CC BY
59
ФИЗИОЛОГИЯ И БИОХИМИЯ ПИТАНИЯ
Для корреспонденции
Бучковская Иванна Михайловна - кандидат биологических наук, ассистент кафедры биохимии и биотехнологии Института биологии, химии и биоресурсов Черновицкого национального университета им. Ю. Федьковича
Адрес: 58012, Украина, г. Черновцы, ул. Коцюбинского, д. 2 Телефон: (0372) 58-48-38 E-mail: [email protected]
Г.П. Копыльчук, И.М. Бучковская
Активность ферментов метаболизма ¿-аргинина
в субклеточных фракциях печени крыс
при алиментарной белковой недостаточности
¿-arginine metabolism enzyme activities in rat liver subcellular fractions under condition of protein deprivation
G.P. Kopylchuk, I.M. Buchkovskaya
Институт биологии, химии и биоресурсов Черновицкого национального университета им. Ю. Федьковича, Украина Institute of Biology, Chemistry and Biological Resources of Chemоvtsi National University named after Yu. Fedkovych, Ukraine
Исследованы особенности аргиназного и ЫО-синтазного путей превращения аргинина в субклеточных фракциях печени животных при алиментарной белковой недостаточности. На протяжении эксперимента (28 сут) самцов белых нелинейных крыс массой тела 100-120 г и возрастом 3-3,5 мес содержали на полусинтетическом казеиновом рационе А1Ы-93. Алиментарную белковую недостаточность моделировали путем полного отсутствия или частичной недостаточности белка (1/2 количества казеина от общепринятой нормы - 7%). Суточный рацион нормировали с учетом принципов парного кормления. Установлено, что после 2-недельной белковой недостаточности изменение активности ферментов метаболизма Ь-аргинина в исследуемых субклеточных фракциях печени крыс характеризовалось снижением аргиназной активности в 1,4-1,7 раза на фоне стабильности ЫО-синтазы в цито-золе. В митохондриальной фракции, наоборот, отсутствие изменений величины активности аргиназы сопровождается активацией ЫО-син-тазы в 3-5 раз. В конце эксперимента (28-е сутки) наблюдалась однонаправленность динамики ферментной активности в цитозольной и митохондриальной фракциях клеток печени обеих опытных групп животных. В исследуемых субклеточных фракциях снижение аргиназ-ной активности (2,4-2,7 раза - безбелковый рацион и 1,5 раза - частичная обеспеченность белком) сопровождалось увеличением активности ЫО-синтазы в 3,8 раза в цитозольной фракции и в 7,2 раза в митохондриальной фракции в группе, содержавшейся на безбелковом рационе, и соответственно в 2,2 и 3,5 раза - в группе животных с частичной обеспеченностью экзогенным белком, что, вероятно, связано с переключением метаболизма Ь-аргинина с аргиназного на окислительный ЫО-синтазный путь.
Ключевые слова: Ь-аргинин, аргиназа, ЫО-синтаза, оксид азота, алиментарная белковая недостаточность, печень крысы
15
The features of arginase and NO-synthase pathways of arginine's metabolism have been studied in rat liver subcellular fractions under condition of protein deprivation. During the experimental period (28 days) albino male rats were kept on semi synthetic casein diet AIN-93. The protein deprivation conditions were designed as total absence of protein in the diet and consumption of the diet partially deprived with 1/2 of the casein amount compared to in the regular diet. Daily diet consumption was regulated according to the pair feeding approach. It has been shown that the changes of enzyme activities, involved in L-arginine metabolism, were characterized by 1,4-1,7 fold decrease in arginase activity, accompanied with unchanged NO-synthase activity in cytosol. In mitochondrial fraction the unchanged arginase activity was accompanied by 3-5 fold increase of NO-synthase activity. At the terminal stages of the experiment the monodirectional dynamics in the studied activities have been observed in the mitochondrial and cytosol fractions in both experimental groups. In the studied subcellular fractions arginase activity decreased (2,4-2,7 fold with no protein in the diet and 1,5 fold with partly supplied protein) and was accompanied by NO-synthase activity increase by 3,8 fold in cytosole fraction, by 7,2 fold in mitochondrial fraction in the group with no protein in the diet and by 2,2 and 3,5 fold in the group partialy supplied with protein respectively. The observed tendency is presumably caused by the switch of L-arginine metabolism from arginase into oxidizing NO-synthase parthway.
Key words: L-arginine, arginase, NO-synthase, nitric oxide, alimentary protein deprivation, liver rats
#
В настоящее время белковая недостаточность -далеко не редкое явление, возникающее вследствие преобладания в пищевом рационе белков с низкой биологической ценностью [21, 27, 29], замены полноценного пищевого белка на содержащий ингибитор трипсина соевый [2, 7], самолечения физиологически не обоснованными диетами (например, только растительная пища ограниченного ассортимента) [19, 28], избыточного содержания углеводов и жиров в рационе с одновременным ограничением количества белка и т.д. Длительное белковое голодание или несбалансированный рацион по количеству белка является одним из основных факторов снижения пула свободных аминокислот в организме. Алиментарные нарушения белкового обмена, связанные с недостаточностью, однообразием, дефицитом или доминированием отдельных аминокислот, играют важную роль в формировании различных патологий и определяют особенности их протекания [5, 12].
Эндогенный L-аргинин (1-амино-4-гуанидинова-лериановая кислота) - основной субстрат аргиназы (КФ 3.5.3.1) и NO-синтазы (КФ 1.14.13.39, NOS) -важнейший регулятор гомеостаза организма, поскольку используется не только в процессах синтеза белков, но и функционирует как сигнальная молекула, стимулируя образование цитокинов, высвобождение гормонов поджелудочной железы и т.д. [6, 31]. Метаболизм L-аргинина может осуществляться путем окислительного превращения в оксид азота (NO) и L-цитруллин с участием
NOS и неокислительного - в аргиназной реакции с образованием мочевины и орнитина. Соотношение активности между этими 2 ферментами обеспечивает в клетках определенный пул аргинина [10, 20].
Физиологическая потребность тканей и органов в аргинине удовлетворяется его эндогенным синтезом и/или поступлением с пищей, однако в молодом возрасте и у взрослых при стрессе или определенной патологии эта аминокислота становится эссенциальной [17]. Известно, что в организме человека аргинин может синтезироваться клетками печени в условиях ненарушенного баланса питания. Дефицит аргинина ведет к переключению орнитинового цикла на синтез пиримидиновых оснований [14]. Кроме того, участие аргинина в метаболизме определяет широкий спектр его терапевтического действия, проявляя гепатотропные, противомикробные, иммунотроп-ные, психотропные свойства [4, 6]. Имеюся также сведения [16], что L-аргинин активно влияет на обмен жиров в организме.
Целью работы было исследование активности ферментов метаболизма L-аргинина в субклеточных фракциях печени крыс при алиментарной белковой недостаточности.
Материал и методы
Исследования проводили на самцах белых нелинейных крыс (п=180) массой тела 100-120 г и воз-
16
Г.П. Копыльчук, И.М. Бучковская
растом 3-3,5 мес. Содержание экспериментальных животных и манипуляции с ними проводили с соблюдением требований Европейской конвенции о защите позвоночных животных, использующихся для исследовательских и научных целей (Страсбург, 1986).
Животных содержали по одному в пластмассовых клетках с песчаной подстилкой, доступ к воде ad libitum. Суточный рацион нормировали с учетом принципов парного кормления [25]. На протяжении эксперимента крысы получали полусинтетический рацион [13, 30].
Опытные животные были разделены на равные группы:
1 - животные, содержащиеся на полусинтетическом рационе (14% белка, 10% жиров, 76% углеводов), сбалансированном по всем нутриентам -группа контроля;
2 - животные, содержащиеся на безбелковой диете в течение всего экспериментального периода;
3 - животные, получающие в течение эксперимента полусинтетический рацион с частичной недостаточностью белка (1/2 количества казеина от общепринятой нормы). Рацион включал 7% белка, 10% жиров и 83% углеводов.
Энергетическая ценность рационов составляла 3601 ккал/кг.
Цервикальную дислокацию животных осуществляли под легким эфирным наркозом на 14-е и 28-е сутки.
Митохондриальную фракцию клеток печени получали методом дифференциального центрифугирования [33]. Чистоту митохондриальной фракции контролировали путем сравнительного определения активности сукцинатдегидрогеназы как специфического маркера внутренней мембраны митохондрий и глюкозо-6-фосфатазы -маркера эндоплазматического ретикулума во фракциях микросом и митохондрий. Загрязнение митохондриальной фракции микросомами составляло 7,32%.
Активность аргиназы в митохондриальной фракции и цитозоле клеток печени определяли по образованию мочевины [10] и выражали в нмоль мочевины за 1 мин на 1 мг белка.
Содержание свободного L-аргинина в митохон-дриальной фракции и цитозоле клеток печени определяли по методу [10].
Определение активности NOS проводили модифицированным методом [11]. Активность NOS определяли как разницу между показателями экс-тинкции субстратного и бессубстратного окисления NADPH и выражали в нмоль окисленного NADPH за 1 мин на 1 мг белка.
Содержание NO определяли по модифицированному методу [23] путем образования нитрит-аниона (NO2-), который является стабильным метаболи-
том N0. Калибровочную кривую для определения количества N02- строили по стандартным растворам NaN02 различной концентрации в 20 мМ калий-фосфатном буфере (рН 7,4) при добавлении реактива Грисса.
Концентрацию белка определяли методом Лоури [24].
Статистическую обработку результатов проводили с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни с применением программы обработки статистических данных 81айвйса 6.0. Различия считали достоверными при р<0,05.
Результаты и обсуждение
Аргиназа I, локализующаяся в цитозоле гепато-цитов, участвует в детоксикации аммиака в цикле мочевины [14, 18]. Кроме того, активность данного изофермента часто используется в качестве раннего маркера повреждений печени [15].
Результаты исследований показали, что в условиях содержания животных на безбелковой диете в цитозоле клеток печени в течение всего эксперимента происходит снижение аргиназной активности по сравнению с контролем (рис. 1а). Следует отметить, что если на 14-е сутки потребления безбелкового рациона активность фермента была ниже показателя животных группы контроля в 1,7 раза, то на завершающем этапе - в 2,7 раза, что свидетельствует о более глубоких метаболических изменениях. Пребывание крыс на рационе с частичной недостаточностью белка сопровождалось повышением активности аргиназы в цитозоле по сравнению с предыдущей опытной группой, которая все же оставалась ниже контроля в 1,5 раза в течение всего эксперимента (рис. 1а).
Вероятно, выявленное изменение активности исследуемого фермента в цитозоле связано со снижением интенсивности цикла мочевины вследствие алиментарной белковой недостаточности. В то же время орнитин и мочевина - продукты аргиназной реакции - могут ингибировать метаболизм ¿-аргинина в цикле мочевины, что, возможно, ведет к уменьшению активности цитозольной изо-формы фермента [18].
Следует отметить, что аргинин - единственный субстрат аргиназы, обладающей абсолютной субстратной специфичностью [4, 14]. Исследование содержания Ьаргинина в цитозоле клеток печени свидетельствует о его уменьшении в течение эксперимента у животных опытных групп (рис. 1б). Более интенсивное снижение количества аргинина наблюдается в группе крыс, содержащихся на безбелковой диете. Максимальное снижение концентрации аргинина в условиях как полного отсутствия, так и частичной недостаточности белка в пищевом
17
го 5
14-е сутки 28-е сутки
80 60
го
к
J 40
20 0
14-е сутки
28-е сутки
Группа животных □ 1-я группа □ 2-я группа
3-я группа
Рис. 1. Аргиназная активность (а) и содержание ¿-аргинина (б) в цитозоле клеток печени крыс при алиментарной белковой недостаточности
Примечание здесь и на рис. 2-4: * - достоверность отличий (р<0,05) от показателя животных контрольной группы; ** - достоверность отличий (р<0,05) от показателя животных, содержащихся на безбелковой диете.
#
к2
S 1
14-е сутки
28-е сутки
14-е сутки
28-е сутки
Группа животных □ 1-я группа ■ 2-я группа
3-я группа
Рис. 2. NO-синтазная активность (а) и содержание NO (б) в цитозоле клеток печени крыс при алиментарной белковой недостаточности
3
0
рационе наблюдается на завершающем этапе эксперимента (28-е сутки). Исследуемый показатель в данный период оказался ниже значений контрольной группы соответственно в 9 и 3 раза. Таким образом, снижение активности аргиназы в цитозоле клеток печени опытных групп животных, вероятно, обусловлено недостатком субстрата.
По данным литературы [6, 15], уменьшение клеточного пула L-аргинина может обусловливаться нарушением поступления его в клетку или интенсивным использованием в метаболических процессах. Основным поставщиком эндогенного аргинина является катаболизм белка в организме [14]. Известно, что значительные количества аргинина расходуются на синтез креатина, являющегося субстратом креатинкиназной реакции с образованием креатинфосфата [4, 6]. Следо-
18
вательно, можно предположить, что в условиях недостаточности белка интенсифицируются системы восстановления клеточного фонда креатина в результате усиленного использования L-аргини-на в анаболических процессах [18].
Кроме того, известно, что метаболизм L-аргини-на осуществляется с помощью NOS, конкурирующей с аргиназой за субстрат. Продуктом окислительного пути метаболизма аргинина является NO [1, 20].
Изменение NO-синтазной активности в сторону повышения по сравнению с контролем в обеих опытных группах животных (в условиях безбелкового рациона - в 3,8 раза, частичной обеспеченности белком - в 2,2 раза) наблюдается лишь в конце эксперимента (28-е сутки) (рис. 2а). Отсутствие изменений уровня NO-синтазной активности
Г.П. Копыльчук, И.М. Бучковская
по сравнению с контролем на 14-е сутки эксперимента в группе животных, находившихся на безбелковой диете, сопровождается усиленным образованием N0 в цитозоле клеток печени (рис. 2б).
По данным литературы [3, 9], кроме результата N0-синтазной реакции образование N0 в цитозоле может происходить с участием фермента ксан-тиноксидоредуктазы, обладающей способностью восстанавливать нитриты (N0^) и нитраты (N0^) в N0, а также в качестве побочного продукта циклооксигеназной и липооксигеназной реакций. С учетом вышесказанного можно предположить, что чрезмерное образование N0 на 14-е сутки эксперимента на фоне отсутствия измений активности N0-синтазы по сравнению с контрольными значениями в цитозоле клеток печени в условиях безбелкового рациона может происходить именно за счет активации указанных сигнальных систем с целью реализации потенциального воздействия N0 как внутриклеточного мессенджера [8].
Исследование содержания N0 в цитозоле клеток печени свидетельствует об увеличении его уровня в обеих опытных группах по сравнению с контролем (рис. 2б). Однако в группе животных, пребывающих на безбелковой диете, повышение уровня N0 наблюдается уже на 14-е сутки, продолжая возрастать до завершения эксперимента. На 28-е сутки отсутствие белка в рационе сопровождается максимальным образованием N0, превышающим значения контроля в 6 раз. Что касается группы животных, частично обеспеченных белком, то увеличение уровня N0 в клетках печени происходит лишь на 28-е сутки и составляет 3,4 раза по сравнению со значениями контроля (рис. 2б). Вероятно, поначалу N0 выступает как внутриклеточный посредник, однако на завершающих этапах эксперимента может оказывать токсическое воздействие путем образования нитрозильных
комплексов с гемовым и негемовым железом или через активные формы азота, вызывающие эндогенную интоксикацию организма [8, 9].
Итак, алиментарная белковая недостаточность сопровождается угнетением аргиназного пути метаболизма ¿-аргинина с одновременной активацией его окислительного N0-синтазного преобразования с повышенной генерацией N0.
В митохондриальной фракции клеток локализуется аргиназа II, регулирующая клеточную концентрацию ¿-аргинин/орнитин. Кроме того, аргиназа II ингибирует активность N08, непосредственно регулируя синтез N0 [14]. Многочисленные исследования [15, 18] показывают, что дефицит аргиназы I индуцирует форму аргиназы II, компенсирующую недостаток первой путем регуляции концентрации клеточного ¿-аргинина.
Результаты исследований аргиназной активности в митохондриальной фракции клеток печени крыс свидетельствуют о ее снижении по сравнению с контролем в обеих опытных группах, однако лишь в конце эксперимента (рис. 3а). Полное лишение крыс поступления экзогенного белка приводит к снижению ферментной активности в 2,4 раза по сравнению с контрольными значениями, в то время как в группе, частично обеспеченной белком, на 28-е сутки эксперимента активность аргиназы снижалась лишь в 1,5 раза по сравнению с контролем.
Известно, что экспрессия митохондриальной изоформы изменяется в зависимости от воздействия экзогенных или эндогенных факторов и потребностей метаболизма [15]. Учитывая роль аргиназы II в регуляции клеточной концентрации ¿-аргинин/орнитин и непосредственного синтеза N0 [17], мы предположили, что в клетках печени крыс, находившихся на безбелковой диете, снижение аргиназной активности происходит вследст-
го
£ 2
ф ю
го ф
ю
60
40
20
14-е сутки 28-е сутки
14-е сутки 28-е сутки
Группа животных □ 1-я группа ■ 2-я группа
3-я группа
Рис. 3. Аргиназная активность (а) и содержание ¿-аргинина (б) в митохондриальной фракции клеток печени крыс при алиментарной белковой недостаточности
19
0
ФИЗИОЛОГИЯ И БИОХИМИЯ ПИТАНИЯ
го ф
ю 2
X I
-D
О
н * ,**
idl
14-е сутки 28-е сутки
го
* 3
14-е сутки 28-е сутки
Группа животных □ 1-я группа □ 2-я группа
3-я группа
Рис. 4. 1\10-синтазная активность (а) и содержание N0 (б) в митохондриальной фракции клеток печени крыс при алиментарной белковой недостаточности
3
4
0
0
вие активации синтазы NO. Недостаток белка в данных экспериментальных условиях можно рассматривать как определяющий стрессовый фактор функционально-метаболических нарушений организма. Данные литературы [32] свидетельствуют о том, что в условиях индуцированных стрессовых состояний происходит активация NOS с усиленным синтезом NO.
Действительно, результаты исследований показали, что в условиях содержания животных на безбелковой диете в митохондриальной фракции клеток печени на протяжении всего экспериментального периода наблюдается повышение NO-синтазной активности по сравнению с контролем соответственно в 5 и 7,2 раза на 14-е и 28-е сутки (рис. 4а). Пребывание крыс на низкобелковом рационе приводило к снижению активности фермента в исследуемой фракции по сравнению с таковой у животных, лишенных белка, но она все же оставалась выше контроля в 3,5 раза (см. рис. 4а).
Вероятно, увеличение NO-синтазной активности на фоне стабильности активности аргиназы на 14-е сутки эксперимента определяется общностью субстрата для обоих исследованных ферментов и возникновением конкурентных взаимосвязей [1, 20]. Снижение количественного содержания арги-
нина в митохондриальной фракции клеток печени крыс обеих опытных групп (рис. 3б), вероятно, вызвано интенсификацией NO-синтазной реакции (рис. 4), т.е. отсутствием характерных изменений аргиназной активности в данный период (рис. 3а) и усилением окислительного превращения L-аргини-на с участием NOS в NO и L-цитруллин [26]. Цитрул-лин, с одной стороны, является предшественником синтеза L-аргинина de novo, а с другой - ингибитором окислительного метаболизма по принципу отрицательной обратной связи. Следует также отметить, что промежуточный продукт NO-синтазной реакции -№-гидрокси-£-аргинин - является потенциальным ингибитором аргиназы [22]. Таким образом, очевидно, что снижение аргиназной активности с одновременным уменьшением количества L-аргинина в митохондриальной фракции клеток печени крыс в условиях алиментарной белковой недостаточности непосредственно связано с активацией NO-зави-симой системы.
В целом полученные результаты позволяют сделать вывод, что при алиментарной белковой недостаточности в клетках печени крыс на фоне снижения аргиназной активности преобладает окислительный метаболизм L-аргинина с активацией NOS и усиленной генерацией NO.
Сведения об авторах
Копыльчук Галина Петровна - доктор биологических наук, профессор кафедры биохимии и биотехнологии Института биологии, химии и биоресурсов Черновицкого национального университета им. Ю. Федьковича (Украина) E-mail: [email protected]
Бучковская Иванна Михайловна - кандидат биологических наук, ассистент кафедры биохимии и биотехнологии Института биологии, химии и биоресурсов Черновицкого национального университета им. Ю. Федьковича (Украина) E-mail: [email protected]
20 Вопросы питания. Том 83, № 4, 2014
Г.П. Копыльчук, И.М. Бучковская
Литература
1. Близнецова Г.Н., Артемьева С.С, Рецкий М.И. Влияние L-арги- 18. нина и ингибиторов NO-синтазы на образование оксида азота и нитрозотиолов при токсическом повреждении печени // Биомед. химия. - 2005. - Т. 51, № 6. - С. 656-661. 19.
2. Бородин Е.А., Аксенова Т.В., Анищенко Н.И. Пищевые продукты из сои. Новая роль // Вестн. ДВО РАН. - 2000. -
№ 5. - С. 72-85. 20.
3. Ванин А.Ф. Оксид азота: регуляция клеточного метаболизма без участия системы клеточных рецепторов // Биофизика. - 2001. - Т. 46, № 4. - С. 631-641. 21.
4. Галкин Б.Н. Антитоксические свойства аргинина // Соврем. пробл. токсикол. - 2003. - № 1. - С. 80-86.
5. Громова Л.В. Влияние белкового голодания на гидроли- 22. тические и транспортные характеристики тонкой кишки крыс в условиях хронического опыта // Рос. физиол. журн. -2006. - Т. 92, № 10. - С. 1239-1249.
6. Кишко Т.О., Шандренко С.Г., Дмитренко Н.П. Аргинин: биоло- 23. гическое действие, влияние на синтез оксида азота // Журн. АМН Украины. - 2008. - Т. 14, № 1. - С. 150-158.
7. Котровский А.В. Соевое питание. - М.: Полиграфлес, 2001. - 42 с. 24.
8. Манухина Е.Б, Дауни Х.Ф, Маллет РТ, Малышев И.Ю. Защитные и повреждающие эффекты периодической гипоксии: роль оксида азота // Вестн. РАМН. - 2007. - № 2. - С. 25-33. 25.
9. Осипов А.Н., Борисенко Г.Г., Владимиров Ю.А. Биологическая роль нитрозильных комплексов гемопротеинов // Успехи биол. химии. - 2007. - T. 47. - C. 259 - 292.
10. Перетятко Ю.В., Сибирная Н.А. Особенности аргиназного
и NO-синтазного путей метаболизма L-аргинина в лейкоци- 26. тах периферической крови крыс в условиях хронического рентгеновского облучения // Укр. биохим. журн. - 2009. - 27. Т. 81, № 2. - С. 40-48.
11. Сумбаев В.В., Ясинская И.М. Влияние ДДТ на активность син-тазы оксида азота в печени, легких и головном мозге крыс // 28. Соврем. пробл. токсикологии. - 2000. - № 3. - С. 3-7.
12. Тимофеева Н.М, Никитина А.А, Егорова В.В, Гордова ЛА Влияние дефицита белка в питании крыс в раннем онтогенезе
на функционирование ферментных систем пищеваритель- 29. ных и непишеварительных органов во взрослой жизни // Бюл. экспер. биол. - 2004. - Т. 138, № 7. - С. 12-15.
13. Тышко Н.В,. Жминченко В.М, Пашорина В.А. и др. Сравнительная характеристика влияния экспериментальных 30. рационов на рост и развитие крыс // Вопр. питания. - 2011. -
Т. 80, № 5. - С. 30-38.
14. Ash D.E. Structure and function of arginases // J. Nutr. -2004. - Vol. 134. - P. 2760-2764.
15. Bachetti T., Comini L., Francolini G. et al. Arginase pathway in 31. human endothelial cells in pathophysiological conditions //
J. Mol. Cell. Cardiol. - 2004. - Vol. 37, N 2. - Р. 515-523.
16. Bellentani S., Tinbelli C. Epidemiology and risk factors for fatty 32. liver // Steatohepatitis (NASH and ASH) / Eds U. Leuschner, O.F.W. James, H. Dancygier - Dordrecht: Kluwer Academic Publishers, 2001. - Р. 3-10.
17. Bode-Boger S.M. Effect of L-arginine supplementation on NO 33. production in man // Eur. J. Clin. Pharmacol. - 2006. - Vol. 62,
N 1. - P. 91-99.
Cederbaum S., Yu H, Grody W. et al. Arginases I and II: do their functions overlap? // Mol. Genet. Metab. - 2004. - Vol. 81, N l. - P. 38-44.
Craig W.J., Mangels A.R. Position of the American Dietetic Association: vegetarian diets // J. Am. Diet. Assoc. - 2009. -Vol. 109, N 7. - P. 1266-1282.
Durante W., Johnson F.K., Johnson R.A. Arginase: a critical regulator of nitric oxide synthesis and vascular function // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. - 2007. - Vol. 34, N 9. - P. 906-911. Fontana L. Long-term low-protein, low-calorie diet and endurance exercise modulate metabolic factors associated with cancer risk // Am. J. Clin. Nutr. - 2006. - Vol. 84, N 6. - P. 1456-1462. Hayashi T., Juliet P., Matsui-Hirai H. et al. L-citrulline and L-arginine supplementation retards the progression of high-cholesterol-diet-induced atherosclerosis in rabbits // Proc. Natl Acad. Sci. USA - 2005. - Vol. 102, N 38. - P. 13681-13686. Hwang S., Lopec C.A., Heck D.E. et al. Osteopontin inhibits induction of nitric oxide synthase gene expression by inflammatory mediators in mouse kidney epithelial // J. Biol. Chem. - 1994. - Vol. 264. - P. 711-715. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L. Protein measurement with Folin phemol reagent // J. Biol. Chem. - 1951. - Vol. 123, N 1. - P. 265-273.
Mashiko S., Ishihara A, Iwaasa H. et al. A Pair-Feeding Study Reveals That a Y5 Antagonist Causes Weight Loss in Diet-Induced Obese Mice by Modulating Food Intake and Energy Expenditure // Mol. Pharmacol. - 2007. - Vol. 71, N 2. -P. 602-608.
Nikoli E., Carruba M.O. Nitric oxide and mitochondrial biogenesis // J. Cell Sci. - 2006. - Vol. 119. - P. 2855-2862. Pan Y. Low-protein diet for diabetic nephropathy: a meta-analysis of randomized controlled trials // Am. J. Clin. Nutr. - 2008. -Vol. 88, N 3. - P. 660-666.
Piccoli G., Ferraresi M., Deagostini M. et al. Vegetarian low-protein diets supplemented with keto analogues: a niche for the few or an option for many? // Nephrol. Dial. Transplant. -2013. - Vol. 28, N 9. - P. 2295-2305. Rasmussen L., Winning H., Savorani F.et al. Assessment of the effect of high or low protein diet on the human urine metabolome as measured by NMR // Nutrients. - 2012. - Vol. 4, N 2. -P. 12-31.
Reeves P., Nielsen F, Fahey G. AIN-93 Purified Diets for Laboratory Rodents: Final Report of the American Institute of Nutrition Ad Hoc Writing Committee on the Reformulation of the AIN-76A Rodent Diet // J. Nutr. - 1993. - Vol. 123, N 11. - P. 1939-1951.
Scibior D., Czeczot H. Arginine - metabolism and functions in the human organism // Postepy Hig. Med. Dosw. - 2004. -Vol. 58. - P. 321-332.
Takeuchi K., Hatazava R., TanigamiM. Role of endogenous nitric oxide (NO) and NO synthase in healing of indomethacin-induced intestinal ulcers in rats // Life Sci. - 2007. - Vol. 80, N 4. -P. 329-336.
Weinbach T.C. A procedure for isolating stadle mitochondria from rat liver and kidney // Anal. Biochem. - 1961. - Vol. 2. -P. 335-343.
21
