CC BY
51
6. Ураков А.Л., Стрелкова Т.Н., Корепанова М.В. и др. Возможная роль качества лекарств в клинико-фармацевтической оценке степени безопасности инфузионной терапии // Нижегородский медицинский журнал. — 2004. — № 1. — С. 42-44.
7. Ураков АЛ., Стрелков Н.С., Любимова Н.Е. и др. Экспертиза причин развития постинъекционного некроза тканей на примере инъекционного введения раствора диклофенака натрия // Проблемы экспертизы в медицине. — 2005. — № 3. — С. 34-36.
8. Стрелков Н.С., Ураков А.Л., Коровяков А.П. и др. Постмортальная клинико-фармакологическая оценка влияния введенных в вену растворов лекарственных средств на процесс прижизненного развития ацидоза или алкалоза // Проблемы экспертизы в медицине. — 2002. — № 2. — С. 12-14.
9. Стрелков Н.С., Ураков АЛ., Садилова П.Ю. и др. Роль физико-химических показателей качества растворов лекарственных средств для инъекций в формировании ими постинъекционного повреждения тканей // Клиническая фармакология и терапия. — 2005. — № 4. — С. 80.
© Ю.М. Максимовский, Т.Д. Чиркова, Л.И. Ульянова, М.А. Ульянова, И.М. Шишкина, 2006 УДК 311.2-002-092:616.314.17-008.1-07-085:579
Ю.М. Максимовский, Т.Д. Чиркова, Л.И. Ульянова, М.А. Ульянова, И.М. Шишкина ASLO КАК ТЕСТ КЛИНИКО-ЭКСПЕРТНОЙ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ПАРОДОНТА У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ КАТАРАЛЬНЫМ ГИНГИВИТОМ
Кафедра факультетской терапевтической стоматологии (зав. — проф. Ю.М. Максимовский) МГМСУ В статье обсуждаются вопросы клинико-экспертной оценки состояния пародонта у пациентов с хроническим катаральным гингивитом посредством определения уровня ASLO в десневой жидкости. Совпадение показателей ASLO, полученных лабораторным и клиническим методами позволяет рассматривать данный критерий в качестве несложного по выполнению клинического экспресс-теста, что имеет огромное значение для практической стоматологии, в том числе для реализации приоритетного национального проекта «Здоровье». Ключевые слова: клинико-экспертная оценка, ASLO, гингивит, пародонт, десневая жидкость.
ASLO AS TEST OF CLINICAL-EXPERT ESTIMATION OF PARODENTIUM AT THE CASES OF CHRONICLE CATARRHAL GINGIVITIS Ju.M.Maksimivsky, T.D.Chirkova, L.I.Ylyanova, M.A. Ylyanova, I.M.Shishkina The questions of clinical-expert estimation of parodentium at the cases of chronicle catarrhal gingivitis by definition of gingival fluid are discussed in the article. Coincidence of ASLO results received by laboratory and clinical methods allow considering this criteria as simple express method. All this have great significance for practical stomatology, including realization of priority national health program.
Key words: clinical-expert estimation, ASLO, gingivitis, parodentium, gingival fluid.
Проблема гингивита и пародонтита является одной из наиболее ключевых проблем, решение которых может стать реальным механизмом улучшения оказания стоматологической помощи населению, в том числе с точки зрения «качества жизни» населения, тем более в рамках реализации приоритетного национального проекта «Здоровье». С этих позиций разработка новых подходов к экспертной оценке состояния пародонта у пациентов является несомненно актуальной задачей стоматологии и практического здравоохранения в нашей стране.
Общеизвестно, что в развитии гингивита и ранних стадий пародонтита наибольшая роль отводится микробным и иммунным механизмам. Прогноз и течение данных заболеваний зависят от уровня неспецифической резистентности как организма в целом, так и тканей, вовлеченных в патологический процесс. Разностороннее изучение показателей клеточного и гуморального иммунитета при заболеваниях пародонта показало существенные нарушения иммунных процессов [1, 2]. Выявлены разнонаправленные иммунные нарушения, характеризующиеся волнообразным течением с активацией иммунных реакций в зависимости от степени заболевания [3, 8, 9].
Именно поэтому актуальной становится разработка подходов к объективной оценке иммунного статуса не только больного, но и здорового человека. Это связано с тем, что состояние пародонта определяет равновесие между микроорганизмами полости рта и макроорганизмом, которое совместимо с минимальной деструкцией тканей и характеризуется готовностью к своевременному восстановлению поврежденных структур [2, 3]. Нарушение этого равновесия приводит к появлению очагов поражения тканей, характерного для острого или хронического заболевания. В свете этого, основная роль в защите слизистых
оболочек полости рта от микроорганизмов и возникновении хронических заболеваний пародонта принадлежит местному иммунитету. Именно от его функционального состояния зависит, какую направленность может принять инфекционный процесс [8, 10, 11].
Среди показателей местного иммунитета тканей па-родонта особое место принадлежит белкам острой фазы воспаления, в частности антистрептолизину — О (ASLO) [5, 6]. Как правило ASLO появляется при инфекции, обусловленной стрептококками групп А, С и G, продуцирующими стрептолизин-О в организме. Он относится к антителам класса IgG. ASLO повышает бактерицидную активность лейкоцитов, в частности, макрофагов и естественных клеток киллеров. Не исключается прямое действие этого белка на Т-лимфоциты, так как белок имеет сродство к одному из рецепторов Т-лимфоцитов [6, 7].
Ранее, при микробиологическом исследовании материала из зубодесневого кармана пациентов с пародонтитом были выявлены грамположительные кокки (Str. pyogenes, Str. mitis, Str. epidermidis и др.) [9, 12]. Они являются продуцентами стрептолизина-О, в ответ на который в месте воспаления клетки и начинают вырабатывать ASLO, что может служить информативным тестом начала воспаления [5, 8, 7].
Учитывая все вышесказанное, целью настоящей работы явилось определение ASLO в десневой жидкости больных хроническим катаральным гингивитом, сопоставление данных, полученных в лабораторных и клинических условиях, для разработки доступного и информативного диагностическо-прогностического теста.
Клинические и иммунологические показатели изучали у 30 добровольцев 18 — 25 лет (15 мужчин и 15 женщин), из них 15 — здоровых и 15 человек с хроническим катаральным гингивитом.
При клиническом обследовании оценивали уровень гигиены полости рта с помощью индекса API, степень выраженности воспалительных явлений в пародонте с помощью индекса PMA, кровоточивость десен оценивали с помощью индекса SBI по Мюлеману. По данным анамнеза выясняли наличие соматических заболеваний, отягощенной наследственности, аллергических реакций и частоту простудных заболеваний.
Каждому обследуемому произведено рентгенологическое исследование (ортопантомограмма) с целью подтверждения отсутствия признаков деструкции костной ткани.
Материалом для обследования явилась жидкость десневой борозды обследуемого, которую собирали в тефлоновые пробирки объемом 0,5 мл.
Метод определения белка острой фазы воспаления ASLO основан на взаимодействии стабилизированного стрептолизина-О, иммобилизованного на полистирольных латексных частицах с соответствующими антителами (AS-LO) в десневой жидкости или крови человека. Появление отчетливо видимой агглютинации латекса в ячейках черного стекла указывает на положительный результат теста.
Для увеличения секреции десневой жидкости производили раздражение десневой борозды одноразовым градуированным зондом. Инструмент вводили в десневую борозду до упора и проводили по радиусу с дистальной и медиальной поверхности зуба. Каждому из обследуемых проводили определение содержания ASLO в десневой жидкости двумя способами.
Первый способ определения ASLO выполняли в лабораторных условиях, на базе ГНЦ Института иммунологии ФУ РФ.
Десневую жидкость, собранную в тефлоновые пробирки центрифугировали 10 минут при 1500 оборотов/минуту на центрифуге «Heraos». Надосадок удаляли, к осадку добавляли 20 мкл физиологического раствора, ресуспенди-ровали, затем проводили реакцию методом агглютинации латексных частиц, с использованием наборов «Human», Germany. Постановку реакции проводили на темном стекле с лунками, согласно рекомендованной методике.
Второй способ определения ASLO проводили в клинике, на кафедре факультетской терапевтической стоматологии МГМСУ.
Десневую жидкость обследуемых, собранную в тефлоновые пробирки пипетировали на темное стекло. Далее постановку реакции проводили по рекомендованной методике.
Достоверность различий полученных результатов определяли методом вариационной статистики с помощью t-критерия Стьюдента (Гублер Е.В., 1978).
Анамнез обследуемых имел сходные черты. Все обследуемые страдали простудными заболеваниями, серьезных аллергических заболеваний и соматической патологии не выявлено.
Клиническое обследование пациентов при обращении позволило сформировать две группы на основании жалоб и определения местного статуса полости рта. Первую группу (группа здоровых лиц, норма) составили 15 человек, не имеющих признаков воспалительных изменений тканей пародонта. У обследуемых данной группы отмечена физиологическая глубина зондирования десневой борозды (в пределах 2мм), нормальный уровень расположения десневого края относительно коронок зубов, физиологическая подвижность зубов и отсутствие признаков кровоточивости десны. Отсутствие признаков деструкции костной ткани альвеолярной кости было подтверждено рентгенологически. Состояние гигиены
полости рта у лиц данной группы имело средние значения. Апроскимальный индекс бляшки по Ланге составил 24%. Индекс кровоточивости (8В1) по Мюлеману и пародон-тально-маргинально-альвеолярный индекс (РМА) не выходили за переделы нормы (табл. 1).
Вторую группу составили 15 человек с начальными признаками воспалительных изменений десны. У всех обследованных этой группы отмечены признаки воспаления и кровоточивости десны, по крайней мере, в области 3 сегментов зубных рядов. В то же время у всех больных ХКГ имелась физиологическая степень подвижности зубов, зубодесневое прикрепление было сохранено в области большинства зубов. Отсутствие признаков деструкции костной ткани было подтверждено рентгенологически. Таким образом, у всех лиц, вошедших в основную группу, имелся хронический катаральный гингивит. Состояние гигиены полости рта у всех обследуемых данной группы имело удовлетворительный характер, что подтверждали значения апроксимального индекса бляшки (АР1) по Ланге, который составил 39%. Пародонтально-марги-нально-альвеолярный индекс (РМА) не превышал 1,15. Индекс кровоточивости (БВ1) по Мюлеману составил 12 (табл. 1).
Таблица 1.
Показатели API, PMA и SBI у здоровых обследуемых и у лиц с ХКГ
Обследуемые API (%) PMA SBI (%)
Здоровые, n=15 24 0 0
ХКГ, n=15 39 1,15 12
Следующим этапом работы явилось определение уровня А8ЬО в десневой жидкости обследуемых.
Типичный результат определения антител к стрепто-лизину-О (А8ЬО) в десневой жидкости методом агглютинации латексных.
Результаты сопоставления уровня А8ЬО в десневой жидкости больных гингивитом, полученные в условиях лаборатории и в клинике приведены в табл. 2. Как видно из таблицы, у пациентов с ХКГ обнаружено высокое содержание А8ЬО в десневой жидкости, которое составляло 680 Е/мл. Следует отметить, что в десневой жидкости контрольной группы А8ЬО не был обнаружен. Показательно, что результаты определения А8ЬО лабораторным и клиническим методами не отличались и были абсолютно идентичны, что позволяет сделать вывод о целесообразности и достоверности клинического (упрощенного) метода определения А8ЬО.
Таблица 2.
Сопоставление уровня ЛБЬС в десневой жидкости, полученное в лабораторных и клинических условиях
Обследуемые ASLO (лаборатория) ASLO (клиника)
Здоровые, n = 15 0 0
ХКГ, n = 15 680 680
Приведенные выше результаты исследования содержания белка А8ЬО в десневой жидкости подтверждают полученные ранее сведения о высоком уровне А8ЬО при гингивите [8] и дает возможность рассматривать данные тест для клинико-экспертной оценки состояния пародон-та в качестве диагностически-прогностического критерия риска развития воспалительных изменений в десне и степени воспалительных изменений в тканях пародонта. Совпадение же показателей А8ЬО в десневой жидкости, полученных лабораторным и клиническим методом позволяет рассматривать данный критерий в качестве
несложного по выполнению клинического экспресс-теста, на ранних стадиях заболевания, а так же в выборе адекват-что имеет огромное значение для диагностики гингивита ных методов лечения.
Литература:
1. Грудянов А.И., Дмитриев Л.А., Максимовский Ю.М. Пародонтология. Современное состояние вопроса и направление научных разработок // Стоматология. — 1999. — №1. — С. 31-33.
2. Горбачева И.А., Кирсанов А.И., Орехова Л.Ю. Общесоматические аспекты патогенеза и лечения генерализованного пародонтита // Стоматология. — 2001. — Т. 80. — №1. — С. 26-34.
3. Левин М.Я., Орехова Л.Ю., Антонова И.Н., Сафронов Б.Н. Иммунологические показатели слюны и крови при воспалительных заболевания тканей пародонта // Пародонтология. — 1999. — №2. — С. 10-13.
4. Григорян А.С. Роль и место феномена повреждения в патогенезе заболевания пародонта // Стоматология. — 1999. — №1. — С. 16 -20.
5. Йегер Клиническая иммунология и аллергология. — М., 1990. — Т. 1.
6. Ярилин А.А. Основы иммунологии. — М., 1999.
7. Хаитов Р.М. Физиология иммунной системы. — Изд-во Калина, 2005.
8. Ульянова М.А. Иммунологические особенности патогенеза гингивита и возможности их иммунокоррекции: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — М., 2003.
9. Salvi G.E., Ramseier C.A., Kandylaki M. Experimental gingivitis in cigarette smokers: a clinical and microbiological study // J. Clin Perio-dontol. — 2005. — №32 — Р.441-447.
10. Madianos P.N., Bobetsis Y.A., Kinane D.F. Generation of inflammatory stimuli: how bacteria set up inflammatory responses in the gingiva // J Clin Periodontol. — 2005. — №32. — Р 130-131.
11. Greenstein G. Changing periodontal concepts: treatment considerations // J Clin Periodontol. — 2004. — № 29. — Р 53-60.
12. Preshaw P.M., Seymour R.A., Heasman P.A. Current concepts in periodontal pathogenesis // Dent Update. — 2004. — №30 (2) — Р 60-68.
© В.В. Чупак, В.К. Шорманов, 2006 УДК 615.22:54.06
В.В. Чупак, В.К. Шорманов ОСОБЕННОСТИ ИЗОЛИРОВАНИЯ ДИКВАТА ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
Курский государственный медицинский университет (ректор — проф. А.И. Лазарев)
В качестве изолирующего агента для извлечения диквата из биологического материала предложена смесь растворителей этанол- 1 н. раствор хлороводородной кислоты (8:2). Определены оптимальные условия изолирования диквата из ткани трупной печени человека смесью растворителей этанол- 1 н. раствор хлороводородной кислоты (8:2) и дана количественная оценка результатов изолирования.
Ключевые слова: дикват, изолирование.
THERE ARE SPECIFICATIONS OF ISOLATION THE DIQUAT FROM BIOLOGICAL MATERIAL
V. V. Chupac, V. K. Shormanov Solvent mixture composed of etanol and 1N hydrochloric acid (8:2) was taken as isolating agent for extraction of diquat from biological material. Optimal conditions for iusolationof the diquat from tissue of human corpseliver by the solvents etanol — 1N hydrochloric acid (8:2) were determined, and quantitative estimfion of the isolation results was given.
Key words: diquat, isolation.
Дикват (1,1-этилен — 2,2-дипиридилий дибромид) — (синонимы: реглон, ФБ-2, приглон ) — белое кристаллическое вещество с температурой плавления 335-340оС. Температура разложения выше 300оС, очень гигроскопичен. Хорошо растворяется в воде (при 20оС 700 мг/л). Практически нерастворим в гидрофобных органических растворителях. Водные растворы нелетучи, устойчивы в кислой и нейтральной средах, в щелочной среде образуется окрашенный продукт. Промышленностью выпускается в виде 20% водного раствора дибромида [2, 3, 6]. Дикват широко применяется в качестве гербицида и десиканта. Относится к контактным гербицидам сплошного действия, характеризуется быстрым гербицидным эффектом и уничтожает надземную часть растений даже при использовании малых доз [1, 5, 6].
Дикват обладает значительной токсичностью по отношению к теплокровным животным и человеку. Описаны многочисленные случаи отравления данным веществом, в том числе с летальным исходом. ЛД50 диквата для крыс составляет 282 мг/кг, летальная доза для человека, очевидно, равна 90-180 мг/кг [4, 6].
Широкое применение диквата, его высокая токсичность, наличие случаев летального отравления обусловливает необходимость изучения этого соединения в судебно-химическом отношении. До настоящего времени остаются недостаточно разработанными вопросы изолирования диквата из объектов биологического происхождения, его обнаружения, идентификации и количественного определения.
Целью настоящих исследований явился поиск оптимальных условий изолирования диквата из трупного материала.
Объектом исследования явился дикват (1, 1-этилен-2.2-дипиридилий дибромид ) — стандарт НИИ защиты растений.
В процессе исследования изучали особенности извлечения диквата из биологического материала изолирующими агентами различной химической природы (ацетонитрил, ацетон, этанол, 1 н. хлороводородная кислота, ацетонитрил — 1 н. раствор хлороводородной кислоты (2:8), ацетонитрил — 1 н. раствор хлороводородной кислоты (8:2), этанол — 1 н. раствор хлороводородной кислоты (2:8), этанол — 1 н. раствор хлороводородной кислоты (8:2)). Изолирование смесью растворителей этанол — 1 н. раствор хлороводородной кислоты (8:2) осуществляли как при комнатной температуре, так и в различных режимах нагревания (нагревание до кипения, нагревание до кипения и далее при 100оС в течение 10 минут, нагревание до кипения и далее при 100оС в течение 2 часов). Для этого готовили модельные смеси диквата с мелкоизмель-чённой тканью трупной печени человека из расчёта 12,5 мг исследуемого вещества в 25 г биологической ткани. Осуществляли двукратное изолирование диквата из его модельных смесей с тканью трупной печени человека при соотношении изолирующего агента и биологического материала 2:1 (по массе). Продолжительность каждого настаивания составляла 60 минут. Оба извлечения, полученные из каждой модельной смеси, объединяли. Две
