CC BY
102
АЛЛЕРГИЗИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТА ИНСАКАР ПЛЮС
Степанов А.А.
ГНУ ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина
Изучение аллергизирующих свойств препарата, который применяется накожно, провели на 90 белых крысах популяции Wistar массой 200 - 220 гр. Провели эпикутанную сенсибилизацию 50 белых крыс путем 20 повторных (по 5 раз в неделю) накожных аппликаций на участки боковой поверхности туловища размером 2х2 см в дозе 0,2 мл (близкая к рекомендованной для клинических испытаний терапевтическая доза), нанося равномерным слоем на весь участок аппликации с помощью глазной пипетки. При этом способе сенсибилизации можно выявить возможность возникновения контактного дерматита. В процессе сенсибилизации контактного дерматита или раздражающего действия препарата отмечено не было.
Через 10 дней после сенсибилизации провели тестирование: использовали кожную (эпикутанную), внутрикожную, конъюнктивальную и назальную пробы, сыворотку от сенсибилизированных и контрольных животных тестировали в непрямой реакции дегрануляции тучных клеток (НРДТК). Для каждой пробы использовали 10 сенсибилизированных крыс и 10 крыс несенсибилизированных - контроль.
Эпикутанная проба. Сенсибилизированным и контрольным животным (по 10 крыс) однократно нанесли на выстриженные участки кожи спины (2х2 см) испытуемый препарат в дозе 0,2 мл (рабочая доза, не вызывающая кожнораздражающего действия). После нанесения препаратов через 15, 30 минут, 24, 48 и 72 часа проводили оценку кожи, которую оценивали в баллах.
В течении 72 часов после нанесения испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным животным по характеру кожной реакции (отсутствие гиперемии, инфильтрации) обработанные участки не отличались у опытных и контрольных животных. Реакция оценена по шкале в баллах: 0 - видимой реакции нет. Отрицательная кожная реакция
свидетельствует об отсутствии гиперчувствительности немедленного и замедленного типа как у сенсибилизированных, так и контрольных животных.
Внутрикожная проба. 0,05 мл испытуемого препарата внутрикожно ввели на выстриженный участок 1х1 см, а воду для контроля в том же объеме на другой стороне туловища животного. Результаты учитывали через 20 - 30 минут (аллергическая реакция немедленного типа), через 4-6 часов (немедленно-замедленного типа), через 24 часа (замедленного типа). Отмечали реакцию кожи (возможные появления эритемы, инфильтрата), измеряли толщину кожной складки, сопоставляя показателям контроля.
При введении препарата у сенсибилизированных и контрольных крыс на месте инъекции появилось покраснение в виде «пуговки». В течение 12 часов покраснение на месте введения препарата рассасывалось, и постепенно
403
переходила в бледно-розовый оттенок в обеих группах с мелким шелушением эпидермиса. По истечении 24 часов на коже сенсибилизированных и контрольных животных не было отмечено никаких отклонений.
Конъюнктивальная и назальная пробы. Конъюнктивальная проба является очень чувствительным тестом, и в ряде случаев позволяет выявить реакцию животных на аллерген при слабой аллергизации, и отрицательных кожных тестах. В случае, если испытуемый препарат, при применении может попасть в верхние дыхательные пути, проводят провокационную назальную пробу. При постановке данных проб также оценивается, кроме сенсибилизирующих свойств препаратов, возможное раздражающее действие, которое может проявится при попадании лекарственного средства на слизистые оболочки. На слизистых оболочках, благодаря развитой кровеносной сети, происходит быстрое всасывание попадающих веществ и, соответственно, реакции развиваются также быстро, как аллергические, так и раздражающего характера.
На слизистую конъюнктивы (под верхнее веко) и носовой полости закапали по 1 капле испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным животных. Оценку конъюнктивальной реакции проводили визуально под лупой при увеличении х2 через 15 минут (реакция немедленного типа) и через 24-48 часов (замедленного типа) по бальной шкале: 0 - видимых реакций нет; 1 - легкое покраснение слезного протока; 2 -покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице; 3 -покраснение всей конъюнктивы и склеры. При оценке назальной реакции учитывали состояние слизистой оболочки, наличие чихания и усиления секреции слизи в сопоставлении с контрольными животными.
Конъюнктивальная реакция при закапывании препарата не отличалась как у сенсибилизированных, так и у контрольных животных. В течение 1 часа отмечали покраснение всей конъюнктивы и склеры, в последующем покраснение переходило в легкое покраснение. Через 24, 48 часов не было отмечено каких-либо изменений слизистой оболочки и склеры глаз в обеих группах.
При оценке назальной реакции установлено, что при закапывании испытуемого препарата наблюдали чихание, усиление секреции слизи и незначительную гиперемию слизистой оболочки в обеих группах. Через 24, 48 часов, никаких отклонений на слизистой оболочке носа отмечено не было.
Всасывание веществ, попадающих на слизистые оболочки, происходит быстро и, соответственно, реакции в связи с этим развиваются также быстро, как аллергические, так и раздражающего характера. Отмеченные отклонения в течение 12 часов, при постановке конъюнктивальной и назальной проб в обеих группах свидетельствуют о слабовыраженном действии препарата на слизистые оболочки.
Реакция непрямой дегрануляции тучных клеток (РНДТК). О
выраженности синсибилизирующих свойств препарата судили по реакции дегрануляции тучных клеток. Тканевые тучные клетки и базофилы крови играют важную при аллергических реакциях, принимая участие в
404
высвобождении гистамина, гепарина, серотонина и др. Образующееся при аллергии иммуноглобулины Е в комплексе с аллергеном, адсорбируясь на тучных клетках, способствуют высвобождению из них вазоактивных аминов, что выражается в их разбухании, образовании вакуолей и выхода содержимого клетки за ее пределы. Это явление называется дегрануляцией тучных клеток, что и фиксируем как положительную реакцию.
Для постановки реакции получали сыворотку от 10 сенсибилизированных животных и 10 контрольных. Тучные клетки выделяли из перитониальной жидкости 2-х крыс-самцов (масса 300 г) после внутрибрюшинного введения 0,9%-ного раствора NaCl с гепарином подогретого до 37 0С в количестве 8-10 мл. Затем, на предметные стекла, предварительно окрашенные 0,3% спиртовым раствором нейтрального красного, наносили по 0,03 мл исследуемой сыворотки крови от подопытных крыс, тучных клеток и аллергена препарат инсакар плюс в разведении 1:100. В контрольной пробе использовали сыворотку крови от несенсебилизированных крыс, тучные клетки и аллерген. Пробы микроскопировали и подсчитывали 100 клеток, среди которых отмечали дегранулированные в процентах. Реакцию оценивали отрицательную, если процент дегранулированных тучных клеток в пробе не превышал 10.
Результаты исследований отражены в таблице 1.
Таблица 1
Результаты исследования по реакции дегрануляции тучных клеток
№ жив-го Процент дегрануляции тучных клеток в опыте Процент дегрануляции тучных клеток в контроле
1 7 6
2 8 5
3 6 5
4 6 6
5 7 4
6 7 5
7 8 7
8 5 5
9 8 6
10 6 6
6,8±0,73 5,5±0,60
Согласно полученных данных процент дегрануляции тучных клеток у опытных животных был на уровне 6,8 ± 0,73 и 5,5±0,60 в контроле. Известно,
405
что при значении до 10% - препарат не обладает сенсибилизирующими свойствами.
Sensitization properties of insacar plus. Stepanov A.A. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Helminthology.
Summary. The results of epicutaneous, intradermal, conjunctival and nasal tests as well as indirect reaction of mast cell degranulation evidenced that insacar plus didn’t demonstrate sensitization properties.
ДЮРАСИД ИС - НОВЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ БОРЬБЫ С МУХАМИ НА ТЕРРИТОРИИ ВБЛИЗИ ПТИЧНИКОВ
Ташбулатов А.А. *, Сафиуллин Р.Т.
*Компания «РАБОС Интл.»
ГНУ ВНИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина
Введение. Как известно зоофильные мухи имеют повсеместное распространение и большую численность в птицеводческих помещениях и на территории вокруг них особенно летом и осенью, что обусловлено коротким периодом полного развития мух, который в теплое время протекает за 10-30 дней, а в фазе имаго в зависимости от температуры, влажности воздуха и наличия пищи они живут до 2-3 месяцев. Излюбленными местами мух на территории вокруг птицеводческих помещений являются стены кормоблока, наружные стены бытового блока, карнизы по периметру, вентеляционные окна птичника, а также наружный транспортер и место погрузки помета. Находясь вблизи птичников летом и осенью, мухи находят корм и укрытие, где откладывают яйца, которые превращаются в личинки, куколку, имаго и пополняют популяцию. Возле птичников легко заметить большое скопление мух у входных дверей и вентиляцонных окон, которые залетают в птичники, где есть постоянный корм, а температурно-влажностный режим более благоприятный, чем на территории вокруг птичников. И не случайно меры борьбы с мухами в современных птицеводческих хозяйствах состоят в ликвидации условий, способствующих выплоду мух и в истреблении личинок и окрыленных насекомых. Птицеводческие помещения и территорию вокруг них следует содержать в чистоте, своевременно убирать помет, не допускать скопления остатков кормов, других нечистот, так как в них развиваются личинки. По принятой в птицеводческих хозяйствах технологии у них ведется планомерная работа по борьбе с мухами в помещениях для выращивания птицы во время санитарного перерыва. И весьма редко проводится работа на территории возле птичников. Исходя из всего отмеченного перед собой поставили задачу испытать эффективность нового комплексного пролангированного препарата дюрасид ИС для борьбы с мухами на территории вблизи птичников.
406
