CC BY
84
УДК 612.438:615.37 ББК Е60*743.11 :Р281.774
Е.А. СОЛЁНОВА, Е.А. ГУРЬЯНОВА, Л .А. АЛЕКСЕЕВА
АНАЛИЗ АКТИВНОСТИ СТРУКТУР ТИМУСА И РАННЕГО ИММУННОГО ОТВЕТА
НА ФОНЕ ПРИЕМА ИММУНОМОДУЛЯТОРА
Ключевые слова: тимус, иммунитет, трансфер фактор, серотонин, катехоламины. Представлены результаты исследования механизма иммунной реакции при предварительной иммуностимуляции крыс препаратом «Трансфер Фактор Классик» методами анализа количественной и функциональной активности структур тимуса, изучения динамики содержания в них биоаминов (серотонина и катехоламинов), анализа динамики лейкоцитарной формулы, оценки общего состояния организма.
E.A. SOLYONOVA, E.A. GURYANOVA, L.A. ALEKSEEVA THE ANALYSIS OF ACTIVITY OF THE STRUCTURES OF THYMUS AND EARLY IMMUNE ANSWER DURING THE TAKING THE IMMUNOMODULATOR
Key words: immune, thymus, transfer factor, serotonin, catecholamines.
The present article considers the findings of the immune answer mechanism with preliminary accepting preparation “Transfer factor Classic" by rats by the methods of analysis quantitative and functional activity of thymus structures, examination of the dynamics of containing serotonin and catecholamines,, the analysis of the leukocytic composition dynamics and appraisal of the organism general condition.
Иммунодефицит является одной из причин развития повышенной восприимчивости к инфекционным болезням, аллергических заболеваний, онкологии, а также ряда патологий, сокращающих продолжительность жизни человека. В XXI в. данная проблема обострилась вследствие плохой экологии, стресса, нездорового образа жизни и неправильного питания [14, 16]. Фармакологические производители предлагают множество препаратов для иммунокоррекции и повышения резистентности организма в условиях иммунодефицита. В их ряду появились препараты трансфер фактора (ТФ). ТФ - это полипептид с малой молекулярной массой, который передается детенышам млекопитающих, в том числе и человеку, с молозивом матери и при контакте обучает незрелые иммунные клетки качественному и правильному иммунному ответу [10]. Препараты ТФ уже многие годы успешно используются для лечения и профилактики бактериальных, вирусных, грибковых инфекций, паразитарных болезней, злокачественных опухолей, аутоиммунных, неврастенических, аллергических и эндокринных расстройств; первичных и вторичных иммунодефицитов; при болезнях, сопровождающихся нарушениями функций иммунной системы [15]. Данное исследование направлено на изучение морфофункиональных характеристик структур тимуса в период раннего иммунного ответа и анализ иммунокорригирующей активности биологически активной добавки «Трансфер Фактор Классик» (далее - «ТФК»), подтвержденной в некоторых клинических и морфологических исследованиях [1, 3, 5, 8-11].
Целью исследования явился анализ гистоморфологических изменений тимуса, количественной и функциональной активности его гранулярных лю-минесцирующих клеток в динамике под влиянием препарата «ТФК» в эксперименте.
Материалы и методы исследования. Объектом исследования стали 28 самцов белых беспородных крыс в возрасте 2-3 месяцев массой 200 г. Животные были разделены на 2 группы: опытную, которая в течение месяца получала препарат «ТФК» в дозе 8,6 мг/кг per os, и контрольную, не получавшую препарат. Питание обеих групп на протяжении эксперимента было одинаковым. Через месяц всем животным в качестве антигена была введена внутривенно, в хвостовую вену, суспензия эритроцитов барана концентрацией 0,2 мл/мл дозой
1 мл [12]. После этого животных и в опытной, и в контрольной группе разделили на 3 подгруппы соответственно сроку забоя: 1 ч, 3 ч и 4 ч. Затем под глубоким эфирным наркозом брали кровь из левого желудочка сердца, затем извлекали тимус и селезенку, криостатные срезы которых толщиной 15 мкм окрашивались по люминесцентно-гистохимическому методу Фалька-Хилларпа (1962) с последующей цитоспектрофлуорометрией [2] для выявления люминесцирующих структур органа на люминесцентном микроскопе под увеличением 400. Содержание биоаминов представлено в условных единицах. Определялась статистическая зависимость данных результатов от параметров распределения с использованием непарного ^критерия Стьюдента, непрерывные переменные представлены в виде среднего значения со стандартной ошибкой среднего. Различия считались достоверными при двустороннем уровне значимости р < 0,05
Результаты исследования и их обсуждение. В результате наблюдений в течение месяца выявлено, что опытные крысы имели более активное поведение, хороший аппетит, быстрое восстановление после наркоза, наблюдалось улучшение качества шерсти. У опытных крыс масса тимуса и селезенки достоверно увеличилась на 11% (р < 0,002). Важно отметить, что при внутривенном десятидневном введении ТФ в физиологическом растворе в дозе 0,8 мг/кг 12-месячным самкам не наблюдается уменьшения массы тимуса в ответ на развитие стресса, вызываемого введением изопротеренола [4].
Результаты данных исследований показали, что картина дольки на люминесцентных срезах тимуса подопытных и контрольных животных на каждом сроке исследования имела определённые морфологические отличия от дольки интактных особей (рис. 1). В отличие от картины контроля, где ГЛК разного размера располагаются на неодинаковом расстоянии друг от друга и имеют разную степень дегрануляции (рис. 1, а), дольки тимуса опытных крыс имеют правильную форму, расположены мозаично, содержащиеся в них ГЛК одного размера (рис. 1, б).
Рис. 1. Корковое вещество тимуса крыс через 3 ч после введения антигена: не получавших иммуностимулятора (контроль) и получавших «Трансфер Фактора Классик» (опыт) (ув. х400).
Метод Фалька-Хилларпа: а - контроль; б - опыт.
1 - цельные ГЛК; 2 - дегранулировавшие ГЛК;
3 - отдельно лежащие гранулы; 4 - скопления гранул
В результате эксперимента отмечено, что более выраженные изменения функциональной активности ГЛК под действием препарата «ТФК» происходят в корковом веществе дольки тимуса. Здесь у контрольных крыс она максимальна через 4 ч, в премедуллярной зоне представлена единичными гранулами, в субкапсулярной - гранулы и клетки разного размера, расположены группами (рис. 1, а). А у опытных крыс функциональная активность ГЛК максимальна через 3 ч, гранулы крупные, клетки и гранулы, в основном, не группиро-
а
б
ваны, располагаются отдельно. В премедуллярной и субкапсулярной зонах выявлены мелкие отдельно лежащие гранулы (рис. 1, б). В мозговом веществе дольки тимуса контрольных крыс дегрануляция ГЛК достигает максимума через
3 ч, представлена единичными гранулами на границе с премедуллярной зоной. В мозговом веществе тимуса опытных уровень дегрануляции максимален через 1 ч, также наблюдается единичная дегрануляция ГЛК.
Содержание серотонина в субкапсулярных ГЛК коркового вещества тимуса через 1 ч, 3 ч и 4 ч у опытных крыс составляет 6,43±0,37, 7±1,64, 9,2±1,3 (р < 0,0072). У контрольных - 7,98±0,23, 8,4±0,44, 10,22±0,07 (р < 0,0072). Динамика катехоламинов в опыте - следующая: 3,65±0,14, 2,95±0,025, 4,5±0,26 (р < 0,016), в контроле - 4,6±0,13, 5,05±0,13, 5,9±0,09 (р < 0,016). Таким образом, в динамике за 4 ч содержание серотонина в ГЛК коркового вещества контрольных крыс достоверно увеличилось на 28%, катехоламинов - на 29%; у опытных - на 51% и 26%, соответственно. Содержание серотонина в тимо-цитах опытных крыс через 1 ч, 3 ч, 4 ч составило 3,6±0,97, 1,6±0,2, 2,4±0,25 (р < 0,0072). У контрольных крыс - 5,7±0,37, 6,4±0,82, 1,646±0,31 (р < 0,0072). Содержание катехоламинов в тимоцитах опытных крыс через 1 ч, 3 ч, 4 ч составило 1,64±,0,54 0,9±0,08, 1,41 ±0,15 (р < 0,016). Картина в динамике у контрольных крыс следующая: 2,95±0,1, 3,38±0,23, 0,882±0,04 (р < 0,016). Содержание серотонина в тимоцитах опытных крыс достоверно уменьшается на 33% (р < 0,0072), а у контрольных достоверно уменьшается на 71% (р < 0,0072). Содержание катехоламинов в тимоцитах опытных особей волнообразно в динамике. У контрольных крыс динамика сходна, но итоговое содержание достоверно меньше исходного на 70% (р < 0,016) (табл. 1).
Таблица 1
Динамика содержания биоаминов в корковых структурах тимуса после антигенного воздействия
Серотонин (р < 0,0072)
Катехоламины (р < 0,016)
При изучении изменений лейкоцитарной формулы выявлены различия показателей в опытной и контрольной группах. Содержание лимфоцитов под влиянием «ТФК» изменяется в течение 4 ч волнообразно с незначительным отклонением и через 4 ч возвращается к показателю 1 ч. Динамика контрольной группы весьма отлична, так как в ней количество лимфоцитов увеличивается со временем линейно, максимум содержания лимфоцитов приходится на
4 ч с достоверным увеличением на 58% от показателя 1 ч (р < 0,015). Следовательно, опытная группа, в отличие от контрольной, имеет стабильную динамику лимфоцитов с незначительными колебаниями в противоположность результатам контрольной группы, в которой наблюдается достоверное увеличение лимфоцитарной популяции в крови с ходом развития иммунного ответа.
Использование таких иммуномодуляторов, как ферровир, гептрал и мек-сикор, лишь частично нормализует в крови содержание лимфоцитов, однако полностью восстанавливает метаболическую активность нейтрофилов периферической крови [8], чего не наблюдается при применении «ТфК», не вызывающего существенных изменений динамики нейтрофилов. Следует заключение, что иммуномодуляция препаратом «ТФК» направлена, в основном, на увеличение продукции и активности лимфоцитов в крови.
Результаты настоящего исследования показывают, что введения «ТФК» в дозе 8,6 мг/кг массы в день в течение месяца достаточно для запуска механизмов активации с возможным дальнейшим развитием полноценного иммунного ответа [6]. Употребление «ТФК» положительно влияет на функциональную активность тимуса крыс и замедление инволюции тимуса. Наши данные согласуются с результатами профессора М.Г. Летифова [10], который обнаружил положительные результаты при применении препаратов трансфер фактора у детей с аллергическими заболеваниями.
После антигенной стимуляции процесс обеспечения катехоламинами и серотонином отклоняется от нормы с первого часа у контрольной и опытной групп. У животных, употреблявших «ТФК», содержание биоаминов в субкапсулярных ГЛК коркового вещества тимуса достоверно меньше от показателей у контрольной группы, у которой содержание моноаминов резко возрастает в тимоцитах. При предварительной иммуностимуляции процесс обеспечения биоаминами субкапсулярных ГЛК имеет волнообразный характер и не возвращается к норме в течение 4 ч. Без применения «ТФК» содержание биоаминов в них увеличивается линейно. При иммуностимуляции в тимоцитах мозгового вещества тимуса общая динамика биоаминов имеет синусоидный характер и не возвращается через 4 ч к исходному уровню, в то же время без применения «ТФК» наблюдается падение содержания данных биологически активных веществ.
В субкапсулярных ГЛК коркового вещества тимуса под влиянием катехоламинов происходят созревание и рост популяции Т-лимфоцитов в ответ на поступление антигена [б]. Таким образом, стабильное содержание лимфоцитов у опытных особей является следствием адекватной функциональной активности ГЛК и достаточным содержанием катехоламинов в корковых структурах тимуса [15]. Отсутствие данных факторов специфической резистентности [6] у контрольных животных, возможно, приводит к увеличению уровня лимфоцитов спустя время.
Увеличение массы тимуса, имеющее место в эксперименте, может служить показателем отсутствия инволютивных процессов в данном органе у особей одного возраста [6, 14, 16].
Имеются данные о применении иммуномодуляторов растительного происхождения как одного из безопасных средств лечения иммунодисфункций: настойки элеутеррокока, эхинацеи и др. Однако применение первых повышает активность лишь фагоцитарного звена [13], наблюдается индивидуальная непере-
носимость растительных компонентов. В связи с этим имеет место преимущество «ТФК» в ряду иммуномодулярующих средств животного и растительного происхождения как безопасного препарата с широким спектром действия [15].
Выводы. 1. Увеличение массы тимуса, развитость долечных структур тимуса [3], вероятно, свидетельствуют об уменьшении инволюционных процессов у особей одного возраста [14, 16].
2. При развитии раннего иммунного ответа на фоне приема «ТФК» повышается функциональная активность ГЛК тимуса в виде множественной дегрануляции [6].
3. Иммуномодуляция препаратом «ТФК» направлена, в основном, на увеличение продукции и активности лимфоцитарного звена иммунитета.
4. Стабильное содержание лимфоцитов в крови, вероятно, является показателем готовности иммунной системы особей, получавших препарат «ТФК», к специфическому ответу.
Литература
1. Алексеева Л.А., Гурьянова Е.А. Изменения биоаминов селезёнки и иммунобиохимиче-ских показателей крови крыс при воздействии иммуномодулятором // Материалы VII конференции по патологии клетки. Москва, 11-12 ноября 2012 г. М.: МдВ, 2010. С. 4-6.
2. Виноградов СЮ, Диндяев С.В., Криштоп В.В. Материалы к изучению цитологии [Электронный ресурс]. URL: http://www.isma.ivanovo.ru/index.php?option=com_docman&task= doc_dow-nload&gid=658&Itemid=17&lang=ru.
3. Гордон Б.М. Люминесцентно-гистохимический анализ гистаминобеспечения структур тимуса в первый час контакта организма с растворимым антигеном: автор. дис. ... канд. мед. наук. Новосибирск, 1990. 24 с.
4. Донцов В.И., Кудашов А.А., Крутько В.Н. Иммуномодуляторы как геропротекторы: восстановление потенциала клеточного роста тканей у старых мышей трансфер-фактором [Электронный ресурс]. URL: http://www.gerontology-explorer.narod.ru/f3c717f8-bd52-475c-8a92-28c39ef74415.html.
5. Забродская Е.Н. Особенности специфической иммунотерапии у больных аллергическим интермиттирующим ринитом с сопутствующим синдромом вторичной иммунной недостаточностью [Электронный ресурс]. URL: http://www.dissercat.com/content/osobennosti-spetsificheskoi-im-munoterapii-u-bolnykh-allergicheskim-intermittiruyushchim-rini.
6. Ильина ЛЮ., Сергеева В.Е. Биоаминсодержащие структуры тимуса при иммуномодуляции: учеб. пособие. Чебоксары: Изд-во Чуваш. ун-та, 2004. С. 81-82.
7. Иммунореабилитация при инфекционно-воспалительных и соматических заболеваниях с использованием Трансфер Фактора: метод. письмо Минздравсоцразвития РФ от 30.07.2004 г. № 14/231 [Электронный ресурс]. URL: http://www.a-factor.com/metoda.html.
8. Кеня А.А. Нарушения иммунного гомеостаза у больных с острым и обострением хронического сальпингоофорита [Электронный ресурс]. URL: http://www.dissercat.com/content/narusheniya- im-munnogo-gomeostaza-u-bolnykh-s-ostrym-i-obostreniem-khronicheskogo-salpingooforita.
9. Кухаркина О.В. Получение и изучение свойств препаратов фактора переноса против некоторых вирусных и бактериальных инфекций животных: дис. ... канд. биол. наук. Владимир, 2003. 24 c.
10. Летифов Г.М. Возможности и перспективы применения Трансфер Факторов в педиатрии [Электронный ресурс]. URL: http://www.shirleys-wellness-cafe.com/russian/transfer-factor-russianlit24.htm.
11. Нейромедиаторный статус селезенки крыс при воздействии иммуномодулятора в условиях экспериментального токсического гепатита /Л.А. Алексеева, Е.А. Гурьянова, А.С. Павлова и др. // Морфологические ведомости. 2010. № 2. С. 80-83.
12. Фримель Г. Иммунологические методы / пер. с нем. А.П. Тарасова. М.: Медицина, 1987,
472 с.
13. Шестакова Н.А. Клинико-иммунологические особенности ответа пациентов с аллергической и неаллергической формой атопического дерматита на введение активированных Т-лим-фоцитов [Электронный ресурс]. URL: http://www.dissercat.com/content/kliniko-immunologicheskie-osobennosti-otveta-patsientov-s-allergicheskoi-i-neallergicheskoi.
14. Di Naro E, Cromi A., Ghezzi F. Fetal thymic involution: a sonograhpic marker of the fetal inflammatory syndrome // Am. J. Obstet. and Gyn. 2006. Vol. 194, № 1. P. 153-159.
15. Kirkpatrick CH. Activities and characteristics of Transfer Factors // Biotherapy. 1996. № 9(1-3). Р. 13-16.
16. Varas A., Jimenez E, Sacedon R. et al. Analysis of human neonatal thymus: evidence for transient thymic involution // J. Immunol. 2000. Vol. 164. P. 6260-6267.
СОЛЕНОВА ЕЛЕНА АЛЕКСАНДРОВНА - студентка IV курса медицинского факультета, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (elensoul@mail.ru).
SOLYENOVA ELENA ALEKSANDROVNA - student of Medical Faculty, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
ГУРЬЯНОВА ЕВГЕНИЯ АРКАДЬЕВНА - доктор медицинских наук, доцент кафедры восстановительной медицины, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (eagurian@rambler.ru)
GURYANOVA EVGENIYA ARKADYEVNA - doctor of medical sciences, assistant of professor of Restoration Medicine Chair, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
АЛЕКСЕЕВА ЛИЯ АРКАДЬЕВНА - соискатель ученой степени кандидата медицинских наук кафедры факультетской терапии, Чувашский государственный университет, Россия, Чебоксары (zdr-nacia@yandex.ru)
ALEKSEEVA LIYA ARKADYEVNA - competitor of scientific degree of medical sciences of Faculty Therapy Chair, Chuvash State University, Russia, Cheboksary.
УДК 616-002.5(470.344)
ББК Р 11(2 Рос.Чув) 062.54
Л.В. СТЕКОЛЬЩИКОВ
ЗАБОЛЕВАЕМОСТЬ ТУБЕРКУЛЕЗОМ НАСЕЛЕНИЯ ТРУДОСПОСОБНОГО ВОЗРАСТА ЧУВАШСКОЙ РЕСПУБЛИКИ
Ключевые слова: трудоспособный возраст, туберкулез, мужчины, женщины, первичная заболеваемость в возрастно-половых группах.
Статья посвящена изучению уровня и структуры первичной заболеваемости туберкулезом (ТБ) населения трудоспособного возраста Чувашской Республики в 2009 г. Уровень и структура заболеваемости ТБ зависят от пола и возраста населения и локализации туберкулезного процесса. Среди общего количества первично заболевших 99% (оба пола) приходится на больных с ТБ органов дыхания (у мужчин - 99,9%, женщин - 97,6%). Самый высокий уровень первичной заболеваемости у мужчин в возрастной группе 45-54 лет (174,72 случая на 100 тыс. мужского населения данной возрастной группы). Максимум первичной заболеваемости среди женщин приходится на активный репродуктивный возраст 25-34 года (58,1 случая).
L V STEKOLCHSHIKOV INCIDENCE OF TUBERCULOSIS AMONG ABLE-BODIED PERSONS IN THE CHUVASH REPUBLIC
Key words: able-bodied persons, tuberculosis, males, females, incidence by age and sex groups.
The paper is devoted to the study of the level and structure of the primary tuberculosis incidence among able-bodied persons in the Chuvash Republic in 2009 year. The tuberculosis disease level and structure depend on the population sex and age and tubercular process localization. Among the general quantity of incidence 99% (the both sexes) is devoted to the people having tuberculosis of respiratory system (men - 99,9%, women - 97,6%). The highest level of maximum incidence among the men of 45-54 (174,72 incidents for 100,000 of male population of the same age group). Women maximum incidence exists among women of active reproduction age of 25-34 years (58,1 incidents).
Среди основных заболеваний, выделяемых Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) и представляющих угрозу существованию человеческой цивилизации, значится и Тб, поэтому в задачи политики ВОЗ в Европейском регионе на хХ! в. входят «энергичные и согласованные действия и меры, направленные на усиление программ профилактики и лечения ТБ» [1. С. 22]. Несмотря на то, что в настоящее время по сравнению с 90-ми гг. ХХ в. показатели заболеваемости и смертности от ТБ стабилизировались и даже немного снизились, ситуация по ТБ выглядит напряженной. Первичная заболеваемость активным ТБ в 2011 г. в Российской Федерации (РФ) составила 72,67 случая на 100 тыс. населения [3. С. 91], в Чувашской Республике (ЧР) в 2010 г. - 66,1 [4. С. 66]. По сравнению с 1989 г. (до начала её роста) уровень первичной заболеваемости в Рф в
