CC BY
79
УДК 615.847.6:612.014.462.9:616-006
М. Yu. Larin1, Р. К. Ivanov1, D. Yu. Blokhin1, N. V. Golubtsova1, E. A. Golenkina1, V. I. Filippov2,
O. L. Ershov3, N. G. Moshechkov4
BIODERGRADABLE IMMUNOMAGNETIC SORBENTS IN ONCOLOGY
1 N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow 2 N. M. Emanuel Institute of Biochemical Physics RAS, Moscow 3 State Research Center of Russian Federation Federal State Unitary Enterprise “State Research Institute for Chemistry and Technology of Organoelement Compounds ", Moscow 4 Federal State Unitary Enterprise “Central Scientific Research Institute
of Precision Machine-Building", Klimovsk
ABSTRACT
One of the most effective technologies to isolate the stem cells used for transplantation is magnetic separation with biodegradable immunomagnetic sorbents.
We have developed a technology to obtain the biodegradable immunomagnetic sorbents on the basis of magnetit-dextran carriers. The sorbent Ferro-Dex-115, which is a conjugate of a magnetit-dextran carrier and monoclonal antibodies ICO-115 specific to CD34-receptor of hemopoetic stem cells has been constructed. The preparation was not toxical, had no pyrogenic effects and did not alter the physical and chemical parameters of blood tests. Moreover, the procedure of stem cells isolation has no negative effect on cell viability.
The design within the study technology of obtaining stable magnetit water colloids allows to receive a wide range of nanostructures one can use in medicine and biotechnology.
Key words: magnetic separation, biodegradable immunomagnetic sorbent.
М. Ю. Ларин1, П. К. Иванов1, Д. Ю. Блохин1, Н. В. Голубцова1, Е. А. Голенкина1,
В. И. Филиппов2, О. JI. Ершов3, Н. Г. Мошечков4
БИОДЕГРАДИРУЕМЫЕ ИММУНОМАГНИТНЫЕ СОРБЕНТЫ В ОНКОЛОГИИ
1 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва 2 ИБХФ им. Н. М. Эммануэля РАН, Москва 3 ФГУП ГНИИХТЭОС, Москва 4 ФГУП ЦНИИТочМаш, Климовск
РЕЗЮМЕ
Одним из наиболее эффективных методов выделения стволовых клеток для пересадки является магнитная сепарация с использованием биодеградируемых иммуномагнитных сорбентов.
Авторами разработана технология получения биодеградируемых иммуномагнитных сорбентов на основе магне-тит-декстрановых носителей. Получен сорбент ФерроДекс-115, представляющий собой конъюгат магнетит-декстра-нового носителя и моноклональных антител ICO-115, специфичных к СБ34-рецептору стволовых гемопоэтических клеток. Токсикологические исследования показали, что препарат не токсичен, не обладает пирогенными свойствами и не влияет на физико-химические показатели крови. Установлено, что процедура выделения клеток с применением иммуномагнитного сорбента ФерроДекс-115 не оказывает негативного влияния на их жизнеспособность.
Созданная в ходе работы технология получения устойчивых водных коллоидов магнетита позволяет получать широкий спектр наноструктур, которые могут найти применение в технике, медицине и биотехнологии.
Ключевые слова: магнитная сепарация, биодеградируемый иммуномагнитный сорбент.
ВВЕДЕНИЕ приводит к угнетению кроветворной функции костного
Применение в практике лечения онкологических мозга, что обусловлено гибелью стволовых гемопоэти-
заболеваний массированной химио-и лучевой терапии ческих клеток [19, 22]. Для решения этой проблемы
требуется пересадка костного мозга [8], но она сопряжена с рядом трудностей: при аутологичной трансплантации возможно внесение реципиенту опухолевых клеток, что может привести к развитию рецидивов опухолевого процесса, при аллогенной трансплантации в организм реципиента попадают иммунологически чужеродные Т-лимфоциты, которые могут вызвать развитие реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ). Альтернативой трансплантации костного мозга является пересадка стволовых клеток кроветворения.
Одним из наиболее перспективных методов выделения стволовых кроветворных клеток является магнитная сепарация с использованием иммуномагнитных сорбентов. Для получения чистых клеточных фракций данным методом возможны 2 подхода: позитивная и негативная селекция клеток. При позитивной селекции целевые клетки соединяются с иммуномагнитным сорбентом. При негативной селекции (деплеции) клеточная фракция обогащается целевыми клетками за счет последовательного или одновременного удаления нецелевых клеток [6, 7, 10, 14, 16, 18, 21,22,24,25, 27].
Применение магнитной сепарации в биологии и медицине затруднено тем, что биологические объекты (отдельные клетки, клеточные органеллы, биополимеры, комплексы биомакромолекул и др.) обладают диамагнитными свойствами, намагниченность насыщения их чрезвычайно мала. Поэтому для разделения нативных биологических объектов по магнитным характеристикам требуется приложение значительных по напряженности и градиенту магнитных полей, что, во-первых, сложно осуществлять технически, а во-вторых, может непредсказуемо влиять на сами биологические объекты. Таким образом, необходимо применение метки, способной придать биологическому объекту выраженные суперпара- или ферромагнитные свойства. Применение ферромагнетиков предпочтительнее, поскольку их магнитные характеристики значительно выше. К ферромагнетикам относят металлы группы железа: железо, кобальт, никель и некоторые их соединения (оксиды, карбонильные соединения и др.). Эти вещества позволяют придать биологическому объекту магнитовосприимчи-вость, т. е. способность к движению в приложенном неоднородном магнитном поле. Для этого необходимо объединить магниточувствительный компонент с биологическим объектом. Это можно осуществить разными методами: сорбцией магниточувствительного компонента биологическим объектом, фагоцитозом магнитных частиц клетками и др. При технической доступности такие приемы не позволяют решить главной задачи — сепарации объектов по заданным биологическим характеристикам. Поэтому возникает необходимость использования биомагнитного сорбента, способного селективно связываться с биологическими объектами. В качестве молекул-векторов, обеспечивающих специфическое взаимодействие, наиболее перспективны олигонуклеотиды и иммуноглобулины [1,9, 15,26].
В связи с вышеизложенным необходимо определить понятие магнитоуправляемого сорбента, который состоит из магниточувствительной фазы, матрицы
и лигандов, обладающих способностью специфически связываться с биологическими объектами.
Совокупность магниточувствительной фазы и матрицы называют магнитоуправляемым носителем, а магнитоуправляемый носитель, связанный с биологически активными лигандами, — магнитоуправляемым (биомагнитным) сорбентом (рис. 1).
1
Рис. 1. Схема магнитоуправляемого сорбента:
1 — магниточувствительная фаза; 2 — матрица; 3 — иммобилизованный биоактивный лиганд
Магниточувствительная фаза обеспечивает магни-тофорез комплекса магнитоуправляемый сорбент — биологический объект [9, 11]. Она должна обладать следующими характеристиками:
— значительной удельной намагниченностью насыщения (не менее 15 А-м^кг-1) в полях доступной напряженности (до 4-105 А-м-1) и градиента (до 4-104 А-м-2), обусловливающей большую силу взаимодействия магнитомеченных объектов с внешним магнитным полем, превышающую силу взаимодействия с диамагнетиками в 10б раз, что позволяет выделять чистые фракции биологических объектов;
— малой остаточной намагниченностью, препятствующей спонтанной агрегации частиц сорбента после проведения магнитной сепарации;
— возможностью получения частиц, обладающих малым размером (от десятков нанометров до 10 микрометров);
— технологичностью.
В качестве магниточувствительной фазы применяются железо, никель, оксид железа (III) — гематит, оксид железа (II, III) — магнетит, карбонильное железо.
Наиболее перспективным по совокупности предъявляемых характеристик является магнетит (Ре304).
Матрица обеспечивает инкапсулирование магниточувствительной фазы, препятствуя ее непосредственному взаимодействию с клетками и биомолекулами, и связывание биологически активных лигандов [4, 5,11, 13].
26 ЛЕКЦИИ
/ Матрица должна удовлетворять следующим тре- Цель работы — технологии получения биодегра-бованиям: дируемых иммуномагнитных сорбентов и фармаколо- — биосовместимость или биодеградируемость; гического препарата иммуномагнитного сорбента, — механическая прочность; специфичного к СБ34-позитивным стволовым клет- — химическая устойчивость; кам гемопоэтическим человека. — наличие поверхностных функциональных групп (гидроксильных ОН, альдегидных СОН, карбок- МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ сильных СООН, аминогрупп NH2, гидразидных Водные суспензии магнетита получали путем NHNH2, амидных CONH2, хлорметильных СН3С1,' осаждения из раствора сульфата железа (II) и хлорида А железа (III) при добавлении аммиака. Для этого навес-эпоксидных —с—-t— , ки семиводного сульфата железа (FeS04-7H20) массой 15 г и хлорида железа (FeCl3) массой 17,5 г растворяли || /—\ в 75 см3 дистиллированной воды. В полученный рас-тозильных 0 | \\ // СНз ); твор вносили 75 см3 водного аммиака с массовой долей о 25 % при постоянном перемешивании. При этом про- — в ряде случаев способность к специфической исходило выпадение осадка черного цвета — магнети-адсорбции определенного класса соединений (напри- та. Сосуд, в котором протекала реакция, охлаждали мер, адсорбция оксидом кремния (Si02) нуклеиновых проточной водой температурой 20 °С. Осаждение час-кислот); тиц магнетита из полученной суспензии для удаления — минимальное неспецифическое взаимодей- маточного раствора проводили путем магнитного кон-ствие с биологическими объектами. центрирования в поле кобальт-самариевого постоянно- Харакгеристика биосовместимости исключает по- го магнита напряженностью 1,5-105 А-м-1. вреждающее воздействие матрицы на биологический Фракционный состав водных суспензий магнетита объект. В качестве биосовместимых матриц наиболее ча- определяли методом фотонной (лазерной) корреляци-сто используются сополимеры стирола, метакриловой онной спектроскопии (динамического лазерного све-кислоты, органические соединения кремния, акриламид. торассеяния). Измерения проводились на приборе Компоненты биодеградируемых матриц должны Nicomp 380 (Nicomp PSS, США) на основе гелий-не-подвергаться разрушению посредством естественных онового лазера с длиной волны 632,8 нм. Для интерметаболических процессов биологического объекта, претации результатов измерения использовалось про-В качестве биодеградируемых матриц используются граммное обеспечение, входящее в комплект поставки различные белки (альбумин, желатин), полисахариды прибора. Дополнительный контроль размеров частиц (декстран, крахмал, хитозан). осуществляли методом трансмиссионной электронной Выбор биологически активного лиганда обуслов- микроскопии на микроскопе Tesla BS-500. ливается характером выделяемого биологического объ- В качестве стабилизирующей среды для водных екта. Например, для выделения нуклеиновых кислот суспензий магнетита с концентрацией 10 мг-см^ис-используются олигонуклеотиды, для выделения фер- пользовалась цитрат-фосфатная буферная система ментов могут применяться аллостерические эффекто- с pH 4,0 и ионной силой от 0,01 до 1,0 моль-дм-3, ры или аналоги субстратов, для выделения клеток Магнетит-декстрановые частицы получали методом и белков — антитела и т. д. Предпочтительно, чтобы адсорбции декстрана на поверхности частиц магнетита лиганды могли ковалентно связываться с веществом в стабилизированных водных суспензиях при комнатной матрицы, что предотвращает их десорбцию с поверх- температуре с постоянным перемешиванием. Концентри-ности носителя в процессе использования магнитоуп- рование полученных частиц осуществляли 2 способами: равляемого сорбента. Кроме того, при ковалентном в поле центробежных сил — центрифугированием при связывании возможно стерически предпочтительное 3-103 г и магнитным осаждением в поле кобальт-самарие-соединение лиганда с носителем, позволяющее опти- вого постоянного магнита напряженностью 1,5-105 А-ьг1. мизировать его взаимодействие с биологическим объ- Продолжительность процесса варьировала от 1 мин до ектом и в ряде случаев увеличить стабильность присо- 3 ч, соотношение магнетит/декстран — от1:10до10:1. единенного лиганда по сравнению с сорбированным. Для предотвращения десорбции матрицы молекулы Применение при позитивной селекции биосовмес- декстрана сополимеризовали с эпихлоргидрином (рис. тимых магнитоуправляемых сорбентов обусловливает 2). Для этого к 100 см3 суспензии магнетит-декстрано-необходимость отделения последних от клеток после вых частиц с концентрацией 10 мг-см-3 добавляли выделения. Это сопряжено с рядом методических 100 см3 раствора гидроксида натрия с концентрацией трудностей: возможностью повреждения клеток, 5 моль-дм-3, после чего к полученной смеси под тягой сложностью подбора необходимых реагентов, услож- добавляли 40 см3 эпихлоргидрина. Реакцию проводили нением процедуры сепарации. Избежать всех этих в течение 24 ч при интенсивном встряхивании, проблем позволяет использование биодеградируемых Для удаления непрореагировавших компонен-иммуномагнитных сорбентов, т. к. в этом случае клет- тов применяли метод диализа и высокоградиентную ки, связавшиеся с частицами сорбента, можно вводить магнитную сепарацию в полях напряженностью реципиенту. 5-105 А-м-1 [12]. Диализ проводили против 20 дм3 дис- -
№3/том4/2005 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
Рис. 2. Соединение двух цепей декстрана эпи-хлоргидрином
тиллированной воды в течение 6 ч, процедуру повторяли 20 раз. Динамику процесса диализа оценивали спектрофотометрически на спектрофотометре Specord UV VIS (Carl Zeiss Jena, ГДР).
Фракционный состав полученных магнетит-декстра-новых носителей контролировали методами фотонной корреляционной спектроскопии и трансмиссионной электронной микроскопии. Магнитные характеристики определяли на магнитных весах Фарадея (Bruker, США).
Фракционирование частиц носителя по размерам проводили путем центрифугирования, по магнитным характеристикам — методом полиградиентной магнитной сепарации [12].
Активирование носителя для ковалентного присоединения молекул иммуноглобулинов осуществляли методом периодатного окисления (рис. 3). Для этого к 10 см3 суспензии магнетит-декстрановых частиц с концентрацией 10 мг-см-3 добавляли 2,5 см3 раствора перйодата калия с концентрацией 25 ммоль-дм-3 (конечная концентрация перйодата калия составляла 5 ммоль-дог3). Реакцию проводили в течение 60 мин при температуре 23 °С, затем реакционную смесь переносили в диализный мешок и диа-лизовали при 4 °С против 2 дм3 боратного буферного раствора с pH 8,5 и концентрацией 20 ммоль-дм-3.
Иммобилизацию иммуноглобулинов на активированном носителе (рис. 4) проводили следующим обра-
Рис. 3. Периодатное окисление декстрана
зом: к 10 см3 суспензии магнетит-декстрановых частиц с концентрацией 10 мг-см_3 добавляли 5 см3 раствора белка в боратном буферном растворе с pH 8,5 и концентрацией 20 ммоль-дм'3, варьируя соотношение иммуноглобулин/носитель от 1 до 100 мкг на 1 мг. Реакцию проводили в течение 6 ч, после чего добавляли 2,5 см3 раствора глицина с концентрацией
0,5 моль-дм-3. Через 1 ч вносили 2,5 см3 раствора бор-гидрида натрия с концентрацией 0,25 моль-дм-3. Для отделения частиц иммуномагнитного сорбента от
Рис. 4. Конъюгирование активированного декстрана с иммуноглобулинами
реакционной смеси применяли метод высокоградиентной магнитной сепарации [12].
Количественную оценку связывания иммуноглобулинов с магнитоуправляемым носителем проводили спектрофотометрически, колориметрическим методом Брэдфорда и простой радиальной иммунодиффузией по Манчини.
Стерилизацию полученных иммуномагнитных сорбентов проводили методом фильтрования с использованием стерилизационных фильтров из ацетата целлюлозы с диаметром пор 0,22 мкм (Озгпошсб, США).
Выделение клеток методом магнитной сепарации с использованием полученных сорбентов проводили в модельном эксперименте с культурой клеток КС-1. Определение жизнеспособности выделенных клеток до и после криоконсервации осуществляли методом эксюпозии красителя трипанового синего. Морфологические характеристики клеток оценивали методом световой микроскопии.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В ходе исследований было установлено, что в не-стабилизированных водных суспензиях магнетита размеры частиц составляют от 0,5 до 3,0 мкм, причем доля частиц размером от 2,0 до 3,0 мкм — около 80 %. Кроме того, была отмечена нестабильность фракционного состава при повторении синтеза магнетита.
Биодеградируемые магнигоуправляемые сорбенты должны иметь размеры частиц, значительно меньшие по сравнению с выделяемыми клетками; кроме того, требуется высокая стабильность их физических характеристик, которые во многом зависят от размеров и структуры магниточув-ствигельнош ядра, поэтому непосредственное применение нестабилизированных водных суспензий магнетита для получения биодеградируемых магаигоуправляемых носителей невозможно.
Для уменьшения размеров частиц магнетита в водных суспензиях применяются различные методы: физические (ультразвуковое диспергирование), химические (использование поверхностно-активных веществ). Однако ультразвуковое диспергирование не дает гарантии стабильности свойств полученных суспензий, а диапазон размеров частиц и их количественное соотношение при использовании данного метода варьируют в очень широких пределах. Использование классических поверхностно-активных веществ, таких, как олеиновая кислота или додецилсульфат натрия, требует их введения еще на этапе синтеза магнетита, а сами они в значительной степени препятствуют адсорбции декстрана на частицы магнетита [3, 13,17, 20, 23].
Для преодоления этих трудностей нами было проведено исследование влияния различных веществ (ряд неорганических и органических кислот и их солей: серная, соляная, ортофосфорная, уксусная, лимонная кислоты, гидрокарбонат, карбонат, одно- и двухзаме-щенный ортофосфат, ацетат, цитрат натрия) и их композиций (карбонатный, карбонат-гидрокарбонатный, фосфатный, ацетатный, цитратный, цитрат-фосфат-ный буферные растворы) на фракционный состав водных суспензий магнетита. Наилучшие результаты были достигнуты при использовании цитрат-фосфатной буферной системы. Оно позволяет получать частицы магнетита в водных суспензиях размером от 20 нм (монокристаллы магнетита) до 1 мкм (рис. 5), достигая при этом высокой степени гомогенности (свыше 90 %). Суспензии магнетита в цитрат-фосфатном буферном растворе стабильны в течение продолжительного времени (по нашим наблюдениям, не менее года), стабилизатор не препятствует адсорбции молекул декстрана, единственный отмеченный его недостаток — возможность контаминации микроорганизмами (плесневые грибы).
иоо 1000 900 800 700 600 ■ 500-400 300 -200 100 о
л
/'А
•••••' Л'
л
5
pH
-♦-1 -*-•2 ••*••3
Рис. 5. Зависимость размеров частиц от pH буферной системы (ионная сила 0,1 моль-дм-3) и концентрации магнетита (распределение по объему):
1 — концентрация магнетита 1 мг-см-3; 2 — концентрация магнетита 10 мг-см-3; 3 — концентрация магнетита 100 мг-см-3
Данный метод стабилизации водных суспензий магнетита открывает широкие возможности использования продуктов на их основе в различных отраслях науки и техники: получение магнитных жидкостей на водной основе (промышленность), создание биодегра-дируемых магнитоуправляемых сорбентов, контрастных субстанций для магнитно-резонансной томографии, агентов для локальной гипертермии (биология, медицина, биотехнология) и т. д.
Оценка динамики процесса адсорбции декстрана на частицы магнетита в водных суспензиях и конечных свойств полученных носителей позволила выявить оптимальные условия данного процесса. При использовании соотношения магнетит/декстран 1:5 и продолжительности процесса 1 ч на основе суспензии магнетита с размером частиц 50 нм удалось получить магнитоуправляемые носители с размером частиц 80±10 нм, содержанием магнетита 25-35 %, намагниченностью насыщения 20±2 А-м2-кН. Суспензия носителя устойчива к гравитационной седиментации, частицы быстро (в течение 3-5 мин) осаждаются в магнитных полях напряженностью 2-105 А-м-1.
Удельная емкость носителя при ковалентном связывании иммуноглобулинов составляла до 50 мкг белка на 1 мг носителя (при этом на 1 частицу носителя в среднем приходилось 70-80 молекул иммуноглобулина).
При ковалентном присоединении к магнетит-декс-трановому носителю моноклональных антител 1СО-115 был получен иммуномагнитный сорбент ФерроДекс-115, специфичный к С034-антигену стволовых кроветворных клеток человека [1].
В проведенных модельных экспериментах по выделению СВ34-позитивных клеток было установлено, что выделенные клетки не изменяют своих морфологических характеристик, их жизнеспособность до и после криоконсервации сопоставима с показателями жизнеспособности клеток, не подвергнутых процедуре сепарации.
Токсикологическая оценка безопасности применения иммуномагнитного сорбента ФерроДекс-115 показала, что он не оказывает влияния на физико-химические показатели крови, не обладает пирогенными свойствами, не оказывает местного раздражающего действия и хорошо переносится лабораторными животными [2].
ВЫВОДЫ
1. Разработан метод получения стабильных водных суспензий магнетита с размером частиц от 20 нм до 1 мкм с применением цитрат-фосфатного буферного раствора.
2. Создана технология получения биодеградируе-мых носителей для иммуномагнитной сепарации на основе магнетита и декстрана.
3. Отработана методика ковалентного присоединения белков к активированной периодатным окислением матрице магнитоуправляемого носителя.
4. Получен биодеградируемый иммуномагнитный сорбент ФерроДекс-115, специфичный к стволовым
кроветворным клеткам человека, обладающий следующими характеристиками: размер частиц 80±10 нм, удельная намагниченность насыщения 20±2 А-м^кг-1, удельная емкость ковалентного связывания иммуноглобулинов 10-50 мкг на 1 мг носителя.
5. Токсикологические исследования препарата иммуномагнитного сорбента ФерроДекс-115 показали, что он не оказывает влияния на физико-химические свойства крови, хорошо переносится животными (мыши, кролики), не оказывает местнораздражающего действия, не обладает пирогенными свойствами.
6. СОЭ4-позитивные клетки, выделенные с помощью иммуномагнитного сорбента ФерроДекс-115, не изменяют своих морфологических характеристик и сохраняют жизнеспособность после криоконсервации на уровне, достаточном для их дальнейшего использования с целью трансплантации.
ЛИТЕРАТУРА
1. Иванов П. К. Моноклональные антитела в онкологии: Автореф. дис... д-ра мед. наук. — М., 2001.
2. Отчет «Токсикологическая оценка безопасности иммуносорбента ФерроДекс-115» — ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва, 2004.
3. Розенцвейг Р. Феррогидродинамика / Пер. с англ. — М.: Мир, 1989. — 356 с.
4. Arshady R. Biodegradable microcapsular drug delivery system // J. Bioactive Compatible Polymers. — 1990. — Vol. 5. — P. 316-342.
5. Arshady R. Preparation of polymer nano- and microspheres by vinyl polymerization techniques // J. Vitro Encapsulation. — 1988. — Vol. 5. — P. 101-114.
6. Chalmers J. J., Zborowsk М., Sun L., Moore L. Flow through, immunomagnetic cell separation // Biotech. Progress. — 1998. — Vol. 14. — P. 141-148.
7. Desprits D., Flohr T. A., Uppenkamp M. et al. CD34+ cell enrichment for autologous peripheral blood stem cell transplantation by use of the CliniMACS device // J. Hematother. Stem Cells Res. — 2000. — Vol. 9. — P. 557-564.
8. Gronthos S., Simmons P. J. The biology and application of human bone marrow // The journal of hema-totherapy. — 1996. — Vol. 5. — P. 15-23.
9. Guedson J. L., Avrameas S. Magnetic solid phase enzyme-immunoassay // Immunochemistry. — 1977. — Vol. 14. — P. 443.
10. Gunkel М., Koehl U., Bartling T. et al. Purification of CD34+ or AC 133+ progenitor cells for autologous and allogeneic transplantation: modified purging strategy with enharanced purity and high depletion of normal from malignant and T-cells // Bone Marrow Transplant. —
2000. — Vol. 25, Suppl. 1. — P. 837.
11. Hasset K. L., Stecher L. C., Hendrickson D. N. Polymer-anchored metal oxide particles // Inorganic chemistry. — 1980. — Vol. 19, No. 2. — P. 416-441.
12. Hatch. GP, Stelter R. E. Magnetic design considerations for devices and particles used for biological high gradient magnetic separation (HGMS) systems //
J. Magnetism & Magnetic materials. — 2001. — Vol. 225.
— P. 262-276.
13. Hess P. H., Parker P. H. Jr. Polymer for stabilization colloidal cobalt particles // J. Applied Polymer Sci. — 1966. —Vol. 10. —P. 1915-1927.
14. Kantor A. B„ Gibbons I., Miltenyi S., Schmitz J. Magnetic cell sorting with colloidal superparamagnetic particles // Cell separation methods and applications. — New York: Marcel Dekker, 1998. P. 153-173.
15. Lansdorp P. M., Thomas T. E. Purification and analysis of bispecific tetrameric antibody complexes // Molec. Immunol. — 1990. — Vol. 27. — P. 659.
16. Laurenti L., Sora F., Piccirillo N., Chiusolo P. et al. Immune reconstitution after autologous selected peripheral blood progenitor cell transplantation: comparison of two CD34+ cell-selection systems // Transfusion. —
2001. — Vol. 41. — P. 783-789.
17. Massart R. Preparation of aqueous magnetic liquids in alkaline and acidic media // IEEE Transact. Magnetics. — 1981. — Vol. 17, No. 2. — P. 1247-1248.
18. Miltenyi S., Muller W., Weichel W., Radbruch A. High gradient magnetic cell separation with MACS // Cytometry. — 1990. — Vol. 11. — P. 231.
19. Morgan M., Gross-Wieltsch V, Onneken J. et al. High dose therapy (HDT) with haematopoietic stem cell rescue (SCR) for paediatric solid tumors: a single center experience // Bone marrow transplantation. — 2001. — Vol. 27, Suppl. 1.
20. Mosbach K., Anderson B. Magnetic ferrofluid for the preparation of magnetic polymer and their application for affinity chromatography // Nature. — 1977. — Vol. 270. — P. 259-260.
21 .Partington K. M., Jenkinson E. J., Anderson G. A novel method of cell separation based on dual parameter immunomagnetic cell selection // J. Immunol. Meth. — 1999. —Vol. 223. —P. 195.
22. Richel D. J., Johnsen H. E, Canon J. et al. Highly purified CD34+ cells isolated using magnetically activated cell selection provide rapid engraftment following high-dose chemotherapy in breast cancer patients // Bone Marrow Transplant. — 2000. — Vol. 25. — P. 243-249.
23. Sano K., Doi M. Theory of agglomeration of ferromagnetic particles in ferromagnetic fluids // J. Phys. Society Jpn. — 1983. — Vol. 52, No. 8. — P. 2810-2815.
' 24. Schumm M., Lang P., Taylor G. et al. Isolation of highly purified autologous and allogeneic peripheral CD34* cells using the CliniMACS device // J. Hematother. Stem Cells Res. — 1999. — Vol. 8. — P. 209-218.
25. Schumm M., Schuele K., Schumm A. et al. Clinical scale system for depletion of alloreactive T-cells intended for immunotherapy after allogeneic transplantation // ISHAGE/ISCT. — 2002. — Vol. 78.
26. Sinclair B. To bead or not to bead: applications of magnetic bead technology // Scientist. — 1998. — Vol. 12(13). —P. 17.
27. Sun L., Zborowski M, Moore L. R., Chalmers J. J. Continuous, flow-through immunomagnetic cell sorting in a quadrupole field // Cytometry. — 1998. — Vol. 33. — P. 469-475.
