CC BY
16
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
Ж.Н. Несипбаева, М.К. Каражанова, Д.З. Нурписова
АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ ХРОМОСОМНЫХ АБЕРРАЦИЙ У ДЕТЕЙ С ОСТРЫМ
ЛЕЙКОЗОМ
АО «Научный центр педиатрии и детской хирургии», г. Алматы, Республика Казахстан
Введение. Лейкоз - это опухолевое новообразование гемопоэтической ткани с первичным поражением костного мозга, морфологическим субстратом которого является бластная клетка. Современные исследования показали, что возникновение опухоли всегда связано с перестройкой генетического аппарата гемопоэтической клетки. Хромосомные и молекулярно-генетические аберрации, играя основную роль в патогенезе острых лейкозов, определяют морфологические, иммунологические и клинические особенности заболевания.
Цель. Ретроспективный анализ структуры и частоты хромосомных аберраций у детей с первично диагностированным острым лейкозом.
Материал и методы. Был проведен ретроспективный анализ историй болезни детей, находившихся на стационарном лечении онкогематологического отделения АО «Научного центра педиатрии и детской хирургии» г. Алматы за период с 2015 по 2017 гг. Было исследовано 310 историй болезни с первично диагностированным острым лейкозом. Материалом исследования послужили клетки костного мозга, полученного при пункционной биопсии грудины или подвздошной кости. Цитогенетические исследования проводились в лаборатории центра стандартным цитогенетическим методом с помощью дифференциального окрашивания хромосом. Хромосомные препараты анализировались на микроскопах исследовательского класса с использованием программ автоматического кариотипирования. При отсутствии митозов, а также при подозрении на определенные варианты острого лейкоза по результатам иммунологических и морфологических исследований и клинических проявлений заболевания при нормальном кариотипе дополнительно проводили исследование методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) c использованием ДНК-зондов «Vysis Inc., Abbott Laboratories».
Результаты. Число пациентов с острым миелобластным лейкозом (ОМЛ) составило 22,6% (n=70), острый лимфо-бластный лейкоз - 75,5% (n=234), недифференцированные и бифенотипические варианты (другие виды лейкоза) встречены в 1,9% случаев (n=6). При цитогенетическом и моле-кулярно-цитогенетическом (методом in situ гибридизации) исследованиях опухолевых бластных клеток костного мозга среди 310 пациентов у 158 пациентов (51%) были выявле-
ны различные хромосомные аберрации. Хромосомные аномалии, ассоциированные с устойчивыми вариантами ОМЛ и ОЛЛ согласно классификации ВОЗ, были обнаружены у 117 больных (74% от всех случаев с хромосомными нарушениями). В 26% (n=41) имели место другие аберрации, не связанные с ВОЗ-вариантами острых лейкозов. Из 117 пациентов с рекуррентными хромосомными перестройками в бластных клетках ОЛ, случаи ОМЛ составили 18% (n=21), ОЛЛ - 82% (n=96). Нормальный кариотип наблюдался у 102 пациентов (33%). Не удалось получить метафазы для цитогенетическо-го анализа у 50 больных (16%). Иммунофенотипирование клеток костного мозга выявило преобладание В-клеточных лейкозов (91,8%) над Т-клеточными лейкозами (8,2%). В структуре В-ОЛЛ доминировали common (70,4%) и пре-В (13,3%) подварианты. Молекулярно-цитогенетическое исследование методом FISH с ДНК-зондами к известным хромосомным перестройкам было проведено 98 пациентам. У 66 пациентов было обнаружено наличие химерных генов, у 32 пациентов данный метод не обнаружил перестройки генов. Из 66 обнаруженных случаев, у 37 было выявлено ETV6/ RUNX1 - t(12;21), у 5 BCR/ABL - t(9;22), у 7 MLL rearranged - t(v;11q23.3), у 2 TCF3-PBXI - t(1;19), у 3 c-MYC - t(8;14), у 5 RUNX1/RUNX1T1 - t(8;21), у 4 PML/RARA - t(15;17), у 3 CBFB/ MYH11 - inv(16).
Выводы. В детской популяции преобладает лимфо-бластный вариант острого лейкоза (75,5%), занимающий ведущую роль в структуре ОЛ у детей разного возраста. На долю ОмЛ приходится 22,6% всех ОЛ. Самой частой хромосомной перестройкой у пациентов с ОЛЛ была гипердиплои-дия хромосом бластных клеток (10,6%), среди структурных перестроек доминирует транслокация t(12;21)(p13;q22)/ ETV6-RUNX1, которая была выявлена у 37 (16%) пациентов. Самой частой перестройкой при ОМЛ была t(8;21)(q22;q22)/ RUNX1-RUNX1T1, которая идентифицирована у 14 (20%) больных. Таким образом, определенные диагностические хромосомные перестройки связаны с благоприятным прогнозом, тогда как другие предсказывают высокий риск неэффективности стандартного лечения, что изначально помогает клиницистам выбрать более интенсивную терапию (высокодозные режимы химиотерапии, трансплантация ге-мопоэтических стволовых клеток).
Е.Е. Никулина, А.С. Пшеничный, Н.В. Рисинская, К.С. Сычевская, Н.В. Рыжикова, Ю.В. Сидорова, А.Б. Судариков
СРАВНЕНИЕ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК ИЗ МАЛОКЛЕТОЧНЫХ ОБРАЗЦОВ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва
Введение. В гематологической лабораторной практике нередко приходится осуществлять диагностику с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) на архивных образцах с низким содержанием клеток, таких как мазки периферической крови (ПК) и костного мозга (КМ), отпечатки лимфатических узлов. Цитологические образцы бывают необходимы при отсутствии иного альтернативного дебютного материала. Важно подобрать эффективную методику выделения нуклеиновых кислот для проведения ПЦР-анализа, обеспечивающую достаточное количество и качество мате-
риала. На данный момент существует большое количество методик выделения нуклеиновых кислот из различных биологических материалов. Однако, не все из них позволяют выделить ДНК/РНК из малого количества материала, в том числе, из образцов изначально не предназначенных для выделения нуклеиновых кислот.
Цель. Сравнить методики экстракции ДНК на твердом носителе (сорбенте) и с помощью протеиназы К из сложного материала с низкой клеточностью: мазки КМ, ПК, ликвора.
Материалы и методы. Проанализированы 23 неокра-
