CC BY
5
ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ
Экспериментальная онкология
При этом, важно отметить, что при некоторых локализациях частота 2 и более амплификаций идентифицированных регионов в опухоли ниже смертности. Это отмечается для рака легкого, желудка, пищевода, толстой кишки, предстательной железы и опухолей головы и шеи. Это означает, что в процессе лечения происходит стимуляция образования амплификаций, больше чем их элиминация под действием лечения. При других локализациях, таких как РМЖ, меланома, рак мочевого пузыря и шейки матки, частота 2 и более амплификаций идентифицированных регионов в опухолях значительно выше частоты смертности. Это свидетельствует о том, что в процессе лечения этих локализаций в большей степени происходит элиминация клонов с амплификациями, чем их появление de novo.
Заключение: Таким образом, анализ связи частоты 2 и более амплификаций 3q, 5p, 6p, 7q, 8q, 9p, 10p, 10q, 12р, 13q, 16p, 18q, 19p со смертностью при различных локализациях показал исключительно высокий уровень корреляции, что свидетельствует об универсальности наличия/отсутствия 2 и более амплификаций идентифицированных регионов как маркера исхода заболевания.
ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ ХИМИОРЕЗИСТЕНТНОСТИ У РАЗНЫХ ЛИНИЙ КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА
Авторы: Н.И. Игнатова, И.Н. Дружкова, М. М. Лукина, А.В. Кашина, М.В. Ширманова
Место работы: ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России, Нижний Новгород
Эл. почта: n.i.evteeva@gmail.com
Цель: Создание химиорезистентных линий колоректаль-ного рака и характеристика изменений, происходящих в клетках на этапах формирования резистентности. Материалы и методы: В работе использовались две линии колоректального рака человека НТ29 и НСТ116, отличающиеся по морфологии, выраженности эпителиально-ме-зенхимального перехода, скорости пролиферации и исходному уровню чувствительности к химиопрепаратам. Химиорезистентные линии получали путем многократного воздействия на клетки малыми дозами препаратов 5-фторурацил и оксалиплатин. Исходные концентрации препаратов составляли 1/10 от предварительно установленной IC50 и увеличивались в процессе культивирования до терапевтических концентраций и выше. Критерием формирования химиорезистентности к какому-либо препарату являлось статистически значимое повышение его ингибирующей дозы IC50 (р < 0,05) по сравнению с IC50 нерезистентной линии того же пассажа. На этапах формирования резистентности оценивали морфологические изменения, скорость пролиферации, выживаемость. Также оценивали популяцию опухолевых стволовых клеток по экспресии маркеров CD133, CD44, CD24.
Результаты: Получены резистентные линии колоректального рака НТ29_ОХО, HT29_5FU, HCT116_OXO и HCT116_5FU. Процесс индуцирования химиорезистентности у клеточных линий занял 5 месяцев (20 недель) для HCT116 и 6 месяцев (24 недели) для HT29. В результате для линии НСТ116 при формировании устойчивости к препарату оксалиплатин значение IC50 увеличилось в 25,3 раза (с 0,75 ± 0,16 до 18,98 ± 2,75 мкМ), к препарату 5-фторура-цил — в 14 раз (с 3,16 ± 0,14 до 44,32 ± 3,56 мкМ). Для линии НТ29 значение IC50 для оксалиплатина увеличилось в 3 раза (с 1,97 ± 0,08 до 6,07 ± 0,29 мкМ), а для 5-фторура-цила — в 2,8 раза (с 13,92 ± 2,52 до 38,89 ± 7,6 мкМ). У линии НСТ116 при приобретении устойчивости к ок-салиплатину наблюдалось снижение пролиферативной активности, а для 5-фторурацила время удвоения клеток было увеличено относительно контроля. У линии НТ29 наблюдалось увеличение времени удвоения числа клеток на первых этапах наблюдения, а в конечной точке значения не отличались от контроля. Оценка перекрестной резистентности к оксалиплатину достоверно показала увеличение чувствительности к оксалиплатину клеток HCT116_5FU (3,16 ± 0,14 vs 2,56 ± 0,05 мкМ) и увеличение чувствительности к 5-фторурацилу клеток НСТ116_ОХО (0,75 ± 0,16 vs 0,40 ± 0,06 мкМ). Популяция опухолевых стволовых клеток увеличилась с приобретением линиями резистентности. Заключение: Индуцирование химиорезистентности в разных линиях колоректального рака ведет к специфическим изменениям для каждой линии и сопровождается изменениями пролиферации и пула опухолевых стволовых клеток. Работа поддержана РФФИ № 18-29-09054.
АНАЛИЗ ТАРГЕТНЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПЕПТИДОВ -ИНГИБИТОРОВ ЦИКЛИН-ЗАВИСИМОЙ КИНАЗЫ6
Авторы: Т.М. Кулинич, А.В. Иванов, А.М. Шишкин, В.К. Боженко Место работы: ФГБУ «РНЦРР» Минздрава России, Москва Эл. почта: sobral@mail.ru
Цель: Определение противоопухолевых свойств последовательностей, полученных с помощью методов математического моделирования и ингибирующих образование комплекса CDK 6/циклин D.
Материалы и методы: Исследованы показатели цитоток-сического и цитостатического воздействия на опухолевые клетки четырех искусственных пептидных конструкций (ИПК). Исследование выполнено in vitro на культурах клеток линий опухолей человека: MCF-7, А549, SKOV-3, НСТ116. Клетки культивировали в стандартных условиях: 37 °С, 5 % СО2, среда DMEM. Анализ проведен методом проточной цитометрии (Cytomics FC500, ВС, США), оценены уровни апоптоза и некроза (Apoptosis Detection Kit, ВС, Inc, Франция), уровень Вс12 (Anti Human Bcl-2 (Caltag Laboratories, США)) и pRb (BD, США). Активность проли-
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том / vol. 10 №3s1 • 2020
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
Российский
онкологический
конгресс
Экспериментальная онкология
ферации оценивалось в режиме «реального времени» системой RTCA iCELLIgence (ACEA Biosciences) и методом проточной цитометрии по анализу фаз клеточного цикла, окраской PI фиксированных образцов. Результаты: Исследуемые ИПК достоверно (р < 0,05) увеличивали уровень апоптоза и некроза в культурах про-лиферирующих опухолевых клеток, клеточная гибель возрастала пропорционально концентрации пептидов в дозах от 10 до 40 мкМ, и составляла от 62,4%± 5,8% до 85,3%± 6,7 % в зависимости от структуры ИПК и клеточной линии. После 24 часового воздействия на клетки ИПК апоптоз составлял от 29,7 %± 3,8 % до 76,1 %± 8,3%, также в образцах наблюдалось достоверное снижение уровня экспрессии Bcl-2. Было обнаружено, что наибольший ци-тотоксический и проапоптотический эффекты оказывали последовательности ИПК, имеющие в структуре несколько молекул изолейцина.
Анализ антипролиферативных свойств ИПК показал, что при увеличении концентрации пептидов до 20 мкМ наблюдается полная остановка процессов пролиферации, причем большинство клеток находится в Gl-фазе клеточного цикла, т. е. блокируется переход G1-S (основная точка воздействия CDK6). Также отмечено снижение экспрессии pRb (в 1,8-2 раза по сравнению с контрольными значениями), что подтверждает специфичность цитостатического воздействия. Т. о. было показано, что пептидные последовательности, полученные с помощью методов математического моделирования, проявляют выраженные свойства ингибиторов CDK6.
Заключение: Разработанные пептидные конструкции оказывают выраженные специфические цитотоксический и цитостатический эффекты на опухолевые клетки и могут являться потенциальными кандидатами для дальнейшей разработки противоопухолевых препаратов. Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 20-015-00068/20.
ОЦЕНКА ПЕРСПЕКТИВНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ВНУТРИКОСТНОЙ ИННОКУЛЯЦИИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК МЕЛАНОМЫ МЫШИ B16/F10 ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЙ В ЯДЕРНОЙ МЕДИЦИНЕ
Авторы: А.В. Смирнова1,2, П.О. Варакса1, Е.Ю. Григорьева1, Ю. С. Лагодзинская1, Ю.А. Финогенова1, Е.А. Калабина3, А. А. Ли-пенгольц \4
Место работы: 1. ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2. ГБУЗ «МКНЦ им. А. С. Логинова» ДЗМ, Москва; 3. ФИБХ им. академиков М. М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Пущино; 4. НИЯУ «МИФИ», Москва Эл. почта: smirn-ova@mail.ru
Введение: Доклинические исследования радиофармацевтических препаратов и методов радиотерапии опухолевых заболеваний требуют создания нового типа моделей in vivo.
Перспективным могут стать модели внутрикостного типа инокуляции опухолевой суспензии клеток, охарактеризованных с точки зрения радиочувствительности. Модель такого типа может быть использована и как фантомная, и как модель для оценки биологической эффективности. Цель исследования: Оценить динамику роста опухолевого узла B16/F10 у мышей C57Bl6/j на 8, 10, 21 и 28 сутки после инокуляции опухолевого материала клеток меланомы мышей B16 /F10 в костомозговой канал большой берцовой кости.
Материалы и методы: Наркотизированным мышам линии C57Bl/6j (n = 24) в диафиз большой берцовой кости ино-кулировали культуральную суспензию клеток меланомы B16/F10 в объеме 0,02 мл с 2 тыс. клеток с 30 % Матригеля. Динамику роста узла оценивали с 1 до 28 дня методом последовательных измерений в 3 взаимно-перпендикулярных плоскостях: длина, ширина и высота узла. В дальнейшем рассчитывали абсолютный объем опухолевого образования. Контроль метастатических поражений проводили методом компьютерной томографии с последующей верификацией при вскрытии.
Результаты: На пятые сутки после введения узел определялся визуально и формировался под кожей в виде тесто-ватой структуры с четкой границей между тканями области голени и маклока у 73,3% животных. К 8 суткам узел определялся визуально и пальпаторно у всех 100%. Динамика изменения размера опухолевого узла была определена на 8, 21 и 28 сутки, и была следующей: 191,95 ± 26,20 мм3, 661,54 ± 576,61 мм3, и 3602,08 ± 2755,94 мм3 соответственно. Для определения интенсивности опухолевой прогрессии использовали метод макроскопической оценки состояния трупного материала, который показал: наличие у всех 100% животных метастатических узлов как рядом с опухолью, так на отдалении от нее, поражения легких (100%) и селезенке (23,81%), трупы животных были кахексичными, подкожно-жировая и висцеральная жировая клетчатка полностью отсутствовала. Кости таза у 4,76 % мышей не определялись из-за прорастания опухоли в малый таз с последующим лизисом костных структур. Заключение: Инокуляция клеток хорошо переносилась животными, опухолевые изменения костной структуры были видны к 14 дню, что совпадало с выходом опухолевых масс в мягкие ткани. Методами классической гистологии планируется уточнение динамики роста и развития метастатических узлов в паренхиматозных органах при описанном типе перевивки.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том / vol. 10 № 3s1 • 2020
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
