CC BY
237. Williams P.C., El-Haramien F.G. Frekeh-making in Syria // ICARDA, Aleppo. RACHIS. - 1985. -V. 4. - P. 25-27.
8. Янковский Д.С. Микробная экология человека: современные возможности ее поддержания и восстановления. - К.: Эксперт ЛТД, 2005. - 362 с.
9. Левицкий А.П. Физиологическая микробная система полости рта // Вісник стоматології. - 2007. -№ 1. - С. 6-11.
10. Пат. № 31012 UA. МПК (2006) А61Р31/00. Спосіб моделювання дисбіозу (дисбактеріозу) / Леви-цький А.П., Селіванська І.О., Цісельский Ю.В., Почтар В.М., Розсаханова Л.М., Гулавський В.Т. -2008, Бюл. № 6.
11. Гаврикова Л.М., Сегень И.Т. Уреазная активность ротовой жидкости у больных с острой одон-тогенной инфекцией челюстно-лицевой области // Стоматология. - 1996. - Спец. вып. - С. 49-50.
12. Левицкий А.П. Лизоцим вместо антибиотиков. - Одесса, КП ОГТ, 2005. - 74 с.
13. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тио-барбитуровой кислоты. В кн.: «Современные методы в биохимии». - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.
14. Барабаш Р.Д., Левицкий А.П. Казеинолити-ческая и БАЭЭ-эстеразная активность слюны и слюнных желез крыс в постнатальном онтогенезе // БЭ-БИМ. - 1973. - № 8. - С. 61-67.
15. Левицкий А. П., Марченко А. И., Рыбак Т.Л. Сравнительная характеристика трех методов определения фосфатаз слюны человека // Лабораторное дело. - 1973. - № 10. - С. 624-625.
16. Пат. № 16048 Україна. Спосіб оцінки дисбактеріозу порожнини рота / Левицький А.П., Макаренко О.А., Селіванська І.О., Дєньга О.В., Почтар В.М., Гончарук С.В.; Опубл. 17.07.2006. - 2006, Бюл. № 7.
17. Гирин СВ. Модификация метода определения активности каталазы в биологических субстратах // Лабор. диагностика. - 1999. - № 4. - С. 45-46.
18. Антиоксидантно-прооксидантний індекс сироватки крові щурів з експериментальним стоматитом і його корекція зубними еліксирами / Левицький А. П., Почтар В.М., Макаренко О.А., Гридіна Л.І.// Одеський медичний журнал. - 2006. - № 1. - С. 22-25.
Поступила 15.01.09.
УДК: 616.314-002-085.242 - 085.31:547.953.2:615.038 О. С. Волкова, С. Н. Волков, к. мед. н.
Харьковский национальный медицинский университет Харьковская медицинская академия последипломного образования
БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ КРЫС, СОДЕРЖАЩИХСЯ НА КАРИЕСОГЕННОЙ ДИЕТЕ С ДОБАВЛЕНИЕМ ФОСФАТИДИЛХОЛИНА (ЛЕЦИТИНА), РАСТИТЕЛЬНОГО МАСЛА И ПРЕПАРАТА КАЛЬЦИЯ
В эксперименте на 30 крысах, содержащихся с 1,5-месячного возраста на кариесогенной диете (КГД) Бугаевой-Никитина, показано, что эта диета обладает гепатоток-сическим (снижение уровня белка и увеличение активности щелочной фосфатазы (ЩФ) и аланинтрансаминазы (АЛТ)) и гипо-кальциемическим действием. Добавка к КГД лецитина (в дозе 0,33 % к рациону) проявила очень слабое гепатопротекторное действие, однако выявила вполне определенный нефротоксический эффект (увеличение концентрации мочевины в сыворотке крови). Добавка растительного масла (5 %, всего 10 % к массе рациона) усилила гепатоток-сическое действие КГД. Напротив, кальциевая добавка (полуфабрикат костный пищевой) устранила гепатотоксический эффект КГД, о чем свидетельствовало снижение повышенных активностей в сыворотке крови щелочной фосфатазы и аланинтрансамина-зы, однако не повлияло на гипокальциемию. Ключевые слова: кариесогенная диета, ге-патотоксическое действие, кальций, фосфор, индикаторные ферменты, белок.
О. С. Волкова, С. Н. Волков
Харківський національний медичний університет Харківська медична академія післядипломної освіти
БІОХІМІЧНІ ЗМІНИ В СИРОВАТЦІ КРОВІ ЩУРІВ, ЯКІ УТРИМУВАЛИСЬ НА КАРІЄСОГЕННІЙ ДІЄТІ З ДОБАВКАМИ ФОСФАТИДІЛХОЛІНУ (ЛЕЦИТИНУ), РОСЛИННОЇ ОЛІЇ ТА ПРЕПАРАТУ КАЛЬЦІЮ
В експерименті на 30 щурах, які з 1,5-місячного віку утримувалися на карієсоген-ній дієті (КГД) Бугайової-Нікітіна, показано, що ця дієта виявляє гепатотоксичну
© Волкова О. С., Волков С. Н., 2009
(зниження рівня білку і збільшення активності лужної фосфатази (ЛФ) і аланінтран-самінази (АЛТ)) і гіпокальціємічну дію. Добавка до КГД лецитину (в дозі 0,33 % до раціону) виявила дуже слабку гепатопротек-торну дію, однак цілком визначений нефро-токсичний ефект (збільшення концентрації сечовини в сироватці крові). Добавка рослинної олії (5 %, всього 10 % до маси раціону) підсилила гепатотоксичну дію КГД. Навпаки, кальцієва добавка (напівфабрикат харчовий кістковий) усувала гепатотоксичний ефект КГД, про що свідчило зниження підвищених активностей в сироватці крові ЛФ і АЛТ, однак не впливало на гіпокальціємію. Ключові слова: карієсогенна дієта, гепато-токсична дія, кальцій, фосфор, індикаторні ферменті, білок.
O. S. Volkova, S. N. Volkov
Kharkiv National Medical University Khrakiv Medical Academy of Postgraduational Education
THE BIOCHEMICAL CHANGES IN BLOOD SERUM OF RATS, KEPT TO CARIESGENIC DIET WITH PHOSPHATIDYLCHOLINE (LECITHIN), VEGETABLE OIL AND CALCIUM PREPARATION
At the experiment on 30 rats, kept to cariesgenic diet (KGD) Bugaeva-Hikitina since the age of 6-weeks, this diet was shown to be of hepato-toxic (decrease of proteing level and growth of the activity of alkaline phosphatase (APh) and alanine transaminase (AT) and hypocalcemic action. The addition of lecithin to KGD (dosed at 0,33 % to the ration) has displayed the very weak hepatoprotective effect, but has revealed a rather defined nephrotoxic effect (the growth of the urea in blood serum). The addition of vegetable oil (5 %, 10 % totally to the mass of ration) has intensified the effect of KGD. On the contrary, the calcium additive (semi-finished osseous nutritional) has removed hepatotoxic effect of KGD, about which the reduction of the increased activities in blood serum of alkaline phosphatase and alanine transaminase speak, but it hasn’t influenced hypocalcaemia.
Key words: cariesgenic diet, hepatotoxic effect, calcium, phosphorus, indicator enzymes, protein.
Широкое распространение кариеса зубов обуславливается необходимостью разработки эффективных и доступных всем слоям населения профилактических мер. Одним из заданий стоматологии является дальнейшее изучение механизмов развития кариеса, а экспериментальные исследования в этой области могут повлиять на поиск новых адекватных средств профилактики, которые улучшат стоматологическое и соматическое здоровье населения. Большинство отечественных и зарубежных исследователей, независимо от своих взглядов на суть кариозного процесса и механизм его возникновения, признают большую роль в этом процессе алиментарного фактора [1].
На сегодняшний день с помощью разнообразных специфических диет можно сравнительно легко воспроизвести и кариес зубов [2], и пародонтит [3]. Кариес зубов у белых крыс воспроизводили путем содержания их на кариесогенной диете М.Г. Бугаевой и С.А. Никитина (1954), которая содержит 54 % рафинированного сахара. Опыт использования этой диеты в экспериментальной стоматологии показал, что при содержании животных на таком высокосахарозном рационе, даже при наличии в норме витаминов и микроэлементов, наблюдаются существенные изменения обмена веществ, приводящие к нарушениям минерального обмена, поражению зубов множественным кариесом, угнетению защитных сил организма [4, 5].
Неоднократно предпринимались попытки ослабить кариесогенный эффект этой диеты при выборе новых кариеспрофилакти-ческих средств [6, 7].
Наиболее существенные в этом отношении результаты были получены при использовании препаратов фтора, глицерофосфата, солей кальция и ряда адаптогенов [8, 9].
Цель настоящего исследования. Изучение влияния диетических добавок (лецитина
- природного фосфатидилхолина, подсолнечного масла и препаратов кальция) на биохимические показатели сыворотки крови крыс, находившихся на кариесогенном рационе.
Материалы и методы исследования.
Эксперимент был проведен на 30 крысах-самцах линии WAG (Wistar Albino Glaxo) в возрасте 1,5 месяца (живая масса 50-80 г).
Все животные были разделены на 5 групп: первая - интактные (рацион вивария), вторая
- кариесогенная диета (КГД) М.Г. Бугаевой и С. А. Никитина, содержащая 54 % рафинированного сахара, 18,5 % - творога, 18,5 % сухарей, 5 % подсолнечного масла, 4 г поваренной соли и 1 драже поливитаминного комплекса "Ундевит" на 100 г корма. Третья группа крыс получала КГД с добавлением лецитина (натуральный соевый лецитин, сертификат про гос.регистрацию № 3568-иА 1.003.Х037085-05 от 01.08.2005 № 384, производитель «Фарметикс» Инк., Канада) в дозировке 0,33г/100г корма. Четвертая группа получала КГД с добавлением кальция - в виде полуфабриката костного пищевого, содержащего 15 % кальция, ТУ У 15.1-
01566330.159-2004 [14]. Пятая группа получала КГД с повышенным в 2 раза содержанием нерафинированного подсолнечного масла на 100 г диеты.
Животных, содержавшихся на КГД 60 дней, выводили из эксперимента путем декапитации с учетом правил эвтаназии, затем получали сыворотку крови.
Экспериментальное исследование проводили, придерживаясь научно - практических рекомендаций по содержанию лабораторных животных и обращению с ними и положений "Европейской конвенции о защите позвоночных животных, которые используются для экспериментальных и научных целей".
Таблица 1
Влияние диетических добавок на биохимические показатели сыворотки крови крыс, находящихся на кариесогенной диете (КГД)
№ группы Группа Содержание в сыворотке
белок, г/л мочевина, ммоль/л Са, ммоль/л Р, ммоль/л
1 Контроль 76,2 ± 2,1 6,92 ± 0,05 3,17 ± 0,11 1,58 ± 0,08
2 КГД 65,2 ± 1,8 р < 0,01 6,62 ± 0,51 р > 0,3 2,55 ± 0,11 р < 0,05 1,40 ± 0,08 р > 0,05
3 КГД + лецитин 66,1 ± 2,7 р < 0,05 р1 > 0,5 7,98 ± 0,21 р < 0,001 р1 < 0,05 2,77 ± 0,05 р < 0,05 р1 > 0,05 1,72 ± 0,10 р > 0,1 р1 < 0,05
4 КГД + "Кальций" 69,6 ± 2,8 р > 0,05 р1 > 0,1 5,90 ± 0,30 р < 0,02 р1 > 0,1 2,49 ± 0,04 р < 0,001 р1 > 0,5 1,99 ± 0,23 р > 0,05 р1 < 0,05
5 КГД + масло 67,4 ± 2,4 р < 0,05 р1 > 0,3 5,96 ± 0,30 р < 0,001 р1 > 0,1 2,38 ± 0,085 р < 0,001 р1 > 0,1 1,96 ± 0,30 р > 0,2 р1 > 0,1
Примечание : Р - достоверность отличий по сравнению с контролем (гр. 1);
Р1 - достоверность отличий по сравнению с группой КГД (гр. 2).
В качестве индикаторов дисфункции органов были выбраны следующие показатели: концентрация белка, мочевины, кальция и неорганического фосфора, а также активность ряда индикаторных ферментов: а-амилазы, щелочной фосфатазы (ЩФ), аланин- и аспартаттранзаминаз (АЛТ и АСТ). Совокупность этих показателей позволяет оценить состояние печени (белок, ЩФ, АЛТ), почек (мочевина, фосфор, АСТ), поджелудочной железы (а-амилаза, АСТ), минерального обмена (кальций, фосфор).
В сыворотке крови определяли концентрацию общего белка унифицированным методом по биуретовой реакции, белковые
фракции определяли методом электрофореза, разделение их проводили в геле агарозы [10]. Также определяли количественное содержание кальция о- крезолфталеиновым методом с помощью набора Кальций ОКФ "ДДС" и количественное определение содержания неорганического фосфора УФ -методом с помощью набора "Фосфор "ДДС". Мочевину определяли в сыворотке крови уреазным методом по реакции с фенол-гипохлоритом, активность а-амилазы оптимизированным энзиматическим кинетическим методом с помощью ЕРБ-кинетиков, определяли активность АСТ и АЛТ унифицированным методом по оптимизированно-
му оптическому тесту, активность ЩФ унифицированным методом по скорости гидролиза п-нитрофенилфосфата [10].
Статистическую обработку результатов исследований осуществляли с помощью программы 81ай81;1са-6.0 [11].
Результаты исследований и их обсуждение. В табл. 1 представлены результаты определения в сыворотке концентрации белка, мочевины, кальция и неорганического фосфора. Как видно из этих данных, КГД вызывает достоверное снижение концентрации белка и кальция, что может свидетельствовать о снижении белоксинтезирующей функции печени [12] и нарушении инкреции паратгормона, отвечающего за уровень кальция в крови [4].
Введение в КГД лецитина не повлияло на уровень белка и кальция, однако увеличило концентрацию мочевины и неорганического фосфора, что может свидетельствовать о нарушении функции почек [12].
Дополнительное введение в рацион полуфабриката костного пищевого, содержащего 15 % кальция, вызвало достоверное снижение концентрации мочевины и увеличение концентрации фосфора, тенденцию к повышению уровня белка и еще больше усилило гипокальциемию, что трудно объяснить, поскольку крысы дополнительно получали избыток кальция. По-видимому, снижение инкреции паратгормона влияет на уровень кальциемии сильнее, чем количество кальция, поступающего с пищей.
Дополнительное введение в рацион подсолнечного масла также снизило концентрацию мочевины, еще больше снизило уровень кальция и сохранило высокую концентрацию фосфора.
В табл. 2 представлены результаты определения активности индикаторных ферментов. Как видно из этих данных, активность а-амилазы, отражающей состояние поджелудочной железы, достоверно не изменяется ни в одной из групп животных.
Таблица 2
Влияние диетических добавок на активность ферментов в сыворотке крови крыс, находящихся
на кариесогенной диете
№ группы Группа Активность ферментов
а-амилаза ЩФ АЛТ АСТ
1 Контроль 5231±4343 584,5 ± 52,2 76,8 ± 4,4 236,6 ± 16,5
2 КГД 5319±311 р > 0,7 1109,4 ± 151,2 р < 0,001 119,4 ± 15,3 р < 0,05 238,7 ± 90,8 р > 0,8
3 КГД + лецитин 5380±317 р > 0,7 р1 > 0,8 984,8 ± 154,0 р < 0,05 р1 > 0,2 114,3 ± 4,1 р < 0,001 р1 > 0,7 271,5 ± 26,5 р > 0,1 р1 > 0,1
4 КГД + "Кальций" 5723 ± 574 р > 0,4 р1 > 0,4 628,6 ± 98,8 р > 0,5 р1 < 0,001 78,0 ± 21,7 р > 0,8 р1 > 0,05 279,5 ± 19,5 р > 0,05 р1 > 0,05
5 КГД + масло 5367 ± 106 р > 0,6 р1 > 0,8 1428,7 ± 86,9 р < 0,001 р1 > 0,05 143,1 ± 17,3 р < 0,001 р1 > 0,05 260,4 ± 16,7 р > 0,1 р1 > 0,2
Примечание : Р - достоверность отличий по сравнению с контролем (гр. 1);
Р1 - достоверность отличий по сравнению с группой КГД (гр. 2).
Напротив, активность ферментов, отражающих состояние печени - ЩФ и АЛТ; достоверно возрастает у крыс, находившихся на КГД, что может свидетельствовать о гепа-тотоксическом действии КГД. Введение в КГД лецитина снижает активность ЩФ (однако р > 0,2), а введение масла, напротив, ее еще больше увеличивает. При этом увеличивается и активность индикаторного для печени фермента АЛТ.
Особый интерес представляют результаты влияния КГД с дополнительным вводом полуфабриката костного пищевого ("Кальций") на активность ферментов. Эта добавка возвращает к норме уровень гепатоспецифи-ческих ферментов - ЩФ и АЛТ, что свидетельствует о ее гепатопротекторном действии.
На подобный эффект кальцийсодержащих препаратов указывают и данные других
исследований [13].
Таким образом, КГД вызывает значительные изменения биохимических показателей сыворотки крови, свидетельствующих о гепатотоксическом и гипокальциемиче-ском действии высокосахарозной диеты. Из испытанных трех диетических добавок (лецитин, "Кальций" и масло) лишь кальцийсодержащий препарат оказал гепатопротектор-ное действие, хотя и не смог нормализовать уровень кальция в крови.
Лецитиновая добавка в слабой степени оказала гепатопротекторный эффект, однако проявила нефротоксическое действие, о чем свидетельствует увеличение концентрации мочевины и активности АСТ. Добавка масла еще больше усугубила гепатотоксическое действие КГД, на что указывает повышение активности ЩФ и АЛТ.
Полученные нами данные свидетельствуют о токсическом влиянии КГД на печень и, возможно, на паращитовидные железы. Кальциевые препараты могут оказать защитное гепатопротекторное действие, результаты которого должны сказаться и на состоянии тканей ротовой полости.
Выводы. 1. Кариесогенная диета Бугаевой-Никитина обладает гепатотоксическим и гипокальциемическим действием.
2. Добавление кальция в виде полуфабриката костного пищевого к кариесогенной диете оказывает гепатопротекторное действие, но не влияет на уровень кальция в крови.
3. Добавка лецитина к диете оказывает слабый гепатопротекторный эффект, однако при этом проявляется ощутимое нефроток-сическое действие.
4. Добавка подсолнечного масла к диете усиливает ее гепатотоксическое действие.
Список литературы
1. Левицкий А.П. Алиментарные факторы в патогенезе, профилактике и терапии стоматологических заболеваний // Вісник стоматології. - 2005. - № 2, спец. вып. - С. 5-7.
2. Прохончуков А.А., Жижина Н.А. Экспериментальные модели важнейших стоматологических заболеваний: Руководство по терапевтической стоматологии. - М.: Медицина, 1967. - С. 86-122.
3. Сукманский О.И., Макаренко О.А. Экспериментальная модель генерализованного пародонтита // Вісник стоматології. - 2006. - № 2. - С. 2-3.
4. Сукманский О.И. Теоретические основы профилактики кариеса зубов // Вісник стоматології. -1996. - № 5. - С. 417-421.
5. Експериментальне вивчення дії та специфічної ефективності засобів для догляду за порожниною рота / Терешина Т.П., Косенко К.М., Левицький А.П., Мозгова Н.В., Близнюк Г.О.:Метод. рекомендації. -К.: ДФЦ, 2003. - 42 с.
6. Окушко В.Р. Кариес: превентивная терапия. -Донецк, 1993. - 110 с.
7. Гранько С.А. Воздействие эндогенных и экзогенных факторов на состояние зубов и окружающих тканей у экспериментальных животных. В кн.: "Организация, профилактика и новые технологии в стоматологии": Матер. V съезда стоматологов Беларуси. -Брест, 2004. - С. 374-375.
8. Деньга О.В. Сочетанная терапия основных стоматологических заболеваний у детей // Вісник стоматології. - 1999. - № 4. - C. 51-53.
9. Иммунологическая реактивность у детей 12летнего возраста с кариесом под влиянием комплексной биостимулирующей терапии / . Ковач И.В., Дыч-ко Е.Н., Дегтяренко Т.В., Вербицкая А.В // Український стоматологічний альманах. - 2005. - № 5. -№ 42-45.
10. Карпищенко А.И. Медицинские лабораторные технологии (справочник в 2-х томах) / Под ред. А.И. Карпищенко. - СПб.: Интер-медика, 1999. - Т. 2.
- 350 с.
11. Лапач О.Н., Чубенко А.В., Бабич П.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel. - К.: Морион, 2000.
- 320 с.
12. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия. -М.-СПб.: Бином, Невский Диалект, 1999. - 368 с.
13. Левицкий А.П., Аль-Баюш Х.М., Горохив-ский В.Н. Гепатопротекторное действие кальцийсодержащих препаратов при хронической фтористой интоксикации // Вісник стоматології. - 2008. - № 3. -С. 12-17.
14. Головко Н.П. Научное обоснование и разработка технологии продуктов питания, обогащенных кальцием, с использованием продуктов переработки пищевой кости: Автореф.дис....доктора техн.наук / Харк. гос. ун-т пит. и торг.-Харьков,2008.-34 с.
Поступила 14.01.09.
„Вісник стоматології ” M 1, 2009 11
