CC BY
36
ДОСТИЖЕНИЯ НАУКИ В ПРАКТИКУ
УДК 616-022.6-074
© Н.В. Зур, А.Ю. Миронов, В.Г. Истратов, 2014
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ
Зур Наталья Васильевна, кандидат медицинских наук, врач-дерматовенеролог, Россия, 140415, г. Коломна Московской области, ул. Уманская, д. 17, пом. 3, тел. : 8-910-408-23-57, e-mail: natalyzur@gmail. com.
Миронов Андрей Юрьевич, доктор медицинских наук, профессор РАМТН, профессор, руководитель отдела микробиологии, ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Россия, 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10, тел. : (495) 380-20-19, e-mail: [email protected].
Истратов Валерий Григорьевич, доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник, ФГБУ «Институт хирургии им. А.В. Вишневского» России, Россия, 117997, г. Москва, ул. Большая Серпуховская, д. 27, тел. : 8-962-968-24-68, e-mail: [email protected].
Для лабораторной диагностики хронической генерализованной урогенитальной хламидийной инфекции использованы методы газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-МС). Проведен ГХ-МС анализ биотопов организма (кровь, моча, цервикальный канал, уретра, предстательная железа) с определением молекулярных маркеров поражений органов мочеполовой системы и биохимических изменений метаболизма сыворотки крови. В крови идентифицированы молекулярные маркеры генерализации инфекционного процесса при уроге-нитальном хламидиозе - активаторы «кооперативной чувствительности» микробов (лактоны, хинолоны и фу-рановые эфиры). Разработанные ГХ-МС диагностические критерии индикации молекулярных маркеров при хронической генерализованной хламидийной инфекции имеют высокий уровень диагностической чувствительности, специфичности, прогностической ценности положительного и отрицательного результата. Использование методов ГХ-МС позволяет повысить эффективность диагностики хронических инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитальной системы хламидийной этиологии с определением прогностических критериев развития генерализации инфекционного процесса и последующим назначением своевременной и адекватной терапии.
Ключевые слова: хроническая генерализованная урогенитальная хламидийная инфекция, молекулярные маркеры, газовая хроматография и масс-спектрометрия, инфекционно-воспалительные заболевания.
INNOVATIVE TECHNOLOGIES OF LABORATORY DIAGNOSIS OF CHLAMYDIAL INFECTION
Zur Natalia V., Cand. Sci. (Med.), dermatovenerologist, 17 Umanskaya St., office 3, Kolomna, Moscow Region, 140415, Russia, tel: 8-910-408-23-57, email: [email protected].
Mironov Andrey Yu., Dr. Sci. (Med.), Professor of Russian Academy of Medical and Technical Science, Professor, Head of Department of Microbiology, Moscow Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology n. a. N.G. Gabrichevsky, 10 Admiral Makarov St., Moscow, 125212, Russia, tel: (495) 380-20-19, e-mail: [email protected].
Istratov Valeriy G., Dr. Sci. (Med.), Leading Research Associate, A.V. Vishnevsky Institute of Surgery, 27 Bolshaya Serpukhovskaya St., Moscow, 115093, Russia, tel: 8-962-968-24-68, e-mail: [email protected].
Methods of gas chromatography and mass spectrometry (GC-MS) were used for laboratory diagnosis of generalized chronic urogenital chlamydial infection. A GC-MS analysis of biotopes of the organism (blood, urine, cervical canal, urethra, prostate gland) was carried out with the determination of molecular markers of the urogenital tract lesions and biochemical changes in the metabolism of blood serum. Molecular markers of generalization of infection in urogenital chlamydiosis - activators of "cooperative sensitivity" of microbes (lactones, quinolones and furan ethers) were identified in the blood. Developed GC-MS diagnostic criteria for indication of molecular markers in chronic generalized chlamydial infection have a high level of diagnostic sensitivity, specificity, predictive value of positive and negative results. Using GC-MS methods can improve the efficiency of diagnosis of chronic infectious inflammatory diseases of urogenital chlamydial etiology with the determination of prognostic criteria of the development of generalization of the infectious process and the subsequent institution of timely and adequate therapy.
Key words: chronic generalized chlamydial infection, molecular markers, gas chromatography and mass spectrometry, infectious inflammatory diseases.
Введение. Урогенитальная хламидийная инфекция представляет собой серьезную медико-социальную проблему для современного здравоохранения вследствие своего широкого распространения, частого развития осложнений и негативного влияния на репродуктивное здоровье населения [10, 19]. Согласно данным ВОЗ, в мире ежегодно регистрируется более 330 млн урогенитальных инфекций, среди которых число заражений хламидиозом достигает 100 млн человек [17]. Статистическая регистрация заболеваемости урогенитальным хламидиозом в России, осуществляемая с 1993 г., свидетельствует о ежегодном увеличении числа больных, что позволило этой инфекции сегодня выйти на второе ранговое место среди всех инфекций, передаваемых половым путем (ИППП) [10]. По экстраполированным данным, частота урогенитального хламидиоза в России ежегодно составляет более 1,5 млн человек, при этом в большинстве случаев этиологический диагноз не устанавливается [8].
Установлено, что мишенями для Chlamydia trachomatis служат клетки цилиндрического и переходного эпителия мочеполовых органов, прямой кишки, задней стенки глотки, конъюнктивы, синовиальной оболочки суставов, а также эпителиальные и эпителиоидные клетки различных органов, клетки ретикулоэндотелия, лейкоциты, моноциты, макрофаги [12]. По данным многочисленных исследований, урогенитальным хламидиозом поражено 40-80 % женщин и 20-60 % мужчин с инфек-ционно-воспалительными заболеваниями мочеполовых органов [20]. В большинстве случаев уроге-нитальный хламидиоз протекает без выраженной клинической симптоматики, что существенно затрудняет диагностику и, следовательно, способствует как распространению болезни, так и раннему развитию осложнений [3, 17]. Установлено, что у 24 % мужчин и 70-90 % женщин заболевание протекает бессимптомно, при этом хламидийная инфекция выявляется у 25-50 % пациенток с воспалительными заболеваниями органов малого таза (ВЗОМТ) и у 34 % мужчин с эпидидимитом [15, 16].
Основные клинические формы хламидийной инфекции у женщин - уретриты и цервициты, а наиболее распространенные осложнения (40 %) - ВЗОМТ, протекающие бессимптомно у 40 % больных [6]. При этом отмечено, что риск бесплодия составляет от 25 до 75 % после 1-3 эпизодов ВЗОМТ [17]. Существует взаимосвязь хламидийной инфекции со злокачественными образованиями, с развитием дисплазии шейки матки [1].
Наиболее часто встречающимися формами хламидийной инфекции у мужчин является уретрит и простатит, причем в 20-30 % случаев они протекают без выраженных клинических симптомов. Из осложнений, как правило, наблюдаются эпидидимиты и орхоэпидидимиты, возникающие у 1-3 % больных с хламидийным уретритом с последующим развитием бесплодия [7]. Установлено, что почти в 25 % случаев идиопатическое бесплодие у мужчин с наличием бессимптомной инфекции C. trachomatis и отсутствием в анамнезе хламидийной инфекции коррелирует с наличием антиспер-мальных антител. Хламидии способны также потенцировать аутоиммунные процессы в организме, результатом которых может стать болезнь Рейтера и иммунологическое бесплодие [2].
Значение урогенитального хламидиоза в патологии человека определяется многоочаговостью поражения не только мочеполовых, но и других органов и систем организма (сердечно-сосудистой, нервной, пищеварительной, органов дыхания и др.) вследствие генерализации инфекционного процесса. Особенностями таких заболеваний является скрытое, хроническое течение, а также несоответствие клинических проявлений морфологическим изменениям в пораженных тканях, выраженные дисфункциональные изменения в системе антиинфекционной резистентности (САИР) организма, вследствие чего происходит транслокация хламидий из мочеполового тракта в экстраурогенитальные области организма с формированием вторичных очагов инфекции [4, 13, 14, 18]. Гематогенное распространение возбудителя наиболее часто наблюдается при заболеваниях, вызванных Chlamydia trachomatis (урогенитальный хламидиоз, серовары D-К). Важным лабораторным диагностическим критерием генерализованной формы хронической хламидийной инфекции является обнаружение хлами-дий в мазках периферической крови и в лейкоконцентрате венозной крови (хламид емия) [5].
Успешная организация борьбы с урогенитальным хламидиозом возможна лишь при условии его своевременного и полного выявления. В этой связи решающее значение в постановке диагноза хронической генерализованной урогенитальной хламидийной инфекции и прогноза ее течения приобретают методы молекулярной диагностики на основе современных технологий и, в частности, га-зохроматографического и масс-спектрометрического (ГХ-МС) анализа биологического материала от больных хламидиозом. Разработка современных, недорогих, высокочувствительных и специфичных
методов лабораторной диагностики урогенитального хламидиоза остается актуальной и имеет огромное значение для медицинской науки и практического здравоохранения.
Цель: разработать способ индикации молекулярных маркеров хронической генерализованной урогенитальной хламидийной инфекции на основе хромато-масс-спектрометрического анализа биологических жидкостей организма больных урогенитальным хламидиозом.
Материалы и методы исследования. Методами ГХ-МС анализа исследован биологический материал (кровь, моча, соскобы слизистых оболочек цервикального канала, уретры, отделяемого предстательной железы) от 41 больного с хронической урогенитальной хламидийной инфекцией и у 40 клинически здоровых пациентов с отсутствием лабораторно-инструментальных признаков инфек-ционно-воспалительных заболеваний.
Детекцию возбудителей ИППП проводили с помощью реакции прямой иммунофлюоресценции (ПИФ), непрямой иммунофлюоресценции, полимеразной цепной реакции. Материалом для исследования служили мазки-соскобы со слизистых оболочек шейки матки, уретры, отделяемое предстательной железы, мазки периферической крови.
Хроматографические исследования проводились по разработанной схеме ГХ-МС анализа биологического материала больных хроническим урогенитальным хламидиозом с переводом исследуемых соединений в триметилалкильные производные (ТМС-соединения) и идентификации с помощью масс-селективного детектора. Использована ГХ-МС система Agilent 6890 MSD-5973 с масс-селективным детектором и идентификацией соединений с помощью химической станции Chem-Station.
Индикацию активаторов «кооперативной чувствительности» микробов - лактонов, хинолонов, фурановых эфиров бора и родственных соединений - проводили с помощью комплекса методов: ГХ-МС анализа с масс-селективным детектором (Agilent 6890 MSD-5973), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-селективным детектором и метода капиллярного электрофореза.
Для ГХ-МС исследований использован хроматограф НР-6890 с масс-селективным детектором MSD-5973. Линейный динамический диапазон определяемых концентраций для MSD модели 5973 позволяет для пикограммов образца получать масс-спектры, пригодные для библиотечного поиска. Идентификация соединений проводилась с помощью химической станции GS/MSD-Chem/Station, работающей в среде Microsoft Windows. Химическая станция обеспечивает полный автоматизированный контроль всех рабочих параметров системы ГХ серии НР-6890, включая электронный контроль потоков (ESP). В работе химической станции использовались стандартные форматы Analyticae Instrument Association (ALA), Open Data Base Connectivity (ODBC), формат Windows Metafile (WMF).
Масс-селективный детектор (MSD) модели 5973 позволяет идентифицировать и количественно определить все компоненты сложных биологических матриц, а также обеспечивает классические спектры электронного удара (ЕТ) в режиме полного сканирования и регистрации отдельных ионов.
Для максимального эффективного использования возможностей ГХ-МС системы НР-6890/MSD-5973 предварительно проводили моделирование процесса идентификации органических соединений с помощью программы фирмы Resteck.
В сложных для идентификации химических соединений случаях (незнакомое химическое соединение или низкий уровень содержания вплоть до следовых количеств) использовали скрининго-вые масс-спектрометрические исследования с применением селективных ионов (2 или 3 ионов характеристичных).
Для подготовки проб биологического материала использовали методы твердофазной экстракции с применением специальных подколонок и твердофазных картриджей фирмы Agilent.
Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием методов математической статистики (факторный, корреляционный, дисперсионный и кластерный анализ), с помощью IBM SPSS Statistics 19.0 на ПЭВМ Pentium IV с операционной системой Windows XP. Для количественных нормально распределенных признаков оценку статистической достоверности проводили при помощи критерия Стьюдента (t). Различия считали достоверными при вероятности ошибки р < 0,05.
При корреляционном анализе использовали коэффициент Юла, который рассчитывали с помощью таблицы сопряженности, а также с помощью корреляционной матрицы программ биомедицинских исследований Гарвардского университета BMDP-2M. Корреляционный анализ проводили с применением графических матриц диаграмм рассеяния. Далее была получена межгрупповая корреляционная матрица, рассчитанная для р = 0,01. Величина коэффициента корреляции указывала на связь между факторами: от 0 до 0,3 - слабой силы, от 0,3 до 0,7 - средней силы, от 0,7 до 0,9 - сильную взаимосвязь, 1 - полную (функциональную) связь.
Для оценки диагностической значимости разработанных хроматографических критериев ис-
пользовали унифицированные критерии пригодности лабораторных тестов для диагностики определенной формы патологии, примененные В.В. Меньшиковым и основанные на решении теоремы Бай-еса (расчет вероятности распределения результатов исследования) [9].
Результаты исследования и их обсуждение. В проведенном исследовании принял участие 81 человек (4 группы). Первая группа - контрольная, состоявшая из 20 мужчин и 20 женщин. Вторая группа является основой данного исследования и набрана из пациентов с изучаемой патологией -21 мужчины и 20 женщин. Исследование обсервационное и охватывает возрастной диапазон населения от 18 до 72 лет (табл. 1). (Обсервационное исследование (Observational study) - исследование, при котором исследователь наблюдает за каким-либо показателем или взаимосвязями нескольких показателей, не вмешиваясь в ситуацию).
Таблица 1
Возрастной состав исследуемых больных и их распределение по группам_
Группа Возраст
Средний в группе Максимум Минимум
Контрольная группа - мужчины 39 49 24
Контрольная группа - женщины 45 67 25
Исследуемая группа - мужчины 43 72 18
Исследуемая группа - женщины 45 71 24
Данные таблицы 1 позволяют считать, что исследованию подлежит равнозначная когорта, как по возрасту, так и половому признаку. В исследуемой группе анализ сочетанной патологии показал, что у женщин раньше развиваются онкологические заболевания мочеполовой системы, чем у мужчин (в данном исследовании в среднем разница составила от 10 лет и выше), также выше и частота встречаемости данных патологий (в 2 раза в рассматриваемой работе). Инфекционно-воспалительные заболевания урогенитальной системы (пиелонефрит, цистит, уретрит, цервицит, сальпингоофорит, простатит, орхоэпидидимит) диагностированы у 100 % женщин и у 52,4 % мужчин.
Рассчитаны внутригрупповые средние значения. Группы достаточно большого объема ^005 > 1,96), данные распределены в популяциях нормально. С 95 % вероятностью можем сказать, что истинные средние значения различаются статистически значимо как у больных и здоровых людей, так и в общей популяции в целом, колеблются в рассчитанных доверительных интервалах с использованием ^распределения Стьюдента. Доверительные интервалы достаточно узкие, что отражает точную оценку. Корреляционный анализ проводили с применением графических матриц диаграмм рассеяния. Далее была получена межгрупповая корреляционная матрица, рассчитанная для р = 0,01 (табл. 2).
Таблица 2
Межгрупповая корреляционная матрица_
Материал для Моча Кровь Уретра Шейка матки, простата
исследования
Моча 1 0,95 0,73 0,29
Кровь 0,95 1 0,78 0,39
Уретра 0,78 0,73 1 0,51
Шейка матки, простата 0,29 0,39 0,51 1
Примечание: р = 0,01
Использование метода ГХ-МС анализа позволяет с высокой степенью достоверности определить ранние признаки генерализации инфекционно-воспалительного процесса при хронической уро-генитальной хламидийной инфекции с верификацией поражения органов и систем организма при отсутствии клинической симптоматики и положительных лабораторных тестов на ИППП. Диагностические возможности ГХ-МС при поиске молекулярных маркеров хронической урогенитальной хла-мидийной инфекции осуществляли по четырем направлениям:
• поиск молекулярных маркеров поражений органов мочеполовой системы (почек, уретры, предстательной железы у мужчин и шейки матки у женщин), в том числе маркеров поражения слизистых оболочек урогенитальной системы;
• анализ биохимических изменений метаболизма сыворотки крови больных с определением углеводных, липидных и аминокислотных компонентов, токсичных метаболитов;
• поиск молекулярных маркеров генерализации инфекционного процесса при урогениталь-ном хламидиозе - идентификация сигнальных соединений для реализации микробами «кооперативной чувствительности» - лактонов, хинолонов и фурановых эфиров;
• поиск молекулярных маркеров среднестатистического клинически здорового пациента (мужчины/женщины) с отсутствием лабораторно-инструментальных признаков инфекционно-воспалительных заболеваний.
Молекулярные маркеры хронической урогенитальной хламидийной инфекции определяли, в первую очередь, в периферической крови, поскольку рассматривали хроническую хламидийную инфекцию как септикоподобное состояние вследствие генерализации инфекционного процесса с наличием возбудителя в крови (хламидемия) и полиорганных поражениий [5]. Одновременно был проведен ГХ-МС анализ и других биотопов организма (уретра, предстательная железа, шейка матки, моча) (табл. 3-6).
Таблица 3
ГХ-МС анализ мочи и крови у женщин с ХГХИ_
Идентифицированные Название биотопа
соединения Моча Кровь
(ммоль/л) Больные (n = 20) Здоровые (n = 20) Больные (n = 20) Здоровые (n = 20)
Уксусная кислота 0,0825 ± 0,0121355* 0,0022 ± 0,0001920* 0,0365 ± 0,0063110* 0,0017 ± 0,0003429*
Пропионовая кислота 0,1045 ± 0,0142824* 0,003 ± 0,0002629* 0,0481 ± 0,0095623* 0,0017 ± 0,0003429*
Изомасляная кислота 0,107 ± 0,0186648* 0,0034 ± 0,0004420* 0,053 ± 0,0096153* 0,0013 ± 0,0006491*
Масляная кислота 0,136 ± 0,0192306* 0,0033 ± 0,0006092* 0,0655 ± 0,0095401* 0,0015 ± 0,0005579*
Изовалериановая 0,09 ± 0,0207641* 0,003 ± 0,0004555* 0,0445 ± 0,0096601* 0,0019 ± 0,0003361*
кислота
Валериановая кислота 0,0716 ± 0,0136803* 0,0028 ± 0,0003487* 0,0368 ± 0,0069873* 0,0016 ± 0,0003841*
Капроновая кислота 0,0675 ± 0,0074193* 0,0031 ± 0,0008440* 0,0316 ± 0,0047203* 0,0017 ± 0,0005900*
Лауриновая кислота 0,0745 ± 0,0106803* 0,0028 ± 0,0006837* 0,0391 ± 0,0087410* 0,0012 ± 0,0006186*
4,4-дигидроокси- 0,0087 ± 0,0062164* 0,0004 ± 0,0003841* 0,0045 ± 0,0031722* 0 ± 0*
дифенилсульфон
2-пропанамид 0,0228 ± 0,0093605* 0* 0,0087 ± 0,0046083* 0 ± 0*
^аминооксиметиламид 0,0128 ± 0,0077997* 0* 0,0106 ± 0,0046758* 0 ± 0*
2-метил-5-( 1 -метил- 0,0351 ± 0,0149610* 0* 0,0191 ± 0,0079977* 0 ± 0*
этил)-фенол
4,4,1 -метилэтил-бутил- 0,0066 ± 0,0115761* 0* 0,0041 ± 0,0065024* 0 ± 0*
фенол
Фенолы 0,142 ± 0,0185098* 0,0049 ± 0,0003552* 0,069 ± 0,0098287* 0,0025 ± 0,0002840*
Крезолы 0,162 ± 0,0193024* 0,0050 ± 0,0003863* 0,078 ± 0,0115240* 0,0023 ± 0,0002290*
Фенилуксусная кислота 0,176 ± 0,0155146* 0,0049 ± 0,0005363* 0,087 ± 0,0086029* 0,0024 ± 0,0003528*
Фенилпропионовая 0,199 ± 0,0175704* 0,004 ± 0,0005880* 0,1025 ± 0,0142339* 0,0019 ± 0,0005013*
кислота
3-оксидеказановая 0,0054 ± 0,0084725* 0 ± 0* 0,0171 ± 0,0107016* 0 ± 0*
кислота
3-оксимиристиновая 0,0062 ± 0,0064055* 0 ± 0* 0,005 ± 0,0056284* 0 ± 0*
кислота
Галактозамин 0,0066 ± 0,0082000* 0 ± 0* 0,0133 ± 0,0094828* 0 ± 0*
Глюкозамин 0,0076 ± 0,0086887* 0 ± 0* 0,0154 ± 0,0110630* 0 ± 0*
Изопентадекановая 0,0065 ± 0,0078716* 0 ± 0* 0,0144 ± 0,0088152* 0 ± 0*
кислота
Нитрозамин 0,0035 ± 0,0033525* 0 ± 0* 0,0033 ± 0,0042869* 0 ± 0*
Липогликаны 0,0042 ± 0,0052793* 0* 0,0166 ± 0,0135947* 0 ± 0*
Стерины 0,0032 ± 0,0037172* 0* 0,0128 ± 0,0113047* 0 ± 0*
Лактоны - - 0,1535 ± 0,0276367* 0,0043 ± 0,0005701*
Хинолоны - - 0,157 ± 0,0284111* 0,0035 ± 0,0005781*
Фурановые эфиры - - 0,108 ± 0,0161124* 0,0058 ± 0,0004624*
Примечание: * - р < 0,05
Важное значение имеет идентификация в крови соединений, относящихся к «активаторам кооперативной чувствительности микробов» - лактоны, хинолоны, фурановые эфиры бора. Предварительно определили пороговые значения активаторов кооперативной чувствительности. С этой целью использовали чистые культуры Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa в концентрации 107 КОЕ/мл и смешанную пробу, состоящую из смеси чистых культур вышеуказанных микроорганизмов с суммарной концентрацией более 10' КОЕ/мл. В результате этих экспериментов получили величины доверительных интервалов пороговых значений по основным группам активаторов кооперативной
чувствительности - лактонам, хинолонам и фурановым эфирам. Эти величины составили: для лакто-нов от 0,006 ± 0,0007 ммоль/л до 0,008 ± 0,0009 ммоль/л; для хинолонов от 0,007 ± 0,0006 ммоль/л до 0,009 ± 0,0007 ммоль/л; для фурановых эфиров бора от 0,008 ± 0,0009 ммоль/л до 0,01 ± 0,0009 ммоль/л. Максимальные значения показателей активаторов кооперативной чувствительности в крови здоровых обследованных практически не достигали пороговых значений, что свидетельствовало о возможности использования этих показателей как нормы.
Содержание активаторов кооперативной чувствительности в крови больных существенно превышало таковое в группе контроля (в 18-45 раз). Концентрация активаторов кооперативной чувствительности в крови больных значительно превышала пороговые значения - в 17-25 раз для лактонов и хинолонов, в 11-15 раз - для фурановых эфиров бора. Превышение пороговых значений более чем в 3 раза обеспечивало группе микроорганизмов при хронической сочетанной хламидийной инфекции возможность запуска генов патогенности с развитием генерализации активного инфекционно-воспалительного процесса на фоне резкого снижения системы антиинфекционной резистентности организма.
Таблица 4
ГХ-МС анализ слизистых уретры и шейки матки у женщин с ХГХИ_
Идентифицированные соединения (ммоль/л) Название биотопа
Уретра Шейка матки
Больные (п = 20) Здоровые (п = 20) Больные (п = 20) Здоровые (п = 20)
Уксусная кислота 0,0215 ± 0,0041013* 0 ± 0* 0,0045 ± 0,0031395* 0 ± 0*
Пропионовая кислота 0,027 ± 0,006288* 0,0001 ± 0,0002093* 0,0045 ± 0,0031395* 0 ± 0*
Изомасляная кислота 0,026 ± 0,0070343* 0,0003 ± 0,0003429* 0,0054 ± 0,0035167* 0 ± 0*
Масляная кислота 0,0355 ± 0,0109096* 0,0005 ± 0,0004158* 0,0072 ± 0,0040334* 0 ± 0*
Изовалериановая кислота 0,019 ± 0,013* 0,0007 ± 0,0004580* 0,0081 ± 0,0042022* 0 ± 0*
Валериановая кислота 0,018 ± 0,012* 0 ± 0* 0,0087 ± 0,0045983* 0 ± 0*
Капроновая кислота 0,0193 ± 0,0047628* 0,0003 ± 0,0003429* 0,0091 ± 0,0042783* 0 ± 0*
Лауриновая кислота 0,0229 ± 0,0080661* 0,0002 ± 0,0002881* 0,0101 ± 0,0050403* 0 ± 0*
4,4-дигидроокси-дифенилсульфон 0,0160 ± 0,0208196* 0 ± 0* 0,0057 ± 0,0039859* 0 ± 0*
2-пропанамид 0,0108 ± 0,0049384* 0 ± 0* 0,0071 ± 0,0040684* 0 ± 0*
^аминооксиметиламид 0,0114 ± 0,0065727* 0 ± 0* 0,0107 ± 0,0044763* 0 ± 0*
2-метил-5-( 1 -метил-этил)-фенол 0,0167 ± 0,0077908* 0 ± 0* 0,0124 ± 0,0064962* 0 ± 0*
4,4,1 -метилэтил-бутил-фенол 0,0036 ± 0,0055296* 0 ± 0* 0,0021 ± 0,0028725* 0 ± 0*
Фенолы 0,0356 ± 0,0090539* 0,0005 ± 0,0004158* 0,0165 ± 0,0052325* 0 ± 0*
Крезолы 0,0435 ± 0,0087714* 0,0006 ± 0,0004400* 0,0175 ± 0,0055738* 0 ± 0*
Фенилуксусная кислота 0,042 ± 0,0088142* 0,001 ± 0,0004801* 0,0194 ± 0,0061573* 0 ± 0*
Фенилпропионовая кислота 0,0505 ± 0,0104772* 0,0003 ± 0,0003429* 0,0215 ± 0,0100577* 0 ± 0*
3-оксидеказановая кислота 0,0236 ± 0,0105343* 0 ± 0* 0,0204 ± 0,0114663* 0 ± 0*
3-оксимиристиновая кислота 0,0079 ± 0,0059086* 0 ± 0* 0,0154 ± 0,0113592* 0 ± 0*
Галактозамин 0,0196 ± 0,0089279* 0 ± 0* 0,0107 ± 0,0085557* 0 ± 0*
Глюкозамин 0,0214 ± 0,0110601* 0 ± 0* 0,0112 ± 0,0094014* 0 ± 0*
Изопентадекановая кислота 0,0244 ± 0,0103203* 0 ± 0* 0,0194 ± 0,0110610* 0 ± 0*
Нитрозамин 0,0074 ± 0,0069040* 0 ± 0* 0,0083 ± 0,0080118* 0 ± 0*
Липогликаны 0,0136 ± 0,0101926* 0 ± 0* 0,0096 ± 0,0092678* 0 ± 0*
Стерины 0,0128 ± 0,0114672* 0 ± 0* 0,0094 ± 0,0085879* 0 ± 0*
Примечание: * - р < 0,05
Самый высокий уровень показателя диагностической чувствительности в крови отмечен при ГХ-МС анализе фурановых эфиров (80,0-90,0 %), затем следует определение лактонов (80,0 %), хинолонов (70,0-75,0 %). Показатели диагностической специфичности распределялись следующим образом: лактоны и хинолоны (85,0-90,0 %); фурановые эфиры (70,0-75,0 %). Наибольшая прогностическая ценность положительного результата отмечена при определении лактонов (84,2-88,9 %) и хинолонов (82,4-83,3 %), в меньшей степени - фурановых эфиров (72,7-78,3 %). Показатель прогностической ценности отрицательного результата наиболее высок при детекции фурановых эфиров (77,8-88,2 %), затем лактонов (81,0-81,8 %) и хинолонов (73,9-77,3 %).
Известно, что генетический механизм реализации «кооперативной чувствительности» позволяет патогенным бактериям рационально использовать свой патогенный потенциал, определяя системой quorum sensing момент включения генов патогенности только после достижения бактериями определенной плотности популяции, при которой синтезирующееся количество факторов патогенности гарантирует успешное развитие инфекционного процесса. Таким образом, определение активаторов кооперативной чувствительности микробов в крови больных с хроническими инфекционно-воспалительными заболеваниями урогенитальной системы сочетанной хламидийной этиологии является молекулярным маркером генерализации инфекции при хроническом урогенитальном хламидио-зе и септикоподобного течения хронической генерализованной хламидийной инфекции.
Таблица 5
ГХ-МС анализ мочи и крови у мужчин с ХГХИ_
Идентифицированные соединения (ммоль/л) Название биотопа
Моча Кровь
Больные (n = 21) Здоровые (n = 20) Больные (n = 21) Здоровые (n = 20)
Уксусная кислота 0,0819 ± 0,0115713* 0,0024 ± 0,0002799* 0,0380 ± 0,0060422* 0,0018 ± 0,000288*
Пропионовая кислота 0,1033 ± 0,0114556* 0,0036 ± 0,0004400* 0,0514 ± 0,0054407* 0,0019 ± 0,0005143*
Изомасляная кислота 0,0985 ± 0,0155227* 0,0046 ± 0,0004896* 0,0471 ± 0,0079030* 0,0025 ± 0,0003561*
Масляная кислота 0,1276 ± 0,0138747* 0,0049 ± 0,0004420* 0,0638 ± 0,0066708* 0,0026 ± 0,0003139*
Изовалериановая кислота 0,0933 ± 0,0191690* 0,0039 ± 0,0004267* 0,0442 ± 0,0099283* 0,0022 ± 0,0003981*
Валериановая кислота 0,0919 ± 0,0133971* 0,0036 ± 0,0004400* 0,0428 ± 0,0070729* 0,0020 ± 0,0003863*
Капроновая кислота 0,0661 ± 0,0068244* 0,0033 ± 0,0005098* 0,0319 ± 0,0037034* 0,0018 ± 0,0004095*
Лауриновая кислота 0,0723 ± 0,0-98585* 0,0030 ± 0,0007036* 0,0380 ± 0,0042260* 0,0015 ± 0,0004920*
4,4-дигидроокси-дифенилсульфон 0,0043 ± 0,0012326* 0,0011 ± 0,0005098* 0,0021 ± 0,0005809* 0,0002 ± 0,0002881*
2-пропанамид 0,0085 ± 0,0078257* 0 ± 0* 0,0043 ± 0,0038985* 0 ± 0*
^аминооксиметиламид 0,0088 ± 0,0073867* 0 ± 0* 0,0041 ± 0,0032770* 0 ± 0*
2-метил-5-( 1 -метил-этил)-фенол 0,0131 ± 0,0107867* 0,0008 ± 0,0005098* 0,0112 ± 0,0072774* 0,0002 ± 0,0002881*
Фенолы 0,0757 ± 0,0332818* 0,0025 ± 0,0013367* 0,0371 ± 0,0161030* 0,0010 ± 0,0006870*
Крезолы 0,1504 ± 0,0149231* 0,0053 ± 0,0003429* 0,0747 ± 0,0068460* 0,0028 ± 0,0002881*
Фенилуксусная кислота 0,1728 ± 0,0118826* 0,0044 ± 0,0003212* 0,0847 ± 0,0077007* 0,0024 ± 0,0002799*
Фенилпропионовая кислота 0,1952 ± 0,0130841* 0,0041 ± 0,0004777* 0,0980 ± 0,0077007* 0,0022 ± 0,0003256*
3-оксидеказановая кислота 0 ± 0* 0 ± 0* 0,01 ± 0,0084793* 0 ± 0*
3-оксимиристиновая кислота 0,0001 ± 0,0002738* 0 ± 0* 0 ± 0* 0 ± 0*
Галактозамин 0 ± 0* 0 ± 0* 0,01 ± 0,0086006* 0 ± 0*
Глюкозамин 0 ± 0* 0 ± 0* 0,012 ± 0,0098979* 0 ± 0*
Изопентадекановая кислота 0,0006 ± 0,0004397* 0 ± 0* 0,0104 ± 0,0090304* 0 ± 0*
Нитрозамин 0 ± 0* 0 ± 0* 0,01 ± 0,015799* 0 ± 0*
Липогликаны 0,0009 ± 0,0004909* 0 ± 0* 0,0004 ± 0,0003828* 0 ± 0*
Стерины 0,0013 ± 0,0005256* 0 ± 0* 0,0021 ± 0,0008604* 0 ± 0*
Лактоны 0,1504 ± 0,0288066* 0,0048 ± 0,0006333*
Хинолоны 0,1528 ± 0,0275665* 0,0054 ± 0,0010453*
Фурановые эфиры 0,1175 ± 0,0169112* 0,0064 ± 0,0006333*
Примечание: * - р < 0,05
В крови обнаружены сернистые соединения: 4,4-дигидрооксидифенилсульфона в минимальных концентрациях. В группе контроля таковые метаболиты не зарегистрированы. Даже такой сравнительно низкий уровень содержания сернистых метаболитов в крови больных обладает достаточно выраженным повреждающим действием, поскольку эти соединения имеют тропность к коллагеновым структурам и способны повреждать ткани, в том числе слизистые оболочки, с развитием деструктивных изменений. Последнее подтверждается определением 4,4-дигидрооксидифенилсульфона в слизистых уретры, шейки матки, отделяемом предстательной железы в минимальных значениях у мужчин и в максимальных у женщин при отсутствии или наличии в следовых количествах сернистых соединений у здоровых обследованных. В крови больных выявлены углеводные, липидные и аминокислотные компоненты: разветвленные жирные кислоты (изопентадекановая), липогликаны и стерины, оксикислоты (3-оксидеказановая, 3-оксимиристиновая), аминосахара (галактозамин, глюкозамин). Эти соединения являются маркерами обменных нарушений, приводящих к функционально-
морфологическим изменениям в предстательной железе у мужчин или в шейке матки у женщин. Содержание указанных выше метаболитов в крови больных коррелирует с их наличием в слизистой шейки матки, уретры, отделяемом предстательной железы и моче. Полученные данные свидетельствуют об определенной перестройке углеводного, белкового и липидного обмена в тканях мочеполовых органов на фоне генерализованного инфекционного процесса в организме больных, что подтверждается отсутствием указанных метаболитов в аналогичных биотопах здоровых обследованных. Инфекционно-воспалительный симптомокомплекс в слизистой шейки матки, уретры, отделяемом предстательной железы и периферической крови у больных по сравнению с контролем характеризовался значительно более высоким уровнем короткоцепочечных монокарбоновых - летучих жирных кислот (ЛЖК) и токсичных метаболитов (фенолов, амидов, крезолов, фенилкарбоновых кислот). Известно, что эти группы соединений являются метаболитами аэробных и анаэробных микроорганизмов (микробные метаболиты), либо появляются в организме после внедрения инфекционного агента (тканевые метаболиты) [11]. При этом клинических данных о наличии активной воспалительной реакции у больных не было получено.
Таблица 6
ГХ-МС анализ слизистых уретры и отделяемого предстательной железы у мужчин с ХГХИ
Идентифицированные Название биотопа
соединения Уретра Предстательная железа
(ммоль/л) Больные (п = 21) Здоровые (п = 20) Больные (п = 21) Здоровые (п = 20)
Уксусная кислота 0,0208 ± 0,0057219* 0,0001 ± 0,0002093* 0,0033 ± 0,0026948* 0 ± 0*
Пропионовая кислота 0,0243 ± 0,0056646* 0,0001 ± 0,0002093* 0,0062 ± 0,0064908* 0 ± 0*
Изомасляная кислота 0,0238 ± 0,0058447* 0,0012 ± 0,0004704* 0,0043 ± 0,0043889* 0 ± 0*
Масляная кислота 0,032 ± 0,0035812* 0,0011 ± 0,0005098* 0,0056 ± 0,0041676* 0 ± 0*
Изовалериановая 0,0218 ± 0,0056696* 0,0005 ± 0,0004673* 0,005 ± 0,0036130* 0 ± 0*
кислота
Валериановая кислота 0,0221 ± 0,0050598* 0,0008 ± 0,0004704* 0,0041 ± 0,0032241* 0 ± 0*
Капроновая кислота 0,0164 ± 0,0034456* 0,0006 ± 0,0004400* 0,0024 ± 0,0019754* 0 ± 0*
Лауриновая кислота 0,0193 ± 0,0039495* 0,0002 ± 0,0002881* 0,0024 ± 0,0019754* 0 ± 0*
4,4-дигидроокси- 0,0015 ± 0,0004144* 0,0006 ± 0,0004400* 0,0033 ± 0,0026948* 0 ± 0*
дифенилсульфон
2-пропанамид 0,0016 ± 0,0003828* 0 ± 0* 0,0015 ± 0,0004144* 0 ± 0*
^аминооксиметиламид 0,0025 ± 0,0019585* 0* 0,0015 ± 0,0004144* 0 ± 0*
2-метил-5-( 1 -метил- 0,0048 ± 0,0038452* 0 ± 0* 0,0014 ± 0,0004330* 0 ± 0*
этил)-фенол
Фенолы 0,02 ± 0,0085607* 0,0007 ± 0,0004580* 0,0061 ± 0,0043596* 0 ± 0*
Крезолы 0,039 ± 0,0045147* 0,0015 ± 0,0004920* 0,0091 ± 0,0048660* 0 ± 0*
Фенилуксусная кислота 0,0425 ± 0,005215* 0,0010 ± 0,0005143* 0,0106 ± 0,0052169* 0 ± 0*
Фенилпропионовая 0,05 ± 0,047856* 0,0009 ± 0,0004777* 0,014 ± 0,0064205* 0 ± 0*
кислота
3-оксидеказановая 0,0196 ± 0,0110281* 0 ± 0* 0,0177 ± 0,0109295* 0 ± 0*
кислота
3-оксимиристиновая 0 ± 0* 0 ± 0* 0,0001 ± 0,0002086* 0 ± 0*
кислота
Галактозамин 0,0167 ± 0,0108761* 0 ± 0* 0,0158 ± 0,0112815* 0 ± 0*
Глюкозамин 0,0172 ± 0,0109473* 0 ± 0* 0,0151 ± 0,0103803* 0 ± 0*
Изопентадекановая 0,0199 ± 0,0116575* 0 ± 0* 0,0163 ± 0,0106465* 0 ± 0*
кислота
Нитрозамин 0,0001 ± 0,0002195* 0 ± 0* 0 ± 0* 0 ± 0*
Липогликаны 0,0046 ± 0,0036243* 0 ± 0* 0,0077 ± 0,0070253* 0 ± 0*
Стерины 0,0046 ± 0,0053500* 0 ± 0* 0,0101 ± 0,0111238* 0 ± 0*
Примечание: * - р < 0,05
В моче больных (табл. 3, 5) по сравнению с группой контроля обнаружены значительно более высокие концентрации ЛЖК, фенилкарбоновых кислот, фенолов, крезолов и особенно амидов и сернистых соединений, которые способствуют развитию почечной патологии при генерализованной хламидийной инфекции на фоне нарушений в системе антиинфекционной резистентности организма.
На основании проведенных ГХ-МС исследований была создана так называемая «молекулярная модель» среднестатистического клинически здорового пациента (мужчины/женщины) с отсутствием лабораторно-инструментальных признаков инфекционно-воспалительных заболеваний (табл. 7-8).
Проведено распределение основных групп метаболитов на три диагностических уровня (молекулярные маркеры высокого, среднего и низкого уровня приоритетности). Параметры диагностической
значимости молекулярных маркеров хронической генерализованной хламидийной инфекции (ХГХИ) представлены в таблицах 9-10. В качестве критериев распределения были выбраны величины удельного веса хроматографических тестов на основании факторного анализа, их сопоставимость с данными клинического обследования, а также диагностическая значимость полученных ГХ-МС показателей.
Таблица 7
«Молекулярная модель» здоровой женщины_
Идентифицированные Название биотопа
соединения (ммоль/л) Кровь Моча Уретра Шейка матки
ЛЖК 0,0012 ± 0,0006 - 0,0022 ± 0,0002 - 0 ± 0 - 0 ± 0
0,0019 ± 0,0003 0,0034 ± 0,0004 0,0001 ± 0,0002
Фенолы, амиды, крезолы 0 ± 0 -0,0025 ± 0,0003 0 ± 0 -0,0050 ± 0,0004 0 ± 0 -0,0006 ± 0,0004 0 ± 0
Фенилкарбоновые кислоты 0,0019 ± 0,0005 - 0,0040 ± 0,0006 - 0,0003 ± 0,0003 - 0 ± 0
0,0024 ± 0,0004 0,0049 ± 0,0005 0,0010 ± 0,0005
Сернистые соединения 0 ± 0 0,0004 ± 0,0004 0 ± 0 0 ± 0
Лактоны 0,0043 ± 0,0006
Хинолоны 0,0035 ± 0,0006
Фурановые эфиры 0,0058 ± 0,0005
Таблица 8
«Молекулярная модель» здорового мужчины_
Идентифицированные Название биотопа
соединения (ммоль/л) Кровь Моча Уретра Простата
ЛЖК 0,0015 ± 0,0005 - 0,0024 ± 0,0003 - 0,0001 ± 0,0002 - 0 ± 0
0,0026 ± 0,0003 0,0049 ± 0,0004 0,0012 ± 0,0005
Фенолы, амиды, крезолы 0 ± 0 -0,0028 ± 0,0003 0 ± 0 -0,0053 ± 0,0003 0 ± 0 -0,0015 ± 0,0005 0 ± 0
Фенилкарбоновые кислоты 0,0022 ± 0,0003 -0,0024 ± 0,0003 0,0041 ± 0,0005 -0,0044 ± 0,0003 0,0009 ± 0,0005 -0,0010 ± 0,0005 0 ± 0
Сернистые соединения 0,0002 ± 0,0003 0,0011 ± 0,0005 0,0006 ± 0,0004 0 ± 0
Лактоны 0,0048 ± 0,0006
Хинолоны 0,0054 ± 0,0010
Фурановые эфиры 0,0064 ± 0,0006
К молекулярным маркерам высокого уровня приоритетности (метаболиты первого уровня) отнесены следующие метаболиты: активаторы кооперативной чувствительности (лактоны, хинолоны, фурановые эфиры бора); фенилкарбоновые кислоты и ЛЖК в моче и крови, а также в уретре у женщин; сернистые соединения в моче и крови (у женщин - только в моче); фенолы, амиды и крезолы в моче у женщин.
Диагностическая эффективность молекулярных маркеров высокого уровня приоритетности составляла: по диагностической чувствительности 70,0-92,9 % у мужчин и 75,0-88,8 % у женщин; по диагностической предсказуемости положительной - 73,6-94,4 % у мужчин и 68,0-89,7 % у женщин. Сопоставимость клинических и хроматографических данных составила 75,2-100,0 % и 50,5-96,6 % у мужчин и женщин, соответственно; уровень удельного веса: 0,0021-0,195 у мужчин (1-10 место), 0,007-0,199 у женщин (1-10 место).
К молекулярным маркерам среднего уровня приоритетности (метаболиты второго уровня) отнесены следующие метаболиты: у мужчин - фенилкарбоновые кислоты в уретре; сернистые соединения в предстательной железе; фенолы, амиды и крезолы в крови; разветвленные жирные кислоты и аминосахара (уретра, кровь); оксикислоты (уретра, простата, кровь); у женщин - ЛЖК, разветвленные жирные кислоты, оксикислоты, аминосахара (уретра); фенолы, амиды и крезолы (шейка матки, уретра); сернистые соединения (уретра, шейка матки, кровь). Диагностическая эффективность молекулярных маркеров среднего уровня приоритетности составляла: по диагностической чувствительности 71,4-90,5 % у мужчин и 70,0-97,5 % у женщин, по диагностической предсказуемости положительной - 64,6-100,0 % у мужчин, 60,0-100,0 % у женщин. Сопоставимость клинических и хромато-графических данных составила 33,2-87,1 % и 30,3-85,8 % у мужчин и женщин, соответственно; уровень удельного веса: 0,0001-0,075 у мужчин (6-20 место), 0,002-0,044 у женщин (9-19 место).
Таблица 9
Параметры диагностической значимости молекулярных маркеров ХГХИ в крови_
ГХ-МС показатели Диагностическая эффективность (%)
ДЧ ДС ПР пол ПР отр
Муж. Жен. Муж. Жен. Муж. Жен. Муж. Жен.
Индикация активаторов «кооперативной чувствительности» микробов Лактоны 80,0 80,0 90,0 85,0 88,9 84,2 81,8 81,0
Хинолоны 70,0 75,0 85,0 85,0 82,4 83,3 73,9 77,3
Фурановые эфиры 90,0 80,0 75,0 70,0 78,3 72,7 88,2 77,8
Биохимические изменения сыворотки крови Сернистые соединения 80,9 70,0 90,0 55,0 89,5 66,9 81,8 64,7
Аминосахара 80,9 50,0 100,0 100,0 100,0 100,0 83,3 66,7
Разветвленные жирные кислоты 80,9 80,0 100,0 100,0 100,0 100,0 83,3 83,3
Липогиканы и стерины 40,5 55,0 100,0 100,0 100,0 100,0 61,5 68,9
Оксикислоты 80,9 65,0 100,0 100,0 100,0 100,0 83,3 74,1
Микробные метаболиты сыворотки крови ЛЖК 80,9 83,1 87,5 90,0 87,2 89,3 81,4 84,2
Фенолы, амиды, крезолы 73,8 67,5 87,5 90,0 86,1 87,1 76,1 73,5
Фенилкарбоновые кислоты 92,9 85,0 65,0 60,0 73,6 68,0 89,7 80,0
Примечание: ДЧ - диагностическая чувствительность; ДС - диагностическая специфичность; ПРпол - диагностическая предсказуемость положительная; ПРотр - диагностическая предсказуемость отрицательная
Таблица 10
Параметры диагностической значимости молекулярных маркеров органных поражений при ХГХИ
ГХ-МС показатели Диагностическая эффективность (%)
ДЧ ДС ПР пол ПР отр
Муж. Жен. Муж. Жен. Муж. Жен. Муж. Жен.
Почки ЛЖК 81,5 88,8 71,9 78,8 75,3 80,7 78,8 87,5
Фенолы, амиды, крезолы 69,1 80,0 77,5 86,3 75,7 85,3 71,3 81,2
Фенилкарбоновые кислоты 80,9 77,5 82,5 72,5 82,9 73,8 80,5 76,3
Сернистые соединения 80,9 80,0 95,0 85,0 94,4 84,2 82,6 80,9
Уретра ЛЖК 85,1 79,4 86,3 83,1 86,7 82,5 84,7 80,1
Фенолы, амиды, крезолы 60,7 73,8 62,5 88,8 62,9 86,8 60,2 77,2
Фенилкарбоновые кислоты 73,8 87,5 57,5 90,0 64,6 89,7 67,6 87,8
Сернистые соединения 71,4 75,0 65,0 50,0 68,2 60,0 68,4 66,7
Шейка матки/ Предстательная железа ЛЖК 70,2 86,3 99,4 65,6 99,2 71,5 76,1 82,7
Фенолы, амиды, крезолы 60,7 78,8 97,5 80,0 96,2 79,7 70,3 79,0
Фенилкарбоновые кислоты 71,4 77,5 97,5 50,0 96,8 60,8 76,5 68,9
Сернистые соединения 71,4 70,0 100,0 65,0 100,0 66,7 76,9 68,4
Примечание: ДЧ - диагностическая чувствительность; ДС - диагностическая специфичность; ПРпол - диагностическая предсказуемость положительная; ПРотр - диагностическая предсказуемость отрицательная
К молекулярным маркерам низкого уровня приоритетности (метаболиты третьего уровня) отнесены следующие метаболиты: у мужчин - фенилкарбоновые кислоты, аминосахара, разветвленные жирные кислоты, ЛЖК в простате; сернистые соединения в уретре; фенолы, амиды и крезолы (моча, уретра, простата); липогликаны и стерины (уретра, простата, кровь); у женщин - ЛЖК (шейка матки); разветвленные жирные кислоты, оксикислоты, аминосахара (шейка матки, кровь); фенолы, амиды и крезолы (кровь); липогликаны и стерины (уретра, шейка матки, кровь).
Диагностическая эффективность молекулярных маркеров низкого уровня приоритетности составляла по диагностической чувствительности 40,5-76,2 % у мужчин и 42,5-86,3 % у женщин; по диагностической предсказуемости положительной: 68,2-100,0 % у мужчины, 71,5-100,0 % у женщин. Сопоставимость клинических и хроматографических данных составила 37,0-84,3 % и 35,6-75,7 % у мужчин и женщин, соответственно; уровень удельного веса: 0,0004-0,150 у мужчин (9-29 место), 0,004-0,078 у женщин (6-27 место).
Выводы:
1. В крови больных ХГХИ определены соединения, которые относятся к активаторам «кооперативной чувствительности» микробов (лактоны, хинолоны, фурановые эфиры бора) в концентрации, обеспечивающей группе микроорганизмов при хронической сочетанной хламидийной инфекции возможность запуска генов патогенности с развитием генерализации активного инфекционно-
воспалительного процесса на фоне резкого снижения системы антиинфекционной резистентности организма.
2. У больных ХГХИ в моче, уретре, шейке матки у женщин и предстательной железе у мужчин определены молекулярные маркеры поражения почек и урогенитальной системы - ЛЖК, фенолы, амиды, крезолы, фенилкарбоновые кислоты, являющиеся продуктами нарушенного метаболизма углеводов и аминокислот при развитии генерализованного инфекционно-воспалительного процесса на фоне выраженного угнетения системы антиинфекционной резистентности организма, а также сернистые соединения, обладающие высокой токсичностью и тропизмом к коллагену и приводящие к поражению слизистых оболочек органов мочеполовой сферы.
3. Хроматографические показатели биотопов организма больных ХГХИ существенно превышают таковые параметры у здоровых обследованных с отсутствием лабораторно-инструментальных признаков инфекционно-воспалительных заболеваний. На основании полученных данных создана молекулярная модель среднестатистического клинически здорового пациента (мужчины и женщины).
4. Лабораторные диагностические критерии индикации молекулярных маркеров при хронической генерализованной хламидийной инфекции методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии имеют высокий уровень диагностической чувствительности и специфичности, прогностической ценности положительного и отрицательного результата.
5. Определены три группы молекулярных маркеров по уровню приоритетности: 1 группа -метаболиты высокого уровня приоритетности - активаторы кооперативной чувствительности микробов (лактоны, хинолоны, фурановые эфиры бора), фенилкарбоновые кислоты и ЛЖК (моча, кровь, уретра у женщин); сернистые соединения (моча, кровь у мужчин, у женщин - моча); фенолы, амиды и крезолы в моче у женщин; 2 группа - метаболиты среднего уровня приоритетности: у мужчин -фенилкарбоновые кислоты в уретре; сернистые соединения в предстательной железе; фенолы, амиды и крезолы в крови; разветвленные жирные кислоты и аминосахара (уретра, кровь); оксикислоты (уретра, простата, кровь); у женщин - ЛЖК, разветвленные жирные кислоты, оксикислоты, аминоса-хара (уретра); фенолы, амиды и крезолы (шейка матки, уретра); сернистые соединения (уретра, шейка матки, кровь); 3 группа - метаболиты низкого уровня приоритетности: у мужчин - фенилкарбоновые кислоты, аминосахара, разветвленные жирные кислоты, ЛЖК в простате; сернистые соединения в уретре; фенолы, амиды и крезолы (моча, уретра, простата); липогликаны и стерины (уретра, простата, кровь); у женщин - ЛЖК (шейка матки); разветвленные жирные кислоты, оксикислоты, аминосахара (шейка матки, кровь); фенолы, амиды и крезолы (кровь); липогликаны и стерины (уретра, шейка матки, кровь).
6. Использование методов газовой хроматографии и масс-спектрометрии позволяет повысить эффективность диагностики хронических инфекционно-воспалительных заболеваний урогениталь-ной системы сочетанной хламидийной этиологии с определением прогностических критериев развития генерализации инфекционного процесса и последующим назначением своевременной и адекватной терапии.
Список литературы
1. Афанасьев, М. С. Вирусно-бактериальная природа дисплазии и рака шейки матки / М. С. Афанасьев, В. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, С. А. Леваков, А. А. Воробьев, И. С. Сидорова, Ю. В. Несвижский // Вестник РАМН. - 2004. - № 6. - С. 35-40.
2. Гомберг, М. А. Алгоритмы диагностики и лечения наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путем / М. А. Гомберг, А. М. Соловьев // Трудный пациент. - 2004. - Т. 2, № 5. - С. 3-8.
3. Гречишникова, О. Г. Сравнительный анализ прямых методов лабораторной диагностики урогени-тального хламидиоза / О. Г. Гречишникова, В. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, В. В. Слободенюк, А. В. Караулов, Ю. В. Несвижский, О. В. Рубальский, Е. А. Воропаева, М. С. Афанасьев, В. А. Метельская, А. Л. Байракова, Е. А. Егорова, Е. О. Рубальский // Астраханский медицинский журнал. - 2010. - Т. 5, № 2. - С. 81-88.
4. Долгих, Т. И. Оппортунистические инфекции у детей (вопросы диагностики, клиники и лечения) / Т. И. Долгих, Ф. В. Носкова - Омск : Изд-во ОГМА, 1999. - 99 с.
5. Зур, Н. В. Подострый тиреоидит как проявление генерализованной хламидийной инфекции / Н. В. Зур, А. Ю. Миронов // Человек и его здоровье : Курский научно-практический вестник. - 2010. - № 4. - С. 60-66.
6. Инфекции, передаваемые половым путем / под ред. В. А. Аковбяна, В. И. Прохоренкова, Е. В. Соколовского. - М. : Медиа Сфера, 2007. - 744 с.
7. Исаков, В. А. Иммунопатогенез и лечение генитального герпеса и хламидиоза : руководство для врачей / В. А. Исаков, А. Г. Архипов, Ю. В. Аспель. - В. Новгород; СПб. : НовГУ; НИИ гриппа РАМН, 1999. -150 с.
8. Кудрявцева, Л. В. Клиника, диагностика и лечение хламидийной инфекции : пособие для врачей / Л. В. Кудрявцева, О. Ю. Мисюрина, Э. В. Генерозов, В. М. Говорун, А. А. Бурова, В. Е. Маликов, Е. В. Липова, Э. А. Баткаев - М. : Российская медицинская академия последипломного образования, 2001. - 29 с.
9. Меньшиков, В. В. Руководство по клинической лабораторной диагностике / В. В. Меньшиков. - М. : Медицина, 1982. - 582 с.
10. Молочков, В. А. Урогенитальный хламидиоз / В. А. Молочков. - М. : БИНОМ, 2006. - 208 с.
11. Подзолкова, Н. М. Обоснование выбора метода прерывания нежелательной беременности у пациенток группы высокого риска послеабортных воспалительных осложнений / Н. М. Подзолкова, В. Г. Истратов, О. Л. Глазкова, Н. Л. Шамугия // Проблемы репродукции. - 2006. - № 2. - С. 91-94.
12. Позняк, А. Л. Сравнительная эффективность рациональных схем этиотропной терапии генерализованных форм хламидийной инфекции у лиц молодого возраста / А. Л. Позняк, Ю. В. Лобзин, В. М. Добрынин, П. А. Бабкин // Урология. - 2000. - № 5. - С. 23-26.
13. Пухнер, А. Ф. Хламидийные экстрагенитальные заболевания / А. Ф. Пухнер, В. И. Козлова -М. : Триада-Х, 2004. - 128 с.
14. Савенкова, М. С. Хламидийная и микоплазменная инфекции в практике педиатра / М. С. Савенкова // Consilium Medicum. - 2005. - Т. 7, № 1. - С. 10-17.
15. Ткачук, В. Н. Хронический простатит / В. Н. Ткачук. - М. : Медицина, 2006. - 112 с.
16. Чеботарев, В. В. Урогенитальный хламидиоз : современные проблемы диагностики, патогенеза, лечения / В. В. Чеботарев // Венеролог. - 2004. - № 1. - С. 43-48.
17. Microbiology & Microbial infections. Topley & Wilsons. Bacteriology. Vol. 2, Part. VI, Chapter 78. -N.Y. : Edward Arnold (Publishers) Ltd., 2005. - P. 2006-2022.
18. Ponsioen, C. Y. A survey of infections agents as risk factors for primary sclerosing cholangitis : are Chlamydia species involved? / C. Y. Ponsioen, J. Defoer, F. J. Ten Kate // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. - 2002. - Vol. 14, № 6. - P. 641-648.
19. Sciarra, J. J. Sexually transmitted diseases: global importance / J. J. Sciarra // Int. J. Gynecol. Obstet. - 1997. - Vol. 58, № 1. - P. 107-119.
20. Xu, F. Chlamydia trachomatis infection in women: analysis through a surveillance case registry in Washington State, 1993-1998 / F. Xu, J. A. Schillinger, L. E. Markowitz // Am. J. Epidemiol. - 2000. - Vol. 152, № 12. -Р. 1164-1170.
References
1. Afanasev M. S., Aleshkin V. A., Afanasev S. S., Levakov S. A., Vorobev A. A., Sidorova I. S., Nesvizhskij Ju. V. Virusno-bakterial'naja priroda displazii i raka shejki matki [Viral and bacterial nature of dysplasia and cervical cancer]. VestnikRAMN [Herald of RAMS], 2004, no. 6, pp. 35-40.
2. Gomberg M. A., Solovjov A. M. Algoritmy diagnostiki i lechenija naibolee rasprostranjonnyh infekcij, peredavaemyh polovym putem [Diagnosis and treatment algorithms of the most common sexually transmitted infections]. Trudnyjpacient [Difficult patient], 2004, vol. 2, no. 5, pp. 3-8.
3. Grechishnikova O. G., Aleshkin V. A., Afanasev S. S., Slobodenjuk V. V., Karaulov A. V., Nesvizhskij Ju. V., Rubalskij O. V., Voropaeva E. A., Afanasev M. S., Metelskaja V. A., Bajrakova A. L., Egorova E. A., Rubalskij E. O. Sravnitel'nyj analiz prjamyh metodov laboratornoj diagnostiki urogenital'nogo hla-midioza [Comparative analysis of direct methods of laboratory diagnosis of urogenital chlamydiosis]. Astrahanskij medicinskij zhurnal [Astrakhan Medical Journal], 2010, vol. 5, no. 2, pp. 81-88.
4. Dolgih T. I., Noskova F. V. Opportunisticheskie infekcii u detej (voprosy diagnostiki, kliniki i lechenija) [Children opportunistic infections (issues of diagnosis and treatment)]. Omsk, Publishing House OGMA, 1999, 99 p.
5. Zur N. V., Mironov A. Ju. Podostryj tireoidit kak projavlenie generalizovannoj hlamidijnoj infekcii [Subacute thyroiditis as a manifestation of generaralized chlamydial infection]. Kurskij nauchno-prakticheskij vestnik «Chelovek i ego zdorov'e» [Kursk theoretical and practical bulletin «People & Health»], 2010, no. 4, pp. 60-66.
6. Infekcii, peredavaemye polovym putjom [Sexually transmitted infections]. Ed. V. A. Akovbjana, V. I. Prohorenkova, E. V. Sokolovskogo. Moscow, Media Sphere, 2007, 744 p.
7. Isakov V. A., Arhipov A. G., Aspel Ju. V. Immunopatogenez i lechenie genital'nogo gerpesa i hlamidioza: Rukovodstvo dlja vrachej [Immunopathogenesis and treatment of genital herpes and chlamydia: a guide for physicians]. Novgorod; SPb.: NovGU; NII grippa RAMN, 1999, 150 p.
8. Kudrjavceva L. V., Misjurina O. Ju., Generozov Je. V., Govorun V. M., Burova A. A., Malikov V. E., Lipova E. V., Batkaev Je. A. Klinika, diagnostika i lechenie hlamidijnoj infekcii: Posobie dlja vrachej [Diagnosis and treatment of chlamydial infection: A Manual for Physicians]. Moscow, Russian Medical Academy of Postgraduate Studies, 2001, 29 p.
9. Menshikov V. V. Rukovodstvo po klinicheskoj laboratornoj diagnostike [Manual of Clinical Laboratory Diagnostics]. Moscow, Medicine, 1982, 582 p.
10. Molochkov V. A. Urogenital'nyj hlamidioz [Urogenital chlamydiosis]. Moscow, BINOM, 2006, 208 p.
11. Podzolkova N. M., Istratov V. G., Glazkova O. L., Shamugija N. L. Obosnovanie vybora metoda preryvanija nezhelatel'noj beremennosti u pacientok gruppy vysokogo riska posleabortnyh vospalitel'nyh oslozhnenij [Choice justification of unwanted pregnancy termination method among high-risk patients with post-abortion inflammatory complications]. Problemy reprodukcii [Reproduction problems], 2006, no. 2, pp. 91-94.
12. Poznjak A. L., Lobzin Ju. V., Dobrynin V. M., Babkin P. A. Sravnitel'naja jeffektivnost' racional'nyh shem jetiotropnoj terapii generalizovannyh form hlamidijnoj infekcii u lic molodogo vozrasta [Comparative efficacy of causal treatment rational schemes of generalized forms of chlamydial infection in young people]. Urologija [Urology], 2000, no. 5, pp. 23-26.
13. Puhner A. F., Kozlova V. I. Hlamidijnye jekstragenital'nye zabolevanija [Chlamydial extragenital diseases]. Moscow, Publishing House Triad-X, 2004, 128 p.
14. Savenkova M. S. Hlamidijnaja i mikoplazmennaja infekcii v praktike pediatra [Chlamydia and Mycoplasma infections in pediatric practice]. ConsiliumMedicum, 2005, vol. 7, no. 1, pp. 10-17.
15. Tkachuk V. N. Hronicheskijprostatit [Chronic prostatitis]. Moscow, Medicine, 2006, 112 p.
16. Chebotarev V. V. Urogenital'nyj hlamidioz: sovremennye problemy diagnostiki, patogeneza, lechenija [Urogenital chlamydia: modern problems of diagnosis, pathogenesis, and treatment]. Venerolog [Venereologist], 2004, no. 1, pp. 43 - 48.
17. Microbiology & Microbial infections. Topley & Wilsons. Bacteriology, vol. 2, part. VI, chapter 78. N.Y.: Edward Arnold (Publishers) Ltd., 2005, pp. 2006-2022.
18. Ponsioen C. Y., Defoer J., Ten Kate F. J. A survey of infections agents as risk factors for primary sclerosing cholangitis: are Chlamydia species involved? Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 2002, vol. 14, no. 6, pp. 641-648.
19. Sciarra J. J. Sexually transmitted diseases: global importance. Int. J. Gynecol. Obstet, 1997, vol. 58, no. 1, pp. 107-119.
20. Xu F., Schillinger J.A., Markowitz L.E. Chlamydia trachomatis infection in women: analysis through a surveillance case registry in Washington State, 1993-1998. Am. J. Epidemiol, 2000, vol. 152, no. 12, pp. 1164-1170.
