CC BY
8
258
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
6М2-ганглиозидозы представляют собой группу ау-тосомно-рецессивных лизосомных болезней накопления. Эти заболевания возникают в результате дефицита лизосомного фермента ß-гексозаминидазы А (HexA). Дефицит HexA вызывает накопление 6М2-ганглиозидов преимущественно в клетках нервной системы, что приводит к тяжелой нейродегенерации и нейровоспалению. В настоящем исследовании была оценена способность генетически модифицированных мезенхимных стволовых клеток (МСК) восстанавливать дефицит HexA в клетках пациента с болезнью Тея-Сакса (БТС) in vitro, а также показана функциональность полученных клеток in vivo.
МСК были генетически модифицированы рекомби-нантными аденоассоциированными вирусами, кодирующими кодон-оптимизированные гены а- и ß-субъединиц фермента HexA (МСК-HEXA-HEXB). МСК-HEXA-HEXB культивировали с МСК пациента с БТС (мутМСК) в системе Трансвелл, после чего изучали эффективность перекрестной коррекции дефицита HexA. Крысам внутривенно вводили 4 х 106 МСК-HEXA-HEXB, контрольным группам вводили нативные МСК или физраствор.
После доставки HexA путем перекрестной коррекции в системе Трансвелл мутМСК содержали кодон-оптими-зированные копии генов HEXA и HEXB. Как а*-, так и ß-субъединицы HexA были обнаружены в мутМСК после перекрестной коррекции. Показано, что после введения МСК-HEXA-HEXB активность HexA значительно повышалась в плазме и органах крыс. В органах крыс обнаружены кодон-оптимизированные копии генов HEXA и HEXB. Введение МСК-HEXA-HEXB не влияло на процент живых клеток в органах иммунной системы, лейко-формулу и уровень воспалительных цитокинов по сравнению с контрольными группами. Гистопатологический анализ не выявил существенных различий между опытной и контрольными группами.
Таким образом, эффективность кросс-коррекции дефицита HexA была показана в мутМСК после взаимодействии с МСК-HEXA-HEXB. Показано, что МСК-HEXA-HEXB экспрессируют функционально активный фермент HexA, выявляемый in vivo, а внутривенное введение клеток не вызывает иммунного ответа у животных. Эти данные позволяют предположить безопасность и функциональность разработанного способа клеточно-опосредованной генной терапии. Работа выполнена при поддержке Программы стратегического академического лидерства Казанского (Приволжского) федерального университета (ПРИ0РИТЕТ-2030) и за счет средств субсидии, выделенной Казанскому федеральному университету для выполнения государственного задания № 0671-2020-0058 в сфере научной деятельности.
АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ АДЕНОАССОЦИИРОВАННЫХ ВИРУСОВ ПОСЛЕ ФОРМИРОВАНИЯ ВЕКТОРНОГО ИММУНИТЕТА
A.А. Шаймарданова, А.И. Муллагулова,
B.В. Соловьева, Я.О. Мухамедшина, А.А. Костенников, А.А. Ризванов
Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: метахроматическая лейкодистрофия, лизосомные болезни накопления, генная терапия, рекомби-нантный аденоассоциированный вирус, векторный иммунитет, ААВ9, AABrh10, арилсульфатаза А.
Метахроматическая лейкодистрофия (МЛД) — ауто-сомно-рецессивное наследственное нейродегенератив-ное заболевание, характеризующееся поражением мие-линовой оболочки, покрывающей большинство нервных волокон центральной (ЦНС) и периферической нервной системы (ПНС). МЛД возникает вследствие дефицита лизосомного фермента арилсульфатазы А (АРБА), из-за различных мутаций в гене АПБА. Клинически МЛД проявляется прогрессирующей двигательной и когнитивной недостаточностью у пациентов. Цель исследования — проанализировать эффект последовательных внутривенных и интратекальных инъекций ААВ9-соАП8А или ААВгМО-соАРБА и оценить их функциональную активность и биобезопасность. Мы разработали 9 и 10 се-ротипы ААВ, кодирующих ген АПБА. Мини-пигам внутривенно вводили ААВ9. Через 2 месяца животные были разделены на 2 группы. Первой группе интратекально вводили ААБ9-АПБА, второй — ААБЮ-АЯБА. Через месяц мы проанализировали эффективность трансдукции с помощью иммуногистохимического анализа (ИГХ), количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР), анализа ферментативной активности АПБА и биохимического анализа крови свиней.
мРНК кодон-оптимизированного гена АПБА была обнаружена в затылочной доле коры головного мозга, мозжечке, шейном, спинном и поясничном отделах спинного мозга и ганглиях тех же отделов свиней после введения вирусов. Достоверных изменений биохимических показателей после введения препаратов не наблюдалось. При исследовании тканей ЦНС с помощью ИГХ выявлена сверхэкспрессия АПБА. После повторного введения ААБЮ-АПБА, количество трансдуцированных нейронов в мозжечке, спинном мозге и спинномозговых ганглиях было значительно выше, чем после введения ААВ9-АПБА. Тем не менее, способность ААВ10-АПБА транс-дуцировать нейроны спинного мозга на уровне шейного утолщения и спинномозговых ганглиев шейного и поясничного отделов спинного мозга значительно выше по сравнению с ААВ9-АПБА. Повторное введение ААВ9-АПБА приводит к наиболее эффективной трансдукции нейронов мозжечка и серого вещества спинного мозга на уровне поясничного утолщения. Работа выполнена при поддержке Программы стратегического академического лидерства Казанского (Приволжского) федерального университета (ПРИ0РИТЕТ-2030) и за счет средств субсидии, выделенной Казанскому федеральному университету для выполнения государственного задания № 0671-2020-0058 в сфере научной деятельности.
МАКРОФАГИ КАК КОМПОНЕНТ РЕГЕНЕРАТИВНОГО ГИСТИОНА НА ФОНЕ ЗАКРЫТИЯ ИШЕМИЗИРОВАННОГО КОЖНОГО ДЕФЕКТА ТКАНЕИНЖЕНЕРНЫМ КОНСТРУКТОМ ИЗ КОЛЛАГЕНА И ДЕРМАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ
Е.Ю. Шаповалова, Ю.Г. Барановский, С.В. Харченко, И.А. Лугин, А.Г. Барановский
ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского», Симферополь, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: кожный дефект, дермальный эквивалент, раневой процесс, макрофаг, фибробласт.
Целью исследования было изучение присутствия макрофагов (М) в тканях модельной
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
