Научная статья на тему 'К генодиагностике возбудителя современной холеры эльтор'

К генодиагностике возбудителя современной холеры эльтор Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

CC BY
56
18
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Инфекция и иммунитет
Scopus
ВАК
RSCI
ESCI
Область наук
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — В.Н. Савельев, О.В. Васильева, И.В. Савельева, Б.В. Бабенышев, А.Н. Куличенко

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «К генодиагностике возбудителя современной холеры эльтор»

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

ты C. tetani, P. gingivalis и C. sporogenes обладали типичной ферментативной активностью. В то же время белки C. difficile и B. melitensis были ошибочно отнесены к МГЛ при аннотировании в соответствующих геномах. Для ферментов из P. gingivalis, C. tetani и C. sporogenes удельная активность равнялась соответственно 5,0 ед/мг, 16,6 ед/мг и 11,0 ед/мг белка. Стационарные кинетические параметры для этих ферментов в реакции гамма-элиминирования метионина составили соответственно Km = 1,77 мМ, kcat = 3,9 c-1; Km = 0,947 мМ, kcat = 12 с-1 и Km = 0,432 мМ, kcat = 9,86 c-1 и были сопоставимы с соответствующими параметрами для МГЛ из Citrobacter freundii. Таким образом, проведенная работа по получению и характеристике МГЛ позволяет приступить к поиску ингибиторов данных ферментов.

О ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗНАЧИМОСТИ ТРОМБОПЛАСТИНА В ИНФЕКЦИОННОМ ПРОЦЕССЕ

А.Ю. Резникова, А.Н. Ложкина

Медицинская академия, Санкт-Петербург; Медицинская академия, г. Чита

Тромбопластин — мембранная фракция (фактор III свертывания крови, включающий тканевой фактор /TF/) — белково-липидный комплекс, традиционно рассматриваемый как индуктор тромботиче-ских состояний. Выработка и экспрессия тканевого фактора эндотелиальными клетками может быть индуцирована TNF-альфа, IL-1 (интерлейкином), IL-2, IL-8, тромбином, липополисахаридом грамо-трицательных бактерий, липоксигеназой, адреналином, липопротеинами очень низкой плотности, продуктами перекисного окисления липидов, лек-тинами, Р-селектином, различными метаболитами в зонах ишемии и ацидоза.

В условиях in vitro тромбопластин повышает количество фагоцитирующих клеток (фагоцитарный показатель) в 1,5 раза — с 60±1 в контроле до 95±3 в опыте /Р < 0,001/ (практически все видимые в поле зрения нейтрофилы с фагоцитированными микробными телами). Среднее число микробов, поглощенных одним активным нейтрофилом (фагоцитарный индекс) возросло в 3 раза — с 38±5 в контроле до 122+13 в эксперименте (Р < 0,001).

Очищенный нами тромбопластин и тромбопластин, выделенный по методу Quick, вводили белым беспородным крысам (n = 100). Внутривенное введение крысам тромбопластина (2 мл/кг; 20 мг/кг; 30-секундной активности) вызывает потребление тромбоцитов, гипер-гипокоагуляционные сдвиги и стимулирует фибринолиз. Введение смеси суспензии тромбопластина и лактозонегативной кишечной палочки (5 х 104 микробных тел/кг, 2,5 мл/кг), либо тромбопластина и суспензии Staphylococcus aureus (5 х 104 микробных тел/кг; 2,5 мл/кг) на 30% снижает летальность. У крыс, которым вводили стафилококк совместно с тромбопластином, наблюдалось более легкое течение заболевания: животные испытывали меньшее чувство жажды, диспепсии не наблюдалось, явления воспаления были не столь ярко выраженными; через сутки отмечалось значительное улучшение показателей; ускорялся фибринолиз.

Таким образом, тромбопластин в два раза увеличивает поглотительную способность фагоцитов в отношении стафилококков, облегчает тяжесть течения инфекционного процесса, на треть снижает летальность взятых в эксперимент животных.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ЖЕЛЧНОКАМЕННОЙ БОЛЕЗНИ

Т.В. Рукосуева, О.В. Перьянова, Е.В. Серова

ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздравсоцразвития России, г. Красноярск

В последние годы отмечается рост числа больных желчнокаменной болезнью (ЖКБ). ЖКБ опасна тяжелыми осложнениями инфекционного характера, которые представляют прямую угрозу жизни пациента. Значение бактериохолии в возникновении заболеваний билиарной системы и ее влияние на результаты оперативных вмешательств является актуальным.

Исследован материал, полученный интраопе-рационно от пациентов с различными формами острого холецистита. При гангренозной форме в желчи и тканях стенки желчного пузыря доминируют представители семейства Enterobacteriaceae (64,5+8,6%). При этом 41,9±8,7% приходилось на долю E. coli. Для флегмонозного калькулезного холецистита (ФКХ) характерно присутствие примерно в равных долях энтеробактерий (33,9+6,0%) и грамположительных кокков (35,5+6,1%), среди последних преобладали коагулазоотрицательные Staphylococcus spp. Образцы, полученные от пациентов с ФКХ, дали самый высокий процент вы-севаемости, наиболее разнообразный видовой спектр микроорганизмов (P. aeruginosa, C. albicans, анаэробные бактерии и др.); достоверно чаще (р < 0,01) были выделены ассоциации микрорганиз-мов (59,1+7,0% проб). Анаэробная флора каждый раз ассоциировалась с особенно тяжелым течением болезни и была представлена бактериями рода Peptococcus (3,6± 1,7%). Другой видовой состав микроорганизмов был выявлен при посеве материалов от пациентов с острым калькулезным холециститом (ОКХ): энтеробактерии составили всего 17,7+9,5%, преимущественно выделялись грамположительные кокки — 53,0+12,5%, представленные главным образом E. faecalis (35,3+11,9% случаев).

Таким образом, спектр микроорганизмов выявляемых при данной патологии варьирует в зависимости от клинико-морфологической формы калькулезного холецистита. При изучении чувствительности выделенных культур к антибактериальным препаратам установлено, что анаэробные микроорганизмы показали высокую частоту резистентности к ме-тронидазолу, который считается препаратом выбора при лечении анаэробных инфекций. По результатам проведенных исследований рекомендовано назначать стартовую эмпирическую терапию острых форм калькулезного холецистита с учетом предполагаемой микрофлоры и особенностей резистентности билиарной микрофлоры.

К ГЕНОДИАГНОСТИКЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ СОВРЕМЕННОЙ ХОЛЕРЫ ЭЛЬТОР

В.Н. Савельев, О.В. Васильева, И.В. Савельева, Б.В. Бабенышев, А.Н. Куличенко

ФКУЗ Ставропольский противочумный институтРоспотребнадзора, г. Ставрополь

Седьмая пандемия холеры, доминирующим этиологическим агентом которой более чем полувека является Vibrio cholera 01 biotype eltor, продолжается,

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

несмотря на непрерывные попытки ограничить ее распространение, и представляет постоянную угрозу для населения и общественного здравохранения многих стран мира. Новым этапом в развитии пандемии стало формирование и широкое распространение генетически измененных — гибридных — вариантов холерного вибриона эльтор. В их геноме помимо генов, присущих биовару эльтор (rstRE1, ге^), присутствуют гены классического холерного вибриона (rstRC1, ctxBC1), кодирующие синтез энтеротоксина классического типа. Вследствие этого холера, обусловленная гибридными вариантами эльтор, протекает по типу классической, преимущественно с контактно-бытовым и пищевым путями передачи возбудителя.

В свете вышеизложенного нами разработана тест-система для генодиагностики типичных и гибридных вариантов холерного вибриона эльтор методом ПЦР.

Постановку ПЦР осуществляли в термостате «Терцик» в формате «мультиплекс» в двух пробирках объемом 600 мкл, содержащих 1) реакционную смесь и праймеры генов rstRE1, ctxBE1, геЮ и 2) реакционную смесь и праймеры генов rstRC1, ctxBC1. Тестировали лизаты клеток

V. cho1erae различного происхождения. Программа термоциклирования: предварительная денатурация при 95°С — 5мин., затем 35 циклов, состоящих из шагов: 95°С — 30 с; 56°С — 30 с; 72°С — 30 с Финальная элонгация 72°С — 7 мин. Продукты ПЦР фракционировали в 2% агарозном геле в электрическом поле напряженностью 7,5 В/см и регистрировали в ультрафиолетовом свете. Результаты тестирования генов изучаемого штамма сводили в таблицу, по данным которой определяли генотип и вариант холерного вибриона эльтор:

Полученные данные позволяют выявить три генотипа холерного вибриона эльтор, которые характеризуются наличием наряду с ctxA, геЮ, следующих генов: генотип I содержит только свои собственные, эльторовские, гены — rstRE1 и ctxBE1, генотип II — гены rstRE1, rstRC1as и ctxBC1as, генотип III — rstRC1as и ctxBC1as. Генотип I — типичный вариант холерного вибриона эльтор, продуцирующий токсин 2-го типа. Генотипы II и III — генетически измененные — гибридные — варианты биовара эльтор, продуцирующие токсин 1-го типа.

ВСПЫШКА АДЕНОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ВОЕННОСЛУЖАЩИХ

С.И. Савельев15, И.А. Щукина15, Н.М. Фатина1, И.В. Ярковская1, В.А. Бондарев2,5, Н.В. Зубчонок25, Е.И. Вендеревская2, А.С. Фролов3, А.Т. Чесноков3, В.И. Мищук3, М.Н. Шнель3, С.Б. Яцышина4

'Управление Роспотребнадзора по Липецкой области, г. Липецк; 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Липецкой области», г. Липецк; 3ГУЗ «Липецкая областная клиническая инфекционная больница», г. Липецк; 4ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Москва; 5ГБОУВПО Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург

На долю аденовирусов приходится от 5 до 10% от всех ОРВИ. Клиническая картина аденовирусной инфекции зависит от серотипа возбудителя: сероти-пы 3 и 7 чаще других вызывают ОРВИ с возможным развитием пневмоний. Наиболее восприимчивы дети до 5 лет, а так же взрослые в недавно организованных коллективах, в частности военнослужащие.

В период с 25.12.2010 г. по 14.01.2011 г. в в/ч г. Липецка среди рядового состава срочной службы был зарегистрирован 141 случай заболеваний ОРВИ, из них в 12 случаях с осложнением в виде пневмонии. С целью установления этиологии вспышки на базе ФБУЗ «ЦГиЭ в Липецкой области» было проведено исследование образцов клинического материала от 51 больного на наличие РНК вирусов гриппа А и В, A/H1-swine, парагриппа, РС-вируса, ДНК аденовирусов с помощью ПЦР тест-систем ООО «ИнтерЛабСервис», в ходе которого в 7 случаях были обнаружены вирусы парагриппа, в 40 — аденовирусы, в 1 случае — вирус гриппа В.

Кроме того, в ходе проведенных на базе МУЗ «КИБ г. Липецка» бактериологических и ПЦР-исследований клинического материала от больных с пневмониями у 6 человек обнаружен ß-гемолитический стрептококк, у 2 — Mycoplasma pneumoniae.

50 проб от 24 больных были переданы в ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора. У 24 из 24 обследованных обнаружена ДНК аденовирусов, в том числе у 15 в высокой нагрузке; при секвенировании генома аденовирусов в 21 образце идентифицирована последовательность, характерная для аденовирусов се-ротипа 7 (тип В); при серологическом обследовании у всех пациентов выявлено высокое содержание IgG антител, у 5 — повышенный уровень ^М антител к аденовирусу.

Проведенные детальные исследования позволили сделать вывод о приоритете в качестве этиологическо -го агента вспышки аденовируса 7 серотипа, с последующим развитием на этом фоне осложнения в виде пневмоний у части военнослужащих, госпитализированных позже 6-го дня болезни. Использование для расшифровки вспышки экспресс-методов лабораторной диагностики позволило своевременно обосновать как коррекцию лечения, так и противоэпидемические мероприятия в очаге.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ЗНАЧЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА LACTOBACILLUS В БИОЦЕНОЗЕ КИШЕЧНИКА У ЖИТЕЛЕЙ СЕВЕРА

Л.А. Сайгушева1, А.В. Куяров1, Е.Ф. Дудко2, А.А. Куяров1

1ГОУ ВПО «Сургутский государственный университет Ханты-Мансийского автономного округа-Югры», г. Сургут; 2МУЗ «Клиническая городская поликлиника № 1», г. Сургут

Бактерии рода Lactobacillus являются одним из важных компонентов микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Частота встречаемости лакто-бактерий варьирует в разных возрастных группах и территориях. Вопрос, связанный с идентификацией представителей этой группы бактерий и значением их в нарушении биоценоза кишечника у жителей Севера не изучался.

Поэтому целью настоящей работы явилось бактериологическое выделение и идентификация бактерий рода Lactobacillus при нарушении биоценоза кишечника у жителей Севера.

Материалом исследования явились результаты бактериологического обследования микрофлоры кишечника 179 больных различных возрастных групп с клиническими проявлениями дисбактерио-за. Проведена видовая идентификация выделенных представителей рода Lactobacillus по сбраживанию 13 углеводов

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.