CC BY
24
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
методом ПЦР). У 9 пациентов этой группы диагностирована герпетическая инфекция, ассоциированная с вирусом герпеса 6 типа (наличие ДНК ВГ 6 в слюне и IgG анти-ВГ 6) и у одного — ЦМВИ (ДНК ЦМВ в моче и слюне, IgG анти-ЦМВ). Бокавирус сочетался у 2 детей с аденовирусом, у 3 — с рино-вирусом: в двух случаях заболевание осложнилось бронхопневмонией.
Другими респираторными вирусами инфицированы 9 из 22 (41%) (2 группа): парагрипп у 5 детей, РС-вирус — у 2, аденовирус — у 2 детей. В трех случаях (4%) этиологическая причина ОРВИ не верифицирована. В этой группе детей доказана инфи-цированность вирусом герпеса 6 типа пяти детей, цитомегаловирусом — двоих детей.
У подавляющего большинства детей с ОРВИ увеличено относительно условной нормы количество CD3+ клеток (17/81%), CD4+ клеток (16/76%) и им-мунорегуляторного индекса (CD4+/CD8+) (15/71%). Достоверные отличия в иммунном статусе детей при сравнении 1-й и 2-й групп получены не были, исследования будут продолжены
Таким образом, установлено, что бокавирус является причиной ОРВИ у детей младшего возраста в 45% случаев; лидирующее место среди представителей герпесвирусов занимает ВГ 6 типа (64%).
ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНЫХ ХИМЕРНЫХ БЕЛКОВ НОВОСИБИРСКИХ ИЗОЛЯТОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЛАЙМ-БОРРЕЛИОЗА
Е.С. Олейникова12, М.Б. Пыхтина1
1ФГБУ НИИ биохимии СО РАМН, г. Новосибирск 2 ФБУН ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор» МЗ РФ, п. Кольцово, Новосибирская область
Лайм-боррелиоз или иксодовый клещевой борре-лиоз (ИКБ) — трансмиссивное природно-очаговое заболевание, вызываемое спирохетами, относящимися к комплексу Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.). В России в структуре заболеваемости клещевыми трансмиссивными инфекциями на долю болезни Лайма приходится 20%. В настоящее время лабораторная диагностика ИКБ включает двухэтапную схему: скрининговое исследование на наличие антител IgG/IgM к антигенам возбудителя с дальнейшим подтверждением положительных результатов методом иммуноблоттинга. Однако ввиду высокой антигенной вариабельности боррелий серологическая диагностика ИКБ существенно затруднена. В этой связи совершенствование лабораторных методов диагностики ИКБ крайне важно как для своевременной терапии, так и для оценки эпидемиологического состояния и прогноза сезонной заболеваемости ИКБ.
Целью данной работы является получение и исследование антигенных свойств химерных реком-бинантных иммунодоминантных белков B. burgdorferi s.l. для дальнейшей разработки на их основе экспрессного иммунохроматографического метода серодиагностики ИКБ. В процессе работы было проведено клонирование и секвенирование кодирующей области гена белка BBK32 B. garinii, осуществлена сборка химерного гена, кодирующего белок BBK32 и иммунодоминантные эпитопы белка VlsE трех патогенных для человека видов боррелий. Исследована локализация белка FlaA и химерных
белков OspCAfz-OspCGar, BmpA-p83fr в субклеточных фракциях продуцирующих их рекомбинантных штаммов E. coli и проведена препаративная наработка и очистка этих антигенов методом аффинной хроматографии. За летние периоды 2005—2012 гг. был осуществлен сбор сывороток крови пациентов больных ЛБ. Все сыворотки проверены методом ИФА на наличие IgM и IgG к возбудителям ИКБ, часть из них была использована для оценки диагностического потенциала рекомбинантных антигенов. Сыворотки, дающие положительный ответ, и химерные антигены будут использоваться в дальнейшей работе для создания экспрессного метода серодиагностики ИКБ, основанного на иммунохро-матографическом анализе.
АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ ГЕНОВ СИСТЕМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И ЦИТОКИНОВОЙ СИСТЕМЫ У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
Ю.В. Останкова1, Т.Э. Иващенко2, В.С. Баранов2
1 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
2 НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт-Петербург
В наши дни возрастает количество больных атопи-ческой бронхиальной астмой (БА). Частота заболевания среди взрослого населения 5—8%, у детей 10—15%. Устойчивость к воздействию некоторых факторов внешней среды зависит от системы детоксикации ксенобиотиков. В то же время совpеменная тpактовка БА исходит из воспалительной теоpии. Важная роль в этиопатогенезе БА отводится генетическим факторам. Целью данной работы было изучение частот аллельного полиморфизма некоторых генов (GSTT1, GSTM1, NAT2, TNF-4, NOS1, NOS3, ER1) у 78 больных атопической БА с манифестацией заболевания до 18 лет и у 115 человек, не имеющих хронических заболеваний органов дыхания.
Показано повышение частоты генотипов GSTM1 0/0 и GSTT1 0/0 у больных БА по сравнению с по-пуляционным контролем. Сочетанные генотипы функционально ослабленных аллелей GSTM10/0 + GSTT10/0, GSTM10/0 + NAT2 S/S, GSTT10/0 + NAT2 S/S увеличивают риск развития БА — OR = 3,6, OR = 2,5, OR = 2,8 соответственно. Для сочетания одновременно GSTM10/0, GSTT10/0, NAT2 S/S генов OR = 5,2.
Показано повышение частоты аллеля A (—308A/G ген TNF-4) у больных БА (9,0%) по сравнению с контролем (4,0%). Показаны гендерные отличия в частотах генотипов гена NOS3 (4а/4Ь) и увеличение частоты аллеля 4a у больных БА с тяжелым течением (37,5%) по сравнению с контролем (19,6%). Сочетанный генотип NOS1 < 12/—, NOS3 4а/—, TNF-ЛА/- в популяции встречался с частотой 0,9%, у больных БА 5,2%, а в группе с тяжелым течением заболевания 12,6%, риск развития атопической БА тяжелого течения OR = 16,2.
Генотипы Xx и Pp гена ER1 (-351A > G и -397C > T соответственно) чаще встречались у больных БА со средней тяжестью течения по сравнению с контролем — Xx (OR = 5,1), Pp (OR = 10,7). Анализ сочетания показал увеличение частоты генотипа XxPp у больных БА со средней тяжестью течения (82%) по сравнению с контролем (31%). Риск развития составил OR = 9,8. Частота генотипа A-PpXx генов
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
TNF-4 и ER1 повышена у больных (22%) по сравнению с популяцией (3%). Риск развития БА OR = 11,09. Риск развития при А-XxPp в подгруппе со средней тяжестью течения составил OR = 21,9.
Анализ сочетаний функционально ослабленного генотипа гена ER1 с другими представленными в работе генами не выявил достоверных отличий, также не показано отличий при анализе сочетаний генов цитокиновой системы и системы детоксикации друг с другом.
Можно предположить, что причиной различий между полиморфными вариантами разных генов и развитием различных форм атопической БА является существование нескольких заболеваний, объединенных общим термином «бронхиальная астма».
ВОЗМОЖНОСТИ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА У ВЗРОСЛЫХ И ДЕТЕЙ ПО ОЦЕНКЕ ЭКСПРЕССИИ CD27 НА ЭФФЕКТОРНЫХ ЛИМФОЦИТАХ CD4
А.В. Пантелеев, И.Ю. Никитина
ФГБУ ЦНИИ туберкулеза РАМН, Москва
В связи с широким распространением заболеваемости туберкулезом (ТБ) большое значение имеет своевременная диагностика активного ТБ (АТБ) и ТБ инфицирования (ТБИ) — состояний, требующих принципиально различных схем лечения. Особые трудности диагностика ТБ представляет в тех случаях, когда заболевание не сопровождается выделением мокроты или наличием в ней микобактерий, что наиболее часто встречается у детей. В таких ситуациях большое значение имеют иммунологические методы диагностики: туберкулиновый тест, диа-скинтест и «интерфероновые» тесты (IGRAs). Эти тесты, однако, не позволяют дифференцировать АТБ и ТБИ.
Недавно для диагностики ТБ в ЦНИИТ РАМН был предложен тест «Mtb-CD27». Пилотные исследования у взрослых показали, что тест позволяет дифференцировать больных АТБ и лиц с ТБИ. Целью настоящей работы явилась валидация теста «Mtb-CD27» у взрослых и оценка возможности его использования для диагностики ТБ у детей.
В исследовании участвовали 38 взрослых больных ТБ, 17 взрослых здоровых человек, имеющих контакт с больными ТБ, 19 детей с АТБ и 9 детей с диагнозом ТБИ.
Иммунологические тесты проводили по методике, разработанной ранее. Кратко, образцы крови культивировали с PPD. Через 12 ч с помощью проточной цитометрии выявляли IFNy продуцирующие лимфоциты CD4 и определяли процентное содержание среди них клеток с низкой экспрессией рецептора CD27 (CD27low; высокодифференцирован-ные эффекторы). Содержание клеток CD27low выше 31,5 от всех лимфоцитов CD4+IFNy+% рассматривали как признак АТБ (положительный результат теста, Nikitina et al., 2012). У взрослых положительные результаты теста были получены у 35 из 39 больных и у 5 из 17 «контактов» (чувствительность — 89,5%, специфичность — 70,5%). При этом у 4 «контактов» наблюдаются близкие значения к пороговым. Положительные результаты теста были получены у 16 из 18 детей с диагнозом АТБ и у 2 из 9 детей с диагнозом ТБИ (чувствительность — 88,9%, специфичность — 77,8%).
Проведенные исследования подтверждают возможность и целесообразность использования теста «Mtb-CD27» для дифференциальной диагностики АТБ и ТБИ у взрослых. Возможность использования теста у детей требует дальнейшей валидации на большей выборке.
ДЕТЕКЦИЯ ИНФЕКЦИИ COXIELLA BURNETII У МИГРИРУЮЩИХ ПТИЦ В БОЛГАРИИ
Ю.А. Панферова1, Н.К. Токаревич1, Б. Николов2, П. Зехтинджиев2, Т. Димова3, Х. Найденски3
1ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
2Институт экосистемных исследований АН Болгарии, София, Болгария
3Институт микробиологии Стефана Ангелова АН Болгарии, София, Болгария
Птицы играют существенную роль в поддержании стабильной циркуляции возбудителей ряда трансмиссивных инфекций на территории существующих очагов, а также могут участвовать в переносе возбудителей в процессе миграций. Мигрирующие птицы могут являться биологическими либо механическими переносчиками патогенов, а также переносить инфицированных эктопаразитов на новые территории.
В рамках данного исследования проводился отлов перелетных птиц в период сезонных миграций, отбор проб крови и детекция ДНК Coxiella burnetii. Отлов птиц проводился на стоянках по пути пролета в период весенних и осенних миграций птиц в 2011— 2013 гг. (южная часть Черноморского побережья Болгарии, Атанасовское озеро; северо-восточная часть Черноморского побережья Болгарии, озеро Даран-кулак). Детекция C. burnetii в пробах проводилась методом стандартной ПЦР с использованием прай-меров к генам супероксид-дисмутазы sod и мембранного белка Coml.
Всего было исследовано 888 образцов крови птиц. Положительными на присутствие ДНК коксиелл были образцы крови четырех птиц, отловленных в районе Атанасовского озера: 3 пробы от пеночки-веснички (Phylloscopus trochilus) и 1 проба от соловья западного (Luscinia megarynchos). Пораженность кок-сиеллами птиц составила 0,45%
Обнаружение ДНК C. burnetii в крови птиц, по-видимому, может свидетельствовать об их относительно недавней инфицированости патогеном и подтверждает возможность участия птиц в качестве переносчиков C. burnetii в природных очагах.
Исследование поддержано грантами Института Пастера № ACIP-08-2010 и № 59-2013.
АПРОБАЦИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К Vi-АНТИГЕНУ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРЮШНОГО ТИФА
Е.Л. Петрова1, Н.К. Мирошникова1, С.Б. Ибраева2, В.Н. Вербов1, Л.А. Кафтырева1
1 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
2 Департамент профилактики заболеваний и госсанэпиднадзора, Бишкек, Кыргызстан
Брюшной тиф — антропонозная кишечная инфекция, вызываемая Salmonella typhi. У части переболевших формируется хроническое бактерионоситель-
