CC BY
12
прессанты (299 случаев с положительным результатом), производные фенотиазина (111 случаев с положительным результатом) и прочие лекарственные средства (5101 положительный результат).
Изучение специальной литературы, передового опыта зарубежных лабораторий и наш многолетний опыт выполнения исследований позволил сформулировать методологические подходы к стандартизации методов исследования наркотических и лекарственных веществ в объектах биологического происхождения. Понимание возможностей различных методов позволило разработать стратегию для надежного скрининга и подтверждения лекарств и наркотиков, оценить и выбрать подходящие методики судебно-химических и химико-токсикологических исследований.
Аналитическая стратегия строится с учетом поставленных целей и зависит от предоставленных объектов, информации об обстоятельствах смерти. Обычно, это использование нескольких методов с раздельным скринингом, подтверждением и количественным определением (иммунные, хроматографические с различными детекторами). В стратегию включены разработка и валидация методик для новых, впервые и редко встречающихся веществ, а также их включение в существующую аналитическую схему.
В секционных докладах за круглым столом будут охарактеризованы стандартные процедуры скрининга и подтверждения наркотических, лекарственных веществ и их метаболитов в объектах биологического происхождения, применяемые в крупнейшей судебно-химической лабораторной службе в Российской Федерации, которая ежегодно занимается не только случаями судебно-химических исследований объектов биологического происхождения по направлениям врачей - судебно-медицинских экспертов Московской области, но и выполняет химико-токсикологические исследования объектов биологического происхождения от живых лиц.
■ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АЛКАНОВЫХ ИНДЕКСОВ УДЕРЖИВАНИЯ ДЛЯ ОБРАБОТКИ МАСС-СПЕКТРАЛЬНЫХ ДАННЫХ ПРИ ОБНАРУЖЕНИИ КОНТРОЛИРУЕМЫХ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ В БИОЛОГИЧЕСКИХ
ОБЪЕКТАХ МЕТОДОМ ГХ-МС_
А. М. Григорьев
ГБУЗ МО «Бюро СМЭ», Москва Повышение достоверности и надежности газового хромато-масс-спектрометрического анализа биологических объектов возможно только при наиболее полном учете возможностей метода. В условиях практической лаборатории это подразумевает учет хроматографического удерживания с помощью унифицированных величин - алкановых индексов, присутствующих в качестве идентификационных параметров в поисковых библиотеках. Ключевые слова: идентификация, ГХ-МС, индексы, биологические объекты, библиотеки Назначение современного судебно-химического и химико-токсикологического анализа (СХА и ХТА) биологических объектов предполагают необходимость определения многих тысяч ксенобиотиков и их производных, попадающих в организм человека и являющихся причиной расстройств здоровья и смерти. Газовая хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС) как метод анализа сложных смесей распространена в РФ и фактически является стандартным методом в области СХА и ХТА как ввиду простоты и относительной дешевизны, так и вследствие
наличия доступных поисковых библиотек, позволяющих обнаруживать значительное число тематических соединений в автоматизированном режиме.
Высокую достоверность методам хромато-масс-спек-трометрии придает возможность идентификации ана-литов на основе двух независимых параметров: удерживания и масс-спектра. С рядом оговорок, масс-спектр может считаться параметром, стандартизированным по причине существования исторически сложившихся схем регистрации. Однако, стандартизация удерживания затруднена как минимум, ввиду наличия разных способов измерения. Поскольку (даже при использовании неподвижных фаз воспроизводимого химического состава) существенным вкладом в хроматографическое удерживание является случайно или намеренно изменяемая геометрия хроматографических колонок и состояния газо- и тер-морегулирующей системы хроматографа, то становится очевидным, что параметр удерживания должен быть относительным.
В настоящее время распространены два способа измерения относительного удерживания: фиксируемые времена, предлагаемые фирмой Agilent Technologies и алкано-вые индексы. Полагаем, что главными преимуществами индексов, выгодно отличающими их от фиксируемых времен, следует назвать:
• значительное количество измеренных величин, накопленных хроматографистами за почти 60 лет со времени появления;
• наличие во многих библиотеках (в том числе NIST Mass Spectral Library, Mass Spectra of Designer Drug, Mass Spectral Library of Drugs, Poisons, Pesticides, Pollutants, and their Metabolites и пр.);
• возможность расчета по структурным характеристикам аналитов (NIST);
• возможность оценочных пересчетов при изменении хроматографических условий.
Определение индексов удерживания и их использование при автоматизированной идентификации анали-тов выполняется с помощью известных систем обработки газовых ион-хроматограмм (Automated Mass Spectral Deconvolution and Identification System и AIPSIN). Для получения наиболее достоверных результатов, присутствующие в библиотеках значения индексов должны быть корректированы с учетом применяемого хроматографи-ческого метода.
ВЫВОДЫ
Алкановые индексы удерживания - необходимый параметр идентификации аналитов на фоне сложной биогенной матрицы. Обладая рядом преимуществ по сравнению с другими параметрами удерживания, индексы позволяют повысить достоверность газового хро-мато-масс-спектрометрического анализа биологических объектов.
A VETERINARIAN'S SUICIDE BY INTRAVENOUS
SELF-INJECTION WITH T61-A SUBSTANCE
USED IN ANIMAL EUTHANASIA_
B. Malinescu1, M. Costescu2, D. Radu2, G. Costea3, M. Ceausu2, C. Stefanescu\ M. Dragu3
illfov Medico-Legal Service-Bucharest, Romania 2«Mina Minovici» National Institute of Legal Medicine-Bucharest, Romania 3Buzau Medico-Legal Service-Buzau, Romania Keywords: T61, euthanasia agent, hard suicide T61 is a solution used for animal euthanasia, a mixture of 3 substances: embutramide (opioid analgesic), mebezonium
iodide (curare-compound) and tetracaine hydrochloride (local anesthetic).
The authors present the case of a 27-year-old female, a veterinarian, who was found dead in bed, in her apartment, next to a 10-ml syringe with an attached branch, containing 4 ml of liquid, a transparent substance.
The paper analyzes the findings in a case of intravenous self-administration of T61 with a suicidal intention, respectively: the necropsy data and the results of the histopathological, toxicological, tanatochemical and serological examinations.
The presentation also includes a psychopathological analysis of this «hard suicide» (nonreturn suicide), less commonly encountered when the chosen method of suicide is an intoxication.
The analytical methods currently used for highlighting and dosing the T61 component substances are also presented.
The presentation brings focus on a less common way of suicide, by use of veterinary euthanasia agents. This must always be suspected by the forensic doctors when the suicidal people have access to such substances through their profession.
■ ОБНАРУЖЕНИЕ 2,4-ДИНИТРОФЕНОЛА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ (СЛУЧАЙ ИЗ ПРАКТИКИ)_
М. А. Гладкий, П. М. Манаков, Е.И. Стародубцева
ГБУЗ ТО «Областное бюро СМЭ», Тюмень 2,4-динитрофенол (2,4-ДНФ, ДНФ) является разобщителем, по этой причине его используют как жиросжигатель. Однако ДНФ представляет смертельную угрозу для здоровья человека, поэтому его постмортальная идентификация в биожидкостях является весьма актуальной. Методами ВЭЖХ и ГХ/МС в крови и содержимом желудка идентифицируется 2,4-ДНФ.
Ключевые слова: динитрофенол, похудение, токсичность, летальность
2,4-динитрофенол (ДНФ) представляет серьезную угрозу для здоровья человека. На сегодняшний день растет интерес и доступность нелегальных препаратов, содержащих ДНФ. Механизм действия ДНФ связан с разобщением окисления и фосфорилирования в митохондриях, что сопровождается ускорением основного обмена, липолиза и потерей массы тела. По этой причине его используют как жиросжигатель. Однако неконтролируемый прием данного соединения приводит в большинстве случаев к смертельным исходам. Поэтому постмортальное идентификация ДНФ в биологических жидкостях человека является весьма актуальной задачей.
2,4-динитрофенол (2,4-ДНФ, ДНФ) является органическим соединением, относящимся к классу динитро-фенолов. При комнатной температуре существует как кристаллическое вещество желтого цвета, которое имеет затхлый запах и плохо растворимо в воде (2790 мг/л при 20 °C). Используется при производстве красителей, взрывчатых веществ, фунгицидов и гербицидов.
2,4-ДНФ легко абсорбируется из дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта (в основном всасывание происходит из желудка). Другим фактором, способствующим быстрому поглощению ДНФ, является его малая молекулярная масса (184,1 дальтон).
2,4-ДНФ метаболизируется до 2-амино-4-нитрофе-нола и 4-амино-2-нитрофенола. В исследованиях на мышах было заключено, что количество образованного 2-амино-4-нитрофенола в 7,9 раза превышает количество 4-амино-2-нитрофенола и что 50 % дозы 2,4-ДНФ превращается в эти два соединения.
Выделение ДНФ и продуктов его распада происходит в основном с мочой.
В исследованиях на животных было показано, что ДНФ является тератогенным, мутагенным и канцерогенным агентом.
На сегодняшний день в медицинской литературе зарегистрировано более 60 смертельных случаев, вызванных передозировкой 2,4-ДНФ.
Объектом для исследования послужил биологический материал, взятый от человека, который прижизненно употреблял ДНФ.
Хромато-масс-спектрометрическое исследование проводили на хроматографе Agilent Technologies 7890B с масс-селективным детектором Agilent Technologies 5977А в режиме сканирования индивидуальных ионов.
Подготовку проб проводили экстракцией хлороформ-бутанольной смесью при pH 9-10 из 2 мл крови или содержимого желудка с добавлением N-этилбензиламина в качестве внутреннего стандарта. Пробы дериватизировали. Сухой остаток растворяли в 200 мкл этилацетата и 1 мкл вводили в инжектор хроматографа. При исследовании полученных хроматограмм обнаружили пик, со временем удерживания 7,995 мин и характеристичными ионами (184, 63, 154), схожими с 2,4-динитрофенолом.
Проводили жидкость-жидкостную экстракцию хло-роформ-изопропанольной смесью при pH 9-10 из 0,2 мл крови или содержимого желудка. Сухие остатки от извлечений растворяли в 0,1 мл 0,1 Н соляной кислоты. Полученные пробы исследовали методом ВЭЖХ.
На хроматограммах извлечений из содержимого желудка и крови идентифицировали пик 2,4-динитрофенола по времени удерживания и спектральным отношениям.
При использовании двух методов мы идентифицировали ДНФ как в крови, так и в содержимом желудка. Поэтому данные методы могут быть использованы в дальнейших лабораторных исследованиях, в частности, для количественного определения ДНФ.
ВЫВОДЫ
Методами ВЭЖХ и ГХ/МС в крови и содержимом желудка идентифицируется 2,4-ДНФ.
■ ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ОСТРЫХ ОТРАВЛЕНИЙ В РЯЗАНСКОЙ ОБЛАСТИ
М. А. Мусинова, Н. М. Крупнов, И. В. Мордасова
ГБУ РО «Бюро СМЭ», Рязань Цель работы - проанализировать структуру и выявить динамику структуры острых химических отравлений в целом и по отдельным токсикантам, а также по гендерному признаку, на территории региона за трехлетний период. Ключевые слова: острые химические отравления, структура, химико-токсикологическая диагностика По обобщенным данным Россия занимает лидирующее место по количеству острых химических отравлений, распространенность их составляет 68,2 на 1000 населения. Смертность в результате отравлений достаточно велика и составляет 4,2 %.
Использованы материалы статистической отчетности химико-токсикологической лаборатории Бюро судебно-медицинской экспертизы за период с 2016 по 2018 год.
Острые отравления химической этиологии относятся по Международной статистической классификации болезней к рубрикам девятнадцатого класса (Т 36 - Т 65) и включают отравления лекарственными веществами, а также токсикантами преимущественно немедицинского назначения (в том числе этанолом
