Антибиотикорезистентность микроорганизмов, выделенных при кишечных инфекциях собак в условиях Прибайкалья Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

УДК 619:616.9:636.7 (571.53) А.А. Плиска,

О.Н. Самокрутова, И.Н. Середкина, А.М. Аблов,

А.С. Батомункуев, П.И. Барышников, Е.В. Анганова

АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ПРИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ СОБАК В УСЛОВИЯХ ПРИБАЙКАЛЬЯ

Ключевые слова: собаки, микроорганизмы, антибиотикорезистентность, кишечные моно- и микстинфекции.

Введение

Одной из основных проблем в лечении инфекционных заболеваний у домашних животных является распространение штаммов микроорганизмов, устойчивых к антимикробным препаратам [1, 2 и др.]. В ветеринарной практике широкое применение получили Р-лактамные антибиотики, обладающие широким спектром действия, высоким коэффициентом пенетрации. Однако на сегодняшний день бесконтрольное применение антибиотиков привело к развитию резистентности многих микроорганизмов к данной группе антимикробных препаратов. Особую тревогу, по мнению С.В. Сидоренко с соавт. [3], D.M. Livermore [4] и др., вызывает способность грамотрицательных микроорганизмов продуцировать Я-лакта-мазы расширенного спектра (БЛРС).

Также в последние годы получает широкое распространение изучение вопросов ассоциированных заболеваний [5, 6 и др.], составляющих большую часть болезней инфекционной природы и представляющих опасность для животных.

Цель работы — изучение антибиотикоре-зистентности выделенных микроорганизмов семейства enterobacteriaceae у здоровых и больных кишечными моно- и микстинфек-циями у собак.

Материал и методы

Исследования выполнены на базе бактериологического отдела Иркутской межобластной ветеринарной лаборатории. Всего обследовано 43 собаки трех пород («спаниель», «кавказская овчарка», «немецкая овчарка») в возрасте от 2,5 мес. до 1 года, в т.ч. с колибактериозами (опытная группа) —

27, здоровые животные (контрольная группа) — 16. Выделено 80 культур, в т.ч. от животных опытной группы — 43, контрольной группы — 37 изолятов.

Отбор проб (смывы с прямой кишки собак), выделение культур микроорганизмов, их идентификацию проводили по общепринятым методикам; определение биохимических свойств микроорганизмов — с помощью тест-систем для биохимической идентификации ПБДЭ и «Enterotest» фирмы Lachema (Чехия). Возбудители кишечных инфекций у собак, представленные энтеробактериями, были протестированы на чувствительность к 16 антимикробным препаратам различных фармакологических групп. Серологическую идентификацию культур эшерихий осуществляли с использованием сывороток О-коли агглютинирующих производства ФГУП «Армавирская биофабрика».

Вирусные инфекционные болезни собак исключали исследованием конъюнктивальных и назальных смывов [7, 8].

Статистическую обработку данных результатов проводили с использованием общепринятых критериев статистики [9].

Результаты и обсуждение

Проведенные исследования показали, что среди энтеробактерий, полученных от собак, больных кишечными инфекциями, доминировали полирезистентные (к шести антимикробным препаратам и более) и умеренно-резистентные (к двум-пяти препаратам) штаммы (43,3 и 36,9% соответственно), а чувствительными оказались только 20,0% штаммов. При этом среди диареегенных эшерихий чувствительные штаммы встречались чаще (21,8%), чем среди условно-патогенных энтеробактерий (14,3%), которые характеризовались преобладанием штаммов, резистентных к шести антибиотикам и более (57,1%) (рис. 1).

Кроме того, условно-патогенные энтеробактерии (Proteus spp., E. agglomerans, C. freundii) характеризовались фенотипами с более широким спектром антибиотикоре-зистентности. У них выявлены фенотипы устойчивости к 2-12 антимикробным препаратам по сравнению с диареегенными эшери-хиями (фенотипы устойчивости к 2-9 антибиотикам). По критерию знаков уровень антибиотикоустойчивости среди условнопатогенных энтеробактерий оказался значимо (p<0,05) более высоким по сравнению с диареегенными эшерихиями.

Следует отметить, что свойством множественной антибиотикорезистентности обладали E.coli O8 (25,0%), E.coli O18 (33,3%), а также E.coli O15, E.coli O141 и E.coli 0101 (100,0%).

Оценка антибиотикоустойчивости исследованных штаммов к различным антибиотикам показала, что большая часть исследованных энтеробактерий проявили резистентность к полимиксину (60,0%), карбеницил-лину, цефатаксиму, цефтазидиму (около 57%), цефалотину (50,0%) и цефтриаксону (46,7%). Третья часть микроорганизмов оказалась устойчивой к цефазолину и фу-радонину. К ампициллину и тетрациклину оказались резистентны 20,0 и 23,4% штаммов соответственно. Наибольшую эффективность в отношении протестированных штаммов энтеробактерий продемонстрировали гентамицин, канамицин, амикацин, оф-локсацин и ципрофлоксацин. Резистентность к данным антимикробным препаратам оказалась значимо (р<0,05) более низкой по сравнению с другими препаратами и варьировала от 3,3 до 6,7%.

Установлено, что энтеробактерии, выделенные от собак с кишечными инфекциями, проявили более высокую устойчивость к Р-лактамным антибиотикам (цефалоспорины

— 66,7%; пенициллины — 60,0%) по сравнению с антимикробными препаратами (АМП) других групп. Так, из не Р-лактамных антибиотиков наибольшая частота встречаемости резистентности отмечена только в отношении полимиксинов. В то же время в отношении АМП других групп уровни резистентности колебались и не превышали 26,7%.

Наименьшим оказался уровень резистентности к антимикробным препаратам двух групп: хинолоны/фторхинолоны и

аминогликозиды. К антибиотикам данных групп частота встречаемости резистентности была значимо (p<0,05) более редкой (3,3 и 13,3% соответственно).

Сравнение антибиотикограмм диареегенных штаммов E.coli при моно- и микстин-фекциях показало, что в микробных ассоциациях (по сравнению с монокультурами) среди диареегенных эшерихий в 4,3 раза

снижается количество чувствительных штаммов (до 8,3%) и повышается (до 50,0%) доля микроорганизмов, несущих признак множественной антибиотикорези-стентности (р<0,05) (рис. 2).

Кроме того, особенно важным является выявленное в ходе исследований значимое увеличение частоты встречаемости в микробных ассоциациях (по сравнению с монокультурами) диареегенных эшерихий, устойчивых к Р-лактамным антибиотикам (пенициллины, цефалоспорины), учитывая их значимость на современном этапе (рис. 2б).

Сравнение антибиотикорезистентности представителей семейства EnteroЬacteria-ceae показало, что энтеробактерии, полученные от животных с кишечными инфекциями, реже (по сравнению со штаммами контрольной группы) обладали чувствительностью ко всем исследованным АМП (20,0 и 55,6% соответственно), среди них не было выявлено монорезистентных штаммов. Кроме того, изоляты от больных животных характеризовались фенотипами устойчивости к двум-пяти, а также к шести антимикробным препаратам и более, а среди энтеробактерий контрольной группы штаммов с фенотипами множественной антибиотикоре-зистентности не выявлено. Все вышеуказанные различия носили значимый характер (р<0,05) (табл.)

Данная тенденция отмечена как в отношении эшерихий, так и в отношении условнопатогенных энтеробактерий. Так, диареегенные кишечные палочки в два раза реже (по сравнению с непатогенными штаммами E.coli) обладали чувствительностью ко всем исследованным АМП (21,6 и 50,0% соответственно), характеризовались фенотипами устойчивости к двум-пяти, а также к шести антимикробным препаратам и более. В то же время среди непатогенных эшерихий контрольной группы штаммов с фенотипами множественной антибиотикорезистентности не выявлено. Среди условнопатогенных энтеробактерий опытной группы только 14,3% оказались чувствительными, а более половины штаммов характеризовались устойчивостью к шести АМП и более. В контрольной группе доминирующая часть (75,0%) оказалась чувствительной, 25,0% — моноре-зистентной при отсутствии полирезистентных штаммов.

В целом, для изолятов, полученных от больных собак, было характерно преобладание фенотипов с детерминантами устойчивости к 2-12 препаратам, а для культур контрольной группы — наличие фенотипов с детерминантами устойчивости к одному препарату.

82

Вестник Алтайского государственного аграрного университета № 8 (106), 2013

Рис. 1. Сравнительная характеристика антибиотикорезистентности диареегенных эшерихий и условно-патогенных энтеробактерий (УПЭ), выделенных от больных собак, %

а)

чувствительные полирезистентные ! микст-инфекции □ моно-инфекции

%

б)

р<0,05

91,7

р<0,01

пенициллины цефалоспорины

і микст-инфекции □ моно-инфекции

Рис. 2. Частота встречаемости антибиотикорезистентных диареегенных штаммов E.coli, выделенных от больных собак, в монокультуре и в микробных ассоциациях, %: а — чувствительные и резистентные штаммы; б — резистентные к Р-лактамным препаратам

Сравнительная характеристика антибиотикорезистентности энтеробактерий, выделенных от больных и здоровых собак

Таблица

Отношение к АМП Энтеробактерии, выделенные от собак р

с кишечными инфекциями здоровых

Чувствительные 20,0 55,6 р<0,05

Монорезистентные 0,0 44,4 р<0,05

Резистентные к двум-пяти АМП 36,7 0,0 р<0,05

Резистентные к шести АМП и более 43,3 0,0 р<0,05

Кроме того, штаммы энтеробактерий от животных опытной группы в разной степени проявили устойчивость ко всем использованным в работе антимикробным препаратам (с варьированием частоты встречаемости устойчивых штаммов от 3,3% к канами-цину, офлоксацину и ципрофлоксацину до 56,7-60,0% к карбенициллину, цефотакси-му, цефтазидиму, полимиксину). Энтеробактерии от собак контрольной группы проявили резистентность только к 3 из 16 антимикробных препаратов: цефотаксиму, цеф-триаксону и амикацину (27,8; 5,6 и 11,1% соответственно). По критерию знаков уровни резистентности к протестированным антимикробным препаратам штаммов энтеробактерий, выделенных от больных собак,

значимо (р<0,01) превышали аналогичные показатели у штаммов контрольной группы.

Заключение

Диареегенные эшерихии характеризуются фенотипами устойчивости к 2-9 антимикробным препаратам (78,3%), более редкой частотой встречаемости чувствительных (21,7%) и отсутствием монорезистентных штаммов, а также высоким уровнем устойчивости к Р-лактамным антибиотикам (около 60%) и низким — к хинолонам/фтор-хинолонам и аминогликозидам (3,3 и 13,3% соответственно). Уровень антибиотико-устойчивости условно-патогенных энтеробактерий (по критерию знаков) значимо (р<0,05) превышает аналогичные показатели у диареегенных эшерихий.

Среди энтеробактерий контрольной группы значимо чаще (p<0,05) встречаются чувствительные (55,6%) и монорезистентные (44,4%) штаммы, а признак множественной антибиотикорезистентности не выявлен.

В микробных ассоциациях (по сравнению с монокультурами) среди диареегенных эшерихий снижается количество антибиотикочувствительных штаммов (с Вб,4 до З,В%) и повышается (с 27,В до 50,0%) доля микроорганизмов, несущих признак множественной антибиотикорезистентности

(p<0,05), а также имеет место увеличение частоты встречаемости штаммов, устойчивых к Р-лактамным антибиотикам: пеницил-линам — до 75,0% (p<0,05) и цефалоспори-нам — до 91,7% (p<0,01).

Библиографический список

1. Белоусов Ю.Б., Mоисеев В.С., Лепа-хин В.К. Клиническая фармакология и фармакотерапия. — M.: Универсум, 199В.

2. Данилевская Н.В. Особенности применения антибиотиков в ветеринарной практике http://www.vetlek.ш/22.0б.2010/3.

В. Сидоренко С.В. Клиническое значение резистентности микроорганизмов к антимикробным препаратам // Рос. мед. вести. — 199З. — № 1. — С. 2З-В4.

4. Livermore D.M. Beta-lactamases in la-

boratory and clinical resistence // Clin. Microbiol. Rev. — 1995. — Vol. З. —

P. 557-5З4.

5. Курбанмагомедов К.Б. Вируснобактериальные энтериты новорожденных телят в Республике Дагестан: распространение, этиология, профилактика и терапия: дис. ... канд. вет. наук. — 16.00.0В. — СПб., 2009. — 1З7 с.

6. Терехов В.И., Иванов A^. Видовой состав бактерий, выделенных от поросят при острых кишечных заболеваниях // Ветеринария Кубани. — 2011. — № В.

7. Инструкция по применению набора

для выявления антигена вируса чумы собак иммуноферментным анализом (ИФA), регистрационный номер ПВР-1-1.0/00В0З, утвержденная Россельхознадзором

12.0З.2010 г.

З. Инструкция по применению набора для выявления антигенов парвовируса собак, вирусов энтерита норок и панлейкопении кошек иммуноферментным анализом (ИФA), регистрационный номер ПВР-1-1.0/00В25, утвержденная Россельхознадзо-ром 12.0З.2010 г.

9. Гланц С. Mедико-биологическая статистика / пер. с англ. — M.: Практика, 1999.

— 459 с.

+ + +

УДК

А.П. Палий

ВИДОВАЯ УСТОЙЧИВОСТЬ РАЗНЫХ ВИДОВ МИКОБАКТЕРИЙ К ДЕЗИНФЕКТАНТУ «ЭКОЦИД С»

Ключевые слова: возбудитель туберкулеза, атипичные микобактерии, дезинфицирующий препарат «Экоцид С», концентрация, экспозиция, резистентность, коэффициент видовой устойчивости.

Введение

Химический метод дезинфекции на сегодня является наиболее доступным и широко применяется в дезинфекционной практике гуманной и ветеринарной медицины. С этой целью используют различные химические соединения в виде водных растворов, сыпучих веществ, аэрозолей [1]. На современном этапе развития дезинфектологии дезинфицирующие средства должны отвечать целому ряду требований, которые в свою

очередь резко ограничивают спектр применяемых препаратов [2].

Одними из наиболее распространенных препаратов, которые широко применяются в мировой ветеринарной практике, являются кислотные средства. Для данных препаратов характерны широкий спектр бактерицидной активности, способность растворять биологический субстрат, коагулировать белок. Данные препараты быстро распадаются в окружающей среде на нетоксические соединения [3]. Вместе с этим основным негативом препаратов этой группы является их высокая токсичность, местнораздражающее и резорбтивное действие [4].

Основным направлением усовершенствования дезсредств этого класса является по-

З4

Вестник Алтайского государственного аграрного университета № 8 (106), 2013