.
10. Free energy calculations to estimate ligand-binding affinities in structure-based drug design / M.R. Reddy [et al.] // Curr Pharm Des. - 2014. - P.20.
References
1. Plakunov V.K., Zhurina M.V., Gannesen A.V., Mart'yanov S.V., Nikolaev YU.A. Antibioplenochnye agenty: neodnoznachnost' terminologii i strategii poiska [Antibiofilm agents: ambiguity of terminology and search strategies]. Mikrobiologiya, 2019, pp.709 (In Russian)
2. Samardzic S., Arsenijevic J., Bozic D., Milenkovic M., Tesevic V., Maksimovic Z. Antioxidant, anti-inflammatory and gastroprotective activity of Filipendula ulmaria (L.) Maxim. and Filipendula vulgaris Moench. Journal of Ethnopharmacology, 2018, no. 213, pp. 132-137. D0I:10.1016/j.jep.2017.11.013
3. Popowski D., Pawlowska K.A., Piwowarski J.P., Granica S. Gut microbiota-assisted isolation of flavonoids with a galloyl moiety from flowers of meadowsweet, Filipendula ulmaria (L.) Maxim. Phytochem Lett, 2019. pp.223.
4. Gudkova N.Y.U. O perspektivah introdukcii predstavitelej roda labaznik (Filipendula Mill.) v kachestve istochnikov
lekarstvennogo syr'ya [Prospect of introduction of plants from corn chandler genus (Filipendula Mill.), as sources of crude drug]. Cel'skohozyajstvennaya biologiya. 2012. pp.73-79 (In Russian)
5. Sokolov N.S., Sharipova S.H., Sazanova K.N., Lyamin A.V. Sravnitel'naya antimikrobnaya aktivnost' vodnyh izvlechenij iz nadzemnyh organov labaznika vyazolistnogo (Filipendula ulmaria (L.) Maxim.) i labaznika shestilepestnogo (Filipendula hexapetala Gilib.) [A comparative evaluation of the antimicrobial activity of aqueous extracts from aerial organs of meadowsweet (Filipendula Ulmaria (L.) Maxim.) and dropwort (Filipendula Hexapetala gilib J]. Aspirantskij vestnik Povolzh'ya, 2022, pp.63-68 (In Russian)
6. Sharipova M.R., Mardanova A.M., Rudakova N.L., Pudova D. S Biostabil'nost' i formirovanie matriksa bioplenki kak mekhanizmy adaptacii B. subtilis v stacionarnoj faze [Bistability and Formation
of the Biofilm Matrix as Adaptive Mechanisms during the Stationary Phase of Bacillus subtilis]. Mikrobiologiya, 2021, no.l, pp. 24-42 (In Russian)
7. Aguilar C., Vlamakis H., Losick R., Kolter R.,
Thinking about Bacillus subtilis as a multicellular organism. Curr. Opin. Microbiol., 2007, pp. 643
8. Harris K. D., Kolodkin-Gal I., Applying the handicap principle to biofilms: Condition-dependent signalling in Bacillus subtilis microbial communities. Environ. Microbiol, 2019, pp.540
9. Kovacs A. T. Bacterial differentiation via gradual activation of global regulators. Curr. Genet, 2016, no.62, pp. 128
10. Reddy M.R., Reddy C.R., Rathore R.S., Erion MD., Aparoy P., Reddy R.N., Reddanna P. Free energy calculations to estimate ligand-binding affinities in structure-based drug design. Curr Pharm Des., 2014, pp. 20
Received 10 April 2024
