CC BY
37
Ек с п еримент иль но-теоре т и ч и п й
УДК 616. 314-002-85. 242-085. 31:547. 953. 2:615. 038 О. С. Волкова, Е. Н„ Рябоконь, *Н. П. Головко
ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ КРЫС, СОДЕРЖАЩИХСЯ НА КАРИЕСОГЕННОЙ ДИЕТЕ
Л ЛПСЛОЛСиМСКЛ ЯСНМТииА ОАЛТиТСЯШАГЛ МАЛА А V Д(ПЫТ1 < 11.ЦГ1 I ГИ ГПУ1Г11ЬПи11У1 V 1Т1ПУ1Ш
И ПРЕПАРАТА КАЛЬЦИЯ
Харьковский национальный медицинский университет *Харьковский государственный университет питания и торговли
Фагоцитарная активность нейтрофилов, открытая 120 лет тому назад И. И. Мечниковым, удостоенным за это открытие Нобелевской премии, является филогенетически наиболее древней формой неспецифической защитной реакции организма от патогенных бактерий [1-3].
Развитие и широкое внедрение в клиническую практику иммунологического анализа в последнее десятилетие показывает, что частота многочисленных заболеваний полости рта, особенно таких заболеваний как пародонтит и кариес, находится в прямой зависимости от состояния местных и общих факторов иммунитета полости рта Н-7].
Содержание животных на ка-риесогенном рационе вызывает глубокие изменения в обмене веществ и в функциональном состоянии ряда органов и тканей [8]. Предположительно в этом случае должны наблюдаться изменения в состоянии фагоцитарной активности нейтрофилов.
Целью настоящего исследования явилось изучение влияния диетических добавок (лецитина, подсолнечного масла и препаратов кальция) на фагоцитарную активность нейтрофилов крыс, находившихся на сахарозо-казеиновой ка-риесогенной диете М. Г. Бугаевой, С. А. Никитина.
Материалы и методы исследования. Эксперимент был проведен на 30 крысах линии WAG (Wistar Albino Glaxo) в возрасте 45±5 дней со средней начальной массой 67±1, 3 г. Длительность эксперимента составила 60 дней.
Экспериментальный алиментарный кариес у белых крыс воспроизводили путем содержания их на сахарозо-казеиновой кариесоген-ной диете {КГД} М. Г. Бугаевой, С. А. Никитина (1954), состоящей из 54% сахарозы, 18, 5% творога и 5% подсолнечного нерафинированного масла, 18, 5% сухарей из белого пшеничного хлеба высшего сорта, 4% солевой смеси, 1 таблетки поливитаминов «Ундевит» на 100 г рациона [9,10].
В качестве профилактических препаратов использовали следующие биологически активные вещества, разрешенные к применению МЗ Украины: лецитин (натуральный соевый лецитин, сертификат о госрегистрации № 3568-UA1. 003. Х037085-05 от 01. 08. 2005 № 384, производитель "Фарметикс» Инк., Канада); полуфабрикат костный пищевой, содержащий 15% кальция, ТУ У 15. 1-01566330. 159-2004 [11]. Также одна из групп получала повышенное в 2 раза (10%) содержание нерафинированного подсолнечного масла.
Перед введением в эксперимент животных взвешивали, описывали их общее состояние. Профилактику препаратами начинали с первого дня введения кариесогенно-го рациона. Препарат животным вводили рег os путем добавления в ежедневный рацион 1 раз в день. Дозировку всех вводимых в рацион препаратов проводили из расчета на килограмм массы тела [12, 13].
Контрольные и опытные группы крыс формировали с учетом одинакового отклонения от средней массы (67+1, 3 г) и далее в зави-
симости от применения профилактических препаратов, распределили по 5 животных в группе следующим образом: 1 группа --интактные крысы на стандартном рационе вивария, сбалансированном по своим качественным и количественным характеристикам, который согласно зоотехническим нормам предусмотрен для данного вида животных [14] (биологический контроль № 1); 2 группа -кариесогенная диета М. Г. Бугаевой и С. А. Никитина (контроль № 2); 3 группа получала КГД с добавлением 0, 33 г лецитина на 100 г корма (натуральный соевый лецитин, сертификат и госрегистрация № 3568-иА1. 003. Х037085-05 от 01. 08. 2005 № 384, производитель "Фарметикс" Инк., Канада); 4 группа получала КГД с добавлением 2% препарата кальция в виде пищевой костной муки, содержащей 15% кальция (ТУ У 15. 1-01566330. 159-2004); 5 группа получала КГД с добавлением дополнительно 5 г подсолнечного масла на 100 г диеты (всего 10%).
Животных содержали на КГД 60 дней, после чего их подвергали эвтаназии под наркозом и получали сыворотку крови.
Содержание экспериментальных животных и манипуляции с ними проводили согласно научно-практическим рекомендациям по содержанию лабораторных животных [15] и обращению с ними, положений "Европейской конвенции о защите позвоночных животных, которые используются для экспериментальных и научных целей", а также в соответствии с положениями "Общих этических
©УКРА1НСЬШЙСТОМАТОЛОПЧНИЙ АЛЬМАНАХ №2, TOM 1, 2010 7
_ I
Ьксперименталъно-теоретичний
принципов экспериментов на животных", утвержденных на I Национальном конгрессе по биоэтике (К. , 2001), и требованиями Приложения № 4 к «Правилам проведения работ по использованию экспериментальных животных», утвержденными приказом Министерства охраны здоровья № 7S5 от 12. 08. 1977 г. «Про меры дальнейшего усовершенствования организационных работ и использованию экспериментальных животных» [16,17].
В сыворотке крови определяли показатели фагоцитоза путем оценки фагоцитарной реакции нейтрофильных лейкоцитов крови. Принцип метода основан на количественном определении поглощенных и переваренных нейтрофилами микроорганизмов при совместной инкубации исследуемой крови с микробной тест-культурой (суточная микробная культура Staphylococcus (штамм С-52).
Расчет и оценка результатов. При микроскопии окрашенных мазков учитывали 100-200 нейтрофилов, в которых подсчитывали:
1) количество клеток с признаками фагоцитоза;
2) количество поглощенных фагоцитами микробов, из них:
количество убитых
(переваренных) микробов,
которые окрашены в различные оттенки розового цвета;
- количество поглощенных микробов, окрашенных в интенсивно розовый цвет.
Фагоцитарный показатель (индекс Гамбургера) - процент фагоцитов, которые принимают активное участие в фагоцитозе из числа сосчитанных нейтрофилов. Фагоцитарное число (индекс Райта) -среднее число микроорганизмов, поглощенных одним активным нейтрофилом, который принимает участие в фагоцитозе.
Для оценки переваривающей функции фагоцитов определяли бактерицидную активность нейтрофилов (БАН), т. е. отношение количества переваренных микробов к общему числу поглощенных микробов (переваренных и непереваренных), выраженное в процентах 118].
Статистическую обработку результатов исследований осуществляли с помощью программы «^айБ^са-б. 0» [19, 20].
Результаты исследований и их обсуждение. Результаты исследования фагоцитарной активности нейтрофилов крыс, содержащихся на КГД и получавших
кормовые добавки, представлены в табл. 1. Из этих данных видно, что у крыс, получавших КГД, достоверно снижены фагоцитарный показатель и бактерицидная активность нейтрофилов. Дополнительное введение в корм лецитина не оказывает существенного влияния на измененные при КГД показатели фагоцитоза. Аналогичные результаты показывает и добавление растительного масла.
В то же время, включение в рацион костной муки почти полностью восстанавливает до нормы фагоцитарный показатель и бактерицидную активность нейтрофилов, сниженные при КГД.
У животных, которых содержали на стандартном рационе вивария, нейтрофилы также не реагировали на введение с кормом лецитина, о чем свидетельствуют практически не изменившиеся показатели фагоцитарной активности (табл. 2).
Таким образом, полученные нами данные о благоприятном влиянии костной муки на фагоцитарную активность нейтрофилов хорошо согласуются с ранее полученными данными о положительном влиянии этого препарата на состояние печени [4].
№ п/п Группы Фагоцитарный показатель, % Фагоцитарное число Бактерицидная активность нейтрофилов, % Индекс завершенности фагоцитоза, ед.
1 Контроль (интактные) 95,6±0,75 3,59+0,39 40,2±0,90 0,9б±0,04
2 КГД 88,8±2,57 р<0,05 4,16±0,27 р>0,1 31,3±1,84 р<0,01 0,87±0,05 р>0,05
3 КГД + лецитин 85,2±1,50 р<0,001 Р,>0.3 4,14±0,28 р>0,1 р,>0,9 34,4±1,1 р<0,05 р,>0,05 0,83±0,02 р<0,05 . р,>0,4
4 КГД + подсолнечное масло 92,0±3,05 р>0,1 р,>0,3 4,47±0,52 р>0,05 Pl>0,4 35,4±2,46 р>0,05 р,>0,05 0,92±0,09 р>0,7 р,>0,4-
S КГД костная мука 95,0+1,00 р>0,8 р,<0,05 4,38±0,62 р>0,1 р,>0,4 38,6+0,80 р>0,05 р,<0,05 0,82±0,01 р>0,4 р,>0,3
р - показатель достоверности различий с группой № 1; р, - показатель достоверности различий с группой № 2.
Таблица 1
Влияние лецитина, подсолнечного масла и костной муки на фагоцитарную активность нейтрофилов крыс. находящихся на кариесогенной диете (КГД)
Е к с п ерименталъно- т еорет и ч и и й
Таблица 2
Влияние лецитина на фагоцитарную активность нейтрофилов интактных крыс
№ п/п Фагоцитарная активность Контроль (интактные) Опыт (+ лецитин)
1 Фагоцитарный показатель, % 95,60±0,75 93,2±1,35 р>0,05
-> Ч'СИ ици юрпъ/? числи !? СПд Л ЭГЧ 4,31±0,43 р>0,3
3 Бактерицидная активность нейтрофилов. % 40,24+0,90 38,06±0,86 р>0,05
4 Индекс завершенности фагоцитоза, ед. 0,96±0,04 0,90+0,06 р>0Д
р - показатель достоверности различий с группой "контроль".
Выводы
X. Содержание крыс на кариесогенном рационе снижает фагоцитарную активность нейтрофилов.
2. Введение в кариесогенный рацион препарата костной муки восстанавливает фагоцитарную активность нейтрофилов.
3. Добавление лецитина и растительного масла в рацион не оказывало существенного влияния на фагоцитарную активность нейтрофилов.
Литература
1. Белова Л. А. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов / Л. А. Белова // Биохимия. - 1997. - Т. 62, № б. - С. 659-668.
2. Eick S. Phagocytosis of periodontopathogenic bacteria by cervicular grabnulocytes is depressed in progressive periodontitis / Eick S., Pfister W., Signsch B., Straube E. // Infection. - 2000. - V. 28, № 5. - P. 301-304.
3. Плехова H. Г. Бактерицидная активность фагоцитов /Н. Г. Плехова // ЖМЭИ. - 2006. - № 6. - С 89-96.
4. Сукманский О. И. Иеспецифическая резистентность / О. И. Сукманский // Вестник стоматологии. -2008. - №4. - С. 35-38.
5. Боровский Е. В. Биология полости рта / Е. В. Боровский, В. К. Леонтьев. - М.: Медицина, 1991. - 304 с.
6. Олейник И. И. О защитных факторах слюны и сыворотки крови больных с воспалительными поражениями пародонта / И, И. Олейник, Е. Б. Маринова И Военно-медицинский журнал. - 1983. - № 11. - С. 62-64.
7. Олейник И. И. Современные аспекты биологии и иммунологии / И. И. Олейник, В. Н. Покровский // Журнал микробиологии. -1987, - №6. - С. 91-97.
8. Волкова О. С. Биохимические изменения в сыворотке крови крыс, содержащихся на кариесоген-ной диете с добавлением фосфатидилхолина (лецитина), растительного масла и препарата кальция / О. С. Волкова, С. Н. Волков // Вестник стоматологии. - 2009. - № 1. - С. 6-10.
9. Бугайова М. Г. Матершли до проблеми Kapiecy: тдсумки експериментальних дослщжень / М. Г. Бугайова, I. А. Бегельман, Л. А. Бланк // Стоматолопя. -1960. - № 6. - С. 3.
10. Бугаева М. Г. Влияние питания белых крыс (самок) диетами, богатыми углеводами, на развитие кариеса зубов у потомства / М. Г. Бугаева // Проблемы терапевтической стоматологии. -1970. - № 5. - С. 11-
16.
11. Головко М. П. Наукове обГрунтування та роз-робка технологи продукт харчування, збагачених на кальцм, з використанням продукта переробки хар-човоТ истки: автореф. дис. на здобуття наук, ступеня доктора техн. наук: спец. 05. 18. 16 «Технология продукта харчування» / М. П. Головко. - Харю в, 2008. - 34 с.
12. Владимиров В. Г. Пщрахунок юлькосл Л1карських препарат!в на поверхню ила, як один ¡з заход!в визна-чення ршно ефективнихдоз для тварин та людини/ В. Г. Владимиров // Фармаколога та токсиколопя. -1976.
- № 1. - С. 123-128.
13. Рыболовлев Ю. Р. Дозирование веществ для млекопитающих по константам биологической активности /Ю. Р. Рыболовлев, Р. С. Рыболовлев // Доклады Академии наук СССР. - 1979. - Т. 247, № 6. - С. 1513-1516.
14. Науково-практичн! рекомендацн з утриман-ня лабораторних тварин та роботи з ними / [Ю. М. Кожем'якш, О. С. Хромов, М. А. Фмтенко, Г. А. Сайфет-дшова]. - К.: Авщенна, 2002. - 156 с.
15. Кожухов А. Н. Ветеринарно-санитарные правила и нормы содержания подопытных (лабораторных) животных, соответствующие международно принятым требованиям / А. Н. Кожухов, И. В. Калини-ченко, А. Т. Добржинский // Лабораторные животные.
- 1992. - Т. 2, № 2. - С. 27-46.
Експер им еитальио-теоре т ич п и й
16. Кудрявицкий А. И. Оценка киллерной бактерицидное™ нейтрофилое периферической крови здоровых и больных в прямом визуальном тесте /А. И. Кудрявицкий // Лабораторное дело. - 1985. - № 1. - С. 45-47.
17. Лапач О. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel I О. Н. Лапач, А. В. Чубенко.. П. Н. Бабич. - К.: Морион, 2000. - 320 с.
Стаття надшшло
1.03.2010 р.
Резюме
В експеримент! на 30 битах щурах вщтворювали експериментальний каркс за допомогою д1ети М. Г. Бугайов01, С. А. Нштна (1954) 1 встановили зниження фагоцитарно'1 активное« нейтроф!л1в.
Одночасне введения препарату натурального соевого лецитину та рослинно'1 олп практично не викликало змш показника фагоцитарно! активность Введения в каргесогенний рацюи нашвфабрикату кгсткового харчового з ум!стом 15% кальщю вщновлювало до норми фаго-цитарний показник та бактерицидну актившеть нейтрофЬпв, знижених при кар1есогеншй Д1Ст1.
Ключовг слова: кариес, цукрово-казешова кар1есогенна д1ета, лецитин, кальщй, фагоцитарна актнвшеть нейтрофШв,
Summary
The experimental caries at the research of 30 white rats was reproduced with the help of Bugayo-va's and Nikitin's diet (1954). The reduction of phagocytes' activity of neutrophils was settled.
Concurrent introduction of natural soy-bean lecithin and vegetable oil practically didn't cause any indices changes of phagocytes' activity of neutrophils. Introduction into cariesogenic ration semi-fin-ished product of osseous food, containing 15% of calcium, restored up to standard phagocytes' index and bactericidal activity of neutrophils, reduced with the help of cariesogenic diet.
Key words: caries, saccharose - caseinic cariesogenic diet, lecithin, calcium, phagocytes' activity of neutrophils.
