CC BY
76
УДК 543.544
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Г.Б. Голубицкий*, В.М. Иванов
(кафедра аналитической химии; e-mail: [email protected])
Разработана методика количественного анализа нового многокомпонентного лекарственного препарата "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином" методом ВЭЖХ. При анализе модельных смесей, содержащих все действующие и все вспомогательные вещества таблеток, подтверждена достоверность получаемых результатов. Проанализированы опытно-экспериментальные образцы таблеток, полученные результаты соответствуют требованиям нормативно-технической документации и технологическим загрузкам. Методика предложена для включения в фармакопейную статью предприятия на данный препарат.
Ключевые слова: лекарственные препараты, пенталгин, пропифеназон, дротаверин, ВЭЖХ.
Таблетки "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином" - оригинальный многокомпонентный лекарственный препарат, разработанный и подготовленный к выпуску на ОАО "Фармстандарт-Лексредства". В состав препарата входят парацетамол (I), пропифеназон (II), кофеин (III), фенобарбитал (IV), дротавери-на гидрохлорид (V) и ряд вспомогательных веществ и наполнителей. Структурные формулы компонентов приведены на рис. 1.
Разработка методики количественного определения пяти действующих компонентов - достаточно сложная, но необходимая задача для обеспечения качества, эффективности и безопасности препарата. Решение этой проблемы нашло отражение в настоящей публикации.
Экспериментальная часть
Реагенты. Для приготовления подвижных фаз (ПФ), а также для растворения стандартных и испытуемых препаратов использовали ацетонитрил для градиентной хроматографии ("Sigma", США) и сверхчистую воду с удельным сопротивлением 18,2 МОм/см, полученную на установке "Direct Q" ("Millipore"). В качестве стандартов определяемых лекарственных веществ использовали фармацевтические субстанции, проверенные отделом контроля качества предприятия и соответствующие всем требованиям нормативно-технической документации (НД).
Все остальные использованные реактивы имели квалификацию не ниже "ч.д.а."
Аппаратура. Хроматографический анализ проводили на хроматографе "Waters Alliance 2695" с диод-но-матричным детектором "Waters 2996". "Мертвый" объем хроматографа (по паспорту) составлял менее 0,650 мл. Использовали колонку размером 150x4,6 мм с защитной предколонкой размером 12,5x4,6 мм. Обе колонки заполняли обращенно-фазо-вым сорбентом "Zorbax SB C8" с размером частиц 3,5 мкм ("Agilent Technologies", США) и термоста-тировали их при 40°С.
Приготовление растворов. Для выполнения анализа около 0,160 г (точная навеска) тщательно растертых анализируемых таблеток помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 40 мл смеси CH3CN (10 об. %) - вода, перемешивали 3 мин, доводили до метки этой же смесью растворителей и снова перемешивали. Для приготовления раствора стандартных образцов (РСО) около 0,060 г парацетамола и около 0,050 г пропифеназона (точные навески) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 40 мл смеси CH3CN (10 об.%) - вода, перемешивали до растворения веществ, добавляли 5,0 мл раствора (А), доводили до метки этой же смесью растворителей и перемешивали. Для приготовления раствора А в мерную колбу вместимостью 100 мл помещали около 0,200 г кофеина, около 0,160 г
* ОАО "Фармстандарт-Лексредства", г. Курск.
Рис. 1. Структурные формулы изученных компонентов
дротаверина и около 0,040 г фенобарбитала (точные навески), добавляли 40 мл смеси CH3CN (10 об.%) - вода, перемешивали до растворения веществ, доводили до метки этой же смесью растворителей и перемешивали. Модельные растворы для подтверждения достоверности получаемых результатов готовили аналогично раствору РСО, но с добавлением соответствующего количества плацебо - смеси всех компонентов препарата, за исключением определяемых веществ. Кроме того, содержание действующих веществ в модельных растворах различалось (±20% от заявленных значений).
Все растворы фильтровали через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (предпочтительны фторопластовые фильтры, устойчивые в водно-ацетонитрильных растворах).
Проеедение анализа, расчет результатов. Хро-матографировали испытуемый раствор и раствор РСО. Состав ПФ изменяли в соответствии с программой, представленной в табл. 1.
Расход ПФ составил 1,0 мл/мин, объем инжектируемых проб 20,0 мкл, детектирование проводили при
Т а б л и ц а 1
Состав подвижной фазы (об.%)
Время, мин Состав подвижной фазы
ra3CN : 0,025 М КН2РО4 = 7 : 3 0,025 М КН2РО4
0 20 80
4 30 70
10 100 0
11 100 0
12 20 80
15 20 80
Рис. 2. Нормализованные спектры поглощения парацетамола (1), пропифеназона (2), кофеина (3),
фенобарбитала (4) и дротаверина (5)
X = 210 нм. Рассчитывали площади пиков определяемых компонентов и находили количество каждого компонента в анализируемых таблетках по формуле:
где £и и £ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно; тст, тс и тн - масса стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса таблетки и масса навески растертых таблеток (г), взятых для приготовления испытуемого раствора.
Результаты и их обсуждение
Оптимальные условия анализа. Длину волны детектирования определяли исходя из спектров поглощения компонентов препарата, полученных в режиме на потоке с помощью диодно-матричного детектора (рис. 2). Условия детектирования определяет спектр фенобарбитала, имеющего достаточное для надежного детектирования поглощение только в коротковолновой области. По этой причине длина волны детектирования в данной методике составляет 210 нм.
Большое различие хроматографических свойств компонентов исследуемого препарата не позволило найти условия их изократического разделения в об-ращенно-фазовой системе. Оптимальные условия разделения смеси действующих веществ в градиентном режиме определяются в основном двумя факторами - разрешение "критической" пары пиков и время удерживания последнего выходящего пика*. В первом случае это пики парацетамола и кофеина, для разделения которых концентрация органического модификатора ПФ не должна превышать 30 об.%, во втором - пик дротаверина, для элюирования которого содержание СН3СК должно быть не менее 60 об.%. Для обеспечения выполнения этих условий и сокращения времени анализа градиентная программа, предусмотренная методикой, включает два участка с разными наклонами: до выхода пика кофеина и более крутой до выхода пика дротавери-на. Такие условия позволили установить время одной инжекции 15 мин, включая время уравновешивания колонки (рис. 3).
Анализ модельных смесей. Всего было приготовлено 17 растворов, содержание определяемых ве-
*Схунмакерс П. Оптимизация селективности в хроматографии. М., 1989. С. 321.
Рис. 3. Хроматограмма испытуемого раствора для анализа таблеток "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином" в
двух масштабах ( а, б)
Т а б л и ц а 2
Метрологические характеристики методики количественного анализа таблеток "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином"
Условия Общий вид Сорбция Десорбция
t = 0 а(х,0) = анач(х) а(х,0) = 0 а(х,0) = анач(х)
X = 0 да — = 0 дх
х = 1
Т а б л и ц а 3
Результаты анализа трех опытных образцов таблеток "Пенталгин с пропифеназоном и дротаверином"
Компоненты Содержание в одной таблетке, г (п = 9; Р = 0,95)
Норма по НД хср 5 5д:ср ¿ЛЛ-ср е,%
0,294 0,002 0,00067 0,00158 0,54
Парацетамол 0,285-0,315 0,302 0,004 0,00133 0,00316 1,05
0,296 0,003 0,00100 0,00237 0,80
0,0489 0,0007 0,00023 0,00055 1,13
Кофеин 0,04625-0,05375 0,0504 0,0005 0,00017 0,00040 0,78
0,0495 0,0009 0,00030 0,00071 1,44
0,255 0,003 0,00100 0,00237 0,93
Пропифеназон 0,237-0,262 0,248 0,006 0,00200 0,00474 1,91
0,244 0,002 0,00067 0,00158 0,65
0,0097 0,0003 0,00010 0,00024 2,44
Фенобарбитал 0,009-0,011 0,0102 0,0003 0,00010 0,00024 2,32
0,0098 0,0004 0,00013 0,00032 3,22
0,0403 0,0006 0,00020 0,00047 1,18
Дротаверина г/х 0,0370-0,0430 0,0387 0,0005 0,00017 0,00040 1,02
0,0396 0,0006 0,00020 0,00047 1,20
ществ в которых колебалось в интервале ±20% от значений, заявленный по рецептуре. Полученные растворы анализировали по вышеприведенной методике и рассчитывали результаты по методу "введено-найдено" с помощью электронных таблиц Excel. Полученные результаты представлены в табл. 2. Сравнение величин средних относительных погрешностей определения компонентов егср с соответствующими доверительными интервалами Aer показывает, что сис-
тематическая погрешность отсутствует (егср < Лег). Площади пиков определяемый веществ линейно зависят от их концентраций в указанном интервале (коэффициент корреляции ^корр > 0,99.
Анализ образцов таблеток. По предлагаемой методике проанализированы опытные образцы препарата. Полученные резулытаты представлены в табл. 3. Резулытаты соответствуют требованиям НД и технологическим загрузкам.
THE QUANTITATIVE ANALYSIS OF ANY FARMACEUTICAL BY A METHOD HPLC
G.B. Golubitsky, V.M. Ivanov
(Division of Analytical Chemistry)
The technique of the quantitative analysis of a new multicomponent medicinal preparation "Pentalgin with propiphenazon and drotaverin" by a method HPLC is developed. At the analysis of modelling mixes containing all working and all auxiliary substances of tablets, the reliability of received results is confirmed. Skilled - experimental samples of tablets are analysed the received results correspond(meet) to the requirements of the normative-engineering specifications and technological loadings. The technique is offered for inclusion in pharmacopoeia clause of the enterprise on the given preparation.
Key words: medicinal preparations, pentalgin, propiphenazon, drotaverin, HPLC.
Сведения об авторах: Иванов Вадим Михайлович - профессор кафедры аналитической химии химического факулытета МГУ, докт. хим. наук ([email protected]); Голубицкий Григорий Борисович - зав. лаб. ОАО "Фармстандарт-Лексредства" (г. Курск), канд. хим. наук.
