Актуальные аспекты лабораторной диагностики урогенитальной хламидийной инфекции Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

6. d'Erell' F. Bakteriofag i fenomen vyzdorovleniya [Bacteriophage and the convalescence phenomenon], Ti-flis, Tiflisskiy gosudarstvennyy universitet [Tiflis State University], 1935,262 p.

7. Kazhal N., Iftimovich R. Iz istorii bor'by protiv mikrobov i virusov [From the history of the fight against microbes and viruses]. Bucharest, Nauchnoe izdatel'stvo [Scientific publishing], 1968,404 p.

8. Kaplan A. S. Raspredelenie i sokhranenie dizenteriynogo polivalentnogo bakteriofaga v organizme belykh myshey posle odnokratnogo kormleniya [Distribution and conservation of dysentery polyvalent bacteriophage in the body of white mice after a single feeding], Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology], 1941, no. 5-6, p. 162.

9. Kokin G. A. Primenenie bakteriofagov v khirurgii [The use of bacteriophages in surgery], Sovetskaya med-itsina [Soviet medicine], 1941, no. 9, pp. 15-18.

10. Krestovnikova V. A. Fagoterapiya i fagoprofilaktika i ikh obosnovanie v rabotakh sovetskikh issledovateley [Phage therapy and phage prophylaxis and their justification in the work of Soviet researchers]. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii [Journal of Microbiology Epidemiology and immunobiology], 1947, no. 11, pp. 56-65.

11. Pokrovskaya M. P., Kaganova L. S., Morozenko M. A, Bulgakova A. G., Skatsenko E. E. Lechenie ran bak-teriofagom [Bacteriophage treatment of wounds]. Moscow, Medgiz, 1942, 60 p.

12. Sapir I. B. Nablyudeniya i zamechaniya po povodu lecheniya dizenterii bakteriofagom [Monitoring and remarks about the bacteriophage treatment of dysentery], Trudy Moskovskogo oblastnogo instituta infektsionnykh bo-lezney [Works the Moscow Regional Institute of Infectious Diseases], Moscow, Moscow Regional Institute of Infectious Diseases, 1939, pp. 135-151.

13. Federal'noe rukovodstvo po ispol'zovaniyu lekarstvennykh sredstv. Vypusk VII [Federal guide on the use of drugs. Issue VII]. Ed. by A. G. Chuchalina, Yu. B. Belousova, V. V. Yasnetsova. Moscow, Ekho, 2006, pp. 659-667.

14. Tsulukidze A. P. K metodike primeneniya bakteriofaga v khirurgicheskoy praktike [The method of use of a bacteriophage in surgical practice]. Vestnik khirurgii [Journal of surgery], 1941, no. 6, pp. 679-685.

15. Shkrob O. S. Akademik Nikolay Nilovich Burdenko (k 125-letiyu so dnya rozhdeniya) [Academician Niko-lay Burdenko (devoted to the 125th anniversary)]. Khirurgiya [Surgery], 2001, no. 5, pp. 61-63.

16. Adhya S., Merril C. The road to phage therapy. Nature, 2006, vol. 443, pp. 754-755.

17. Bruynoghe R., Maisin J. Essais de thérapeutique au moyen du bacteriophage du staphylocoque. Compt. Rend. Soc. Biol., 1921, vol. 85, pp. 1120-1121.

18. Chanishvili N. A Literature Review of the Practical Application of Bacteriophage Research. Hauppauge, New York, Nova Science Publishers, 2012, 283 p.

19. Chanishvili N. Phage therapy - history from Twort and d'Herelle through Soviet experience to current approaches. Adv. Virus Res., 2012. vol. 83, pp. 3^0.

20. Dutton L. O. The probable role of the bacteriophage in streptococcus infections. Jour. Lab. and Clin. Med., 1926, vol. 11, p. 763.

21. Hausler T. Viruses vs. Superbugs: a solution to the antibiotics crisis? New York, MacMillan, 2008,292 p.

22. Kuchmen A. The Forgotten Cure : The Past and Future of Phage Therapy. New York, Springer Science & Business Media, 2011,131 p.

23. Morrison S., Gardner R. E. The treatment of a lung abscess due to Bacillus coli with a lytic filtrate. J. Am. Med. Assoc., 1936, vol. 107, pp. 33-34.

24. Raiga A., Voitot J. Le bactériophage de d'Hérelle. Agent naturel et thérapeutique de la guérison des infections. Hôp Paris, 1952, vol. 40, p. 265.

25. Sulakvelidze A., Alavidze Z., Morris J. G. Jr. Bacteriophage therapy. Antimicrob. Agents Chemother, 2001, vol. 45, pp. 649-659.

26. Summers W. C. Felix d'Herelle and the Origins of Molecular Biology. Yale New Haven, CT, University Press, 1999,230 p.

27. Twort F. An investigation on the nature of ultramicroscopic viruses. Lancet, 1915, vol. 11, p. 1241.

УДК 616.98:579.882. ll]-031:611.63/65]-078 03.02.00-Общая биология

О H.B. Зур, А.Ю. Миронов, В.А. Алешкин, 14.01.00 - Клиническая медицина

С.С. Афанасьев, Е.Е. Рубальская, 14.03.00 - Медико-биологические науки М.С. Афанасьев, Е.О. Рубальский, 2016

АКТУАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ

Зур Наталья Васильевна, кандидат медицинских наук, врач-дерматовенеролог, Россия, 140415, Московская область, г. Коломна, ул. Уманская, д. 17, пом. 3, тел.: 8-910-408-23-57, e-mail: natalyzur@gmail.com.

Миронов Андрей Юрьевич, доктор медицинских наук, профессор, руководитель отдела микробиологии, ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: 8-916-357-54-86, e-mail: andy.60@mail.ru.

Алешкин Владимир Андрианович, доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, директор, ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 452-18-16, e-mail: info@gabrich.ru.

Афанасьев Станислав Степанович, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, заместитель директора, ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: (495) 452-18-16, e-mail: afanasievss409.4@bk.ru.

Рубальская Елена Евгеньевна, заведующая лабораторией клинической лабораторной диагностики Научно-исследовательского института краевой инфекционной патологии, ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121, тел.: 8-908-616-90-66, e-mail: e.e.rubalskaya@gmail.com.

Афанасьев Максим Станиславович, доктор медицинских наук, профессор кафедры клинической аллергологии и иммунологии, ГБОУ ВПО «Первый московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Россия, 119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, тел.: 8-916-685-52-38, e-mail: mafa78@inbox.ru.

Рубальский Евгений Олегович, специалист по инновационной работе Центра поддержки технологий и инноваций, ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, д. 121; младший научный сотрудник лаборатории прикладной иммунохимии, ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел.: 8-961-798-37-53, e-mail: e.o.rubalsky@gmail.com.

Представлен анализ литературы, посвященный изучению биологических свойств хламидий и роли хламидийной инфекции в патологии человека. Установлено, что для урогенитальной хламидийной инфекции характерно хроническое, бессимптомное течение, что способствует распространению инфекционного процесса с развитием генерализованной формы. Приведен обзор современных подходов к лабораторной диагностике урогенитальной хламидийной инфекции и ее диагностических возможностей. Указано на целесообразность использования нескольких взаимодополняющих тестов для диагностики хламидийной инфекции. В постановке диагноза хронической урогенитальной инфекции и ее генерализованной формы показано приоритетное значение методов молекулярной диагностики.

Ключевые слова: урогениталъная хламидийная инфекция, лабораторная диагностика, генерализованная форма, методы молекулярной диагностики.

ACTUAL ASPECTS OF LABORATORY DIAGNOSTICS OF UROGENITAL CHLAMYDIAL INFECTIONS

Zur Natal'ya K, Cand. Sei. (Med.), Dermatovenereologist, 17 Umanskaya St., office 3, Kolomna, Moscow Oblast, 140415, Russia, tel. 8-910-408-23-57, e-mail: natalyzur@gmail.com.

Mironov Andrey Yu., Dr. Sei. (Med.), Professor, Head, Department of Microbiology, G.N. Gabrichevsky Moscow Research Institute for Epidemiology and Microbiology, 10 Admiral Makarov St., Moscow, 125212, Russia, tel.: 8-916-357-54-86, e-mail: andy.60@mail.ru.

Aleshkin Vladimir A., Dr. Sei. (Biol.), Professor, Honored Scientist of the RF, Director, G.N. Gabrichevsky Moscow Research Institute for Epidemiology and Microbiology, 10 Admiral Makarov St., Moscow, 125212, Russia, tel: (495) 452-18-16, e-mail: info@gabrich.ru.

Afanasjev Stanislav S., Dr. Sei. (Med.), Professor, Honored Scientist of the RF, Deputy Director, G.N. Gabrichevsky Moscow Research Institute for Epidemiology and Microbiology, 10 Admiral Makarov St., Moscow, 125212, Russia, tel.: 8-903-667-20-68, e-mail: afanasievss409.4@bk.ru.

Rubalskaya Elena E., Head, Laboratory of Clinical Laboratory Diagnostics, Research Institute of Regional Infectious Pathology, Astrakhan State Medical University, 121 Bakinskaya St., Astrakhan, 414000, Russia, tel.: 8-908-616-90-66, e-mail: e.e.rubalskaya@gmail.com.

Afanasjev Maxim S., Dr. Sci. (Med.), Professor, Department of Clinical Allergology and Immunology, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, 8-2 Trubetskaya St., Moscow, 119991, Russia, tel.: 8-916-685-52-38, e-mail: mafa78@inbox.ru.

Rubalskii Evgenii O., Specialist in Innovations, Technology and Innovation Support Center, Astrakhan State Medical University, 121 Bakinskaya St., Astrakhan, 414000, Russia; Junior Research Associate, Laboratory of Applied Immunochemistry, G.N. Gabrichevsky Moscow Research Institute for Epidemiology and Microbiology, 10 Admiral Makarov St., Moscow, 125212, Russia, tel: 8-961-798-37-53, e-mail: e.o.rubalsky@gmail.com.

We have analyzed the literature devoted to the study of biological properties of chlamydia and the role of chlamydial infection in human pathology. It was discovered that urogenital chlamydial infection is characterized as chronic and asymptomatic that contributes to the spread of the infection with the development of a generalized form. There is an overview of current approaches to laboratory diagnosis of chlamydial urogenital infection, diagnostic capabilities. It is indicated to use several complementary tests for the diagnosis of chlamydial infection. Molecular diagnostic methods are a priority in making a diagnosis of chronic urogenital infection and its generalized form.

Key words: urogenital chlamydial infection, laboratory diagnostics, generalized form, molecular diagnostic methods.

Заболевания, вызываемые облигатными внутриклеточными микроорганизмами семейства Chlamydiaceae, являются актуальной проблемой современного здравоохранения ввиду их широкого распространения [14]. Урогенитальный хламидиоз, вызванный Chlamydia trachomatis, ежегодно поражает более 100 млн человек. Это самая распространенная бактериальная инфекция, передаваемая половым путем. В 35-50 % случаев хламидийная инфекция протекает под маской других заболеваний [12, 45]. Частота урогенитального хламидиоза в России составляет от 1,5 до 2 млн человек ежегодно, при этом в большинстве случаев этиологический диагноз не устанавливается [16]. Истинная заболеваемость превышает данные официальной статистики, имея характер эпидемии [11,22].

Урогенитальным хламидиозом поражено 40-80 % женщин и 20-60 % мужчин с инфекционно-воспалительными заболеваниями мочеполовых органов [53]. Урогенитальный хламидиоз протекает без выраженной клинической симптоматики, что затрудняет диагностику, способствует распространению болезни, раннему развитию осложнений [45]. У 24 % мужчин и 70-90 % женщин заболевание протекает бессимптомно, при этом хламидийная инфекция выявляется у 25-50 % пациенток с воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ) и у 34 % мужчин с эпидидимитом [38].

У женщин основными клиническими формами данного заболевания являются уретриты и цер-вициты, наиболее распространенным осложнением - ВЗОМТ, протекающие бессимптомно у 40 % больных с развитием бесплодия в 25-75 % случаев [13, 45]. Отмечена связь хламидийной инфекции со злокачественными новообразованиями и развитием дисплазии шейки матки. Хламидии могут являться кофактором, способствующим прогрессированию неопластических процессов [1].

У мужчин основными клиническими формами являются уретрит и простатит, которые в 20-30 % случаев протекают без выраженных клинических симптомов. Как осложнения развиваются эпидиди-миты, орхоэпидидимиты, возникающие у 1-3 % больных с хламидийным уретритом с последующим развитием бесплодия [25]. Хламидии потенцируют аутоиммунные процессы в организме, результатом которых может стать болезнь Рейтера и иммунологическое бесплодие [23]. В 25 % случаев идиопатическое бесплодие у мужчин с наличием бессимптомной инфекции С. trachomatis коррелирует с наличием антиспермальных антител [22].

Значение урогенитального хламидиоза в инфекционной патологии человека определяется поражением не только мочеполовой системы и их последствиями, но и поражением других систем организма (сердечно-сосудистой, нервной, пищеварительной, дыхательной и др.) при генерализации инфекции. Особенностью таких заболеваний является скрытое, хроническое течение, несоответствие клинических проявлений морфологическим изменениям в пораженных тканях, выраженные дисфункциональные изменения в системе антиинфекционной резистентности организма, вследствие чего происходит распространение хламидий из мочеполовых органов в экстрагенитальные биотопы организма с формированием вторичных очагов инфекции [13, 27, 48]. Изучены лимфогенный, интракана-ликулярный пути распространения патогена, интранатальный, при прохождении плода через родовые пути матери [21]. Гематогенное распространение возбудителя чаще наблюдается при заболеваниях, вызванных сероварами D-K, что доказано выделением инфекционных форм патогена из сыворотки крови больных урогенитальным хламидиозом [24]. Обнаружение хламидий в мазках периферической

крови и лейкоконцентрате венозной крови (хламидемия) является важным лабораторным диагностическим критерием генерализованной формы хронической хламидийной инфекции [8, 30]. Широкое распространение, разнообразие патологических проявлений, склонность к диссеминированию позволяет рассматривать урогенитальную хламидийную инфекцию как проблему, следующую по значимости за ВИЧ-инфекцией.

С. trachomatis (семейство Chlamydiaceae, род Chlamydia) обладает рядом особенностей, важных для диагностики урогенитального хламидиоза [15]. Это облигатный внутриклеточный паразит, не способный размножаться вне клеток хозяина. Он не растет на питательных средах, культивируется в желточном мешке куриных эмбрионов. Хламидии имеют уникальный цикл развития, протекающий в цитоплазме клеток хозяина с использованием ферментов клетки-хозяина. Они не способны самостоятельно синтезировать АТФ, являясь энергетическими паразитами. Получены данные о способности хламидий синтезировать АТФ в незначительных количествах путем гликолиза и расщепления гликогена [6]. Хламидии - грамотрицательные бактерии, содержат ДНК и РНК, обладают цитоплазматиче-ской мембраной, клеточной стенкой. У них полностью отсутствует пептидогликан клеточной стенки и высококонсервативный ген FtsZ, ответственный за образование клеточной перегородки во время деления. Хламидии чувствительны к антибиотикам широкого спектра действия [21].

Выделяют 19 генотипов С. trachomatis, которые отличаются распространенностью в популяции, клеточным тропизмом, вирулентностью, иммуногенностью. Типирование хламидий не значимо для постановки клинического диагноза, но важно для эпидемиологии, изучения клинических проявлений, создания вакцины. У человека циркулируют штаммы 5 генотипов: К (42,6 %), G (23,1 %), Е (бесплазмидный) (19,2 %), F (7,7 %), J (3,8 %). При манифестной форме болезни чаще встречается генотип К (61 %). При стертой клинической картине в 37,5 % наблюдений определяется генотип Е. Разработано молекулярно-генетическое типирование штаммов С. trachomatis, выделенных от человека, на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) специфического участка гена Ompl. Это позволяет проводить внутривидовую дифференциацию хламидий в стандартных ПЦР-лабораториях [34].

Хламидии имеют уникальный цикл развития, включающий в себя три формы существования патогена [23, 29]. ЭТ (элементарное тельце) - экстрацеллюлярная, высокоинфекционная форма возбудителя, размером 250-300 нм, адаптированная к внеклеточному существованию, не способная к размножению. ЭТ обеспечивает диссеминацию бактерии в клетке или проникновение в другую чувствительную клетку. РТ (ретикулярное тельце) - интрацеллюлярная, неинфекционная форма репродукции размером до 1 ООО нм, которая обеспечивает продолжительность инфекции, «выживание» за счет строгой внутриклеточной локализации. Аберрантные тельца - некультивируемые формы, определяющие персистенцию патогена за счет нарушенного иммунного ответа, который он порождает. Эти формы морфологически и антигенно отличаются от ЭТ и РТ. Они в 10-100 раз крупнее, характеризуются сниженным уровнем синтеза главного белка и липополисахарида (ЛПС) наружной мембраны. Синтез белка теплового шока, обеспечивающего внутриклеточное выживание хламидий, поддерживается на высоком уровне. Вследствие почти 50 % гомологии по составу аминокислот аналогичного белка человека, в организме может усиливаться синтез аутоантител [13, 23, 45]. Проникновение хламидий в клетки происходит через трансмембранные каналы, которые содержат высокоаффинные сайты связывания и облегчения транспорта веществ, в том числе при эндоцитозе ЭТ. На поверхности клеток находится N-ацетил-нейраминовая кислота, взаимодействующая с ЭТ авирулентных штаммов хламидий. ЭТ эффективнее взаимодействует с клетками, специфически обедненными данными рецепторами. При поглощении ЭТ при пиноцитозе наблюдается специфическое взаимодействие рецепторов цитоплазматической мембраны с лигандами хламидий, что играет ведущую роль в инфицировании монослоя культуры клеток in vitro авирулентными штаммами, так как высоковирулентные штаммы могут эффективно проникать посредством фагоцитоза. Фагоцитоз инициируется взаимодействием паразита и хозяина, которое включает поверхностный заряд и гидрофобность поверхности клетки хламидий и клетки-хозяина [10].

При детекции и типировании хламидий для верификации возбудителя, установления источника и механизмов передачи инфекции необходимо учитывать антигенное строение хламидий, родовую, видовую, типовую специфичность. Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Выделяют три антигена (АГ): родоспецифический, видоспецифический, типоспецифический. В клеточной стенке хламидий содержится термостабильный ЛПС, являющийся родоспецифическим АГ. Эпитоп, определяющий родовую специфичность, расположен в углеводном участке и представлен трехмономерным олигосахаридом (З-деокси-О-манно-октулозоновая кислота) [45]. Детерминанты видоспецифических

и типоспецифических АГ термолабильны, белковой природы, локализованы в различных доменах интегрированных в нее белков наружной мембраны - Outer membrane proteins (Omp). Белки наружной мембраны хламидий - Ompl, Omp2 (OmcB), ОтрЗ (ОтсА) - обогащены цистеином. Ригидность клеточной стенки хламидий обусловлена наличием множественных дисульфидных поперечных связей между этими белками. Примерно 60 % общей массы белков наружной мембраны составляет главный структурный белок, формирующий мембранные поры, Ompl или МОМР. Его молекулярная масса составляет 40 кДа. Остальные АГ наружной мембраны представлены богатыми цистеином белками наружной мембраны второго типа с молекулярной массой 60 кДа. Белки МОМР и Отр2 содержат видо- и типоспецифические эпитопы, имеются родоспецифические эпитопы, что обусловливает возможность перекрестных реакций [5, 13].

Белок МОМР содержит 4 вариабельных домена - VDb VD2, VD3, VD4 (variable domain), несущих главные видо- и типоспецифические АГ детерминанты. Серовароспецифические участки локализованы преимущественно в VD2 и VD4. При генетической рекомбинации в этих участках изменяется антигенная структура С. trachomatis, ее рецепторный аппарат и бактерии становятся невидимыми для синтезированных антител. Так происходит антигенная мимикрия хламидий [13, 20]. Урогени-тальный хламидиоз вызывают серотипы D-K С. trachomatis. Хламидии одного и того же урогени-тального серовара могут содержать более одного серовароспецифического эпитопа.

МОМР присутствует в ЭТ и РТ. Его структура различна в этих формах. ЭТ содержат большое количество МОМР с перекрестными дисульфидными связями и богатые цистеином белки, массой 60, 125 и 15 кДа. Это определяет форму и осмотическую стабильность ЭТ. В нестабильных РТ МОМР не имеет перекрестных связей, богатые цистеином белки синтезируются и встраиваются в наружную мембрану хламидий на завершающих этапах цикла развития. МОМР является порином и адгезином, экспрессируется во всех фазах развития хламидий. Периплазматический насыщенный цистеином белок Отр2 (ОтсВ) массой 60 кДа присутствует только в мембране ЭТ. Он участвует в адгезии и взаимодействии с клетками организма, обусловливает вирулентность хламидий. ОтрЗ (ОтсА) белок 12 кДа - гидрофильный липопротеин, сходный по структуре с липопротеидами грамотрицательных бактерий. В наружной мембране хламидий имеется 9 полиморфных белков (Pomp), которые участвуют во взаимодействии хламидий с клетками хозяина. Протеины ОтрЗ, Pomp синтезируются в течение поздней фазы цикла развития и включаются в мембрану в процессе трансформации РТ в ЭТ [20]. Структурным белком клеточной стенки хламидий является термостабильный белок теплового шока (hsp) из семейства 60 кДа. Белок теплового шока хламидий является АГ. Он участвует в развертывании, свертывании, трансляции других белков, в сборке и разборке белковых комплексов в эндоплаз-матической сети и митохондриях. Такие белки-шапероны могут быть ошибочно приняты за признак аутоиммунного заболевания. Белок теплового шока активирует CD4 и CDg-лимфоциты. IgA AT к белкам теплового шока хламидий преобладают у женщин с первичным бесплодием и повторяющимися спонтанными абортами. Наличие высоких титров противохламидийных IgG, в особенности AT к hsp 60, в сыворотке крови человека не только не обеспечивает защиту от инфекции, но и ассоциируется с осложнениями и развитием хронической персистирующей инфекции. AT к hsp 60 С. trachomatis связывают с развитием перигепатитов и спаечного процесса [10, 14].

Геном С. trachomatis представлен двуспиральной ДНК, на 44 % состоящей из гуанина и цито-зина, с молекулярной массой 660 х 10б (Да), состоит из 1 000 пар нуклеотодов, содержит 9 генов Pomp. В зараженных клетках присутствуют транскрипты генов Pomp. Неизвестно, происходит ли синтез всех 9 мембранных белков. Большое количество генов Pomp является источником антигенной изменчивости хламидий. Почти все штаммы С. trachomatis содержат криптическую плазмиду, состоящую из 7 500 пар нуклеотидов. Выявление нуклеотидных последовательностей используется для диагностики (полимеразная цепная реакция, лигазная цепная реакция (ЛЦР)). Мультикопийная крип-тическая плазмида является отличной диагностической мишенью. Она может отсутствовать у 1-16 % клинических изолятов хламидий. В таких случаях ПЦР-тест-системы, направленные на детекцию плазмидной ДНК, дают ложноотрицательный результат. Для дифференциации и идентификации штаммов С. trachomatis друг от друга и от других видов используют вариабельные области в последовательностях рибосомальных ДНК, спейсорную область 16S-23S рРНК, ген МОМР, Отр2 [6, 14, 20, 45]. Среди штаммов С. trachomatis, выделяемых от человека, преобладают плазмидосодержащие (96 %), а среди штаммов от обезьян в 54 % случаев определяются бесплазмидные варианты. Бесплазмидные штаммы хламидий человека или обезьян обладают низкой вирулентностью, характеризуются образованием при культивировании множественных внутриклеточных включений, а у плазмидных штаммов выявлено формирование одного общего внутриклеточного включения [5, 14].

На основании особенностей жизненного цикла хламидий, их строения, взаимодействия с клетками организма, вызывающего мало- или асимптомное течение инфекции, часто характеризующейся пер-систентной или латентной формами заболевания со множеством клинических проявлений, можно сделать заключение о том, что в большинстве случаев единственным достоверным критерием верификации урогенитального хламидиоза являются результаты лабораторных исследований. Успешная борьба с урогенитальным хламидиозом возможна лишь при его своевременном и полном выявлении. Не существует единого алгоритма диагностического обследования пациентов с подозрением на хламидиоз, в том числе на генерализованные формы урогенитальной хламидийной инфекции. Диагноз «генерализованная форма хламидийной инфекции» основывается на анамнезе, клинической картине (интоксикация, персистирующая лимфоаденопатия, катаральный синдром, офтальмохламидиоз, поражение мочеполовых органов, сердечно-сосудистой, нервной системы и др.), подтверждается результатами лабораторных исследований. Важным диагностическим критерием является хламидемия [25].

Указанное выше обусловлено зависимостью результатов диагностики от выбора соответствующего метода лабораторного исследования, подготовки пациента к исследованию, качества взятия врачом-клиницистом материала для исследования, правильного хранения и транспортировки материала, предварительной подготовки материала и своевременного проведения исследования, материально-технического обеспечения лаборатории, квалификации персонала [19].

Урогенитальный хламидиоз диагностируют прямой детекцией С. trachomatis (выделение чистой культуры, цитологическое исследование мазков, реакция иммунофлюоресценции (РИФ), молеку-лярно-биологические методы) и непрямыми методами (серологические реакции, методы экспресс-диагностики - иммунохроматографический и ферментспецифический) [6, 10, 14, 20]. «Золотым стандартом» лабораторной диагностики урогенитального хламидиоза является культуральный метод. Клиническим материалом, полученным от больного, заражают монослой культуры клеток McCoy, PL, HeLa-920, Нер-2, BGMK, культуру мышиных фибробластов L-929, обработанную антиметаболитами, цитостатиками [6, 15, 25]. Через 48-72 часа клетки фиксируют, окрашивают, оценивают результаты под микроскопом по наличию специфических внутриклеточных включений методами прямой или непрямой РИФ с моноклональными или поликлональными флюоресцирующими противо-хламидийными AT). При отрицательном результате рекомендуется посеять материал повторно. Выявление хотя бы одного цитоплазматического включения, имеющего специфическое окрашивание, форму, структуру, достаточно для констатации наличия хламидий в аналите. Для повышения адсорбции и проникновения хламидий в клетки культуру клеток перед заражением обрабатывают различными поликатионами (DEAE-декстран-диэтиламиноэтилдекстран). Клетка хозяина и мембрана хламидий отрицательно заряжены. Поликатионы нейтрализуют анионную поверхность бактерии, создавая условия для контакта. После заражения в питательную среду добавляют антиметаболиты (цикло-гексимид, L-цистеин гидрохлорид, гидрокортизон, колхицин), ингибирующие метаболизм культуры клеток, не влияющие на хламидии и косвенно стимулирующие их репродукцию [20]. Для культивирования широко используются клетки McCoy, обработанные циклогексимидом [45]. Для подавления сопутствующей микрофлоры в питательную среду добавляют антибиотики и антимикотики в дозах, не ингибирующих размножение хламидий и не обладающих токсичностью для культуры клеток. Вирулентность и инфекционность хламидий увеличивается при центрифугировании культуры клеток с материалом. Культивирование хламидий в культуре клеток позволяет проводить определение их чувствительности к антибиотикам и выявлять штаммы, не содержащие плазмиду [6, 15, 45]. Четкие критерии определения штамма чувствительного или устойчивого к данному антибиотику отсутствуют, поскольку системы in vitro не учитывают роль иммунитета хозяина в элиминации патогена [39].

Культуральный метод - самый трудоемкий и дорогостоящий, длительный (3-14 суток), требующий соблюдения строгих правил транспортировки клинического образца и температурного режима, наличия квалифицированного медицинского персонала. По специфичности (100 %) он является эталоном, однако его чувствительность может варьировать от 33 до 85 % [16, 19, 51]. Для выявления урогенитального хламидиоза рекомендуется использовать материал из уретры и цервикального канала, что позволяет увеличить выделение хламидий на 5 % [45]. При неактивном хламидиозе, когда в РТ хламидий приостанавливаются метаболические процессы, в культуре клеток можно получить ложноотрицательные результаты. Этим обусловлены трудности диагностики хронической персисти-рующей хламидийной инфекции. При хронической восходящей инфекции, вызванной С. trachomatis, а также при взятии у пациента с хламидиозом материала с низким количеством жизнеспособных бактерий удельный вес выявления хламидий невелик [20]. При детекции в культуре клеток хламидий для повышения чувствительности культурального метода применяются ПЦР-тест-системы для видовой

дифференциации ДНК С. pneumoniae и С. trachomatis, а также для верификации криптических плаз-мид у штаммов С. trachomatis. Это исключает ложные результаты, которые регистрируются при применении меченных флуоресцеин-изотиоцианатом (ФИТЦ) моноклональных антител и окраски по Романовскому-Гимзе или раствором Люголя [5].

Цитологический метод диагностики прост и доступен. Он дает общее представление о цитологической картине, морфологии клеток из очага поражения, наличии микробного обсеменения, мицелия грибов, простейших. Морфологические признаки позволяют определить наличие хламидий в препарате. Препараты окрашивают по Романовскому-Гимзе, Маю-Грюнвальду-Гимзе, МакКиавелло, Папаниколау, раствором Люголя [15, 19, 45]. При окраске по Романовскому-Гимзе включения хламидий выявляются как округлые или овоидные структуры, состоящие из красно-фиолетовых ЭТ и сине-фиолетовых РТ. В препарате можно оценить морфофункциональное состояние лимфоцитов и ней-трофилов. Наличие в препарате телец Гальберштедтера-Провачека подтверждает диагноз хламидио-за, однако их отсутствие его не исключает. На частоту обнаружения включений существенное влияние оказывает характер течения инфекционного процесса, качество соскобных препаратов. Чувствительность метода составляет 10-15 %, специфичность - 10-30 % [13]. Метод неприменим для скрининга. Диагностическая значимость цитологического метода низкая: у мужчин верифицировать хла-мидийную инфекцию удается лишь в 10-15 %, а у женщин - до 30—40 % случаев (в соскобах из цер-викального канала) [19]. При правильном взятии материала от больных (со слизистых влагалища и щеки) и при соответствующей квалификации врача диагностическая значимость световой микроскопии для обнаружения хламидий не уступает прямой РИФ и превосходит ИФА. С учетом выявленной в других исследованиях высокой специфичности (95,8 %), микроскопию мазка, окрашенного по Романовскому-Гимзе, можно рекомендовать для повышения достоверности диагностики, особенно при остром течении процесса [22, 31].

Серологический метод позволяет обнаружить в биологическом материале (моча, мокрота, соскоб из уретры, цервикального канала, ротоглотки, эякулят, сок предстательной железы, сыворотка крови, лейкоконцентрат, мазки периферической крови, суставная жидкость) наличие либо родо- или видоспе-цифического АГ - РИФ, либо специфических антихламидийных AT классов IgA, IgM, IgG - ИФА.

В РИФ определяют АГ хламидий в эпителии и других тканях со специфическими монокло-нальными или поликлональными AT к ЛПС, МОМР, рекомбинантным АГ. Чувствительность РИФ зависит от качества люминесцирующих AT [5]. При производстве AT для «РекомбиСлайдХламидия» НПФ ЛАБдиагностика используется первый в России генно-инженерный рекомбинантный белок, состоящий из видоспецифических эпитопов (к МОМР) поверхностного антигена С. trachomatis. При использовании моноклональных AT преимущественно окрашиваются ЭТ хламидий, в меньшей степени РТ. Применение поликлональных хламидийных AT позволяет выявлять все формы (элементарные, цитоплазматические включения, персистирующие, переходные, ретикулярные) хламидий. Кроме импортных наборов («Chlamyset», Финляндия, «Syva Micro Trak», США), широко применяются отечественные моноклональные AT («ХлаМоноСкрин», «ХлаМоноСкрин-2»), Набор поликлональных AT «РекомбиСлайдХламидия» позволяет качественно обнаруживать все формы С. trachomatis на разных стадиях их развития [10].

Существует два варианта РИФ - прямой (ПИФ) и непрямой (РНИФ). В первом случае специфические AT метят флюрохромом, реакция проходит в один этап. Во втором случае специфическое AT не имеет метки, для выявления образовавшегося комплекса АГ-АТ используются меченые антииммуноглобулины. Результат реакции оценивают визуально под люминесцентным микроскопом. Результат признается положительным в том случае, если препарат содержит клетки эпителия и удается обнаружить не менее 5-10 ярко-зеленых флюоресцирующих ЭТ [13,20,29].

ПИФ и РНИФ широко применяются для диагностики урогенитального хламидиоза. Их дальнейшее применение сдерживается тем, что их специфичность и чувствительность находятся в пределах 85-99 и 50-90 %, соответственно [13, 19, 36, 41, 51]. Это связано с тем, что специфические AT выпускаются разными фирмами и различаются по своему качеству. Помимо жестких условий к качеству тест-систем важное значение для получения достоверных результатов имеют подготовка пациентов к исследованию, взятие материала для исследования, дальнейшая его обработка и хранение. Для получения достоверных результатов необходимы квалифицированные специалисты по люминесцентной микроскопии. Только при корректном исполнении ПИФ очень чувствительна и высокоспецифична [37, 41, 47]. ПИФ целесообразно использовать для диагностики в группах высокого риска по урогенитальному хламидиозу, особенно у пациентов с клиническими проявлениями инфекций, передаваемых половым путем, и не оправдано для выявления АГ С. trachomatis в группах

низкого риска, в том числе подлежащих скрининговому обследованию [37, 49]. При сравнении ПЦР и ПИФ для индикации С. trachomatis в уретральных и цервикальных образцах, в основном с низким содержанием ЭТ, установлено, что чувствительность ПИФ в 10 раз выше, чем ПЦР. Диагностическая информативность ПИФ связана с ее способностью выявлять не только корпускулярные, но и растворимые АГ хламидий. Показатели РИФ менее зависят от изменения тинкториальных свойств хлами-дий в процессе развития инфекции, особенно при этиотропной терапии [20].

ИФА выявляет родоспецифический ЛПС хламидий. На рынке предлагается большое количество наборов зарубежных и отечественных диагностических ИФА тест-систем. ИФА удобен для скри-нинговых исследований, поскольку возможна объективная приборная регистрация результатов анализа. Чувствительность и специфичность ИФА составляет 20-98 и 80-99 %, соответственно. При хронической инфекции, особенно при персистенции хламидий, вероятность детекции возбудителя невелика, что ведет к ложноотрицательным результатам [20, 43, 51]. В ИФА преимущественно определяют наличие и титр противохламидийных AT - IgM, IgA, IgG в сыворотке крови, что перспективно при определении стадии и характера течения болезни [29, 43]. Если образец для ИФА конъюгиро-ван с пероксидазой, можно получить ложноположительный результат, поскольку многие микроорганизмы и клетки организма обладают собственными пероксидазными системами. Поэтому ИФА повсеместно отвергнут при выявлении АГ, но остается ведущим для серодиагностики [25]. Часто ложноположительный результат ИФА встречается при определении специфических AT класса IgM и может быть обусловлен наличием ревматоидного фактора, физиологической гиперпродукцией IgM при беременности, перекрестной реакцией с АГ других возбудителей, аутоиммунным процессом, нарушением обмена веществ [44].

Хламидии обладают низкой иммуногенностью, выработка AT в организме происходит в низких титрах. Кровь для исследования лучше брать в период обострения заболевания. Это позволяет обнаруживать антихламидийные AT, как правило, лишь у 55-65 % больных при наличии в 2-5 % случаев ложноположительных результатов [25]. Титр AT зависит от иммунореактивности организма и скорости их элиминации из него. Постановка диагноза хламидиоза по единичному анализу возможна лишь при наличии высокого титра противохламидийных AT преимущественно IgM. IgM в сыворотке крови является ранним маркером инфекции и определяется через 5 дней после начала заболевания и полностью исчезает через 2-3 месяца независимо от проведенного лечения. IgA вырабатываются в сывороточной и секреторной формах. slgA синтезируется в месте проникновения патогена - сначала выявляется в эякуляте и вагинальном отделяемом. В сыворотке крови IgA появляется через 10-14 дней от начала заболевания, обычно параллельно появлению IgG, только в более низком титре и свидетельствует о прогрессировании заболевания. Титр IgA обычно снижается к 2—4 месяцу при успешном лечении, при реинфекции их титр нарастает. IgA является маркером как острой формы, так и манифестации при хронической форме инфекции. В течение короткого периода в крови присутствуют IgM и IgA. Определение IgA более информативно в качестве маркера активной стадии хламидийной инфекции или при мониторинге эффективности лечения, так как эти AT имеют небольшой период полураспада. В этот же период или чуть позже могут быть выявлены IgG. После перенесенной инфекции IgG могут определяться в низком титре в течение многих лет. При реинфекции или реактивации наблюдается увеличение титра IgG, который у пациентов, не подвергавшихся лечению, сохраняется неизменным. Высокий титр антихламидийных IgG диагностически важен при хронической или системной инфекциях [20]. Более корректно определять сероконверсию противохламидийных AT (IgA, IgG) в парных сыворотках. Выявление 2-3-кратного снижения титра AT указывает на адекватность и эффективность проводимых лечебных мероприятий. 4-кратная сероконверсия свидетельствует об обострении или прогрессировании заболевания. Для верификации персистирующей хламидийной инфекции целесообразна постановка ИФА не только на наличие AT классов IgA, IgM, IgG, но и для определения IgG к hsp 60 хламидий [6, 27, 42]. ИФА важно для эпидемиологических обследований пациентов групп риска, особенно в экономически отсталых странах [45, 49].

Серодиагностика хламидийной инфекции до настоящего времени недостаточно успешна, поскольку заболевание вызывается низкоиммуногенным возбудителем. AT к хламидиям сохраняются длительное время, поэтому даже у здорового населения может отмечаться фоновый титр AT к хламидиям. При продолжительной и осложненной хламидийной инфекции можно использовать серологический метод. РНИФ - точна, но для ее постановки требуется высокая профессиональная подготовка. РНИФ является основой для дифференциации С. trachomatis и диагностики заболеваний у определенных категорий больных, к которым относятся дети с перинатальными пневмониями, больные с тяжелыми формами генерализованной хламидийной инфекции. Выявление AT к хламидиям только в

одном образце сыворотки даже в титре 1 : 8 - 1 : 16 может свидетельствовать как о текущей хлами-дийной инфекции, так и о наличии следовой реакции, связанной с любым перенесенном в прошлом заболевании хламидийной этиологии. Нарастание титра хламидийных AT до 1 : 64 - 1 : 256 и выше даже в одном образце сыворотки при длительно текущих и осложненных формах инфекции отражает нарастание гуморального иммунного ответа организма и при соответствующих результатах клинико-эпидемиологического анализа и учете анамнеза приобретает диагностическое значение. РНИФ позволяет проводить идентификацию хламидий до вида при наличии соответствующих тест-объектов и титровании сывороток по отношению к конкретным видам возбудителей. Высокую специфичность и информативность (90 %) имеет РНИФ для определения уровня специфических иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови [15, 25].

Молекулярно-генетические методы диагностики, основанные на выявлении ДНК или РНК хламидий, в последние годы заняли место «золотого стандарта», которое ранее принадлежало культу-ральному методу [13, 14, 23]. Разработан гибридизационный анализ на основе меченых ДНК-зондов. Зондами являются фрагменты ДНК, полученные путем клонирования в плазмидных или фаговых векторах специфических участков исследуемых объектов, и искусственно синтезированные одноце-почечные олигонуклеотиды, последовательность которых комплементарна определенному специфическому участку генома хламидий. Чувствительность метода составляет 70-85 %, его преимуществом является возможность тестирования большого количества образцов, быстрота, автоматизация, он может применяться только для образцов материала, полученных инвазивными методами (из шейки матки, уретры) [7].

ДНК-диагностика основана на комплементарном взаимодействии нуклеиновых кислот, позволяющем с высокой точностью идентифицировать последовательность нуклеотидов в генах искомого микроба. Широкое распространение получила ПЦР. В ее основе лежит многократная амплификация фрагмента ДНК, который является маркерным для данного возбудителя. С помощью ПЦР можно обнаружить плазмидную ДНК С. trachomatis, фрагменты хромосомной ДНК, кодирующие МОМР, ри-босомальную РНК и др. При амплификации может образоваться 1 млрд копий ДНК-мишени, которые обнаруживаются с помощью электрофореза в геле, либо гибридизацией со специфичным зондом с последующим выявлением гибридов в ИФА. Преимуществом ПЦР является высокая чувствительность (70-95 %) и специфичность (97-99 %), возможность тестирования большого числа образцов [26, 37, 46, 51]. При помощи ПЦР возможно получение практически неограниченных количеств специфической ДНК. ПЦР применяют для детекции ДНК хламидий и типирования штаммов. Причиной невоспроизводимости результатов является низкое качество реагентов для ПЦР, обусловленное инактивацией наиболее лабильных реагентов тест-систем (праймеры, ДНК-полимераза), неадекватно выбранная генетическая мишень. Считалось, что самыми чувствительными диагностическими системами для ПЦР являются те, что ориентированы на детекцию критической плазмиды, поскольку каждая клетка С. trachomatis содержит 10-20 копий плазмидной ДНК. Но у некоторых клинических изолятов количество бесплазмидных штаммов С. trachomatis варьирует от 1 до 16 %, что означает большую вероятность ложноотрицательных результатов, проверить которые в лаборатории практического здравоохранения проблематично. Для достижения высокой чувствительности и специфичности в качестве мишени используют консервативные внутри вида фрагменты генов, не гомологичных родственным генам других видов. Идеальной мишенью оказался ген Kdo-трансферазы (gseA), кодирующий фермент, принимающий участие в синтезе одного из основных родоспецифических компонентов ЛПС. Эта тест-система обладает высокой специфичностью при относительно низкой чувствительности, что не позволяет использовать ее для диагностики хламидиоза [6]. ПЦР ставится с инвазивными (шейка матки, уретра) и с неинвазивными образцами (моча, биоматериал из области вульвы и влагалища). Чувствительность при исследовании вагинальных проб методом ПЦР может быть низкой (53-73 %). Этот материал может быть использован при проведении скрининговых эпидемиологических исследований [28].

Качество ПЦР-диагностики зависит от специфичности используемых праймеров, строгого соблюдения технологического режима, квалификации исследователя. Возможно получение ложнопо-ложительных результатов вследствие некачественно подобранных праймеров и ложноотрицательных результатов из-за ингибирования реакции. ПЦР не требует сохранения жизнеспособности возбудителя, однако необходимо соблюдать строгие требования к условиям транспортировки клинического материала, особые нормативы для предупреждения контаминации лаборатории ДНК, что может существенно влиять на результат анализа [45, 51]. Следует учитывать высокую стоимость исследования, обусловленную дороговизной качественных праймеров, и лабораторного оборудования,

что ограничивает применение ПЦР в лабораторной практике.

С помощью биоинформационного анализа синтезированы праймеры для видовой мультиплексной детекции и идентификации С. pneumoniae и С. trachomatis у человека и обезьян, а также для детекции штаммов С. trachomatis, несущих плазмиду и свободных от нее. Предлагаемые ПЦР-тест-системы применяются для прямой детекции С. pneumoniae и С. trachomatis в образцах клинического материала и в культуре клеток [32, 35].

Помимо ПЦР созданы альтернативные технологии - LCR (ligase chain reaction), NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification), TMA (Transcription-Mediated Amplification), SDA (Strand Displasment Amplification), и др., с помощью которых выявляют С. trachomatis. В основе ЛЦР лежит легирование олигонуклеотидов, комплементарных определенной ДНК-мишени. В ЛЦР используется способность ДНК-лигазы соединять две пары комплементарных олигонуклеотидов после их гибридизации in vitro, что выявляется с помощью анализатора. ЛЦР может быть использована для анализа уретральных, эндоцервикальных образцов и проб мочи, при этом отмечается повышенная чувствительность определения С. trachomatis в моче у женщин [49].

Амплификация с применением QB-репликазы, копирующей РНК-матрицу, основана на внедрении одноцепочечного олигонуклеотидного зонда в молекулу РНК, которая может быть амплифици-рована экспоненциально после гибридизации мишени ферментом QB-репликазой [50]. В NASBA -амплификация нуклеиновых кислот на основе сиквенса - амплифицируется РНК при одновременном использовании ферментативной активности обратной транскриптазы вируса миелобластоза птиц, РНКН, Т7РНК-полимеразы в изотермальных условиях [52]. TMA (Gen-Probe) - транскрипционная амплификация, основана на амплификации с помощью транскрипции и гибридизации для качественного определения рибосомальной РНК С. trachomatis в исследуемых пробах (мишенями являются гены 16S рРНК). Использование двух праймеров и двух ферментов создает возможность транскрипции ДНК и последующих РНК ампликонов в изотермальных условиях [20]. На основе изотермической реакции аналогично ТМА и NASBA, но с использованием в качестве мишени молекулы ДНК, разработаны методы амплификации со смещением или вытеснением цепи (SDA). Для диагностики урогенитального хламидиоза рекомендуется использовать МАНК: ПЦР, ЛЦР, ПЦР-РВ [45].

Методы экспресс-диагностики хламидиоза - иммунохроматография (ИХ) и ферментспецифи-ческие тесты. ИХ основана на образовании комплекса АГ-АТ-цветной латекс, который формирует окрашенную зону на нитроцеллюзном фильтре. В основе ИХ лежит комбинация конъюгата монокло-нальных AT и коллоидного золота с поликлональными AT, иммобилизированными на твердой фазе, что позволяет идентифицировать ЛПС хламидий. Оценка ИХ-теста происходит по характерному окрашиванию в лунке плашки, чувствительность ИХ составляет 87,5 %. Ферментспецифические тесты заключаются в расщеплении синтетического субстрата пептидазой хламидий и пурпурном окрашивании под действием хромогена продукта реакции непосредственно на тампоне с клиническим образцом. Оба теста скрининговые, обладают относительно невысокой чувствительностью (50-60 %), но простые и быстрые в использовании [6,20].

Для верификации урогенитальной хламидийной инфекции предложен и апробирован новый способ диагностики - реакция специфического лейкоцитолиза (РСЛ), основанная на определении в крови высокого показателя разрушения лейкоцитов у больных урогенитальным хламидиозом. РЛС обладает высокой чувствительностью (100 %) и может быть использована в качестве подтверждающего теста в комплексной диагностике урогенитальных заболеваний [18].

Ключевым звеном в распознавании организмом патогенов являются образраспознающие рецепторы врожденного иммунитета - То11-Нке-рецепторы (TLR), составляющие основу мембранных комплексов и экспрессирующие на всех клетках, участвующие в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек. Описан способ диагностики урогенитального хламидиоза, заключающийся в том, что в соскобном материале из уретры с использованием ПЦР-РВ определяют уровни экспрессии TLR-2 и TLR-4 в значении не более 5 единиц. Низкие уровни данных рецепторов указывают на хронизацию инфекционного процесса [3]. TLR слизистых оболочек урогенитального тракта через цитокиновую систему запускают местную воспалительную реакцию, определяют уровни IgG, slgG, секреторного компонента (sc). Высокие уровни экспрессии TLR-2, TLR-4, концентрации IL-8 в цервикальном канале у больных острым хламидиозом расценивают как компенсаторную реакцию организма, направленную на локализацию патогена в очаге воспаления (шейка матки). Низкие показатели уровней TLR-2, TLR-4, повышенные IL-8 у женщин с хроническим хламидиозом свидетельствуют о нарушении местного иммунитета и менее выраженном локальном воспалении. Активация воспалительного процесса в цервикальном канале характеризуется повышением содержания

TNF-a, TLR-2, TLR-4. IL-6 выступает в роли медиатора острого воспаления. Низкое содержание INF-y является фактором хронизации инфекционного процесса. IL-1(3 усиливает воспалительный ответ путем стимуляции продукции цитокинов неинфицированными клетками [2].

Сформирована основа лабораторной диагностики урогенитального хламидиоза, позволяющая в большинстве случаев достоверно устанавливать наличие патогена, динамику воспалительного процесса, эффективность проводимой терапии, критерии излеченности [6]. Выбор метода диагностики и способ оценки результатов при урогенитальном хламидиозе имеет важное значение. Ни один из существующих методов диагностики урогенитальной хламидийной инфекции не является оптимальным. «Золотым стандартом» стал грамотный комплексный подход к диагностике хламидиоза - подтверждение наличия возбудителя двумя или тремя различными методами [4, 6, 23, 40]. Будущее в диагностике хламидиоза принадлежит ПЦР, особенно ПЦР-РВ и NASBA, которые могут быть использованы в качестве арбитражного подтверждающего теста и для контроля излеченности [28].

Перспективными прямыми методами индикации хламидий является ПЦР-исследование клинического материала (мазки-соскобы), культуральный метод с детекцией возбудителя ПЦР или окраской по Романовскому-Гимзе с одновременным выявлением как несущих криптическую плазмиду, так и свободных от нее штаммов хламидий. Последнее позволяет прогнозировать характер течения инфекции и повышать эффективность проводимой терапии [4].

Предложена оценка степени информативности различных методов лабораторной диагностики урогенитального хламидиоза в зависимости от характера течения инфекционного процесса. Сильная корреляционная связь отмечена при клинически выраженной форме инфекции - с положительными результатами ПЦР и ИФА, средняя - с положительными результатами культурального и цитологического исследования. При стертом течении хламидийной инфекции наибольший процент положительных результатов дают ПЦР и ИФА [31]. Разработан способ прогнозирования манифестной или стертой формы хламидийной инфекции человека или обезьян на основе ПЦР, обеспечивающий выбор оптимальных вариантов лечения при хламидийной инфекции. Для этого проводят мультиплексную ПЦР с сочетанием двух новых пар праймеров (Ctr и R, PLf и PLr), специфичных для С. trachomatis. Манифестную форму хламидийной инфекции человека или обезьян прогнозируют при положительной ПЦР с праймерами Ctr, R, PLf, PLr; стертую форму - при положительной ПЦР с праймерами Ctr, R и отрицательной ПЦР - с праймерами PLf и PLr [33]. Спонтанная хламидийная инфекция у обезьян, вызванная штаммами хламидий, гомологичными человеческим, может служить моделью для изучения хламидиоза человека. Данная модель может использоваться при апробации фармакологических препаратов, необходимых для профилактики и лечения хламидиоза у человека [14].

В настоящее время отсутствует не только единый алгоритм обследования больного с подозрением на урогенитальную хламидийную инфекцию, особенно на распространенную форму урогенитальной хламидийной инфекции с затяжным, рецидивирующим характером течения заболевания, но и единое мнение о трактовке полученных результатов. Для достоверной верификации возбудителя при генерализованной хламидийной инфекции необходимо расширять перечень исследуемых клинических образцов от больных не только из урогенитального тракта, но и из других органов и систем. Важным лабораторным диагностическим критерием при этом является обнаружение хламидий в крови, что позволяет объективно диагностировать генерализованную форму урогенитальной хламидийной инфекции [17, 25]. В этой связи решающее значение в постановке диагноза хронической генерализованной урогенитальной хламидийной инфекции и прогноза ее течения приобретают методы молекулярной диагностики на основе современных технологий и, в частности, газо-хроматографического и масс-спектрометрического (ГХ-МС) анализа биологического материала от больных хламидиозом [9, 21].

Установлены молекулярные маркеры инфекционной патологии почек при хронической генерализованной хламидийной инфекции - 2-пропанамид, N-амино-оксиметиламид, 2-метил-5-(1 -метил-этил)-фенол, 4-4-дигидроокси-дифенил-сульфон. При их концентрации в моче 0,002-0,06 ммоль/л, 0,002-0,06 ммоль/л, 0,003-0,11 ммоль/л, 0,002-0,05 ммоль/л, соответственно, диагностируют инфекционную патологию почек, вызванную С. trachomatis, до начала манифестации развернутых клинических проявлений заболевания. Ранняя этиологическая диагностика специфической инфекционной патологии почек способствует проведению адекватной и эффективной терапии. Разработанные ГХ-МС диагностические критерии почечной патологии при хронической генерализованной хламидийной инфекции имеют высокий уровень диагностической чувствительности (69,1-80,9 %), диагностической специфичности (77,5-95,0 %), диагностической предсказуемости положительной (75,7-94,4 %), диагностической предсказуемости отрицательной (71,3-82,6 %) [10].

Разработка современных, недорогих, высокочувствительных и специфичных методов лабораторной диагностики урогенитального хламидиоза остается актуальной и имеет важное значение для медицинской науки и практического здравоохранения.

Список литературы

1. Афанасьев, М. С. Вирусно-бактериальная природа дисплазии и рака шейки матки / М. С. Афанасьев,

B. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, С. А. Леваков, А. А. Воробьев, И. С. Сидорова, Ю. В. Несвижский // Вестник РАМН. - 2004. - № 6. - С. 35-40.

2. Афанасьев, С. С. Связь уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 с изменениями цитокинового профиля урогенитального тракта при урогенитальном хламидиозе у женщин / С. С. Афанасьев, А. Л. Байракова, Е. А. Воропаева, В. А. Алешкин, А. П. Топтыгина, О. Г. Гречишникова, О. М. Кострова, В. А. Метельская, М. С. Афанасьев, Е. А. Егорова, В. В. Слободенюк, Е. В. Фандеева, Л. И. Кафарская, Б. А. Ефимов, А. Н. Шко-поров, А. В. Караулов, Ю. В. Несвижский, С. А. Леваков, Д. Л. Теплый, О. В. Рубальский, Е. О. Рубальский // Естественные науки. - 2008. - № 4 (25). - С. 62-73.

3. Байракова, А. Л. Пат. 2327995 Рос. Федерация, МПК G01N 33/569, C12Q 1/68 Способ диагностики хронического урогенитального хламидиоза / А. Л. Байракова, В. А. Алешкин, Е. А. Воропаева, С. С. Афанасьев, Л. И. Кафарская, О. М. Кострова, Ю. В. Несвижский, О. В. Рубальский, О. Г. Гречишникова, В. А. Метельская, А. Н. Шкопоров, Б. А. Ефимов, А. А. Куракова, Е. А. Егорова, К. В. Поздняков, М. С. Афанасьев, А. М. Затева-лов, Е. В. Хохлова; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. — № 2007123483/15; заявл. 25.06.2007; опубл. 27.06.2008. Бюл. № 18.

4. Гречишникова, О. Г. Сравнительный анализ прямых методов лабораторной диагностики урогенитального хламидиоза / О. Г. Гречишникова, В. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, В. В. Слободенюк, А. В. Караулов, Ю. В. Несвижский, О. В. Рубальский, Е. А. Воропаева, М. С. Афанасьев, В. А. Метельская, А. Л. Байракова, Е. А. Егорова, Е. О. Рубальский // Астраханский медицинский журнал. - 2010. - Т. 5, № 2. - С. 80-86.

5. Гречишникова, О. Г. Фенотипическая характеристика штаммов хламидий, выделенных от человека и обезьян культуральным методом / О. Г. Гречишникова, В. В. Слободенюк, В. А. Алешкин, Б. А. Лапин,

C. С. Афанасьев, В. Ф. Ликов, Е. А. Воропаева, Э. К. Джикидзе, Ю. В. Несвижский, Н. В. Воложанцев, Н. Н. Полещук, Э. А. Светоч, И. А. Дятлов, М. С. Афанасьев, О. В. Рубальский, В. А. Метельская, А. Л. Байракова, Л. В. Рубанин, Е. А. Егорова, Е. О. Рубальский, 3. Б. Квачева, И. В. Евсегнеева, А. В. Караулов // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2009. - № 3. - С. 44—53.

6. Дмитриев, Г. А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций / Г. А. Дмитриев. - М.: Медицинская книга; Н. Новгород : Изд-во НГМА, 2003. - 336 с.

7. Европейские стандарты диагностики и лечения заболеваний, передаваемых половым путем / гл. ред. К. Рэдклиф; пер. с англ. под ред. В. П. Адаскевича. - М.: Медицинская литература, 2006. - 272 с.

8. Зур, Н. В. Подострый тиреоидит как проявление генерализованной хламидийной инфекции / Н. В. Зур, А. Ю. Миронов // Человек и его здоровье: Курский научно-практический вестник - 2010. - № 4. - С. 60-66.

9. Зур, Н. В. Роль системы Quorum sensing при хронической урогенитальной хламидийной инфекции / Н. В. Зур, А. Ю. Миронов, В. Г. Истратов // Клиническая лабораторная диагностика. - 2015. - № 10. - С. 54—57.

10. Зур, Н. В. Современные методы лабораторной диагностики урогенитальной хламидийной инфекции / Н. В. Зур, А. Ю. Миронов // Человек и его здоровье : Курский научно-практический вестник - 2010. - № 2. -С. 33-42.

11. Зур, Н. В. Пат. 2539386 Рос. Федерация, МПК G01N 33/50 Способ диагностики инфекционной патологии почек / Н. В. Зур, А. Ю. Миронов, Е. Е. Рубальская; заявитель и патентообладатель Н. В. Зур, А. Ю. Миронов, Е. Е. Рубальская. - № 20131264443/15; заявл. 10.06.2013; опубл. 20.01.2015. Бюл. № 2.

12. Исаков, В. А. Лабораторная диагностика урогенитального хламидиоза. Сообщение 1. Распространенность, свойства и классификация хламидийной инфекции : аналитический обзор / В. А. Исаков, Л. Б. Куляшова, Л. А. Березина, А. В. Закревская // Terra Medica. - 2012. - № 1. - С. 11-17.

13. Инфекции, передаваемые половым путем / под ред. В. А. Аковбяна, В. И. Прохоренкова, Е. В. Соколовского. - М.: Медиа Сфера, 2007. - 744 с.

14. Караулов, А. В. Хламидийная инфекция. Новые аспекты патогенеза, иммунологии, верификации и лечения инфекции у человека и приматов / А. В. Караулов, С. С. Афанасьев, В. А. Алешкин, Б. А. Лапин, Е. А. Воропаева, М. С. Афанасьев, В. В. Слободенюк, А. В. Алешкин, А. Л. Байракова, О. Г. Гречишникова, И. А. Дятлов, X. М. Галимзянов, И. В. Евстигнеева, Э. К. Джикидзе, О. В. Рубальский, Ю. В. Несвижский, А. Ю. Миронов, О. Г. Фотиади, Л. И. Кафарская, О. М. Кострова, А. П. Топтыгина, Н. С. Матвеевская, Д. С. Афанасьев, Е. О. Рубальский, Э. А. Светоч, С. Ю. Пчелинцев, О. В. Логунов, Л. И. Новикова, В. Ф. Ликов. - М. : Изд-во Первого МГМУ им. И. М. Сеченова, 2012. - 256 с.

15. Колкова, Н. И. К вопросам диагностики хламидийных инфекций / Н. И. Колкова, В. Р. Мартынова // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - № 2. - С. 20-21.

16. Кудрявцева, Л. В. Клиника, диагностика и лечение хламидийной инфекции : пособие для врачей / Л. В. Кудрявцева, О. Ю. Мисюрина, Э. В. Генерозов, В. М. Говорун, А. А. Бурова, В. Е. Маликов, Е. В. Лилова, Э. А. Баткаев. — М.: Российская медицинская академия последипломного образования, 2001. — 29 с.

17. Лобзин, Ю. В. Хламидийные инфекции / Ю. В. Лобзин, Ю. И. Ляшенко, А. Л. Позняк. - СПб. : ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2003. - 400 с.

18. Мананков, В. В. Диагностическое значение реакции лейкоцитолиза у больных хламидиозом / В. В. Ма-нанков, Т. П. Пашанина, В. П. Смелянский // Информационный сборник. — Сер. : Медицина. — Вып. 4. — Аллергия, астма и клиническая иммунология. — М., 1997. — С. 76.

19. Медицинская лабораторная диагностика : справочник / под ред. проф. А. И. Карпшценко. - СПб. : Интермедика, 1997. - 304 с.

20. Метельская, В. А. Современные методы лабораторной диагностики хламидиозов / В. А. Метельская, В. А. Алешкин, В. В. Зверев, О. Г. Гречишникова, Е. А. Воропаева, С. С. Афанасьев, Ю. В. Несвижский, М. С. Афанасьев, А. Л. Байракова, Е. А. Егорова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2008. — №4.-С. 111-117.

21. Миронов, А. Ю. Молекулярные маркеры патогенов / А. Ю. Миронов, Н. В. Зур. - М.: ООО «Тираж», 2013.-184 с.

22. Миронов, А. Ю. Современные подходы к лабораторной диагностике урогенитальной хламидийной инфекции : лекция / А. Ю. Миронов, Н. В. Зур // Клиническая лабораторная диагностика. - 2013. - № 7. - С. 29-36.

23. Молочков, В. А. Урогенитальный хламидиоз / В. А. Молочков. - М.: БИНОМ, 2006. - 208 с.

24. Пашко, Ю. П. Особенности распространения в организме Chlamydia trachomatis при хроническом течении урогенитального хламидиоза и детекция возбудителя в сыворотке крови / Ю. П. Пашко, Н. А. Зигангиро-ва, Л. Н. Капотина, Е. Ю. Моргунова, Н. И. Колкова, Л. В. Диденко // Фундаментальные исследования. — 2010. — №7.-С. 50-57.

25. Позняк, А. Л. Особенности лабораторной диагностики хламидиозов с системными проявлениями / А. Л. Позняк, Н. В. Михайлов, А. О. Яковлев, В. М. Мудрицкий, Н. В. Нуралова, М. Н. Сидорчук, А. Ю. Шес-таев // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - № 6. - С. 42—45.

26. Пухнер, А. Ф. Хламидийные экстрагенитальные заболевания / А. Ф. Пухнер, В. И. Козлова. — М. : Триада-Х, 2004. - 128 с.

27. Савенкова, М. С. Хламидийная и микоплазменная инфекции в практике педиатра / М. С. Савенкова // Consilium Medicum. - 2005. - Т. 7, № 1. - С. 10-17.

28. Савичева, А. М. Этиологическая диагностика и терапия репродуктивно значимых инфекций / А. М. Савичева // Трудный пациент. - 2007. - Т. 5, № 1. - С. 22-28.

29. Савичева, А. М. Краткое руководство по микроскопической диагностике инфекций, передаваемых половым путем / А. М. Савичева, Е. В. Соколовский, М. Домейка. - СПб: ООО «Изд-во Фолиант», 2004. -128 с.

30. Самойлова, Э. С. Пат. 2200957 Рос. Федерация, МПК G01N 33/569, G01N 33/53 Способ диагностики и лечения паразитарных заболеваний и оздоровления организма / Э. С. Самойлова, Н. В. Зур; заявитель и патентообладатель Э. С. Самойлова, Н. В. Зур. -№ 2001119437/14; заявл. 16.07.2001; опубл. 20.03.2003. Бюл. № 8.

31. Слободенюк, В. В. Сравнительная характеристика методов верификации Chlamydia trachomatis у человека и обезьян / В. В. Слободенюк, В. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, О. Г. Гречишникова, Е. А. Воропаева, М. С. Афанасьев, В. А. Метельская, А. Л. Байракова, Е. А. Егорова, Б. А. Лапин, Э. К. Джикидзе, А. В. Караулов, Ю. В. Несвижский, Д. Л. Теплый, О. В. Рубальский, Е. О. Рубальский // Естественные науки. - 2009. - № 1. -С. 65-71.

32. Слободенюк, В. В. Пат. 2385946 Рос. Федерация, МПК C12Q 1/68 Способ диагностики хламидийной инфекции человека или обезьян и набор для его осуществления / В. В. Слободенюк, В. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, Б. А. Лапин, Е. А. Воропаева, В. А. Баннов, О. М. Кострова, А. В. Караулов, О. В. Рубальский, Э. К. Джикидзе, Н. В. Воложанцев, И. А. Дятлов, Э. А. Светоч, О. Г. Гречишникова, В. А. Метельская, А. Л. Байракова, М. С. Афанасьев, Е. А. Егорова, Д. С. Афанасьев, Ю. Н. Урбан, Е. О. Рубальский,

A. А. Куракова; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. - № 2008151550/13; заявл. 26.12.2008; опубл. 10.04.2010. Бюл. № 10.

33. Слободенюк, В. В. Пат. 2385945 Рос. Федерация, МПК C12Q 1/68 Способ прогнозирования манифестной или стертой формы хламидийной инфекции человека или обезьян и набор для его осуществления / В. В. Слободенюк, В. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, Б. А. Лапин, Е. А. Воропаева, В. А. Баннов, О. М. Кострова, А. В. Караулов, О. В. Рубальский, Э. К. Джикидзе, Н. В. Воложанцев, И. А. Дятлов, Э. А. Светоч, О. Г. Гречишникова,

B. А. Метельская, А. Л. Байракова, М. С. Афанасьев, Е. А. Егорова, Д. С. Афанасьев, Ю. Н. Урбан, Е. О. Рубальский, А. А. Куракова; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. — № 2008151548/13; заявл. 26.12.2008; опубл. 10.04.2010. Бюл. № 10.

34. Слободенюк, В. В. Пат. 2443782 Рос. Федерация, МПК C12Q 1/04, C12Q 1/68, C12N 1/20 Способ геноги-пирования Chlamydia trachomatis / В. В. Слободенюк, В. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, Б. А. Лапин, X. М. Галимзя-нов, Е. А. Воропаева, Ю. В. Несвижский, А. В. Алешкин, О. М. Кострова, А. В. Караулов, О. В. Рубальский, Э. К. Джикидзе, И. А. Дятлов, Э. А. Светоч, О. Г. Гречишникова, В. А. Метельская, А. Л. Байракова, М. С. Афанасьев, Е. А. Егорова, Д. С. Афанасьев, Ю. Н. Урбан, Е. О. Рубальский; заявитель и патентообладатель ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. -№ 2010132294/10; заявл. 03.08.2010; опубл. 27.02.2012. Бюл. № 6.

35. Слободенюк, В. В. ПЦР-детекция возбудителей хламидийных инфекций человека и обезьян / В. В. Слободенюк, В. А. Алешкин, Б. А. Лапин, С. С. Афанасьев, Д. Ф. Кокушков, О. Г. Гречишникова, Е. А. Воропаева, Э. К. Джикидзе, Ю. В. Несвижский, Н. В. Воложанцев, Э. А. Светоч, И. А. Дятлов, М. С. Афанасьев, О. В. Рубальский, В. А. Метельская, А. Л. Байракова, Е. А. Егорова, Е. О. Рубальский, И. В. Евсегнеева, А. В. Караулов // Иммунопатология, аллергология, инфектология. — 2009. — № 3. — С. 54—62.

36. Тейлор-Робинсон, Д. Диагностика хламидиоза : решают ли современные достижения проблемы клинической практики? / Д. Тейлор-Робинсон // Заболевания, передаваемые половым путем. — 1996. — № 6. — С. 13-14.

37. Тейлор-Робинсон, Д. Какие тесты для диагностики инфекций, передаваемых половым путем, следует использовать в индустриально развитых странах / Д. Тейлор-Робинсон, А. Рентой // Заболевания, передаваемые половым путем. - 1998. - № 5. - С. 23-26.

38. Чеботарев, В. В. Урогенитальный хламидиоз : современные проблемы диагностики, патогенеза, лечения / В. В. Чеботарев // Венеролог. - 2004. - № 1. - С. 43^8.

39. Шипицына, Е. В. Устойчивость Chlamydia trachomatis к антибиотикам in vitro : методологические аспекты и клиническое значение / Е. А. Шипицына, А. М. Савичева, Т. А. Хуснутдинова, К. В. Шалепо, О. Ю. Мисгорина, В. М. Говорун, М. Домейка // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. — 2004. — Т. 6, № 1. - С. 54-64.

40. de Berbeyrac, В. Histoire naturelle des infections a Chlamydia. Physiopathologie des infections a Chlamydia : consequences diagnostiques et therapeutiques / B. de Berbeyrac, C. Bebear // Arch. Pediatr. - 2005. - Vol. 12, № 1. -P. 26-31.

41. Herrmann, B. Genital chlamydial infection among women in Nicaragua : validity of direct fluorescent antibody testing, prevalence, risk factors and clinical manifestations / B. Herrmann, F. Espinosa, R. R. Villegas // Geni-tourin. Med. - 1996. - Vol. 72, № 1. - P. 20-26.

42. Horner, P. J. Antigen capture ELISA for the heat shock protein (hsp 60) of Chlamydia trachomatis / P. J. Horner, M. Ali, D. Parker, J. N. Weber, D. Taylor-Robinson, M. O. McClure // J. Clin. Pathol. - 1996. - Vol. 49, №8.-P. 642-647.

43. Koivisto, A. L. Chlamydial antibodies in an elderly Finnish population / A. L. Koivisto, R. Isoaho, L. Von Hertzen, M. Toyryla, P. Laippala, S. L. Kivela, P. Saikku // Scand. J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 31, № 2. -P. 135-139.

44. Lobau, S. Molecular cloning, sequence analysis, and functional characterization of the lipopolysaccharide biosynthetic gene kdtA encoding 3-deoxy-alpha-D-mannooctulonosonic acid transferase of Chlamydia pneumoniae strain TW-183 / S. Lobau, U. Mamat, W. Brabetz, H. Brade // Mol. Microbiol. - 1995. - Vol. 18. - P. 391-399.

45. Topley and Wilson's Microbiology and Microbial Infections. Bacteriology / edited by S. P. Borriello, P. R. Murray and G. Funke. - N.Y.: Hodder Arnold (Publishers) Ltd., 2005. - Vol. 2, p. VI, ch. 78. - P. 2006-2022.

46. Naher, H. Evaluierung der Polymerase Kettenreaction zum Nachweis von C. trachomatis aus urogenitalem Abstrichmaterial / H. Naher, R. Hochstetter, D. Petzoldt // Hautartzt. - 1995. - № 10. - P. 633-636.

47. Ostergaard, L. Use of PCR and direct immunofluorescence microscopy for confirmation of results obtained by Syva Micro Trak Chlamydia enzyme immunoassay / L. Ostergaard, J. K. Moller // J. Clin. Microbiol. - 1995. -Vol. 33, № 10. - P. 2620-2623.

48. Ponsioen, C. Y. A survey of infections agents as risk factors for primary sclerosing cholangitis : are Chlamydia species involved? / C. Y. Ponsioen, J. Defoer, F. J. Ten Kate // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. - 2002. - Vol. 14, №6.-P. 641-648.

49. Schachter, J. DFA, EIA, PCR, LCR and other technologies: what tests should be used for diagnosis of chlamydia infections? / J. Schachter // Immunol. Invest. - 1997. - Vol. 26, № 1-2. - P. 157-161.

50. Shah, J. S. Novel, ultrasensitive, Q-beta replicase amplified hybridization assay for detection of Chlamydia trachomatis / J. S. Shah, J. Liu, J. Smith, S. Popoff, G. Radcliffe, W. J. O'Brien, G. Serpe, D. M. Olive, W. King // J. Clin. Microbiol. - 1994. - Vol. 32, № 11. -P. 2718-2724.

51. Stary, A. European Guideline for management of Chlamydia infection / A. Stary // Int. J. STD&AIDS. -2001. - Vol. 12, № 3. - P. 31-33.

52. Van Gemen, B. A one-tube quantitative HIV-l RNA NASBA nucleic acid amplification assay using electro-chemiluminescent (ECL) labelled probes / B. van Gemen, R. van Beuningen, A. Nabbe, D. van Strijp, S. Jurriaans, P. Lens, T. Kievits // J. Virol. Methods. - 1994. - Vol. 49. - P. 157-167.

53. Xu, F. Chlamydia trachomatis infection in women: analysis through a surveillance case registry in Washington State, 1993-1998 / F. Xu, J. A. Schillinger, L. E. Markowitz // Am. J. Epidemiol. - 2000. - Vol. 152, № 12. -P. 1164-1170.

References

1. Afanasjev M. S., Aleshkin V. A., Afanasjev S. S., Levakov S. A., Vorob'ev A. A., Sidorova I. S., Nesvizhskiy Yu. V. Virusno-bakteriarnaya priroda displazii i raka sheyki matki [The viral and bacterial nature of dysplasia and of cervical carcinoma]. Vestnik RAMN [Annals of the Russian academy of medical sciences], 2004, no. 6, pp. 35-40.

2. Afanasjev S. S., Bayrakova A. L., Voropaeva E. A., Aleshkin V. A., Toptygina A. P., Grechishnikova O. G., Kostrova O. M., Metel'skaya V. A., Afanasjev M. S., Egorova E. A., Slobodenyuk V. V., Fandeeva E. V., Kafarskaya L. I., Efimov B. A., Shkoporov A. N., Karaulov A. V., Nesvizhskiy Yu. V., Levakov S. A., Teplyi D. L., Rubalsky O. V., Rubalskii E. O. Svyaz' urovney ekspressii genov TLR-2 i TLR-4 s izmeneniyami tsitokinovogo pro-filya urogenital'nogo trakta pri urogenital'nom khlamidioze u zhenshchin [TLR-2 and TLR-4 gene expression levels connectivity with cytokine profile changes of the urogenital tract with women urogenital chlamydiosis]. Estestvennye nauki [Natural sciences], 2008, no. 4 (25), pp. 62-73.

3. Bayrakova A. L., Aleshkin V. A., Voropaeva E. A., Afanasjev S. S., Kafarskaya L. I., Kostrova O. M., Nesvizhskiy Yu. V., Rubalsky O. V., Grechishnikova O. G., Metel'skaya V. A., Shkoporov A. N., Efimov B. A., Kurakova A. A., Egorova E. A., Pozdnyakov K. V., Afanasjev M. S., Zatevalov A. M., Khokhlova E. V. Sposob diagnostiki khronicheskogo urogenital'nogo khlamidioza [Diagnostic method of chronic urogenital chlamydiosis]. Patent RF, no. 2327995,2008.

4. Grechishnikova O. G., Aleshkin V. A., Afanasjev S. S., Slobodenyuk V. V., Karaulov A. V., Nesvizhskiy Yu. V., Rubalsky O. V., Voropaeva E. A., Afanasjev M. S., Metel'skaya V. A., Bayrakova A. L., Egorova E. A., Rubalskii E. O. Sravnitel'nyy analiz pryamykh metodov laboratornoy diagnostiki urogenital'nogo khlamidioza [Comparative analysis of direct methods in laboratory diagnostics of urogenital chlamydiosis]. Astrakhanskiy meditsinskiy zhurnal [Astrakhan Medical Journal], 2010, vol. 5, no. 2, pp. 80-86.

5. Grechishnikova O. G.,. Slobodenyuk V. V., Aleshkin V. A., Lapin B. A., Afanasjev S. S., Likov V. F., Voropaeva E. A., Dzhikidze E. K., Nesvizhskiy Yu. V., Volozhantsev N. V., Poleshchuk N. N., Svetoch E. A., Dyatlov I. A., Afanasjev M. S., Rubalsky O. V., Metel'skaya V. A., Bayrakova A. L., Rubanin L. V., Egorova E. A., Rubalskii E. O., Kvacheva Z. B., Evsegneeva I. V., Karaulov A. V. Fenotipicheskaya kharakteristika shtammov khla-midiy, vydelennykh ot cheloveka i obez'yan kul'tural'nym metodom [The phenotypical characteristic of chlamydia strains separated from humans and monkeys with the application of cultural method]. Immunopatologiya, allergologiya, infektologiya [Immunopathology, allergology, infectology], 2009, no. 3, pp. 44-53.

6. Dmitriev G. A. Laboratornaya diagnostika bakterial'nykh urogenital'nykh infektsiy [Laboratory diagnosis of bacterial urogenital infections]. Moscow, Meditsinskaya kniga [Medical book]; N. Novgorod: Publishing House NGMA, 2003, 336 p.

7. Evropeyskie standarty diagnostiki i lecheniya zabolevaniy, peredavaemykh polovym putem [European standards of sexually transmitted infections diagnosis and treatment]. Ed. by K. Redklif; English-Russian translation ed. by V. P. Adaskevich. Moscow, Meditsinskaya literatura [Medical literature], 2006, 272 p.

8. Zur N. V., Mironov A. Yu. Podostryy tireoidit kak proyavlenie generalizovannoy khlamidiynoy infektsii [Subacute thyroiditis as a manifestation of generaralized chlamydial infection]. Chelovek i ego zdorov'e: Kurskiy nauchno-prakticheskiy vestnik [Kursk scientific and practical bulletin "Man and his health"], 2010, no. 4, pp. 60-66.

9. Zur N. V., Mironov A. Yu., Istratov V. G. Rol' sistemy Quorum sensing pri khronicheskoy urogenital'noy khlamidiynoy infektsii [The role of system quorum sensing under chronic urogenital chlamydia infection]. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika [Clinical laboratory diagnosis], 2015, no. 10, pp. 54-57.

10. Zur N. V., Mironov A. Yu. Sovremennye metody laboratornoy diagnostiki urogenital'noy khlamidiynoy infektsii [Modern methods of laboratory diagnostics of urogenital Chlamidia infections]. Chelovek i ego zdorov'e: Kurskiy nauchno-prakticheskiy vestnik [Kursk scientific and practical bulletin "Man and his health"], 2010, no. 2, pp. 33-42.

11. Zur N. V., Mironov A. Yu., Rubalskaya E. E. Sposob diagnostiki infektsionnoy patologii pochek [Diagnostic method of renal infectious pathology]. Patent RF, no. 2539386,2013.

12. Isakov V. A., Kulyashova L. B., Berezina L. A., Zakrevskaya A. V. Laboratornaya diagnostika urogenital'nogo khlamidioza. Soobshchenie 1. Rasprostranennost', svoystva i klassifikatsiya khlamidiynoy infektsii : analiticheskiy obzor [Laboratory diagnostics of urogenital chlamydiosis. Part I. Incidence, features and classification of chlamydial infection: analytical review]. Terra Medica, 2012, no. 1, pp. 11-17.

13. Infektsii, peredavaemye polovym putem [Sexually transmitted infections]. Ed. by V. A. Akovbyan, V. I. Prokhorenkov, E. V. Sokolovskiy. Moscow, Publishing House "Media Sphere", 2007, 744 p.

14. Karaulov A. V., Afanasjev S. S., Aleshkin V. A., Lapin B. A., Voropaeva E. A., Afanasjev M. S., Slobodenyuk V. V., Aleshkin A. V., Bayrakova A. L., Grechishnikova O. G., Dyatlov I. A., Galimzyanov Kh. M., Evstigneeva I. V., Dzhikidze E.. K., Rubalsky O. V., Nesvizhskiy Yu. V., Mironov A. Yu., Fotiadi O. G., Kafarskaya L. I., Kostrova O. M., Toptygina A. P., Matveevskaya N. S., Afanasjev D. S., Rubalskii E. O., Svetoch E. A., Pchelintsev S. Yu., Logunov O. V., Novikova L. I., Likov V. F. Khlamidiynaya infektsiya. Novye aspekty pato-geneza, immunologii, verifikatsii i lecheniya infektsii u cheloveka i primatov [Chlamydial infection. New aspects of pathogenesis, immunology, verification and treatment of infections in humans and primates]. Moscow, published by I. M. Sechenov 1st MSMU, 2012,256 p.

15. Kolkova N. I., Martynova V. R. K voprosam diagnostic khlamidiynykh infektsiy [Questions of chlamydial infections diagnosis]. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika, 1998, no. 2, pp. 20-21.

16. Kudryavtseva L. V., Misyurina O. Yu., Generozov E. V., Govorun V. M., Burova A. A., Malikov V. E., Lipova E. V., Batkaev E. A. Klinika, diagnostika i lechenie khlamidiynoy infektsii: posobie dlya vrachey [Clinical features, diagnosis and treatment of chlamydial infection: A Manual for Physicians]. Moscow, Russian Medical Academy of Postgraduate Studies, 2001,29 p.

17. Lobzin Yu. V., Lyashenko Yu. I., Poznyak A. L. Khlamidiynye infektsii [Chlamydial infections]. Saint Petersburg, Publishing house "Foliant", 2003,400 p.

18. Manankov V. V., Pashanina T. P., Smelyanskiy V. P. Diagnosticheskoe znachenie reaktsii leykotsitoliza u bol'nykh khlamidiozom [Diagnostic value of a leukolysis reaction in patients with chlamydiosis]. Informatsionnyy sbornik. Seriya Meditsina, Vypusk 4. Allergiya, astma i klinicheskaya immunologiya [Information collection. Serial Medicine. Issue 4. Allergic disease, asthma and clinical immunology]. Moscow, 1997, p. 76.

19. Meditsinskaya laboratornaya diagnostika: spravochnik [Medical laboratory diagnosis: reference book], Ed. by Prof. A.I. Karpishhenko. Saint Petersburg, Intemedica, 1997, 304 p.

20. Metel'skaya V. A., Aleshkin V. A., Zverev V. V., Grechishnikova O. G., Voropaeva E. A., Afanasjev S. S., Nesvizhskiy Yu. V., Afanasjev M. S., Bayrakova A. L., Egorova E. A. Sovremennye metody laboratornoy diagnostiki khlamidiozov [Modern methods of laboratory diagnostics of chlamydia infections]. Zhurnal mikrobiologii, epidemi-ologii i immunobiologii. [Journal of microbiology epidemiology and immunobiology], 2008, no. 4, pp. 111-117.

21. Mironov A. Yu., Zur N. V. Molekulyarnye markery patogenov [Molecular markers of pathogens]. Moscow, LLC "Tirazh", 2013, 184 p.

22. Mironov A. Yu., Zur N. V. Sovremennye podkhody k laboratornoy diagnostike urogenital'noy khlamidiynoy infektsii : lektsiya [The modern approaches to laboratory diagnostic of urogenital chlamydia infection: a lecture]. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika [Clinical laboratory diagnosis], 2013, no. 7, pp. 29-36.

23. Molochkov V. A. Urogenital'nyy khlamidioz [Urogenital chlamydiosis]. Moscow, "Publishing House BINOM", 2006,208 p.

24. Pashko Yu. P., Zigangirova N. A., Kapotina L. N., Morgunova E. Yu., Kolkova N. I., Didenko L. V. Osobennosti rasprostraneniya v organizme Chlamydia trachomatis pri khronicheskom techenii urogenital'nogo khla-midioza i detektsiya vozbuditelya v syvorotke krovi [Features of Chlamydia trachomatis distribution in the organism with chronic urogenital chlamydiosis and detection of the pathogen in the blood serum], Fundamental'nye issledovaniya [Fundamental Research], 2010, no. 7, pp. 50-57.

25. Poznyak A. L., Mikhaylov N. V., Yakovlev A. O., Mudritskiy V. M., Nuralova N. V., Sidorchuk M. N., Shestaev A. Yu. Osobennosti laboratornoy diagnostiki khlamidiozov s sistemnymi proyavleniyami [Features of the chlamydia laboratory diagnosis with systemic symptoms]. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika [Clinical laboratory diagnosis], 2002, no. 6, pp. 42-45.

26. Pukhner A. F., Kozlova V. I. Khlamidiynye ekstragenital'nye zabolevaniya [Chlamydial extragenital diseases]. Moscow, Publishing House Triad-X, 2004,128 p.

27. Savenkova M. S. Khlamidiynaya i mikoplazmennaya infektsii v praktike pediatra [Chlamydia and Mycoplasma infections in pediatric practice]. Consilium Medicum, 2005, vol. 7, no. 1, pp. 10-17.

28. Savicheva A. M. Etiologicheskaya diagnostika i terapiya reproduktivno znachimykh infektsiy [Etiological diagnosis and treatment of reproductive infections]. Trudnyy patsient [Difficult patient], 2007, vol. 5, no. 1, pp. 22-28.

29. Savicheva A. M., Sokolovskiy E. V., Domeyka M. Kratkoe rukovodstvo po mikroskopicheskoy diagnostike infektsiy, peredavaemykh polovym putem [Quick Guide to the microscopic diagnosis of sexually transmitted infections], Saint Petersburg, Publishing house "Foliant", 2004,128 p.

30. Samoylova E. S., Zur N. V. Sposob diagnostiki i lecheniya parazitarnykh zabolevaniy i ozdorovleniya or-ganizma [Method for diagnosis and treatment of parasitic diseases and health improvement]. Patent RF, no. 2200957,2003.

31. Slobodenyuk V. V., Aleshkin V. A., Afanasjev S. S., Grechishnikova O. G., Voropaeva E. A., Afanasjev M. S., Metel'skaya V. A., Bayrakova A. L., Egorova E. A., Lapin B. A., Dzhikidze E. K., Karaulov A. V., Nesvizhskiy Yu. V., Teplyi D. L., Rubalsky O. V., Rubalskii E. O. Sravnitel'naya kharakteristika metodov verifikatsii Chlamydia trachomatis u cheloveka i obez'yan [Comparative characteristics of Chlamydia trachomatis verification methods in humans and monkeys]. Estestvennye nauki [Natural sciences], 2009, no. 1, pp. 65-71.

32. Slobodenyuk V. V., Aleshkin V. A., Afanasjev S. S., Lapin B. A., Voropaeva E. A., Bannov V. A., Kostrova O. M., Karaulov A. V., Rubalsky O. V., Dzhikidze E. K., Volozhantsev N. V., Dyatlov I. A., Svetoch E. A., Grechishnikova O. G., Metel'skaya V. A., Bayrakova A. L., Afanasjev M. S., Egorova E. A., Afanasjev D. S., Urban Yu. N., Rubalskii E. O., Kurakova A. A. Sposob diagnostiki khlamidiynoy infektsii cheloveka ili obez'yan i nabor dlya ego osushchestvleniya [Method of diagnosing chlamydial infection in humans and apes and a set for its implementation], Patent RF, no. 2385946,2010.

33. Slobodenyuk V. V., Aleshkin V. A., Afanasjev S. S., Lapin B. A., Voropaeva E. A., Bannov V. A., Kostrova O. M., Karaulov A. V., Rubalsky O. V., Dzhikidze E. K., Volozhantsev. V., Dyatlov I. A., Svetoch E. A., Grechishnikova O. G., Metel'skaya V. A., Bayrakova A. L., Afanasjev M. S., Egorova E. A., Afanasjev D. S., Urban Yu. N., Rubalskii E. O., Kurakova A. A. Sposob prognozirovaniya manifestnoy ili stertoy formy khlamidiynoy infektsii cheloveka ili obez'yan i nabor dlya ego osushchestvleniya [Forecasting method of a symptomatic or asymptomatic form of human or monkeys chlamydial infection and a set for its implementation]. Patent RF, no. 2385945,2010.

34. Slobodenyuk V. V., Aleshkin V. A., Afanasjev S. S., Lapin B. A., Galimzyanov Kh. M., Voropaeva E. A., Nesvizhskiy Yu. V., Aleshkin A. V., Kostrova O. M., Karaulov A. V., Rubalsky O. V., Dzhikidze E. K., Dyatlov I. A., Svetoch E. A., Grechishnikova O. G., Metel'skaya V. A., Bayrakova A. L, Afanasjev M. S., Egorova E. A., Afanasjev D. S., Urban Yu. N., Rubalskii E. O. Sposob genotipirovaniya Chlamydia trachomatis [A method of genotyping Chlamydia trachomatis]. Patent RF, no. 2443782,2012.

35. Slobodenyuk V. V., Aleshkin V. A., Lapin B. A., Afanasjev S. S., Kokushkov D. F., Grechishnikova O. G., Voropaeva E. A., Dzhikidze E. K., Nesvizhskiy Yu. V., Volozhantsev N. V., Svetoch E. A., Dyatlov I. A., Afanasjev M. S., Rubalsky O. V., Metel'skaya V. A., Bayrakova A. L., Egorova E. A., Rubalskii E. O., Evsegneeva I. V., Karaulov A. V. PTsR-detektsiya vozbuditeley khlamidiynykh infektsiy cheloveka i obez'yan [PCR-detection and identification of clamydia infections pathogens of human and monkeys]. Immunopatologiya, aller-gologiya, infektologiya [Immunopathology, allergology, infectology], 2009, no. 3, pp. 54-62.

36. Teylor-Robinson D. Diagnostika khlamidioza: reshayut li sovremennye dostizheniya problemy klinicheskoy praktiki? [Diagnosis of chlamydiosis: can modern achievements solve the problems of clinical practice?]. Zabolevaniya, peredavaemye polovym putem [Sexually Transmitted Diseases], 1996, no. 6, pp. 13-14.

37. Teylor-Robinson D., Renton A. Kakie testy dlya diagnostiki infektsiy, peredavaemykh polovym putem, sle-duet ispol'zovat' v industrial'no razvitykh stranakh [What tests for the diagnosis of sexually transmitted infections should be used in industrialized countries?]. Zabolevaniya, peredavaemye polovym putem [Sexually Transmitted Diseases], 1998, no. 5, pp. 23-26.

38. Chebotarev V. V. Urogenital'nyy khlamidioz: sovremennye problemy diagnostiki, patogeneza, lecheniya [Urogenital chlamydiosis: modern problems of diagnosis, pathogenesis, and treatment]. Venerolog [Venereologist], 2004, no. 1, pp. 43-48.

39. Shipitsyna E. V., Savicheva A. M., Khusnutdinova T. A., Shalepo K. V., Misyurina O. Yu., Govorun V. M., Domeyka M. Ustoychivost' Chlamydia trachomatis k antibiotikam in vitro : metodologicheskie aspekty i klinicheskoe znachenie [In vitro antimicrobial resistance of Chlamydia trachomatis: methodological aspects and clinical significance]. Klinicheskaya mikrobiologiya i antimikrobnaya khimioterapiya [Clinical microbiology and antimicrobial chemotherapy], 2004, vol. 6, no. 1, pp. 54-64.

40. de Berbeyrac B., Bebear C. Histoire naturelle des infections a Chlamydia. Physiopathologie des infections a Chlamydia: consequences diagnostiques et therapeutiques. Arch. Pediatr, 2005, vol. 12, no. 1, pp. 26-31.

41. Herrmann B., Espinosa F., Villegas R. R. Genital chlamydial infection among women in Nicaragua: validity of direct fluorescent antibody testing, prevalence, risk factors and clinical manifestations. Genitourin. Med., 1996, vol. 72, no. 1, pp. 20-26.

42. Horner P. J., Ali M., Parker D., Weber J. N., Taylor-Robinson D., McClure M. O. Antigen capture ELISA for the heat shock protein (hsp 60) of Chlamydia trachomatis. J. Clin. Pathol., 1996, vol. 49, no. 8, pp. 642-647.

43. Koivisto A. L., Isoaho R., Von Hertzen L., Töyrylä M., Laippala P., Kivelä S. L., Saikku P. Chlamydial antibodies in an elderly Finnish population. Scand. J. Infect. Dis., 1999, vol. 31, no. 2, pp. 135-139.

44. Lobau S., Mamat U., Brabetz W., Brade H. Molecular cloning, sequence analysis, and functional characterization of the lipopolysaccharide biosynthetic gene kdtA encoding 3-deoxy-alpha-D-mannooctulonosonic acid transferase of Chlamydia pneumoniae strain TW-183. Mol. Microbiol., 1995, vol. 18, pp. 391-399.

45. Topley and Wilson's Microbiology and Microbial Infections. Bacteriology / edited by S. P. Borriello, P. R. Murray and G. Funke, vol. 2, part. VI, chapter 78, N.Y., Hodder Arnold (Publishers) Ltd., 2005, pp. 2006-2022.

46. Naher H., Hochstetter R., Petzoldt D. Evaluierung der Polymerase Kettenreaction zum Nachweis von C. trachomatis aus urogenitalem Abstrichmaterial. Hautartzt, 1995, no. 10, pp. 633-636.

47. Ostergaard L., Moller J. K. Use of PCR and direct immunofluorescence microscopy for confirmation of results obtained by Syva Micro Trak Chlamydia enzyme immunoassay. J. Clin. Microbiol., 1995, vol. 33, no. 10, pp. 2620-2623.

48. Ponsioen C. Y., Defoer J., Ten Kate F. J. A survey of infections agents as risk factors for primary sclerosing cholangitis: are Chlamydia species involved? Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 2002, vol. 14, no. 6, pp. 641-648.

49. Schachter J. DFA, EIA, PCR, LCR and other technologies: what tests should be used for diagnosis of chlamydia infections? Immunol. Invest., 1997, vol. 26, no. 1-2, pp. 157-161.

50. Shah J. S., Liu J., Smith J., Popoff S., Radcliffe G., O'Brien W. J., Serpe G., Olive D. M., King W. Novel, ultrasensitive, Q-beta replicase amplified hybridization assay for detection of Chlamydia trachomatis. J. Clin. Microbiol., 1994, vol. 32, no. 11, pp. 2718-2724.

51. Stary A. European Guideline for management of Chlamydia infection. Int. J. STD&AIDS, 2001, vol. 12, no. 3, pp. 31-33.

52. van Gemen B., van Beuningen R., Nabbe A., van Strijp D., Jurriaans S., Lens P., Kievits T. A one-tube quantitative HIV I RNA NASBA nucleic acid amplification assay using eiectrochemiluminescent (ECL) labeled probesn. J. Virol. Methods, 1994, vol. 49, pp. 157-167.

53. Xu F., Schillinger J. A., Markowitz L. E. Chlamydia trachomatis infection in women: analysis through a surveillance case registry in Washington State, 1993-1998. Am. J. Epidemiol., 2000, vol. 152, no. 12, pp. 1164-1170.