CC BY
23
УДК 543.544
АНАЛИЗ СИРОПА «ИООЦЕТАМ» МЕТОДОМ ГРАДИЕНТНОЙ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Г.Б. Голубицкий*, В.М. Иванов
(кафедра аналитической химии; e-mail: [email protected])
Предложена оригинальная методика анализа нового многокомпонентного лекарственного препарата - сиропа «Нооцетам» методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в режиме линейного градиента. При анализе модельных растворов, содержащих действующее вещество, консерванты и все вспомогательные компоненты, подтверждена достоверность получаемых результатов. Проведен анализ опытно-экспериментальных образцов сиропа, все результаты соответствуют требованиям нормативно-технической документации. Разработанная методика включена в фармакопейную статью предприятия на данный препарат.
Ключевые слова: сироп, нооцетам, высокоэффективная жидкостная хроматография, изократическая, градиентная.
Сироп "Нооцетам" - оригинальный многокомпонентный лекарственный препарат ноотропного действия, разработанный и подготовленный к производству на ОАО "Фармстандарт-Лексредства" (г. Курск). Действующее вещество сиропа - пирацетам (I), консерванты - нипагин (II) и нипазол (III), подсластитель -аспартам (IV). Структурные формулы компонентов приведены на рис. 1. Для отработки технологии препарата и контроля его качества при серийном выпуске специалистами предприятия была разработана методика анализа. Результаты проведенной работы нашли отражение в настоящей статье.
Экспериментальная часть
Реагенты. Для приготовления подвижных фаз (ПФ), а также для растворения стандартных и испытуемых препаратов использовали ацетонитрил для хроматографии "ос.ч. сорт 0" ("Криохром", Россия) и сверхчистую воду с удельным сопротивлением 18,2 МОм/см, полученную на установке "Direct Q" ("Millipore"). В качестве стандартов определяемых лекарственных веществ использовали фармацевтические субстанции, проверенные отделом контроля качества предприятия и соответствующие всем требова-
Рис. 1. Вещества, входящие в состав сиропа "Нооцетам" * ОАО "Фармстандарт-Лексредстваг. Курск.
Рис. 2. Хроматограммы испытуемого раствора сиропа «Нооцетам» для определения: а - пираце-тама (1) и аспартама (2); б - нипагина (1) и нипазола (2)
ниям нормативной документации (НД). Все остальные использованнные реактивы имели квалификацию не ниже "ч.д.а."
Аппаратура. Хроматографический анализ проводили на хроматографе "Waters Alliance 2695" с диодно-матричным детектором "Waters 2996". Величина "мертвого" объема хроматографа менее 0,650 мл (по паспорту). Использовали колонку размером 3,9x150 мм с защитной предколонкой размером 3,9x20 мм (обе колонки заполнены сорбентом "NovaPak С18" с размером частиц 4,0 мкм ("Waters").
Приготовление растворов. Для выполнения анализа 1,0 мл сиропа помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили до метки смесью CH3CN (3 об. %) с 0,025 М раствором КН2РО4 и перемешивали. Параллельно готовили раствор
стандартного образца сравнения (PCO), содержащий около 0,2 г пирацетама, 0,0007 г нипагина, 0,0003 г нипазола и 0,005 г аспартама. Все растворы фильтровали через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (предпочтительны фторопластовые фильтры, устойчивые в водно-ацетонитрильных растворах).
Проведение анализа, расчет результатов. Хро-матографировали испытуемый раствор и раствор PCO в режиме линейного градиента. Состав ПФ изменяли по программе, представленной в табл. 1. Объем инжектируемых проб и расход ПФ составили 5,0 мкл и 1,0 мл/мин соответственно. Определяемые вещества детектировали при длинах волн 218 нм (пи-рацетам, аспартам) и 256 нм (нипагин, нипазол). Рассчитывали площади пиков определяемых компонентов
Т а б л и ц а 1
Программа изменения состава ПФ
Время, мин CH3CN : 0,025 М КН2РО4 = 3 : 97 CH3CN : 0,025 М КН2РО4 = 70 : 30
0 100 0
10 0 100
11 0 100
12 100 0
15 100 0
и находили количество каждого компонента в 5 мл анализируего сиропа по формуле:
X = 5^и X mст/Sст >
где SH и £ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и PCO соответственно; тст -масса стандарта определяемого вещества в растворе PCO (г).
Результаты и их обсуждение
Рабочая длина волны. Спектры поглощения определяемых веществ, полученные в режиме on line с помощью диодно-матричного детектора хроматографа, представлены на рис. 2. Нипагин и нипазол де-
тектировали при 256 нм (максимум поглощения), а пирацетам и аспартам, поглощение которых при 256 нм мало, при 218 нм.
Состав ПФ и продолжительность градиента выбирали исходя из свойств пирацетама (слабое удерживание в обращенно-фазовой системе) и нипазо-ла (относительно сильное удерживание)*. Изменение содержания СЫ3СК в смеси с 0,025 М раствором КН2Р04 от 3 до 70 об.% в течение 10 мин позволило получить оптимальное значение времени удерживания и удовлетворительное разделение пиков (рис. 3).
Метрологические характеристики. Для подтверждения достоверности получаемых результатов определения компонентов были проанализированы 17 модельных смесей, содержащих определяемые и все вспомогательные вещества сиропа. Определяемые вещества вводили в диапазоне от 80 до 120% от нормируемого количества. Установлено, что результаты анализа не имеют систематической погрешности, поскольку средние относительные погрешности определения ег ср компонентов меньше соответствующих доверительных интервалов Аег Метрологические характрис-тики предлагаемой методики представлены в табл. 2.
Анализ сиропа. По предлагаемой методике проанализированы 3 образца сиропа «Нооцетам». Таблетки соответствуют требованиям НД по содержанию всех определяемых веществ. Полученные результаты и метрологические характеристики анализа представлены в табл. 3.
Рис. 3. Нормализованные спектры поглощения компонентов сиропа «Нооцетам»: 1 - пирацетам;
2 - аспартам; 3 - нипагин, 4 - нипазол
*СхунмакерсП. Оптимизация селективности в хроматографии. М., 1989. С. 321.
Т а б л и ц а 2
Метрологические характеристики методики определения пирацетама, аспарта-ма, нипагина и нипазола в сиропе «Нооцетам»
Компоненты S г '-'макс; 1 s2 макс ^макс? % е % cr ср? /и Aer, % e % r макс
Пирацетам 1,4х10-3 1,95 х10-6 3,27 -0,070 0,172 1,34
Аспартам 4,4х10-5 1,92 х10-9 3,18 -0,017 0,230 -1,84
Нипагин 8,2х10-6 6,65 х10-11 4,55 0,023 0,215 -1,83
Нипазол 5,6х10-6 3,16х10-11 6,79 -0,113 0,249 -1,74
Т а б л и ц а 3
Результаты анализа сиропа «Нооцетам» (опытная партия 0803)
Компоненты Содержание в 5,0 мл, г (n = 9; Р = 0,95)
норма по НД Хср S S Хср АХср S, %
Пирацетам 0,90 - 1,1 0,99300 0,00916 0,003053 0,00721 0,73
0,99500 0,00897 0,002990 0,00706 0,71
0,99100 0,00281 0,000937 0,00221 0,22
Аспартам 0,0225- 0,0275 0,02168 0,00022 0,000073 0,00017 0,80
0,02080 0,00021 0,000070 0,00017 0,79
0,02046 0,00007 0,000023 0,00006 0,27
Нипагин 0,0028-0,0042 0,00360 0,00002 0,000007 0,00002 0,44
0,00353 0,00003 0,000010 0,00002 0,67
0,00365 0,00001 0,000003 0,00001 0,22
Нипазол 0,0012-0,0018 0,00150 0,00002 0,000007 0,00002 1,05
0,00160 0,00002 0,000007 0,00002 0,98
0,00145 0,00001 0,000003 0,00001 0,54
THE ANALYSIS OF A SYRUP "NOOCETAM" BY A METHOD GRADIENT HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY G.B. Golubitsky, V.M. Ivanov
(Division of Analytical Chemistry)
The original technique of the analysis of a new multicomponent medicinal preparation - syrup "Noocetam" by a method HPLC a mode of a linear gradient is offered. At the analysis of modelling solutions containing working compound, preservation and all auxiliary components of a preparation, the reliability of received results is confirmed. The analysis of skilled -experimental samples of a syrup is carried out, all results correspond to the requirements of the normative-engineering specifications. The developed technique is included in pharmacopeiea clause of the enterprise on the given preparation.
Key words: sirup, noocetam, high performance liquid chromatography, isocratic, gradient.
Сведения об авторах: Иванов Вадим Михайлович - профессор кафедры аналитической химии химического факультета МГУ, докт. хим. наук ([email protected]); Голубицкий Григорий Борисович - зав. лаб. ОАО "Фармстандарт-Лексредства" (г. Курск), канд. хим. наук.
