CC BY
25
УДК 619:579.842.14
Б1бен I.A., к.вет.н., доцент © Днтропетровсъкий державный аграрнийутверситет
АНТАГОН1СТИЧНА Д1Я AEROCOCCUS VIRIDANS AVIUM 21 ДО SALMONELLA PULLORUM - GALLINARUM IN VITRO
Наводятъсярезулътати вивчення антагошстично! дп Aerococcus viridans avium 21, що продукуе перекис водню, на Salmonella pullorum-gallinarum, in vitro. Установлено антагошстичну dm, що посилюетъся в кожти наступит генерацИ S. pullorum-gallinarum, при стлъному вирощуванш з A. viridans avium 21. Припускаетъся, що встановлении вплив, пов'язании зг зм1нами бюлог1чних властивостей салъмонел.
Ключом слова: Aerococcus viridans avium 21, Salmonella pullorum-gallinarum, антаготзм, перекис водню, повторнии контакт, генеращя.
Вступ. При виготовленш пробютиюв значна роль належить дослщженням щодо антагошзму MÍKpoopraHÍ3MÍB. Явище антагошзму широко розповсюджене в природг Особливе м1сце займае антагошзм MÍKpoopraHÍ3MÍB, велика увага до якого виникла у зв'язку з вщкриттям та широким впровадженням у ветеринарну та медичну практику антибютиюв. Ще в kíhu;í XIX стол1ття Л. Пастер та rnmi вчеш звернули увагу на здатшсть одних MÍKpoopraHÍ3MÍB пригшчувати picT i розвиток шших. I.I. Мечшков показав можливють використання явища антагошзму MÍKpoopraHÍ3MÍB з терапевтичною метою [1, 3, 6].
Вивченню продуцента антибютиюв передуе велика робота з дослщження антагошзму míkpo6íb. Широке використання мають антагошстичш властивосп míkpo6íb, яю видшеш í3 оргашзму сшьськогосподарських тварин [2,4], що обумовлено значним розповсюдженням серед продуктивних ссавщв та птищ хвороб оргашв травления pÍ3HOi етюлоги.
Тому, питания пошуку нових ефективних шлях1в корекцп мжрофлори шлунково-кишкового тракту е одним з важливих у сучаснш ветеринарнш медицин!. Найбшьш виправданим, з еколопчних позицш, методом санацп бактерюносив та збудниюв кишково! шфекци е застосування бактер1альних препарата з живих MÍKpoopraHÍ3MÍB, здатних проявляти антагошстичну i конкурентну дш до патогенних míkpo6íb [1,3,8].
Останшм часом перспективним напрямком визнаш вивчення i застосування для л1кування i профшактики проб1отик1в - препарата Í3 представниюв нормально! мжрофлори тварин. Одним з таких MÍKpoopraHÍ3MÍB е Aerococcns viridans avium 21. Родовщ штаму Kingdom: Bacteria
©Ei6eH I.A., 2012
8
Phylum: Firmicutes Class: Bacilli Order: Lactobacillales Family: Aerococcaceae Genus: Aerococcus Species: Aerococcus viridans BiH видшений i3 грудного молока i выявлений у noBiTpi житлових примщень [7,9], що е представником нормально! мжрофлори людини i тварин. Установлена його антагошстична актившсть щодо ряду груп патогенних бактерш. Ця актившсть аерокоюв обумовлена екскрещею бактерицидних концентрацш перекису водню [5,6].
Мета дослщження - визначити характер антагошстично! дп Aerococcus viridans avium 21 на Salmonella pullorum-gallinarum при повторних контактах, шляхом пасажу на рщких середовищах.
Матер1али та методи дослщжень. Для проведения дослщження використовувався видшений у птищ штам Aerococcus viridans avium 21, який продукуе перекис водню, польовий патогенний штам Salmonella pullorum-gallinarum, видшений у хворо! на сальмонельоз птищ.
У 50 мл простого м'ясопептоного бульйону заавали 1 мл 20 млрд./мл cycnerni! св1жо1 культури A. viridans avium 21.
Шсля дводобово! ¿нкубацИ при 37°С визначали в культуральн1й р1дин1 кшьккть перекису водню йодометричним методом i п1дс1вали 0,1 мл 1 млрд./мл суспензи добово! культури Salmonella pullorum-gallinarum. Пгсля повторно! добово! ¡нкубац!! при 37°С визначали кшьккть перекису водню в середовищ1 i кшьккть сальмонел, що вижили. Вис1в 0,1 мл культурально! р1дини робили на середовище Чистовича та однопроцентний кров'яний агар для к1льк1сного визначення в змкту в н1й сальмонел (перша генеращя).
Сальмонели, що вижили, у кшькост1 100 штам1в в1дс1вали для вивчення культуральних i 61ох1м1чних властивостей. Для отримання наступних генерац1й сальмонел, що вижили, повторно пщавали до аерокоюв за вищеописаною методикою доти, поки в середовищ1 виявлялися життездатш особини сальмонел. Паралельно проводилося переавання Salmonella pullorum-gallinarum на м'ясопептоний бульйон без продуцент1в перекису водню. Плазмокоагулююч1 властивост1 Salmonella pullorum-gallinarum визначали за загальноприйнятою методикою.
Результати та ix обговорення. Встановлено, що з кожним наступним перес1ванням к1льк1сть сальмонел, що вижили, у культуральнш р1дин1 з А. viridans avium 21 зменшувалося. К1льк1сть сальмонел у м'ясопептоному бульйош без аерокок1в, що продукують перекис водню, коливалося в межах значень визначених у перш1й генерацИ (табл. 1).
9
Таблиця 1
Середня кшьккть сальмонел (у перерахуванш на 1 мл МПБ), що вижили
Умови КРАТНЮТЬ КОНТАКТУ САЛЬМОНЕЛ 3 АЕРОКОКАМИ
досл!ду 1 2 3 4 5 6 7
Досл!д 1 1,5 105+ 7,4 104+ 5,6 104 4,9 102 8,5 101 3,8 101 0,25
3,3 104 1,2 104 +1,2 104 +9,2 101 +0,7 101 +1,1 101 +0,001
Контроль 1 1,9 109 9,7 108+ 2,2 109 8,9 108 1,2 109 4,2 109 1,4 109
+4,0 107 1,7 108 +3,7 108 +5,6 107 +5,4 107 +3,5 108 +1,2 108
Дослщ 2 1,9 105+ 1,3 105+ 1,7 103 4,8 102 1,4 102 1,5 102 0,6
5,1 104 3,7 104 +3,9 102 +1,5 102 +3,9 101 +0,9 101 +0,001
Контроль 2 1,2 109+ 1,1 109+ 1,0 109 8,6 108 2,9 109 2,1 109 1,9 109
1,0 108 7,0 107 +7,2 107 +3,4 107 +1,4 108 +1,3 108 +1,8 108
Примака: 1. дослщ - культури сальмонел, що були в контакт! з аерококами
2. контроль - культури сальмонел, що не були в контакт! з аерококами
3. дослщ 1, контроль 1 - штам Salmonella pullorum-gallinarum
Як видно з даних таблиц! 1, починаючи з 7-й генерац!!, залишалися життездатними в перерахуванш на 1 мл МПБ одиничш кл!тини сальмонел обох дослщжуваних штам!в. При цьому в!дзначена виражена динам!ка зниження к!лькост! сальмонел (рис.1).
10
На малюнку видно, що р1зке зниження кшькосп сальмонел спостер1галося, починаючи з третьо! генераци, що не можна пов'язати з д1ею перекису водню i, ¿мов1рно, пов'язано 3i змшами бюлопчних властивостей сальмонел при повторних контактах з A. viridans. avium 21.
Значимо! змши динамжи кшькост1 сальмонел у МПБ вирощуваних у вщсутност1 аерокоюв не встановлено (Рис.2)
1E+10
Е
D И
= 1E+09
га
CT
Е 2
S2 100000000
D
SU
С 10000000
о
л
га со
¡5 1000000 о
л С
* 100000
1 2 3 4 5 6 7
генерац1я
Рис.2. Динамжа (логар1фмична шкала) кшькост1 сальмонел штаму не бувших у контакт! ¡з A.viridans avium 21.
3 огляду на те, що плазмокоагулазна проба е одним з основних ознак, що визначають хвороботворшсть, проведене дослщження штам1в сальмонел в кожнш ¿з семи генерацш на здатшсть продукування плазмокоагулази. Виявлено, що з кожним наступним контактом Salmonella pullorum-gallinarum з А. viridans avium 21 вщзначене наростання питомо! ваги плазмокоагуло-негативних штам1в.
Виражене збшьшення питомо! ваги штам1в Salmonella pullorum-gallinarum не продукуючих плазмокоагулазу 3i збшьшенням числа контакта з А. viridans avium 21 вказуе на змшу бюлопчних властивостей сальмонел.
Висновки Aerococcus viridans avium 21, продукуючий перекис водню, виявляе антагошстичну дш у вщношенш сальмонел in vitro у рщкому живильному середовищг
Встановлено виражене зниження кшькост1 сальмонел, що вижили, у кожнш наступит генераци при спшьному вирощуванш з А. viridans avium 21, що зв'язано 3i змшами бюлопчних властивостей стафшокока i пщтверджено, зокрема, змшами його плазмокоагулюючих властивостей.
Л1тература
1. Егоров Н.С. Микробы-антагонисты и биологические методы определения антибиотической активности. - М.: Высшая школа, 1965.- 211 с.
11
2. Резник С.Р., Смирнов В.В., Сытник С.И. Действие микробов антагонистов на кокковые бактерии кожи молочных желез кормящих женщин // Микробиол. журн - 1988. - Т. 50, № 4. - С. 82-88.
3. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода ВасШш/В.В.Смирнов,С.Р.Резник, В.А. Вьюницкая и др. // Мткробюлопчний журнал - 1993.-Т.55, №4.- С. 92-112.
4. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии-продуценты биологически активных веществ. - К.:Наукова думка, 1982. - 280 с.
5. Смирнов В.В., Рева О.Н., Вьюницкая В.А. Создание и практическое применение математической модели антагонистического действия бацилл при конструировании пробиотиков // Микробиология. - 1995. - Т. 64, № 5. - С. 661667.
6. Evans J.B. Genus Aerocococcus Williams, Hirch and Cowan 1953 //Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. - 1986. - T.2. - P.1080.
7. Hillier S.L., Krohn M.A., Rabe L.K., Klebanoff S.J., Eschenbach D A. The normal vaginal flora, H2O2-producing Lactobacilli and bacterial vaginosis in pregnant women // Cln. Infect. Dis. - 1993. - № 16. - P. 273-281.
8. Kondro W. Canadian scientists urge government to develop antibiotic plan The Lancet Vol 360, October 19, 2002 -P.1230.
9. MacKova-Suchova M., Kostal J., Demnerova K. Effect of cultivation conditions on glycerophosphate oxidase production by a mutant strain of Aerococcus viridans. Microbiologia 1995 Sep; Vol. 11.- № 3.- P. 337-342.
Summary I. Biben
ANTAGONISM A EROCOCCUS VIRIDANS AVIUM 21 AND SALMONELLA PULLORUM-GALLINARUM IN VITRO
Are represented the study results of antagonistic action Aerococcus viridans avium 21 produced hydrogen peroxide on Salmonella pullorum-gallinarum, in vitro.
Is established antagonistic action, becoming stronger in each consequent generation Salmonella pullorum-gallinarum attached to the joint growing with A. viridans. avium 21 Supposes, that checked off dominance related to changes of biological properties Salmonella.
Key words: Aerococcus viridans avium 21,Salmonellapullorum-gallinarum, antagonistic, hydrogen peroxide, consequent contact, generation
Рецензент - д.вет.н., професор Стибель В.В.
12
