CC BY
124
УДК 5547.56:547.972.2
КОМПОНЕНТНЫЙ СОСТАВ ФРАКЦИИ FILIPENDULA ULMARIA (L.)
MAXIM. С ВЫСОКОЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
© Е.Ю. Авдеева, Е.А. Краснов , И.В. Шилова
Сибирский государственный медицинский университет, ул. Московский тракт, 2, Томск, 634050 (Россия) E-mail: elenaavdeev@yandex.ru
Приведены данные о химическом составе фракции лабазника вязолистного (Filipéndula ulmaria (L.) Maxim.), обладающей высокой антиоксидантной активностью. Из фракции выделены анисовая, олеаноловая и урсоловая кислоты; методом хромато-масс-спектрометрии идентифицированы 14 веществ, представленные алифатическими кетонами, ароматическими карбоновыми кислотами и их производными.
Ключевые слова: Filipéndula ulmaria, анисовая кислота, олеаноловая кислота, урсоловая кислота, алифатические ке-тоны, ароматические карбоновые кислоты, ГЖХ-МС, антиоксидантная активность.
Введение
В последние два десятилетия установлено важное значение окислительного стресса в этиологии и патогенезе различных заболеваний: атеросклероза, диабета, рака, гипертензии, неврозов, воспалительных процессов [1-3]. Применение природных антиоксидантов показало ряд их преимуществ в лечении и профилактике свободнорадикальных патологий. Для большинства из них характерно эффективное воздействие на ведущие факторы повреждения, отсутствие побочных эффектов и низкая токсичность [3]. Поэтому весьма актуальным является поиск высокоактивных природных антиоксидантов.
Значительные перспективы в этом отношении имеет лабазник вязолистный Filipéndula ulmaria (L.) Maxim., сем. Rosaceae - многолетнее растение, с широким ареалом произрастания в европейской части России, Западной и Восточной Сибири [4].
Лабазник вязолистный обладает разнообразным составом биологически активных веществ, представленным в основном фенольными соединениями [5]. Эфирное масло цветков растения содержит салициловый альдегид, 4-метоксибензальдегид, метилсалицилат, фенетиловый и бензиловый спирты [6], цинеол и эукар-вон [7]. Из цветков F. ulmaria H.Thieme были выделены три фенолгликозида: изосалицин, спиреин и моно-тропитин [8,9]. Методом ВЭЖХ установлено содержание в надземной части F. ulmaria восьми фенолокис-лот, из них преобладали галловая, и-кумаровая и ванилиновая кислоты [10], а также 5 гликозидов кверцети-на (рутин, гиперозид, авикулярин, спиреозид, кверцетин-3-глюкуронид) и кемпферол-4-глюкозида [11].
Из надземной части растения нами выделен ряд фенольных компонентов: салициловая, эллаговая, галловая кислоты, этилгаллат, кверцетин, авикулярин, рутин, а также изокверцитрин и 4-О-р-Б-галактопиранозид кверцетина, ранее не обнаруженные в растениях рода лабазник [12, 13].
Установлено, что выраженной антиоксидантной активностью (АОА) обладают экстракты F. ulmaria на 70 и 95% этаноле [14], а наибольшую активность проявляет хлороформная фракция из экстракта на 70% этаноле [15]. Целью настоящей работы явилось изучение химического состава хлороформной фракции F. ulmaria.
* Автор, с которым следует вести переписку.
Экспериментальная часть
Сырьем для исследования служила надземная часть F. ulmaria, собранная в фазу цветения в июле 2006 г. (окр. п. Тимирязево, Томской области). 600 г воздушно-сухого сырья (размер частиц 2 мм, влажность 7,6%) экстрагировали 70%-ным водным этанолом трижды в соотношении 1 : 7 при температуре 80 °С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Объединенные извлечения фильтровали и этанол удаляли под вакуумом при температуре не выше 60 °С. Водный остаток многократно обрабатывали в делительной воронке хлороформом в соотношении 2 : 1. Полученные хлороформные извлечения объединяли, высушивали безводным сульфатом натрия и упаривали под вакуумом при температуре 40 °С. После удаления растворителя получили 0,42 г (выход 0,07% от воздушно-сухого сырья) сухой хлороформной фракции.
Фракцию разделяли методом флэш-хроматографии на силикагеле (Lachema, 5/40); элюенты: гексан, гексан - хлороформ (8 : 2; 6 : 4; 4 : 6; 2 : 8), хлороформ, с последующей колоночной рехроматографией на силикагеле (Lachema, 40/100); элюенты: гексан, гексан - этилацетат с увеличением градиента последнего, этилацетат.
В результате выделили 20 мг кристаллов кремового цвета, не растворимых в гексане и воде, легко растворимых в хлороформе и этаноле, с т.пл. 177-178 °С. На ТСХ («Silufol UV-254»; Rf=0,56 (хлороформ - метанол 25 : 3 и 0,66 (хлороформ - метанол - вода 70 : 12 : 1) с раствором бромтимолового-синего с последующем выдерживанием в парах аммиака проявляется в виде желтого пятна на синем фоне (реакция характеризует кислотные свойства). Xmax 252 нм (MeOH). ИК-спектр (КВг), v, см-1: 3443, 2916, 2965, 2848, 1603, 1463. По данным масс-спектра соединение имеет формулу С8Н8О3, М+152. В ПМР-спектре (DMSO-d6) вещества, записанном на спектрометре Bruker DRX-500 (рабочая частота 500, 13 МГц), наблюдались сигналы, 5, м.д.: 3,86 (с, 3Н), 6,94 (с, Н-3, Н-5), 8,05 (с Н-2, Н-6). На основании спектральных данных полученное вещество идентифицировано с анисовой кислотой (4-метоксибензойная кислота).
При дальнейшем элюировании выделены 43 мг олеаноловой и 8 мг урсоловой кислоты, идентичность которых установлена хроматографическим сравнением с достоверными образцами [12] и 115 мг фракции, представляющей собой густую жидкость желтого цвета с медовым запахом, легко растворимую в хлороформе.
Компонентный состав фракции изучали методом ГЖХ-масс-спектрометрии на приборе Trace DSQ (Thermoelectron corp., США), программное обеспечение Xcalibur 1.4. Условия анализа: колонка BPX5, 25 м; Тисп = 280 °С; V* = 1 мл/мин; растворитель - хлороформ; Ттермостата от 40 до 300 °С; скорость нагрева 10°/мин; задержка хроматограммы 5 мин; сканирование 33-650 а.е.м. (рис.). В результате установили, что указанная фракция представлена в основном алифатическими кетонами, а также ароматическими карбоновыми кислотами и их производными: гексаналь (0,23%, tr 8,12 мин), бензойная кислота (0,56%, tr 14,78 мин), салициловая кислота (2,5%, tr 16,83 мин), 4-метоксибензойная кислота (0,63%, tr 18,78 мин), 4,4,7а-триметил-5,6,7,7а-тетрагидро-2(4Н)-бензофуранон (1,3%, tr 20,69 мин), диэтилфталат (16,32%, 20,86 tr мин), 6,10,14-триметил-2-пентадеканон (1,55%, 23,39 tr мин), бис-(2-метилпропил)-фталевая кислота (0,52%, tr 23,85 мин), 2-гептадеканон (0,97%, tr 24,06 мин), метиловый эфир 14-метилпентадекановой кислоты (0,97%, tr 24,23 мин), бутилоктиловый эфир фталевой кислоты (7,67%, tr 24,88 мин), 2-нонадеканон (1,43%, tr 26,05 мин), (4-метоксифенил)метиловый эфир бензолуксусной кислоты (1,17%, tr 26,36 мин), диизооктиловый эфир фталевой кислоты (64,22%, tr 30,32 мин) (рис.).
Исследования АОА проводили на основе процесса электровосстановления кислорода (ЭВ О2) [14]. В качестве фонового электролита использовали фосфатный буфер с рН 6,86. АОА определяли по относительному уменьшению тока ЭВ О2 в присутствии образца. В качестве препарата сравнения использовали аскорбиновую кислоту с концентрацией 0,01 г/мл. Полученные результаты показали, что по силе антиоксидантной активности хлороформная фракция приближается к аскорбиновой кислоте (кинетический критерий антиок-сидантной активности 1,040±0,038 и 1,150±0,053 мкМ/л-мин соответственно).
Обсуждение результатов
Из фракции F. ulmaria, обладающей высокой антиоксидантной активностью, наряду с анисовой кислотой, выделены тритерпеновые соединения: олеаноловая и урсоловая кислоты. Кроме того, методом ГЖХ-МС обнаружены еще 14 соединений, представленных в основном алифатическими кетонами, ароматическими карбоновыми кислотами и их производными.
Time (min)
ГЖ-хроматограмма фракции лабазника вязолистного
Выводы
Высокая антиоксидантная активность хлороформной фракции 70% водно-этанольного экстракта F. ul-maria может быть обусловлена наличием в ней ароматических карбоновых кислот, фенольных и тритерпе-новых соединений.
Хромато-масс-спектрометрическое исследование было выполнено на базе научно-аналитического
центра Томского политехнического университета, за что выражаем им искреннюю благодарность.
Список литературы
1. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН. 1998. №7. С. 43-50.
2. Голотин В.Г., Гоненко В.А. Биоантиоксиданты и их роль в жизнедеятельности организма // Валеология. 1995. Вып. 2. С. 49-63.
3. Барабой В.А. Антиоксиданты и здоровье // Валеология: диагностика, средства и практика обеспечения здоровья. СПб., 1993. 269 с.
4. Шанцер И.А. Лабазники. М., 2001. 32 с.
5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Hy-drangeacea - Haloragaceae. СПб., 1987. 326 с.
6. Кожин С.А., Силин Ю.Г. Состав эфирного масла из соцветий Filipendula ulmaria (L.) Maxim. // Раститительные ресурсы. 1971. Т. 7. Вып. 4. С. 567-569.
7. Chermenskaya T.D., Burov V.N., Maniar S.P., Pow E.M. Behavioural responses of western flower thips, Franclinella occidentalis (Pergande), to volatiles from three aromatic plants // Inset Sci. its Appl. 2001. V. 21. №1. P. 61-72.
8. Thime H. Isoliеrung eines neuen phenolischen glykosids aus den bluten von Filipendula ulmaria (L.) Maxim. // Die Pharmazie. 1966. Bd. 21. №2. S. 123.
9. Thime H. Isolierung und strukturaufklarung des spiraeins, eines phenolglykosids aus den bluten von Filipendula ulmaria (L.) Maxim. // Die Pharmazie. 1965. Bd. 20. №2. S. 113-114.
10. Smolarz H.D, Sokolowska-Wosniak A. Chromatografic analysis of phenolic acids in F. ulmaria (L.) Maxim. and F. hexapetala Gilib // Chem. and Environmental Research. 2003. V. 12. №1. P. 77-82.
11. Lamaison I.L., Peninjean-Freytet C., Carnat A. Content of principle flavonoids from the aerial parts of F. ulmaria (L.) Maxim. subsp. ulmaria and subsp. denudata (J. and C. Presl) Hayek // Pharm. Acta Helv. 1992. V. 67. №8. P. 218-222.
12. Авдеева Е.Ю., Шилова И.В., Краснов Е.А., Ралдугин В.А. Тритерпеновые и фенольные соединения лабазника вязолистного // Химия и медицина: матер. VI Всерос. науч. семинара с Молодежной науч. школой. Уфа. 2007. С. 122-123.
13. Краснов Е.А., Ралдугин В.А., Шилова И.В., Авдеева Е.А. Фенольные соединения ПНрешШа и1шапа // Химия природных соединений. 2006. №2. С. 122-124.
14. Шилова И.В., Краснов Е.А., Короткова Е.И., Нагаев М.Г., Лукина А.Н. Антиоксидантная активность экстрактов надземной части лабазника вязолистного // Химико-фармацевтический журнал. 2006. Т. 40. №12. С. 22-24.
15. Авдеева Е.Ю., Шилова И.В., Краснов Е.А., Ралдугин В.А. Изучение химического состава фракций лабазника вязолистного, обладающих антиоксидантной и гепатозащитной активностью // Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: мат. III Всерос. науч. конф. Барнаул, 2007. С. 334-336.
Поступило в редакцию 22 марта 2008 г.
