CC BY
227
Таблица 2
выявление флюоресцеина, пиорубина и пиомеланина на питательных средах King A, King B и синтетической питательной среде King BS при 28°С в течение 24 ч
Группа штаммов Число Продуцируют на среде King B Продуцируют на среде King BS
P. aeruginosa мов пио- пиоме- флюо- пио- пиоме- флюо-
рубин ланин ресцеин рубин ланин ресцеин
Продуцирующие пиорубин на среде King A 10 4 - 10 0 - 10
Продуцирующие 3 - 3 0 - 0 0
пиомеланин на среде
King A
Примечание. 0 - отрицательный результат.
монад в течение 48 ч при 28°С (156 чашек Петри) и инкубации незасеянной среды в чашках Петри при 28 и 37°С в течение 7 сут (40 чашек). Кроме того, стерилизовать среду King BS в паровом стерилизаторе нецелесообразно, так как снижается интенсивность флюоресценции.
Диагностическую чувствительность и диагностическую специфичность синтетической питательной среды King BS изучали в отношении к эталонной среде King B (bioMerieux) по методике, изложенной в разделе «Материалы и методы». Как показали результаты исследований, питательная среда King BS имеет ДЧ 100% и ДС 100% (табл. 1).
Результаты выявления синтеза флюоресцеина на среде King BS у 140 штаммов флюоресцирующих видов псевдомонад были полностью воспроизводимы при повторном исследовании. Для изучения возможности выявления синтеза флюоресцеина у штаммов P. aeruginosa, продуцирующих другие пигменты, исследовали на средах King BS и King B штаммы синегнойной палочки, продуцирующие на среде King A пиорубин (10 штаммов) и пиомеланин (3 штамма). Установлено, что все штаммы синегнойной палочки, образующие пиорубин, на среде King BS продуцируют только флю-оресцеин, на среде King B - флюоресцеин и дополнительно (4 штамма) - пиорубин слабой интенсивности (табл. 2).
Все штаммы синегнойной палочки, образующие пиомела-нин на среде King A, продуцируют пиомеланин слабой интенсивности на среде King B и не синтезируют пиомеланин на среде King BS (см. табл. 2). Вероятно, пиорубин и пиомеланин
не продуцируются синегноиными палочками на синтетической среде King BS ввиду отсутствия субстрата для синтеза этих пигментов.
Заключение. Таким образом, разработанная нами синтетическая питательная среда King BS для выявления синтеза флюо-ресцеина псевдомонадами обладает высокой диагностической чувствительностью и специфичностью, равной таковой среды King B, но превосходит ее по стандартности состава, упрощению изготовления без стерилизации в паровом стерилизаторе, возможности четкого выявления флюоресцеина у штаммов псевдомонад, продуцирующих другие пигменты. Среда King BS пригодна для стандартизации и применения в стандартизированной методике выявления синтеза флюоресцеи-на у псевдомонад. На указанную среду получен патент РФ на изобретение [5], питательная среда производится отделом новых технологий Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера Роспотребнадзора.
ЛИТЕРАТУРА
1. Меньшиков В. В. // Клин. лаб. диагн. - 1996. - № 5. - С. 4-12.
2. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. М. Герхардта: Пер. с англ. - М.: Мир, 1984. - Т. 3.
3. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий (аэробных и факультативно анаэробных) / Вейгант Р., Мосс У, Уивер Р. и др.: Пер. с англ. - М.: Мир, 1999.
4. Сиволодский Е. П. // Журн. микробиол. - 1992. - № 9-10. - С. 10-12.
5. СиволодскийЕ. П. Патент РФ № 2366714. Способ определения синтеза флюоресцеина бактериями рода Pseudomonas. Бюлл. изобретений № 25. - 2009.
6. Сиволодский Е. П. // Микробиология. - 2009. - Т. 78, № 6. - С. 766-772.
7. Смирнов В. В., Киприанова Е. А. Бактерии рода Pseudomonas. -Киев: Наукова думка, 1990.
8. Palleroni N. J. // Bergey's manual of systematic bacteriology / Eds G. M. Garriti et al. - 2-nd Ed. - New York: Springer, 2005. - Vol. 2, Pt B. - P. 324-379.
Поступила 22.09.11
© КОЛЛЕКТИв АвТОРОв, 2012
удК 579.871.1:579.252.55].083.1(470.61)
Г. Г. Харсеева, Н. А. Боронина, А. Ю. Миронов, А. Р. Харисова
АнтиБиотиКочувствитЕльность штАммов CoRYNEBACTERiuM NoN DiPHTHERiAE, циркулирующих в ростове-на-дону и ростовской области
Ростовский государственный медицинский университет, Ростов-на-Дону; Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова
Целью работы явилось изучение чувствительности к антибактериальным препаратам штаммов Corynebacterium non diphthe-riae, циркулировавших в Ростове-на-Дону и Ростовской области. Исследованы штаммы Corynebacterium non diphtheriae, выделенные из урогенитального тракта: C. xerosis, C. pseudotuberculosis, C. amycolatum, C. striatum. У 41 штамма C. non diphtheriae методом серийных разведений в жидкой питательной среде проводили определение чувствительности к 9 антибактериальным препаратам. Диапазон колебаний минимальной подавляющей концентрации (МПК) препаратов в отношении Corynebacterium non diphtheriae составлял 0,003-20,0 мкг/мл. Полученные результаты показали, что Corynebacterium non diphtheriae высокочувствительны к гентамицину, ванкомицину и цефотаксиму, чувствительны к рифампицину и устойчивы к линкомицину. Для всех исследованных штаммов Corynebacterium non diphtheriae наибольшие показатели МПК выявили у линкомицина, причем для C. striatum он был максимальным - 11,52 ± 2,26 мкг/мл.
Ключевые слова: Corynebacterium non diphtheriae, чувствительность к антибактериальным препаратам, минимальная подавляющая концентрация
МИКРОБИОЛОГИЯ
G.G. Kharseyeva, N.A. Voronina, A.Yu. Mironov, A.R. Kharysova THE ANTIBIOTICS SENSITIVITY OF STRAINS OF CORINEBACTERIUM NON DIPHTHERIAE CIRCULATING IN ROSTOV-ON-DON AND ROSTOV OBLAST The article deals with the results of study of sensitivity of strains of Corinebacterium non diphtheriae circulating in Rostov-on-Don and Rostov oblast to antibacterial preparations. The strains of Corinebacterium non diphtheriae isolated from urogenital tract (C.xerosis, C.pseudotuberculosis, C.amycolatum, C.striatum) are analyzed. The .sample of 41 strains of C.non diphtheriae was used to detect the sensitivity to 9 antibacterial preparations. The technique of serial dilutions in liquid growth medium was applied. The range of variations (minimal suppressive concentration) of preparations as related to C. non diphtheriae made up 0.003-20.0 mkg/ ml. The results demonstrated that C.non diphtheriae are: highly sensitive to gentamycin, vancomycin and cefotaxime; sensitive to rifampicinum; and resistant to lincomicyn. In all analyzed strains of Corinebacterium non diphtheriae the greatest indicators of minimal suppressive concentration are detected in lincomicyn and at that the maximal indicator was for C.striatum and consisted 11.52±2.26 mkg/ml.
Key words: Corinebacterium non diphtheriae, sensitivity, antibacterial preparation, minimal suppressive concentration
Corynebacterium non diphtheriae (C. pseudotuberculosis, C. striatum, C. equi, C. xerosis, C. striatum и др.), являясь условно-патогенными микроорганизмами, при определенных условиях могут явиться причиной развития инфекционных заболеваний различной локализации (эндокардиты, септические артриты, остеомиелиты, инфекции при протезировании, заболевания мочеполовой системы и др.) [3, 4-10, 12]. Перечисленные виды коринебактерий присущи только человеку. Но описаны случаи заболеваний, вызываемых ко-ринебактериями - патогенами животных. К их числу относят C. ulcerans (ранее C. ovis) и C. pseudotuberculosis [3, 4, 10-13], которые чаще вызывают септические лимфадениты. C. non diphtheriae в последние десятилетия приобрели большое значение как возбудители гнойно-септических заболеваний у лиц с нарушениями иммунной защиты (пожилые, онкологические, гематологические больные, наркоманы, пациенты отделений интенсивной терапии, гемодиализа и др.). Во всем мире растет частота выделения недифтерийных корине-бактерий, считавшихся прежде контаминантами посевов [3, 4]. При лечении заболеваний, вызванных коринебактериями, в отечественной и зарубежной практике обычно используют антибиотики. При этом препаратами выбора являются пенициллины, карбапенемы, макролиды и тетрациклины. Проблема осложняется антибиотикорезистентностью (естественной или приобретенной) многих видов коринебактерий к одному или нескольким антибактериальным препаратам, что способствует их распространению как возбудителей внутрибольничной инфекции [4, 7, 9]. Полиантибиотикоре-зистентность C. non diphtheriae, особенно ассоциированных с другими микроорганизмами, обусловливает более тяжелое и длительное течение болезни [5-7]. Поэтому актуальным для борьбы с инфекцией, обусловленной недифтерийными коринебактериями, является оптимальный подбор антибактериальных препаратов.
Цель исследования - охарактеризовать чувствительность к антибиотикам C. non diphtheriae, циркулировавших в Ростове-на-Дону и Ростовской области.
Материалы и методы. Объектом исследования являлись штаммы C. non diphtheriae (41 штамм), выделенные от больных острым кольпитом, хроническим и острым пиелонефритом и беременных, проходивших профилактическое обследование за период с 2009 по 2011 г., и полученные из бактериологических лабораторий ГБУЗ Областная детская больница Ростова-на-Дону и МБУЗ ЦГБ горбольница № 1 г. Гуково Ростовской области. Среди них были выделены: из мочи - C. pseudotuberculosis, C. xerosis, C. amycolatum,
Для корреспонденции:
Харсеева Галина Георгиевна, д-р мед. наук, зав. каф. микробиологии и вирусологии № 2
Адрес: 344022, Ростов-на-Дону, Нахичеванский пер., 29
Телефон: 8(632)250-41-09
E-mail:galinagh@bk.ru
C. striatum; из цервикального канала - C. xerosis, C. pseudotuberculosis, C. amycolatum, C. striatum; из влагалища - C. xe-rosis, C. striatum.
Штаммы C. non diphtheriae идентифицировали общепринятыми методами по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим свойствам на питательных средах в соответствии с указаниями Н. Н. Костюковой [3] и с помощью набора для идентификации коринеформных бактерий Api Coryne ("Bio Meriex", Франция). В качестве контрольного штамма использовали музейный штамм C. diphtheriae var. gravis (tox+), BH, серотип 2, полученный из коллекции ГИСК им. Л. А. Тарасевича.
Методом серийных разведений (микрометодом) в жидкой питательной среде [1, 9] проводили определение чувствительности C. non diphtheriae к 9 антибактериальным препаратам (АБП), применяемым в клинической практике, - бензилпени-циллину, цефотаксиму, цефазолину, эритромицину, азитроми-цину, гентамицину, рифампицину, линкомицину, ванкомицину. Результаты оценивали по величине минимальной подавляющей концентрации - МПК (в мкг/мл), при которой наблюдали полную задержку роста исследуемого штамма. Для контроля метода использовали чувствительные к антибиотикам эталонные штаммы S. aureus АТСС 29213, E. coli АТСС 25922 и Р. aeruginosa АТСС 27853. Для характеристики степени чувствительности коринебактерий к антибактериальным препаратам вычисляли МПК для 50 и 90% исследованных штаммов и определяли диапазоны колебаний МПК.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием статистических пакетов Microsoft Office 2007 и Statistica 6.0 для Windows ХР. Достоверность полученных данных оценивали при уровне значимостиp < 0,05.
Результаты и обсуждение. В результате проведенных исследований установлено, что чаще из урогенитального тракта (УГТ) выделяли штаммы C. xerosis (43,9%), реже - C. pseudotuberculosis (24,4%), C. striatum (19,5%) и C. amycolatum (12,2%). Следует отметить, что 41,5% исследованных штаммов C. non diphtheriae были выделены в ассоциации с другими микроорганизмами: E. faecalis, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. viridans, E. coli, Р. mirabilis, C. krusei и S. saprophyticus.
Результаты определения чувствительности штаммов недифтерийных коринебактерий к 9 антибактериальным препаратам показали, что к большинству из них в настоящее время коринебактерии сохраняют чувствительность. Так, диапазон колебаний МПК всех изученных антибактериальных препаратов составляли от 0,003 до 20,0 мкг/мл (табл. 1).
У штаммов C. xerosis наиболее высокий показатель МПК (7,4 ± 1,6 мкг/мл) был обнаружен к линкомицину по сравнению с другими АБП, что свидетельствовало о его минимальной чувствительности к данному препарату. Так, показатели МПК гентамицина (1,0 ± 0,6 мкг/мл), ванкомицина (1,4 ± 0,4 мкг/мл), цефотаксима (1,2 ± 0,3 мкг/мл) были достоверно (p < 0,05) ниже, чем у линкомицина. Самый низкий показатель МПК отмечен у бензилпенициллина - 0,8 ± 0,4 мкг/мл, что свидетельствовало о его высокой активности в отношении C. xerosis.
Таблица 1
Чувствительность штаммов C. non diphtheriae к АБП (X ± m)
Штаммы МПК, мкг/мл
АБП C. xerosis C. pseudotuber culosis C. amycolatum C. striatum
Бензилпени-циллин 0,8 ± 0,4 1,0 ± 0,7 0,1 ± 0,01 1,0 ± 0,8
Цефазолин 1,7 ± 0,8 2,7 ± 1,3 0,4 ± 0,2 0,5 ± 0,1
Гентамицин 1,0 ± 0,6 1,1 ± 0,5 0,1 ± 0,1 0,1 ± 0,1
Линкомицин 7,4 ± 1,6 9,8 ± 2,3 7,7 ± 1,7 11,5 ± 2,3
Рифампицин 1,5 ± 0,6 1,0 ± 0,2 3,0 ± 1,0 0,1 ± 0,1
Ванкомицин 1,4 ± 0,4 1,9 ± 0,8 0,8 ± 0,3 0,6 ± 0,2
Цефотаксим 1,2 ± 0,3 3,4 ± 2,0 2,3 ± 1,0 1,0 ± 0,2
Азитромицин 1,8 ± 0,6 2,8 ± 1,3 1,2 ± 0,2 4,1 ± 2,1
Эритромицин 1,5 ± 0,7 3,1 ± 1,7 1,1 ± 0,3 3,4 ± 2,2
Для C. pseudotuberculosis МПК линкомицина была максимальной и составила 9,8 ± 2,3 мкг/мл. В то же время для других АБП показатели МПК были достоверно (p < 0,05) ниже (цефотаксим - 3,4 ± 2,0 мкг/мл, эритромицин - 3,1 ± 1,7 мкг/мл и азитромицин - 2,8 ± 1,3 мкг/мл, ванкомицин - 1,9 ± 0,8 мкг/ мл). Однако самые низкие значения МПК были обнаружены у рифампицина (1,0 ± 0,2 мкг/мл) и бензилпенициллина (1,0 ± 0,7 мкг/мл).
Для штаммов C. amycolatum максимальный показатель МПК отмечен у линкомицина - 7,7 ± 1,7 мкг/мл, достоверно (p < 0,05) ниже у цефазолина - 0,4 ± 0,2 мкг/мл, ванкомицина - 0,8 ± 0,3 мкг/мл, эритромицина - 1,1 ± 0,3 мкг/мл, азитро-мицина - 1,2 ± 0,2 мкг/мл и цефотаксима - 2,3 ± 1,0 мкг/мл. Минимальный показатель МПК обнаружен у гентамицина -0,1 ± 0,1 мкг/мл и бензилпенициллина - 0,1 ± 0,01 мкг/мл.
В отношении C. striatum, как и всех штаммов недифтерийных коринебактерий, максимальный показатель МПК был отмечен у линкомицина - 11,5 ± 2,3 мкг/мл, достоверно (p < 0,05) низкие показатели МПК для гентамицина - 0,1 ± 0,1 мкг/мл и рифампицина - 0,1 ± 0,1 мкг/мл.
Полученные результаты показали, что C. non diphtheriae обладали высокой чувствительностью к бензилпенициллину, гентамицину, рифампицину и цефазолину, пределы колебаний МПК которых составили от 0,1 ± 0,1 до 3,0 ± 1,0 мкг/мл и были менее чувствительны к цефотаксиму, азитромицину и эритромицину (МПК от 1,0 ± 0,2 до 3,4 ± 2,2 мкг/мл). Наименьшей чувствительностью штаммы обладали к линкоми-цину, диапазон МПК которого составил от 7,4 ± 1,6 до 11,5 ± 2,3 мкг/мл. Высокая чувствительность к рифампицину была обнаружена у C. pseudotuberculosis и C. striatum; к бензил-пенициллину, гентамицину, ванкомицину и цефазолину - у штаммов C. xerosis; к бензилпенициллину - у всех исследованных штаммов коринебактерий. Для всех исследованных штаммов C. non diphtheriae наибольшие показатели МПК выявили у линкомицина, причем для C. striatum МПК была максимальной и составила 11,5 ± 2,3 мкг/мл. Необходимо подчеркнуть, что 75% штаммов C. striatum были выделены в ассоциации с другими условно-патогенными микроорганизмами, редко выделяемыми из УГТ (E. coli, S. haemolyticus, E. faecalis, S. saprophyticus, S. epidermidis, P. mirabilis) [2].
По данным определения МПК50 и МПК90 (табл. 2), наибольшую активность в отношении штаммов C. non diphtheri-ae проявляли бензилпенициллин, гентамицин и рифампицин. Бензилпенициллин подавлял рост 50% штаммов в концентрации 0,03 мкг/мл, гентамицин - 0,039 мкг/мл и рифампицин -
Таблица 2
Диапазоны чувствительности C. non diphtheriae к АБП
АБП МПК, мкг/мл
диапазоны МПК МПК50 МПК90
Бензилпени-циллин 0,003-6,25 0,03 6,25
Цефазолин 0,0097-10,0 0,156 10,0
Гентамицин 0,005-10,0 0,039 2,5
Линкомицин 0,006-15,0 7,5 15,0
Рифампицин 0,004-7,5 0,12 3,75
Ванкомицин 0,006-6,25 0,391 2,5
Цефотаксим 0,0097-20,0 1,25 2,5
Азитромицин 0,006-6,25 0,78 6,25
Эритромицин 0,006-12,5 0,39 12,5
0,12 мкг/мл. В то же время МПК90 для них составила 2,5-6,25 мкг/мл. Штаммы C. non diphtheriae отличались высокой чувствительностью к гентамицину, ванкомицину и цефотаксиму, МПК90 которых составила 2,5 мкг/мл. Наименьшей чувствительностью C. non diphtheriae обладали к линкомицину, подавляющему 90% штаммов в концентрации 15 мкг/мл.
Таким образом, значительное число штаммов C. non diphtheriae, выделенных на территории Ростова-на-Дону и Ростовской области из различных источников, высокочувствительны к гентамицину, ванкомицину и цефотаксиму, чувствительны к рифампицину и устойчивы к линкоми-цину, в меньшей степени - к эритромицину и цефазолину. Снижение чувствительности к линкомицину, эритромицину и цефазолину можно объяснить, по-видимому, более широким использованием именно этих препаратов в клинической практике.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гладин Д. П., КозловаН. С., Зайцева Т. К. // Антибиотики и химиотерапия. - 1999. - Т. 44, № 5. - С. 17-21.
2. Клиническая лабораторная аналитика / Под ред. В. В. Меньшикова. - М., 2003. - Т. 4.
3. КостюковаН. Н., Михайлова В. С., Малахов В. Н. и др. // Клин. лаб. диагн. - 2002. - № 12. - С. 43-45.
4. КостюковаН. Н. // Клин. лаб. диагн. - 2001. - № 6. - С. 25-31.
5. Костюкова О. Н., Гладкая Е. А. // Журн. микробиол. - 1992. - № 9-10. - С. 29-31.
6. Краева Л. А., Манина Ж. Н., Ценева Г. Я. и др. // Журн. микробиол. - 2007. - № 5. - С. 3-7.
7. Краева Л. А., Ценева Г. Я. // Здоровье населения и среда обитания. - 2011. - Т. 2. - С. 25-27.
8. Миронов А. Ю., Харсеева Г. Г., Клюкина Т. В. Основы клинической микробиологии и иммунологии: Уч. пос. - Ростов-на-Дону, 2011.
9. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУ 4.2.1890-04. Метод. указания. - М.,
2004.
10. Скала Л. З., Сидоренко С. В., Нехорошева А. Г. и др. Практические аспекты современной клинической микробиологии. -Тверь, 2004.
11. Bonmarin I., Guiso N., GrimontP.A. D. // Vaccine. - 2009. - Vol. 27, N 31. - P. 4196-4200.
12. Damasco P. V., Pimenta F. P., Filardy A. A. // Epidemiol. Infect. -
2005. - Vol. 2005. - Vol. 133. - P. 911-914.
13. Puliti M., von Hunolstein Ch., Marangi M. // J. Med. Microbiol. -
2006. - Vol. 55. - P. 229-235.
Поступила 16.04.12
