CC BY
205
ИЗУЧЕНИЕ АЛЛЕРГИЗИРУЮЩИХ СВОЙСТВ НОВОГО ПРОТИВОПАРАЗИТАРНОГОПРАПАРАТА
Курочкина К.Г.
ВНИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина
Введение. Изучение аллергизирующих свойств новых лекарственных препаратов в эксперименте на животных имеет существенное значение в связи необходимостью всесторонней доклинической экспертизы предлагаемых новых препаратов для ветеринарной практики.
Специфическая диагностика аллергии и используемые методы in vivo и in vitro позволяют обнаружить состояние сенсибилизации на всех этапах аллергического процесса и выявить начальные проявления заболевания, когда клинические признаки болезни еще не выражены (латентная сенсибилизация).
Целью настоящей работы является установление возможных сенсибилизирующих свойств препарата на основе аверсектина С и празиквантела (применяют при нематодозах и арахноэнтомозах) на лабораторных животных, поскольку учет сенсибилизирующих свойств обязателен и проводится после оценки токсичности всех новых лекарственных форм.
Материалы и методы. Изучение сенсибилизирующей активности аверсектина Q + празиквантела, который применяют инъекционно, провели на белобоких морских свинках массой 250-300 г. Проведено две серии опытов по оценке сенсибилизирующих свойств препарата испытуемого препарата. В первой серии опытов сенсибилизация морских свинок проводилась путем однократной внутрикожной инъекции сенсибилизирующей дозы 150 мкг препарата в объеме 0,05 мл в кожу наружной поверхности уха.
Во второй серии опытов сенсибилизацию морских свинок проводили путем 20 повторных (по 5 раз в неделю) накожных аппликаций на участки боковой поверхности туловища размером 2х2 см в дозе 0,1 мл/кг. При этом способе сенсибилизации можно выявить и возможность возникновения контактного дерматита.
Через 10 дней сенсибилизированных морских свинок тестировали. Для выявления сенсибилизации использовали кожную, внутрикожную, конъюнктивальную и назальную пробы, сыворотку от сенсибилизированных и контрольных животных тестировали в непрямой реакции дегрануляции тучных клеток (НРДТК).
Результаты и обсуждение. После нанесения препарата через 15, 30 минут, 24 и 48 часов кожных реакций гиперчувствительности немедленного и замедленного типа не отметили как у сенсибилизированных, так и у несенсибилизированных (котрольных) животных. Реакция оценена по шкале в баллах: 0 - видимой реакции нет. По характеру кожной реакции: цвету кожи (отсутствие гиперемии) и толщине кожной складки (отсутствие
255
инфильтрации) тестируемые участки не отличались у опытных и контрольных животных.
Реакции немедленного типа развиваются быстро, и их механизме участвуют как основное звено реакции антиген-антитело в тканях и в жидких средах организма, как еще одна составляющая в механизме возникновения аллергической реакции большое значение имеет высвобождение гистамина. Реакции замедленного типа развиваются в течение нескольких часов, иногда и суток. Это в основном реакции пролиферативного типа, когда ведущую роль играют процессы раздражения эпидермальных и соединительнотканных структур и формирование различных видов воспаления (1). По-видимому, отрицательная реакция, которая зарегистрирована нами как раз и связана с отсутствием у испытуемого лекарственного средства свойств, способных спровоцировать запуск механизмов аллергических реакций.
При оценке внутрикожной пробы через 30 минут у сенсибилизированных и контрольных морских свинок на месте введения оставалась видна «пуговка», которая образовалась при введении препарата и быстро рассасывалась, бледно-розовая эритема проходила через 12 часов, через 24 часа на коже как сенсибилизированных, так и контрольных животных не было отмечено изменений. Развития аллергических реакций немедленного и замедленного типа не регистрировали.
Конъюнктивальная проба сенсибилизированных у морских свинок, не отличались от реакции у контрольных животных. Глазная щель не сужалась, также не было отмечено каких-либо изменений сосудистого рисунка конъюнктивы глаз или ее общей гиперемии через 15, 30 минут и 24 часа. Реакция оценена как отрицательная.
При постановке провакационной назальной пробы, установлено, что закапывание в носовые ходы испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным морским свинкам не вызвало гиперемии слизистой оболочки, чихания и усиления секреции слизи у животных, поэтому тест оценили как отрицательный.
Постановка этих проб дает возможность оценить кроме выявления сенсибилизирующих свойств испытуемого препарата, возможное раздражающее действие, которое может проявиться при попадании лекарственного средства на слизистые оболочки. Слизистые оболочки имеют очень развитую кровеносную сеть и поэтому всасывание попадающих на них веществ происходит очень быстро и, соответственно, реакции развивается тоже быстро, как аллергические, так и раздражающего характера.
Тканевые тучные клетки и базофилы крови играют важную роль при аллергических реакциях, принимая участие в высвобождении гистамина, гепарина, серотонина и др. (2). Образующиеся при аллергии иммуноглобулины Е в комплексе с аллергеном, адсорбируясь на тучных клетках, способствуют высвобождению из них вазоактивных аминов, что выражается в их разбухании, образовании вакуолей и выхода содержимого клетки за ее пределы. Это явление и называется дегрануляцией тучных клеток,
256
что мы и фиксируем как положительную реакцию. Результаты исследований представлены в таблице.
Таблица
Реакции непрямой дегрануляции тучных клеток
Аверсектин С + празиквантела Результаты исследования (%) (М+m)
Сенсибилизация в/к однокр. 5,37 + 0,78
Сенсибилизация 20-ти кратн.н/к 6,50 + 1,01
Контроль 4,97 + 0,69 - 6,37 + 0,86
Согласно результатам реакции, которые представлены в таблице аллергизации организма животных при применении (при разных схемах сенсибилизации) испытуемого препарата не происходит и процент дегранулированных тучных клеток у опытных животных был на уровне 5,37 + 0,78 - 6,5 + 1,01 и 4,97 + 0,69 - 6,37 + 0,86 в контроле, что оценивается как отрицательная реакция.
Механизм, по которому может развиваться аллергическая реакция, зависит от многих факторов: природы аллергена (физико-химическая
структура фармакологического средства), дозы, пути введения, кратности и продолжительности введения, способности соединяться с белками в организме и др. В зависимости от этого аллергические реакции развиваются по «немедленному» и «замедленному» типу. Реакции «немедленного» типа развиваются быстро, в течение 10-20 минут, до 4-х часов, а «замедленного» типа - через 6 часов и 24-72 часа.
Уровень аллергенной активности фармакологических средств устанавливается в зависимости от степени развития аллергического состояния, частоты и характера проявления аллергических реакций, что устанавливается в эксперименте на животных.
По результатам эксперимента можно определяют следующее:
Если число сенсибилизированных животных в группе по одному из испытанных тестов составляет менее 50%, то наблюдаемые эффекты рассматриваются как проявление индивидуальной чувствительности, а если число сенсибилизированных животных в группе составляет 50% и выше, то фармакологическое средство относится к потенциальным аллергенам.
Заключение. На основании результатов наших исследований можно сказать, что при разрешающем эпикутанном, внутрикожном тестировании было показано отсутствие аллергических реакций у животных. При постановке конъюнктивальной и назальной проб сенсибилизации организма
257
опытных животных не выявили. По данным, полученным при постановке непрямой реакции дегрануляции тучных клеток также можно говорить об отсутствии сенсибилизирующей активности у испытуемого препарата, т.к. результаты тестирования не отличались от показателей контроля, что подтверждает отсутствие у препарата аллергизирующих свойств.
Таким образом, на основании полученных результатов исследований установлено, что внутрикожная и 20-ти кратная накожная сенсибилизация животных препаратом на основе аверсектина С и празиквантела терапевтической дозе 0,1 мл/кг не вызывает сенсибилизации организма животных.
Литература: 1.Адо А.Д. Общая аллергология. М.: Медицина - 1978. -426 с. 2.Фрадкин В.А. Аллергодиагностика in vitro. М.: Медицина -1975. - С. 104-109. 3.Методы определения сенсибилизации организма животных.
Методические рекомендации. Новочеркасск.- 1987. - 31с. З.Отчет о научноисследовательской работе (ВНЦБ БАВ). Изучение аллергенных свойств аверсектина С. - 1996. 4.Руководство по экспериментальному
(доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва, 2005. - С. 54-69.
Investigation of sensibilization properties of a new antiparasite agent.
Kurochkina K.G. All-Russian K.I. Skryabin Institute of Helminthology.
Summary. Based on the results of performed trials it was concluded that the single intradermal and 20-fold sensibilization of guinla pigs by agent based on avermectin S1 and praziquantel given at dose level of 0,1 ml/kg of body weight didn’t cause a sensibilization effect.
ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКАЯ СИТУАЦИЯ В СУХОЙ СТЕПИ В 2009 ГОДУ
Лазарев Г.М.
Калмыцкий НИИ сельского хозяйства
Введение. В 2008 году на фоне подъема солнечной активности наступил очередной гидротермический период (синхронный рост потепления и влажности), что сопровождалось высокими урожаями трав и зерна, а также восстановлением ЭИ и ИИ паразитозов у пастбищных животных до уровня 2000-2005гг. Во второй половине 2009 года после умеренно влажной весны отмечалась сухая погода летом и осенью, что снизило контаминацию пастбищ в аридной зоне.
Материалы и методы. Исследования проводили в типичном хозяйстве сухостепной подзоны. Методы исследования - традиционные (Фюллеборна,
258
