CC BY
29
УДК 543.544
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ТАБЛЕТОК И СИРОПА "КОДЕЛАК БРОНХО" МЕТОДАМИ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Г.Б. Голуб)шкий , В.М. Пианов
(кафедра аналитической химии: e-mail: :Sandro@analyt.сШш.msu.ru)
Предложена методика количественною ана, una ноною оригинального лекарственною препарата - таблеток н сиропа «Коделак бропхо» методами высокоэффективной жидкостной хроматографии. Действующие вещества таблеток разделяются в течение шести минут при эффективном разрешении инков всех компонентов. Проведен анализ онытно-экснернмен-т&пьпых образцов таблеток. Полученные результаты соответствуют требованиям нормативно-технической документации и технологическим загрузкам. Для сирина предложены дна варианта анализа- о изократичсскоми градиентном режимах. Показано, что они практически равноценны но продолЖ!цельности н точности. При исследовании модельных растворов, содержащих все действующие и все вспомогательные вещества препарата, подтверждена достоверность получаемых результатов. Изократнчсскнн вариант методики технически проще, поэтому он предложен для включения в проект фармакопейной статьи предприятия.
"Коделак бронхо" — многокомпонентный препарат от кашля в форме таблеток и сиропа, содержащий лекарственные вещества синтетического и растительного происхождения (схема). Основные действующие вещества препарата - гидрохлорид амброксола (I) и тринагриевая соль плицирризиновой кислоты (II). Кроме этого, таблетки содержат сухой экстракт термопсиса и ряд вспомогательных веществ и наполните-
ли. В качестве консервантов в сироп вводят нипагин (III) и нипазол (IV).
Параллельно с разработкой технологии получения таблеток и сиропа разрабатывали методики количественного определения. Поскольку препарат имеет достаточно сложный состав, трудно разработать методику для количественного определения всех его компонентов. Была поставлена реальная задача -
NH'HCI
!I3C XOONa
fil.
NaOOC
Oil
Oil
МО
Ч
ill
о—сн3
-Гм
\=/ о—CjHf
o¡¡
II
IV
* ОАО" 'Флр\ютандарт-Лексредства" 18 ВМУ, химия, № 6
разработать методику одновременного определения двух основных действующих компонентов (I, II) в таблетках и в сиропе, а также двух консервантов (Ш, IV) в сиропе.
Экспериментальная часть
Реагенты. Для приготовления подвижных фаз (ПФ), а также для растворения стандартна и испытуемых препаратов использовали ацетонитрил для градиентной хроматографии ("Sigma", США) и сверхчистую воду с удельным сопротивлением 18,2 МОм/см, полученную на установке "Direct О" ("Mi¡Праге"). В качестве стандартов определяемых лекарственных веществ использовали проверенные отделом контроля качества предприятия фармацевтические субстанции, соответствующие всем требованиям нормативной документации. Все остальные использованные реактивы имен! квалификацию не ниже "ч.д.а."
Аппаратура. Хроматографический анализ проводили на хроматографе "Waters Alliance 2695" с диод но-матричным детектором "Waters 2996". Величина "мертвого" объема хроматографа составляет по паспорту менее 0,650 мл. Использовали колонку размером 150x4,6 мм и защитную пред колонку размером 12.5 > 4.6 мм. заполненные обращен но-фазовым сорбентом "Zorbcix SB С8" с размером частиц 3,5 мкм ("Agilent Technologies", США), и термостаггиро-вали их при 40°С.
Для контроля рН элюентов использовали рН-метр-милливольтметр "рН-673М" со стеклянным индикаторным электродом и хлоридсеребряным электродом сравнения.
Приготовление растворов. Для проведения анализа тщательно растертые анализируемые таблетки (точная навеска —0,275 г) помещали в мерную колбу емкостью 100 мл, добааляли 40 мл смеси CH^CN-Н20 (1:4 по объему), перемешивали 3 мин, доводили до метки этой же смесью растворителей и перемеривали, Для приготовления раствора стандартных образцов (РСО) около 0,100 г амброксоиа г/х и около 0,300 г тринаггриевой соли глицирризиновой кислоты (точные навески) помещали в мерную колбу емкостью 100 мл, добавляли 40 мл той же смеси CHgCN— П20, перемешивали до растворения веществ, доводили до метки этой же смесью растворителей и перемешивали (раствор А). Затем 5,0 мл раствора А помещали в мерную колбу емкостью 100 мл, доводили до метки той же смесью CH^CN—Н20 и перемешивали. Модельные растворы для подтверждения до-
стоверности получаемых результатов готовили аналогично раствору PCO, но при разбавлении в мерные колбы добааляли от 4,0 до 6,0 мл раствора А и соответствующее количество плацебо - смеси всех компонентов препарата за Исключением определяемых веществ.
Для проведения анализа 5,0 мл анализируемого сиропа помещали в мерную колбу емкостью 100 мл, добавляли 40 мл смеси CH,CN H20 (3:7 по объему), перемешивали в течение 3 мин, доводили до метки этой же смесью растворителей и перемешивали. Для приготовления PCO в мерную колбу емкостью 100 мл помещали -0,100 г гидрохлорида амброк-сола, -0,300 г тринатриевой соли глицирризиновой кислоты, -0,038 г нипагина и —0.013 г нипазола (точные навески), добавляли 40 мл той же смеси CH3CN-H20. перемешивали до растворения веществ, доводили до метки этой же смесью растворителей и перемешивали (раствор А). Затем 10,0 мл раствора А помещали в мерную колбу емкостью 100 мл, доводили до метки той же смесью CH,CN—Н,0 и перемешивали. Для подтверждения достоверности получаемых результатов модельные растворы готовили аналогично раствору PCO. но при разбавлении в мерные колбы добавляли от 8,0 до 12,0 мл раствора А и соответствующее количество плацебо.
Все растворы для анализа таблеток и сиропа фильтровали через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (предпочтительны фторопластовые фильтры, устойчивые в водно-ацетонит-рильных растворах).
Проведение анализа. Хром атограф и ров ал и испытуемый раствор таблеток и раствор PCO. В качестве ПФ использовали смесь (в соотношении 2:3) С(-ЦС1Ч-0,025 М КН2Р04 (pH 2,5) с расходом 1,0 мл/мин. Объем инжектируемых проб составил 20,0 мкл, детектирование проводили при 250 нм.
При анализе сиропа хроматографировали испытуемый раствор и раствор PCO. При анализе в изократи-ческом режиме в качестве ПФ использовали смесь (в соотношении 3:7) CH^CN-0.025 М КН2Р04 (pH 2,5) с расходом 1,0 мл/мин. При использовании градиентного режима состав ПФ изменяли в соответствии с программой, представленной в табл. 1. Объем инжектируемых проб составил 20.0 мкл, детектирование проводили при 254 нм.
Расчет результатов. При анализе таблеток рассчитывали площади пиков определяемых компонентов и на\одили количество каждого компонента в анализируемых таблетках по формуле:
Т а б л и ц а 1
Программа изменения состава ПФ при использовании градиентного режима
Время, мин Состав ПФ, об. %
CH3CN: 0,025 М КН2Р04 (pH 2,5) -3:2 0.025 МКН,РО, (pH 2,5)
0 30 70
16 90 10
17 90 10
18 30 70
21 30 70
X = (¿;х шстхшс)/(лстхтн),
где S и S — средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах испытуемого раствора и PCO соответственно; т , т и тн - соответственно массы стандарта определяемого вещества в растворе PCO. средняя масса таблетки и масса навески растертых таблеток, взятой для приготовления испытуемого раствора (г).
При анализе сиропа рассчитывали площади пиков определяемых компонентов и находили количество каждого компонента (г) в одной дозе анализиру емого сиропа (5 мл) по формуле:
где S и Sci - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и PCO соответственно; т - масса стандарта определяемого вещества в растворе PCO (г).
Результаты н их обсуждение
Оптимальные условия анализа таблеток. На
рису нке представлены спектры поглощения определяемых компонентов, полученные в режиме on line с помощью диодно-матричного детектора. По этим данным длину волны детектирования установили близкой к максимуму поглощения II и одному из максимумов поглощения 1. равной 250 нм.
Для определения оптимальных условий разделения компонентов испытуемого раствора проводили эксп-ресс-оптимизацию. Экспресс-оптимизация подразу мевает исследование части факторов, влияющих на хро-матографические параметры веществ [1]. Значения других факторов устанавливали, исходя из определяющих физико-химических свойств компонентов. Было установлено, что для получения оптимального удерживания глицирризиновой кислоты и удовлетворительной для целей количественного анализа формы ее пика необходимо устанавливать pH ПФ < 3 (вещество в молекулярной форме). При этом молекула амброксола переходит в протонированное состояние, ее удерживание снижается, но форма пика остается приемлемой. В то же время при этих условиях удается получить удовлетворительное разделение пиков определяемых и других компонентов.
210
245
280
315
X, нм
Нормализованные спектры поглощения амброксола (1) и тринагриевой соли глицирризиновой кислоты (2)
Таблица 2
Влияние содержания СН3СМ на характеристики удерживания
с(СН3СЫ), об.% 30 35 40 50
*гтщ> МИН 21,567 7,319 3,747 2,212
^йр, мин 2,854 2,304 2,022 1,772
(о, мин 1,347 - - -
11■ 1 м 3,006672 1,787082 0,875469 -0,14503
Ь^амф 0,410121 -0,04395 -0,39304 -0,85567
Для определения необходимой концентрации в ПФ органического модификатора концентрацию СН3СЫ изменяли от 30 до 50 об.%. Для определения времени выхода несдерживаемого вещества получали хромагограммы воды. Полученные результаты представлены в табл. 2, где показано, что оптимальное разделение и минимальную продолжительность анализа обеспечивает концентрация СН^СЫ 40 об.%. Время удерживания амброзола и глицирризината 2.022 и 3.747 мин соответственно.
Оптимальные условия анализа сиропа. Детектирование проводили при 254 нм. Ранее нами была разработана методика анализа многокомпонентного лекарственного препарата - сиропа ''Коделак-фито" [2|. Этот препарат в качестве действующего вещества содержит фосфат кодеина. Для эффективного разделения пиков кодеина и пиков компонентов растительного происхождения нами было использовано свойство кодеина необратимо удерживаться некоторыми обращенно-фазовыми сорбентами при отсутствии соли в ПФ. Градиентное элюирование проводили с использованием смесей ацетонитрид-вода и аце-тонитрил-фо сфатный буферный раствор, причем второй состав ПФ вводили после алюирования всех ком-
понентов. кроме кодеина. В связи с отсутствием фосфата кодеина в составе сиропа "Коделак бронхо"' и сравнительно меньшим содержанием растительных веществ было принято решение применить более простой вариант элюирования с введением фосфатного бу ферного раствора в самом начале анализа. При использовании исходного 0,025 М КН2Р04 (рН 4.7) был получен неудовлетворительный результат - неприемлемая для цепей количественного анализа фор-Х1а пика глицирризиновой кислоты. По-видимому, это связано с тем, что данный компонент содержится в ПФ с определенным рН. и для получения симметричного пика необходим его перевод в молекулярную форму. После доведения кислотности фосфатного буферного раствора прибавлением Н,Р04 до рН 2,5 это предположение было подтверждено: была получена удовлетворительная форх1а всех пиков, свидетельству -ющая об эффективном разделении. Поскольку при разделении кохшонентов в градиентном режиме изменение концентрации органического модификатора ПФ составило всего 36 об.%. было сделано предположение о возможности разделения и в изократическом режиме. Использование в качестве ПФ смеси СН3СХ-0,025 М КН2Р04 состава 3:7 (рН 2.5) позво-
Т а б л и н а 3
Метрологические характеристики методики определения гидрохлорйда амброксола и триннтриешш соли г.ннднрршнновон кислоты в таблетках "Коделак бронхи"
Компонент ^маку, Г *3 макс г % ° шке - 1 ®ГСр, % Двг_ % е, „.., %
Амброксола г/х 0,00007 5,39x10 * 3,15 -0,073 0,137 -1,05
Тринатриевая соль 1. [ ицирризш ювой кислоты 0,00018 3,14x10"® 5,08 -0,028 0,168 1,69
лило получить удовлетворительный результат разделения. Изократический вариант не имеет преимуществ по продолжительности анализа, но технически более прост, а поэтому' и более предпочтителен.
Анализ модельных смесей. Было приготовлено 17 растворов, в которых содержание определяемых веществ составляло ±20% от значений, заявленных по рецептуре. Полученные растворы анализировали по методике, описанной в разделе "Проведение анализа"', и рассчитывали результаты по методу7 «введено-найдено» с поующью электронных таблиц Excel. Результаты, полученные для таблеток и сиропа представлены в табл. 3, 4. Сравнение величин средних относительных погрешностей определения компонентов (е ) с соответству ющими доверительными интерва-
лаУ1и Аег показывает, что систематическая погрешность отсутству ет (е|ч;[) < Дег). Площади пиков определяемых веществ линейно зависят от их концентраций в у казанном интервале (коэффициент корреляции > 0,99).
Анализ обращав. По предлагаемой методике проанализированы опытные образцы таблеток препарата (табл. 5). Результаты соответствуют требованиям нормативно-технической документации и технологическим загрузкам. По предлагаемой У1етодике с ис-пользованием изокрагического и градиентного вариантов проанализированы опытные образцы препарата в виде сиропа. Полученные результаты для изократи-ческого варианта представлены в табл. 6. Результаты градиентного варианта практически идентичны.
Таблица 4
Метрологические характеристики методики определения гидрохлорида амброксола, трннат-рнсвон соли глнцирризиновой кислоты, ннпагнна и нипазола в сиропе "Коде л я к брони"
Компонент ■s щкоэ Г J макс С *> макс? ' ° ^гср? 0 Дег % ^гмакс? 0
Амброксола г/х 0,00011 1,15x10 Е 5.76 -0.032 0.213 -1,53
Тринатриевая соль глицирризиновой кислоты 0,00022 4,92x10-8 3.04 -0,034 0.152 - 1.48
Нипагин 0.00002 5,96хЮ"10 2,61 -0.005 0.142 1,75
Нипазол 0.00002 3,70x10 10 4,97 0,062 0.248 2,88
Таблица 5
Результаты анализа таблеток "Кодслак брони" (3 опытно-экспериментальных образца)
Компонент Норма по ИД. г Содержание в одной таблетке, г (и = 9: Р = 0,95)
S SXcp Д^р %,е
Амброксола г/\ 0,0185-0,0215 0,01% 0,0011 0,00037 0,0009 4,43
0,0204 0,0009 0,00030 0,0007 3,49
0,0201 0,0007 0,00023 0,0006 2,75
Тринатриевая соль глицирри шпоной кислоты 0.0277-0.0323 0.0299 0,0013 0,00043 0,0010 3,43
0,0287 0,0009 0,00030 0,0007 2,48
0,0308 0,0011 0,00037 0,0009 2,82
Таблица 6
Результаты анализа сиропа "Коделак бронхо" (3 опытно-экспериментальньгх образца). Нормализованные спектры поглощения амброксола (1) н трннатрпсвои соли [.ннцфрнннювон кислоты (2)
Компонент Содержание по нормативной Содержание в 5 мл, г (и = 9; Р = 0,95)
документации, г ^"ср S SXcp Мр %,£
0,00975 0,00034 0,00011 0,00027 2,74
Амброксола г/х 0,009-0,011 0,00988 0,00028 0,00009 0,00022 2,23
0,01012 0,00036 0,00012 0,00028 2,80
Тринатриевая соль глициррюиновой кислоты 0,0277-0,0323 0,03211 0,03020 0,02890 0,00122 0,00112 0,00098 0,00041 0,00037 0,00033 0,00096 0,00088 0,00077 2,99 2,92 2,67
0,00364 0,00012 0,00004 0,00009 2,59
Нина] ин 0.0034-0.0041 0,00354 0,00008 0,00003 0,00006 1,78
0,00388 0,00014 0,00005 0,0001 1 2,84
0,00122 0,00006 0,00002 0,00005 3,87
Нипазол 0,0011-0,0014 0,00118 0,00004 0,00001 0,00003 2,67
0,00129 0,00009 0,00003 0,00007 5,49
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. СхунмакерсП. Оптимизация селективности в хроматогра- 2. Голубицкий Г.Б., Будко Е.Б., Прохода Е.Ф., Покровский фии.М., 1989, С, 216, М.В., Захарова ЕВ. Пат. РФ №2267115.
Поступила в редакцию 01.06.07
QUANTITATIVE ANALYSE OF TABLETS AND SYRlfP "CODELAC BRONKHO" BY HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY METHODS
G.B. Golubitskii, V.M. Ivanov
(Division of Analytical Chemistry)
A procedure was proposed for the quantitative analysis of the new original tablets and syrup "Codclac I)roilkho". The components of the pills were separated in 6 minutes with effective peak resolution. The procedure was used for the analysis of a prep rod net ion samples of the tablets. The results correspond to the normative documentation merits and the technological loadings. Model solutions containing all the active principles and additives of the drugs were analyzed, and the performance characteristics of both procedures were calculated. Tw o versions of analysis in isocratic and gradient modes were proposed for the syrup. Both procedures afford reliable analytical results; however, the isocratic version is technically simpler and more preferable for product control in commercial production.
