CC BY
35
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Животные экспериментальной группы получали фитопрепарат в течение 5 дней до заражения (50 мг/ кг веса, в желудок). Забор материала осуществляли периодически, определяли динамику освобождения организма животных от возбудителя, гематологические показатели, активность фагоцитоза. Результаты обрабатывали с использованием IBM SPSS Statistics 19, независимые группы сравнивали с помощью непараметрического U-теста Манна—Уитни (р < 0,05).
Со 2-х по 10-е сутки после заражения у животных обеих групп наблюдали клинические признаки генерализованной стафилококковой инфекции. Возбудитель определялся в органах животных контрольной группы до 20 суток наблюдения, в группе, животных, получавших фитопрепарат — до 15 суток. Доля животных с положительной высеваемостью стафилококков в опытной группе была достоверно меньше, чем в контрольной: на 7-е сутки инфекционного процесса S. аureus высевался из печени и селезенки у 28,6% мышей контрольной группы и у 14,3% мышей опытной группы, из почек — у 35,7 и 28,6% животных соответственно. Лейкоцитоз регистрировали у животных обеих групп на 5-е сутки после заражения (14,18—14,30 х 109/л), в остальные дни абсолютное число лейкоцитов крови у животных контрольной и экспериментальной групп было в норме и различалось недостоверно. Лейкоцитоз у животных развивался за счет увеличения доли ней-трофилов, причем в контроле на 5-е сутки отмечали гиперрегенеративный сдвиг лейкоцитарной формулы влево (индекс ядерного сдвига составил 0,94). В опытной группе регистрировали менее выраженный сдвиг влево (индекс ядерного сдвига составил 0,25). Фагоцитарная активность нейтрофилов у экспериментальных животных была достоверно выше аналогичных показателей контрольных мышей в начале и в конце инфекции, в период с 5-х по 10-е сутки отличалась незначительно.
Таким образом, препарат C. geoides оказывает профилактическое действие при стафилококковой инфекции: ускоряет элиминацию возбудителя и стимулирует фагоцитоз нейтрофилов, существенно не влияя на процессы иммунопролиферации.
ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТРЕПТОКОККОВ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ВО ВЬЕТНАМЕ
А.Г. Носик, Ю.Ю. Ильясов
ФГБУ НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург
Стрептококки являются одними из самых распространенных возбудителей инфекционных заболеваний человека. При этом инфекционные процессы, вызываемые ими в условиях тропиков, как правило, протекают тяжелее и стремительнее. В настоящее время данные об особенностях штаммов стрептококков во Вьетнаме практически отсутствуют, поэтому целью данного исследования было выделение стрептококков групп А, С, G у детей младшего школьного возраста и их характеристика с использованием молекулярно-эпидемиологических и генетических подходов.
В результате микробиологического исследования материала с задней стенки глотки и миндалин у 659 детей выделено 46 штаммов стрептококков группы А (GAS), 2 штамма стрептококков группы С (GCS)
и 44 штамма стрептококков группы G (GGS). С помощью разработанного метода ПЦР-идентификации на основе видоспецифичной области гена cpn60, кодирующего белок теплового шока HSP60, определена их принадлежность к трем видам — S. pyogenes (46 штаммов — GAS), S. anginosus (1 штамм — GCS, 38 штаммов — GGC), S. dysgalactiae subsp. equisimilis (1 штамм — GCS, 6 штаммов — GGS). Штаммы S. anginosus, S. dysgalactiae subsp. equisimilis проанализированы на наличие генов вирулентности scpС/G, lmb, nga, slo, кодирующих факторы патогенности S. pyogenes. Так, гены scpC/G и nga, кодирующие C5а пептидазу и НАД-гликогидролазу, соответственно, были обнаружены у 100% штаммов S. dysgalactiae subsp. equisimilis, но отсутствовали у S. anginosus. Гены вирулентности lmb и slo, кодирующие белок, связывающий ламинин и стрептолизин O соответственно, были обнаружены у всех штаммов S. dysgalactiae subsp. equisimilis, и лишь у 66,7 и 40,0% S. anginosus. Учитывая, что пары генов scpC/G-lmb; nga-slo являются сцепленными у S. pyogenes, эти данные доказывают определенные генетические перестройки у вьетнамских штаммов S. anginosus.
С целью определения доминирующих emm-типов проведено ешш-типирование штаммов S. pyogenes. Были выявлены следующие генотипы: emm4.0, emm12.0, emm44.0, emm58.0 и другие, в том числе, редко встречающиеся emm104.0 и emm109.0.
Для установления степени генетического родства штаммы S. pyogenes были проанализированы методом электрофореза в пульсирующем электрическом поле. Анализ данных показал высокую степень генетической гетерогенности и специфические генетические линии, характерные для Вьетнамского региона.
Исследования поддержаны грантом РФФИ № 13-04-01864а.
БОКАВИРУС В СТРУКТУРЕ ОРВИ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА, ИНФИЦИРОВАННЫХ ГЕРПЕСВИРУСАМИ
Н.В. Околышева, Л.Б. Кистенева2, А.Г. Боковой1, Е.Н. Выжлова3, В.В. Малиновская3, А.П. Фисенко1
1 Центральная клиническая больница с поликлиникой Управления делами Президента РФ, Москва
2 ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского МЗ РФ, Москва
3 ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ, Москва.
Цель: изучить частоту встречаемости бокавиру-са и его влияние на клеточный иммунитет у детей раннего возраста с персистирующей герпесвирус-ной инфекцией в период разгара ОРВИ. Материалы и методы: обследованы 22 ребенка от 1 года до 3-х лет, поступивших в инфекционное отделение ЦКБ с признаками ОРВИ: клинические анализы крови и мочи; серологическое исследование крови (IgM и IgG к вирусу Эпштейна—Барр, цитомегаловиру-су и вирусу герпеса 6 типа (ИФА); исследование крови, слюны, мочи на наличие ДНК ЭБВ, ЦМВ и ВГ-6 (ПЦР), исследование крови на клеточный иммунитет (субпопуляции лимфоцитов), мазок из ротоглотки на ДНК и РНК респираторных вирусов (ПЦР).
Результаты. У 10 детей из 22 (45%) (1 группа), поступавших в стационар с признаками ОРВИ верифицирована бокавирусная инфекция (обнаружение РНК бокавируса в мазках из носоглотки
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
методом ПЦР). У 9 пациентов этой группы диагностирована герпетическая инфекция, ассоциированная с вирусом герпеса 6 типа (наличие ДНК ВГ 6 в слюне и IgG анти-ВГ 6) и у одного — ЦМВИ (ДНК ЦМВ в моче и слюне, IgG анти-ЦМВ). Бокавирус сочетался у 2 детей с аденовирусом, у 3 — с рино-вирусом: в двух случаях заболевание осложнилось бронхопневмонией.
Другими респираторными вирусами инфицированы 9 из 22 (41%) (2 группа): парагрипп у 5 детей, РС-вирус — у 2, аденовирус — у 2 детей. В трех случаях (4%) этиологическая причина ОРВИ не верифицирована. В этой группе детей доказана инфи-цированность вирусом герпеса 6 типа пяти детей, цитомегаловирусом — двоих детей.
У подавляющего большинства детей с ОРВИ увеличено относительно условной нормы количество CD3+ клеток (17/81%), CD4+ клеток (16/76%) и им-мунорегуляторного индекса (CD4+/CD8+) (15/71%). Достоверные отличия в иммунном статусе детей при сравнении 1-й и 2-й групп получены не были, исследования будут продолжены
Таким образом, установлено, что бокавирус является причиной ОРВИ у детей младшего возраста в 45% случаев; лидирующее место среди представителей герпесвирусов занимает ВГ 6 типа (64%).
ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНЫХ ХИМЕРНЫХ БЕЛКОВ НОВОСИБИРСКИХ ИЗОЛЯТОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЛАЙМ-БОРРЕЛИОЗА
Е.С. Олейникова12, М.Б. Пыхтина1
1ФГБУ НИИ биохимии СО РАМН, г. Новосибирск 2 ФБУН ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор» МЗ РФ, п. Кольцово, Новосибирская область
Лайм-боррелиоз или иксодовый клещевой борре-лиоз (ИКБ) — трансмиссивное природно-очаговое заболевание, вызываемое спирохетами, относящимися к комплексу Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.). В России в структуре заболеваемости клещевыми трансмиссивными инфекциями на долю болезни Лайма приходится 20%. В настоящее время лабораторная диагностика ИКБ включает двухэтапную схему: скрининговое исследование на наличие антител IgG/IgM к антигенам возбудителя с дальнейшим подтверждением положительных результатов методом иммуноблоттинга. Однако ввиду высокой антигенной вариабельности боррелий серологическая диагностика ИКБ существенно затруднена. В этой связи совершенствование лабораторных методов диагностики ИКБ крайне важно как для своевременной терапии, так и для оценки эпидемиологического состояния и прогноза сезонной заболеваемости ИКБ.
Целью данной работы является получение и исследование антигенных свойств химерных реком-бинантных иммунодоминантных белков B. burgdorferi s.l. для дальнейшей разработки на их основе экспрессного иммунохроматографического метода серодиагностики ИКБ. В процессе работы было проведено клонирование и секвенирование кодирующей области гена белка BBK32 B. garinii, осуществлена сборка химерного гена, кодирующего белок BBK32 и иммунодоминантные эпитопы белка VlsE трех патогенных для человека видов боррелий. Исследована локализация белка FlaA и химерных
белков OspCAfz-OspCGar, BmpA-p83fr в субклеточных фракциях продуцирующих их рекомбинантных штаммов E. coli и проведена препаративная наработка и очистка этих антигенов методом аффинной хроматографии. За летние периоды 2005—2012 гг. был осуществлен сбор сывороток крови пациентов больных ЛБ. Все сыворотки проверены методом ИФА на наличие IgM и IgG к возбудителям ИКБ, часть из них была использована для оценки диагностического потенциала рекомбинантных антигенов. Сыворотки, дающие положительный ответ, и химерные антигены будут использоваться в дальнейшей работе для создания экспрессного метода серодиагностики ИКБ, основанного на иммунохро-матографическом анализе.
АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ ГЕНОВ СИСТЕМЫ ДЕТОКСИКАЦИИ И ЦИТОКИНОВОЙ СИСТЕМЫ У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
Ю.В. Останкова1, Т.Э. Иващенко2, В.С. Баранов2
1 ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
2 НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт-Петербург
В наши дни возрастает количество больных атопи-ческой бронхиальной астмой (БА). Частота заболевания среди взрослого населения 5—8%, у детей 10—15%. Устойчивость к воздействию некоторых факторов внешней среды зависит от системы детоксикации ксенобиотиков. В то же время совpеменная тpактовка БА исходит из воспалительной теоpии. Важная роль в этиопатогенезе БА отводится генетическим факторам. Целью данной работы было изучение частот аллельного полиморфизма некоторых генов (GSTT1, GSTM1, NAT2, TNF-4, NOS1, NOS3, ER1) у 78 больных атопической БА с манифестацией заболевания до 18 лет и у 115 человек, не имеющих хронических заболеваний органов дыхания.
Показано повышение частоты генотипов GSTM1 0/0 и GSTT1 0/0 у больных БА по сравнению с по-пуляционным контролем. Сочетанные генотипы функционально ослабленных аллелей GSTM10/0 + GSTT10/0, GSTM10/0 + NAT2 S/S, GSTT10/0 + NAT2 S/S увеличивают риск развития БА — OR = 3,6, OR = 2,5, OR = 2,8 соответственно. Для сочетания одновременно GSTM10/0, GSTT10/0, NAT2 S/S генов OR = 5,2.
Показано повышение частоты аллеля A (—308A/G ген TNF-4) у больных БА (9,0%) по сравнению с контролем (4,0%). Показаны гендерные отличия в частотах генотипов гена NOS3 (4а/4Ь) и увеличение частоты аллеля 4a у больных БА с тяжелым течением (37,5%) по сравнению с контролем (19,6%). Сочетанный генотип NOS1 < 12/—, NOS3 4а/—, TNF-ЛА/- в популяции встречался с частотой 0,9%, у больных БА 5,2%, а в группе с тяжелым течением заболевания 12,6%, риск развития атопической БА тяжелого течения OR = 16,2.
Генотипы Xx и Pp гена ER1 (-351A > G и -397C > T соответственно) чаще встречались у больных БА со средней тяжестью течения по сравнению с контролем — Xx (OR = 5,1), Pp (OR = 10,7). Анализ сочетания показал увеличение частоты генотипа XxPp у больных БА со средней тяжестью течения (82%) по сравнению с контролем (31%). Риск развития составил OR = 9,8. Частота генотипа A-PpXx генов
