АССОЦИИРОВАННОСТЬ ПОЛИМОРФИЗМА В ПРОМОТОРНЫХ УЧАСТКАХ ГЕНОВ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗ (MMP2, MMP3, MMP9) С ВАРИАНТАМИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ЖЕНЩИН РОССИИ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

© Коллектив авторов, 2014 Вопросы онкологии, 2014. Том 60, № 5

УДК 618.19:61:575

A.B. Шевченко 1, В.И. Коненков1, Е.Ю. Гарбуков2, М.Н. Стахеева2

АССОЦИИРОВАННОСТЬ ПОЛИМОРФИЗМА В ПРОМОТОРНЫХ УЧАСТКАХ ГЕНОВ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗ (ММР2, ММРЗ, ММР9) С ВАРИАНТАМИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ

ЖЕЛЕЗЫ У ЖЕНЩИН РОССИИ

1 ФгБу Нии клинической и Экспериментальной лимфологии сО рАМН, Новосибирск 2 Фгбу Нии онкологии томского научного центра сО рАМН

Проанализирована ассоциированность функционального полиморфизма промотор-ных регионов генов ММР2 С — 1306Т, ММР 9 С -1562 Т, ММР3 5А -1171 6А в группе здоровых женщин и больных РМЖ с целью выявления информативных маркеров, ассоциированных с риском развития заболевания. В исследование включены образцы ДНК 395 женщин с РМЖ и 329 здоровых женщин. Геноти-пирование полиморфизмов осуществляли методом рестриктазного анализа продуктов амплификации (ПДРФ-анализ).

Среди больных женщин достоверно реже выявляется носительство 6A6A MMP3-1117 и ММР 9-1562ТТ генотипов и значительно чаще носительство MMP3 5А6А генотипа. Среди больных женщин достоверно реже встречаются генотипы 6А6А ММРЗ-1117 и ММР 9-1562ТТ и значительно чаще генотип ММРЗ 5А6А. Риск лимфогенного метастазирования снижен у пациенток с ММР9-1562СС генотипом. Напротив, гетерозиготность в этой позиции может рассматриваться как фактор риска метастазирования. Выявлена ассоциированность ММР3 5А6А генотипа со степенью злокачественности опухоли.

Ключевые слова: рак молочной железы, полиморфизм, матричные металлопротеиназы

Одним из главных молекулярных механизмов, лежащих в основе инвазии и метастазирования опухолей, считается разрушение окружающей базальной мембраны и внеклеточного матрик-са (ВКМ) ассоциированными с опухолью про-теазами [12,26]. На всех этапах прогрессирова-ния опухолевого процесса активную роль играют цинк-зависимые эндопептидазы семейства ММР, представленные более чем 20-ю секретируемыми или связанными с поверхностью клеток ферментами, которые способны к деградации практически всех белковых компонентов ВКМ [20]. Многие опухоли имеют локально увеличенные уровни матричных металлопротеиназ, способных разлагать любой белок матрикса, что позволяет многим исследователям связать их с инвазивным фенотипом опухоли [27]. Для многих типов опухо-

лей возрастание уровней ММР в плазме крови позитивно коррелирует с высокими показателями метастазирования и считается весомым прогностическим фактором [6].

Опухоли различной локализации связывают в основном с наиболее исследованными типами металлопротеиназ ММР-2, ММР-3 и ММР-9. Несмотря на динамичный характер содержания этих ММР в тканях и биологических жидкостях, базовый уровень их синтеза и экспрессии у человека зависит от генетических факторов [8]. Выявлены полиморфизм MMP-2- 1306 С^Т, причем *С аллель ассоциирован с высокой про-моторной активностью, полиморфизм ММР-9 -1562 С—>Т, где наличие минорного аллеля *Т в генотипе обеспечивает высокую транскрипционную активность гена, и полиморфизм ММР3 -1171, обладающей высокой транскрипционной активностью при носительстве 5А5А генотипа [16]. Исходя из этого, мы проанализировали полиморфизм промоторных регионов генов ММР2(-1306), ММР3 (-1171), ММР 9 ( -1562) у больных раком молочной железы (РМЖ) и ассоциированность вариантов и генотипов со степенью злокачественности опухоли и лимфоген-ным метастазированием.

Материалы и методы

В исследование включены образцы ДНК больных инфильтрирующим операбельным РМЖ стадии T1-4N0-3M0 (395 человек), которые получали оперативное лечение в НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН. Средний возраст женщин на момент заболевания составил 51,6 лет (20-79 лет). У 143 (36,4%) женщин менструальный цикл был сохранен, а 258 (63,6%) находились в менопаузе. При гистологическом исследовании операционного материала у 310 (79%) человек был диагностирован инфильтрирующий прото-ковый, у 48 (12%)—инфильтрирующий дольковый рак, у остальных—единичные случаи других гистологических форм. Уницентрическая форма роста опухоли отмечена у 319 (81%) женщин, у 51 (13%) наблюдался мультицен-трический рост опухоли (с учетом клинически невыявляе-мых случаев). Образцы ДНК контрольной группы (п=329, европеоиды), сопоставимой по возрасту с выборкой больных РМЖ, были отобраны из банка ДНК популяционной выборки жителей г. Новосибирска. Средний возраст женщин составил 52,4 года (30-84 лет). Работа проводилась с соблюдением принципов добровольности и конфиденци-

альности. На данное клиническое исследование было получено разрешение комитета по биомедицинской этике ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН.

Однонуклеотидный полиморфизм промоторного региона гена ММР 2 исследовался в позиции -1306 С^Т, ММР3 в позиции -1171 5А^6А, ММР 9 в позиции -1562 С^Т. Участки промоторного региона генов амплифицировали с использованием пары специфичных праймеров [4,25], затем продукты амплификации подвергались гидролизу эндо-нуклеазами рестрикции Вз1Х1 для ММР2, ТШ для ММР3 и ЭрЫ для ММР9 («СибЭнзим», Новосибирск). Электрофорез проводили в 2,5% агарозном геле.

При статистическом анализе результатов исследований использовали такие показатели как частота встречаемости генов, генотипов, отношение шансов (ОЯ) с расчетом 95% доверительного интервала (ОЯ 95%С1). Расчет величины ОЯ проводили по методу Вульфа-Холдейна [1]. Частоту встречаемости генотипов определяли как процентное отношение индивидов, несущих генотип, к общему числу обследованных в группе по формуле: Г=п/Ы, где п—количество раз встречаемости генотипа, N—численность обследованных. Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга [2]. Достоверность различий частот распределения изучаемых признаков в альтернативных группах определяли по критерию х2 с поправкой Йетса на непрерывность и двустороннему варианту точного метода Фишера для четырехпольных таблиц [3].

Результаты

Частоты генотипов в группе популяционно-го контроля соответствуют распределению частот в европеоидных популяциях и равновесию Харди-Вайнберга. Наблюдается отклонение от распределения Харди-Вайнберга в сторону уменьшения гетерозиготности ММР2 -1306 у пациенток с РМЖ, что вероятно свидетельствует о воздействии какого-либо фактора, сцепленного с развитием неопластического процесса на соотношение генотипов в данной группе женщин (табл. 1). Анализ ассоциированности полиморфизма промоторных регионов генов ММР 2, ММР3 и ММР 9 с исследуемым неопластическим процессом (табл. 2) выявил, что среди больных женщин достоверно реже выявляется генотип 6А6А промоторного региона гена ММР3-1117, ассоциированный с недостаточным уровнем продукции анализируемого протеолити-ческого фермента (ОЯ =0,46, Р= 0,0005), а также минорный генотип ММР 9-1562ТТ (ОЯ =0,22, Р=0,0067), ассоциированный с высоким конституциональным уровнем продукции данной ме-таллопротеиназы. Значительно повышена среди пациенток с РМЖ и частота генотипа ММР3 5А6А, что с учетом вышеперечисленных результатов, вероятно, свидетельствует о выраженной дисрегуляции генетически обусловленных процессов функционирования систем стабилизации базальных мембран и экстрацеллюлярного мат-рикса при опухолевом росте.

Распределение частот генотипов матричных металлопротеиназ у пациенток с РМЖ с уче-

том статуса региональных лимфатических узлов представлено в табл.3. Риск лимфогенного ме-тастазирования снижен у пациенток с ММР9-1562СС генотипом с низкой транскрипционной активностью. Напротив, гетерозиготный вариант носительства гена может рассматриваться как фактор риска метастазирования за счет включения в генотип аллеля, ответственного за более высокий уровень экспрессии (OR =0,60, Р 0,0389 и OR =1,66, Р 0,0389 соответственно). Можно предположить, что лимфогенный путь метастазирования не характерен для пациенток с изначально более низким уровнем продукции металлопротеиназы 9, известной также как же-латиназа, разрушающая коллаген IV типа, являющийся главным компонентом базальной мембраны эндотелия, создающим условия для клеточной миграции. Поскольку повышение содержания ММР в первичной опухоли больных РМЖ тесно связано со степенью злокачественности новообразования, а уровень секреции металлопротеиназ обусловлен, в том числе, и генетическими особенностями, мы проанализировали ассоциированность полиморфизма ММР 2, MMP3 и ММР 9 со степенью злокачественности новообразования. Из анализа были исключены пациентки с поражением обеих молочных желез с разной степенью злокачественности опухоли (табл. 4). Выявлена ассоциированность носительства гетерозиготного варианта гена ММР3 5А6А со степенью злокачественности опухоли. Частота этого генотипа снижена у пациенток с III степенью злокачественности относительно пациенток с I и II степенью злокачественности (OR=0,23, Р 0,03 и OR=0,19, Р 0,04 соответственно), что можно рассматривать как защитный фактор в процессе развития заболевания. Вместе с тем, необходимо отметить, что частота выявления генотипов MMP2 и MMP3, ассоциированных с высоким базовым уровнем продукции обеих металлопротеиназ закономерно нарастает в группах пациенток по мере возрастания степени злокачественности от I ко II и III степени.

Обсуждение

Злокачественные опухоли характеризуются инвазивным ростом и способностью к мета-стазированию. Деградация базальной мембраны и стромы — ключ, необходимый для начала этих процессов [6,7]. У женшин в нормальной ткани молочной железы практически не регистрируется экспрессия ММР-2 в отличие от пациенток с РМЖ, когда ММР-2 экспрессия фиксируется и в опухолевых клетках, и в окружающих стро-мальных клетках [9,18,21]. Кроме того, в сравнении со смежными тканями грудной железы,

Таблица 1. Проверка распределения генотипов ММР2, ММР3, ММР9 на равновесие Харди-Вайнберга у пациенток с РМЖ

ПОЛИМОРФИЗМЫ N.O. N.E. P_gen H obs H_exp /2 Р

MMP2 С-1306Т N=371 C 553 0,7453

T 189 0,2547

СС 216 206,07 0,5822 0,5554

ТС 121 140,86 0,3261 0,3797 7,37 0,0089

ТТ 34 24, 07 0,0917 0,0649

MMP3 5A -11716А N=320 6 347 0,5422

5 293 0,4578

66 95 94,07 0,2968 0,2940

56 157 158,86 0,4907 0,4964 0,16 0,8218

55 68 67,07 0,2125 0,2096

MMP9 C-1562T N=390 C 666 0,8538

T 114 0,1462

СС 280 284,33 0,7179 0,7291

ст 106 97,34 0,2718 0,2496 3,08 0,1018

ТТ 4 8,33 0,0103 0,0213

Примечание. N.O. и N.E. — наблюдаемая и ожидаемая численности генотипов; P_gen — частота аллельного варианта гена в долях единицы; H_obs и H_exp - наблюдаемая и ожидаемая частота генотипов;; P—достоверность различий наблюдаемых и ожидаемых частот генотипов с поправкой на непрерывность (Йетса) для одной степени свободы

Таблица 2. Частота генотипов ММР 2, MMP3 и ММР 9 у пациенток с РМЖ (и в группе сравнения)

полиморфизм РМЖ (%) Здоровые (%) OR 95%С1

ММР2-1306 N=371 N=224

СС 216(58,22) 133 (59,38) 0,95 0,67-1,35

СТ 121(32,61) 75(33,48) 0,96 0,67-1,39

ТТ 34(9,17) 16(7,14) 1,31 0,68-2,55

ММР3-1171 N=320 N=128

6А6А 95(29,68) 61(47,66) 0,46* 0,30-0,72

5А6А 157(49,07) 48(37,50) 1,61** 1,03-2,50

5А5А 68(21,25) 19(14,84) 1,55 0,86-2,81

ММР9-1562 N=390 N=329

СС 280(71,79) 229(69,60) 1,11 0,79-1,55

СТ 106(27,18) 85(25,84) 1,07 0,76-1,52

ТТ 4(1,03) 15(4,56) 0,22*** 0,06-0,71

Примечание. *Х2=12,33 Р 0,00047 , **Х2=4,47 Р 0,0344 , *** Х2=7,34 Р 0,0067 с учетом поправки Йейтса на множественные сравнения

Таблица 3. Распределение частот генотипов ММР 2, MMP3 и ММР 9 у пациенток с РМЖ с с учетом лимфогенного метастазирования

полиморфизм Лимфогенное метаста-зирование (%) Отсутствие лимфогенного метастазирования (%) OR 95%С1

ММР2-1306 N=162 N=197

СС 93(57,41) 117(59,39) 1,01 0,47-2,20

СТ 54(33,33) 62(31,47) 1,09 0,68-1,74

ТТ 15(9,26) 18(9,14) 0,92 0,59-1,44

ММР3-1171 N=137 N=170

6А6А 39(28,47) 51(30,00) 1,32 0,74-2,36

5А6А 65(47,44) 86(50,59) 0,88 0,55-1,42

5А5А 33(24,09) 33(19,41) 0,93 0,55-1,57

ММР9-1562 N=167 N=210

СС 110 (65,87) 160(76,19) 0,60* 0,37-0,97

СТ 55(32,93) 48(22,86) 1,66** 1,02-2,68

ТТ 2(1,20) 2(0,95) 1,26 0,13-12,64

Примечание. *Х2=4,38 Р 0,0389,** Х2=4,26 Р 0,0389 с учетом поправки Йейтса на множественные сравнения

Таблица 4. Распределение частот генотипов ММР 2, ММР3 и ММР 9 у пациенток с различной степенью злокачественности опухоли

Полиморфная позиция Степень злокачественности 1 Степень злокачественности 2 Степень злокачественности 3 OR 2/ 1 95%а OR 3/ 2 95%а OR 3/1 95%а

1 2 3

ММ^-1306 N=32 N=193 N=19

СС 17(53,13) 110(56,99) 12(63,16) 1,17 0,52-2,63 1,29 0,45-3,82 1,51 0,41-5,69

СТ 11(34,37) 63(32,65) 7(36,84) 0,93 0,40-2,19 1,20 0,41-3,49 1,11 0,29-4,26

И 4(12,50) 20(10,36) 0 0,81 0,24-3,03 0,00 0,00-2,47 0,00 0,00-2,59

ММР3-1171 N=27 N=173 N=18

6А6А 8(29,63) 56(32,37) 10(55,55) 1,14 0,44-3,03 2,61 0,89-7,75 2,97 0,73-12,57

5А6А 14(51,85) 81(46,82) 3(16,67) 0,82 0,34-1,98 0,23* 0,05-0,88 0,19** 0,03-0,93

5А5А 5(18,52) 36(20,81) 5(27,78) 1,16 0,38-3,76 1,46 0,42-4,81 1,69 0,33-8,66

ММР9-1562 N=32 N=208 N=19

СС 23(71,88) 143(68,75) 10(52,63) 0,86 0,35-2,09 0,51 0,18-1,43 0,43 0,11-1,66

СТ 9(28,12) 62(29,81) 9(47,37) 1,09 0,45-2,70 2,12 0,75-5,99 2,30 0,60-8,95

И 0 3(1,44) 0 ns ns ns

Примечание. *Х2= 4,86 Р 0,0275, **Х2= 4,29 Р 0,0383 с учетом поправки Йейтса на множественные сравнения

отмечено постепенное увеличение экспрессии ММР-2 от неагрессивных до агрессивных раковых образований; ММР-2 уровень экспрессии значительно выше в опухолевой ткани по сравнению с другими тканями молочной железы [10,13], а уровень ММР-2 значительно выше в пораженной опухолью ткани железы, чем в группе здоровых[17]. При исследовании полиморфизма ММр 2 при РМЖ оценивается вклад, как правило, одного полиморфизма ММр2-1306 (ге243865). По данным исследований у женщин Латинской Америки (89 случаев РМЖ и 100 здоровых женщин) и при обследовании у шведских женщин (959 случаев РМЖ и 952 здоровых), показано отсутствие ассоциации заболевания с ММр2 полиморфизмом [19,23], что соответствует полученным нами данными. В то же время, в китайской популяционной группе (462 случая РМЖ и 509 здоровых) показано значительное снижение риска развития РМЖ для носителей ММр2-1306 T аллеля, а носительство редкого гомозиготного генотипа ММр2-1306 CС имело тенденцию усиливать риск развития заболевания [5,28], что подчеркивает необходимость учитывать популяционные особенности при генетических исследованиях.

Ряд исследователей считают стромализин 1 (ММРЗ) естественным канцерогенным фактором. При исследовании MMPЗ -1171 и его ассоциации с процессом метастазирования при разных типах опухолей, включая РМЖ, показано, что женщины с генотипом 5A6A или 6A6A имели более низкий риск развития метастазов. Эта ассоциированность сохранялась и при стра-

тификации по типам опухолей [14, 15]. В нашей группе также сохраняется подобная ассоциированность. У пациенток с ММр3-6А6А генотипом, ответственным за сниженный уровень экспрессии, ниже риск развития патологии; наличие в генотипе высокоэкспрессирующего варианта гена увеличивает отношения шансов развития заболевания, а носительство гетерозиготного генотипа ассоциировано с более низкой степенью злокачественности опухоли.

Желатиназа В (ММП-9) обеспечивает ан-гиогенез в опухолевой ткани, тем самым способствуя ее росту. Показано, что у пациенток с РМЖ Т аллель MMP-9 ^1562т промоторного региона гена связан с развитием опухоли, прогрессией и агрессивным фенотипом опухоли и может рассматриваться как маркер прогрессии заболевания [22,24]. Однако при учете гормонального статуса опухоли показано, что при непротоковом раке при положительном ЕЯ статусе и отсутствии TP5З мутации аллель MMP-9 -1562 T ассоциирован с хорошим прогнозом течения заболевания [11]. В нашей группе ММр9 -1562—единственная полиморфная позиция, ассоциированная непосредственно с лимфогенным метастазированием опухоли. Причем, ММр9-1562 СС генотип с низкой транскрипционной активностью гена ассоциирован с низким лимфогенным метастазированием, а ММр9-1562 Ст генотип с более высоким экспрессионным уровнем является фактором риска метастазирования опухоли. Таким образом, результаты ассоциированности различных MMP полиморфизмов с метастазированием довольно противоречивы, что

можно объяснить несколькими причинами. Это могут быть популяционные различия, вносящие свой вклад в результаты исследования. Кроме того, опухоль может находиться под влиянием определенных факторов, например, гормонального фона, которые необходимо учитывать при составлении групп для исследования.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бабич П.Н., Чубенко А.В., Лапач С.Н. Применение современных статистических методов в практике клинических исследований. Сообщение третье. Отношение шансов: понятия, вычисление и интерпретация // Украинский мед. журн. — 2005. — 46 (2). — С. 113-119.

2. Вейр Б. Анализ генетических данных. Дискретные генетические признаки. Пер. с англ. — М.: Мир, 1995. — 400 с.

3. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. — М.: Практика, 1998. — 459 с.

4. Шевченко А. В., Голованова О. В., Коненков В. И., и др. Анализ полиморфизма генов матриксных метал-лопротеиназ-2 и -9 у пациентов с ишемической болезнью сердца // Терапевт. архив. — 2010. — 82 (1). — С. 31-35.

5. Beeghly-Fadiel A, Lu W, Long J-R, at al. Matrix Metalloproteinase-2 Polymorphisms and Breast Cancer Susceptibility // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. — 2009. — Vol. 18. — P. 1770-1776.

6. Bjorklund M, Koivunen E. Gelatinase-mediated migration and invasion of cancer cells. // Biochim Biophys Acta. — 2005. — 1755. — P. 37-69.

7. Deryugina EI, Quigley JP. Matrix metalloproteinases and tumor metastasis // Cancer Metastasis Rev. — 2006. — Vol. 25. — P. 9-34.

8. Egeblad M , Werb Z. New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression // Nat Rev . — 2002. — Vol. 2. — P. 163-176.

9. Fujiwara A, Shibata E, Terashima H. et al. Evaluation of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) activity with film in situ zymography for improved cytological diagnosis of breast tumors // Breast Cancer. — 2006. — Vol. 13. — P. 272-278.

10. Garbett E, Reed M, Stephenson T, Brown N. Proteolysis in human breast cancer // Mol Pathol. — 2000. — Vol. 53. — P. 99-106.

11. Grieu F, Li W , lacopetta B. Genetic polymorphisms in the MMP-2 andMMP-9 genes and breast cancer phenotype // Breast Cancer Research and Treatment . — 2004. — Vol. 88. — P. 197-204.

12. Hanahan D, Weinberg R. Hallmarks of Cancer: The Next Generation // Cell. — 2011. — Vol. 144 (5). — P. 646-674.

13. Hanemaaijer R, Verheijen J, Maguire T. et al. Increased gelatinaseA and gelatinase-B activities in malignant vs. benign breast tumors // Int J Cancer. — 2000. — Vol. 86. — P. 204-207.

14. Hughes S, Agbaje O, Bowen R. et al. Matrix metalloproteinase single-nucleotide polymorphisms and haplotypes predict breast cancer progression // Clin Cancer Res. — 2007. — Vol. 13. — P. 6673-6680.

15. Krippl P, Langsenlehner U, Renner W. et al. (2004) The 5A/6A polymorphism of the matrix metalloproteinase 3 gene promoter and breast cancer. Clin Cancer Res 10: 3518-3520.

16. Lamblin N, Bauters Ch, Hermant X. et al. Polymorphisms in the Promoter Regions of MMP-2, MMP-3, MMP-9 and MMP-12 Genes as Determinants of Aneurysmal Coronary Artery Diseas // J. Am. Coll.Cardiol. — 2002. — Vol. 40(1). — P. 43-48.

17. LaRocca G, Pucci-Minafra I, Marrazzo A. et al. Zymographic detection and clinical correlations of MMP-2 and MMP-9 in breast cancer sera // Br J Cancer. — 2004. — Vol. 90. -P. 1414-1421.

18. Lebeau A, Muller-Aufdemkamp C, Allmacher C. et al. Cellular protein and mRNA expression patterns of matrix metalloproteinases-2,-3 and -9 in human breast cancer: correlation with tumour growth // J Mol Histol. — 2004. — Vol. 35. — P. 443-455.

19. Lei H, Hemminki K, Altieri A. et al. Promoter polymorphisms in matrix metalloproteinases and their inhibitors: few associations with breast cancer susceptibility and progression // Breast Cancer Res Treat. — 2007. — Vol. 103. — P. 61-69.

20. Malemud CJ Matrix metalloproteinases (MMPs) in health and disease: an overview // Front Biosci. — 2006. — Vol. 11. — P. 1696-1701.

21. Pellikainen J, Ropponen K, Kataja V. et al. Expression of matrix metalloproteinase (MMP)-2 and MMP-9 in breast cancer with a special reference to activator protein-2, HER2, and prognosis // Clin Cancer Res. — 2004. — Vol. 10. — P. 7621-7628.

22. Przybylowska K, Kluczna A, Zadrozny M, et al. Polymorphisms of the promoter regions of matrix metalloproteinases genes MMP-1 and MMP-9 in breast cancer // Breast Cancer Res Treat.- 2006 . Vol. — 95 (1). — P. 65-72.

23. Roehe A, Frazzon A, Agnes G, et al. Detection of polymorphisms in the promoters of matrix metalloproteinases 2 and 9 genes in breast cancer in South Brazil: preliminary results // Breast Cancer Res Treat. — 2007. — Vol. 102. — P. 123-124.

24. Sadeghi M, Motovali-Bashi M, Zohreh H. MMP-9 promoter polymorphism associated with tumor progression of breast cancer in Iranian population // Internat. J Integrative Biolog. — 2009. — Vol. 6 (1). — P. 33-37.

25. Takahashi M, Haro H, Wakabayashi X et al. The association of degeneration of the intervertebral disc with 5a/6a polymorphism in the promoter of the human matrix metalloproteinase-3 gene // J Bone Joint Surg. — 2001. — Vol. 83 B. — P. 491-495.

26. Yoon S, Park S, Yun C, Chung A. Roles of matrix metalloproteinases in tumor metastasis and angiogenesis // J Biochem Mol Bio. — 2003. — Vol. 36. — P. 128-137.

27. Wieczorek E, Reszka E, Gromadzinska J, Wasowicz W. Genetic polymorphism of matrix metalloproteinases in breast cancer // Neoplasma. — 2012. — Vol. 59 (3). — P. 237-247.

28. Zhou X Yu C, Miao X, et al. Substantial reduction in risk of breast cancer associated with genetic polymorphisms in the promoters of the matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 genes // Carcinogenesis. — 2004. — Vol. 25. — P. 399-404.

Поступила в редакцию 02.04.2014 г.

A.V. Shevchenko1, V.I. Konenkov1, E.Yu. Garbukov2, H.N. Stakheeva2

Associating of polymorphism in the promoter regions of genes of metalloproteinase (MMP2, MMP3, MMP9) with options of the clinical course of breast cancer in Russian women

1 Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology, Novosibirsk 2Research Institute of Oncology, Tomsk

There were analyzed associating of functional polymorphism of the promoter regions of genes MMP2 C —1306T, MMP 9 C -1562 T, MMP3 5A -1171 6A in a group of healthy women and

breast cancer patients in order to identify informative markers associated with the risk of developing the disease. The study included 395 DNA samples from women with breast cancer and 329 healthy women. Genotyping of polymorphisms was carried out by restriction analysis of amplification products (RFLP—analysis). Among female patients there was revealed significantly seldom a carrier of 6A6A MMP3-1117 and MMP 9-1562TT genotypes and also significantly increased the frequency of MMP3 5A6A genotype. The risk of lymph node metastasis reduced in patients with MMP9-1562CC genotype. Conversely heterozygosis at this position could be regarded as risk factor for metastasis. It was revealed associating of MMP3 5A6A genotype with the degree of malignancy.

Key words: breast cancer, polymorphism, matrix metalloproteinase