CC BY
20
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
несмотря на непрерывные попытки ограничить ее распространение, и представляет постоянную угрозу для населения и общественного здравохранения многих стран мира. Новым этапом в развитии пандемии стало формирование и широкое распространение генетически измененных — гибридных — вариантов холерного вибриона эльтор. В их геноме помимо генов, присущих биовару эльтор (rstRE1, ге^), присутствуют гены классического холерного вибриона (rstRC1, ctxBC1), кодирующие синтез энтеротоксина классического типа. Вследствие этого холера, обусловленная гибридными вариантами эльтор, протекает по типу классической, преимущественно с контактно-бытовым и пищевым путями передачи возбудителя.
В свете вышеизложенного нами разработана тест-система для генодиагностики типичных и гибридных вариантов холерного вибриона эльтор методом ПЦР.
Постановку ПЦР осуществляли в термостате «Терцик» в формате «мультиплекс» в двух пробирках объемом 600 мкл, содержащих 1) реакционную смесь и праймеры генов rstRE1, ctxBE1, геЮ и 2) реакционную смесь и праймеры генов rstRC1, ctxBC1. Тестировали лизаты клеток
V. cho1erae различного происхождения. Программа термоциклирования: предварительная денатурация при 95°С — 5мин., затем 35 циклов, состоящих из шагов: 95°С — 30 с; 56°С — 30 с; 72°С — 30 с Финальная элонгация 72°С — 7 мин. Продукты ПЦР фракционировали в 2% агарозном геле в электрическом поле напряженностью 7,5 В/см и регистрировали в ультрафиолетовом свете. Результаты тестирования генов изучаемого штамма сводили в таблицу, по данным которой определяли генотип и вариант холерного вибриона эльтор:
Полученные данные позволяют выявить три генотипа холерного вибриона эльтор, которые характеризуются наличием наряду с ctxA, геЮ, следующих генов: генотип I содержит только свои собственные, эльторовские, гены — rstRE1 и ctxBE1, генотип II — гены rstRE1, rstRC1as и ctxBC1as, генотип III — rstRC1as и ctxBC1as. Генотип I — типичный вариант холерного вибриона эльтор, продуцирующий токсин 2-го типа. Генотипы II и III — генетически измененные — гибридные — варианты биовара эльтор, продуцирующие токсин 1-го типа.
ВСПЫШКА АДЕНОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ВОЕННОСЛУЖАЩИХ
С.И. Савельев15, И.А. Щукина15, Н.М. Фатина1, И.В. Ярковская1, В.А. Бондарев2,5, Н.В. Зубчонок25, Е.И. Вендеревская2, А.С. Фролов3, А.Т. Чесноков3, В.И. Мищук3, М.Н. Шнель3, С.Б. Яцышина4
'Управление Роспотребнадзора по Липецкой области, г. Липецк; 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Липецкой области», г. Липецк; 3ГУЗ «Липецкая областная клиническая инфекционная больница», г. Липецк; 4ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Москва; 5ГБОУВПО Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург
На долю аденовирусов приходится от 5 до 10% от всех ОРВИ. Клиническая картина аденовирусной инфекции зависит от серотипа возбудителя: сероти-пы 3 и 7 чаще других вызывают ОРВИ с возможным развитием пневмоний. Наиболее восприимчивы дети до 5 лет, а так же взрослые в недавно организованных коллективах, в частности военнослужащие.
В период с 25.12.2010 г. по 14.01.2011 г. в в/ч г. Липецка среди рядового состава срочной службы был зарегистрирован 141 случай заболеваний ОРВИ, из них в 12 случаях с осложнением в виде пневмонии. С целью установления этиологии вспышки на базе ФБУЗ «ЦГиЭ в Липецкой области» было проведено исследование образцов клинического материала от 51 больного на наличие РНК вирусов гриппа А и В, A/H1-swine, парагриппа, РС-вируса, ДНК аденовирусов с помощью ПЦР тест-систем ООО «ИнтерЛабСервис», в ходе которого в 7 случаях были обнаружены вирусы парагриппа, в 40 — аденовирусы, в 1 случае — вирус гриппа В.
Кроме того, в ходе проведенных на базе МУЗ «КИБ г. Липецка» бактериологических и ПЦР-исследований клинического материала от больных с пневмониями у 6 человек обнаружен ß-гемолитический стрептококк, у 2 — Mycoplasma pneumoniae.
50 проб от 24 больных были переданы в ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора. У 24 из 24 обследованных обнаружена ДНК аденовирусов, в том числе у 15 в высокой нагрузке; при секвенировании генома аденовирусов в 21 образце идентифицирована последовательность, характерная для аденовирусов се-ротипа 7 (тип В); при серологическом обследовании у всех пациентов выявлено высокое содержание IgG антител, у 5 — повышенный уровень ^М антител к аденовирусу.
Проведенные детальные исследования позволили сделать вывод о приоритете в качестве этиологическо -го агента вспышки аденовируса 7 серотипа, с последующим развитием на этом фоне осложнения в виде пневмоний у части военнослужащих, госпитализированных позже 6-го дня болезни. Использование для расшифровки вспышки экспресс-методов лабораторной диагностики позволило своевременно обосновать как коррекцию лечения, так и противоэпидемические мероприятия в очаге.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ЗНАЧЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДА LACTOBACILLUS В БИОЦЕНОЗЕ КИШЕЧНИКА У ЖИТЕЛЕЙ СЕВЕРА
Л.А. Сайгушева1, А.В. Куяров1, Е.Ф. Дудко2, А.А. Куяров1
1ГОУ ВПО «Сургутский государственный университет Ханты-Мансийского автономного округа-Югры», г. Сургут; 2МУЗ «Клиническая городская поликлиника № 1», г. Сургут
Бактерии рода Lactobacillus являются одним из важных компонентов микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Частота встречаемости лакто-бактерий варьирует в разных возрастных группах и территориях. Вопрос, связанный с идентификацией представителей этой группы бактерий и значением их в нарушении биоценоза кишечника у жителей Севера не изучался.
Поэтому целью настоящей работы явилось бактериологическое выделение и идентификация бактерий рода Lactobacillus при нарушении биоценоза кишечника у жителей Севера.
Материалом исследования явились результаты бактериологического обследования микрофлоры кишечника 179 больных различных возрастных групп с клиническими проявлениями дисбактерио-за. Проведена видовая идентификация выделенных представителей рода Lactobacillus по сбраживанию 13 углеводов
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
В результате собственных исследований установлено, что у подавляющего большинства исследуемых лиц с дисбактериозом кишечника отмечается сниженное количество лактобактерий (87,2%) на фоне снижения общего количества представителей вида Е. coli, из которых преобладают кишечные палочки с гемолитической активностью. Видовой состав лактобактерий в различных возрастных группах значительно варьировал. В возрастных группах у детей до 1 года и детей в возрасте от 1—15 лет наблюдалось большое видовое разнообразие лакто-бактерий. Наиболее часто выделялись L. delbrueskii, L. са8е^ L. rhamnosus и L. plantarum. Менее часто выделялись L. acidophilus, L. jensenii, L. cellobiosus, L. corynoformis и L. lactis. В группе лиц в возрасте от 16 лет и старше прослеживалось уменьшение видового разнообразия лактобактерий. Наиболее часто выделялись L. delbrueskii, L. сasei, L. brevis и L. rhamnosus. Менее часто выделялись L. fermentum и L. corynoformis. Отмечено отсутствие таких видов как: L. acidophilus L. lactis, L. jensenii, L. cellobiosus, L.plantarum и L. trichodes.
Таким образом, проведенные исследования позволили установить, что у жителей Севера изменения микрофлоры кишечника в большинстве случаев связаны со снижением уровня лактобактерий и уменьшением их видового разнообразия, которое наиболее выражено в старших возрастных группах. Видовое разнообразие лактобактерий у северян имело иное количественное представительство по сравнению с жителями других городов России, что диктует необходимость проведения определенных профилактических мероприятий в регионе.
ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫХ МОЛЕКУЛ FOXP3 И NF-kB ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ И КОРРЕКЦИЯ НАЧАЛЬНЫХ ЭТАПОВ ИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ ПОМОЩИ ПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ПОЛИПРЕНИЛФОСФАТ НАТРИЯ А.В. Саличев1, А.Н. Наровлянский2, А.В. Пронин2, А.В. Санин2, С.В. Ожерелков1 ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН, Москва; 2НИИЭМ им.Н.Ф. Гамалеи, Москва
FoxP3 служит ключевой молекулой, контролирующей развитие и функционирование T-reg-клеток. Роль FoxP3 при вирусных инфекциях остается малоизученной. В настоящее время установлена корреляция между продукцией FoxP3 и проявлением супрес-сорной активности CD4+ T-клеток. Ядерный фактор транскрипции NF-kB участвует в процессах созревания и активации Т- и В-лимфоцитов, предопределяя развитие специфического иммунного ответа. В тоже время роль NF-kB при инфекциях, вызываемых вирусом клещевого энцефалита (ВКЭ) и вируса простого герпеса (ВПГ) человека 1-го типа, остается неизученной. Исследована динамика стимуляции мРНК FoxP3 и NF-kB в селезенках мышей линии BALB/c при заражении ВКЭ (штамм Софьин) и беспородных мышей при заражении ВПГ (штамм VR3); при введении препаратов, содержащих полипренилфосфат натрия — Фоспренила (ФП) и Гамапрена (ГП), а также при одновременном заражении животных ВПГ и введении ФП или ГП на 1, 2, 3 и 4-е сутки методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени. В опытах с ВКЭ и ВПГ использовали дозы вирусов, вызывавших за-
болевания и гибель мышей в 100% случаев. Оба вируса вводили внутрибрюшинно. ФП и ГП вводили внутримышечно в дозе 80 мкг/мышь.
Показано, что ВКЭ стимулирует экспрессию мРНК FoxP3 в течение 4-х суток после заражения, что, вероятно, отражает его иммуносупрессивную активность на начальных этапах инфекционного процесса. Установлено, что ФП обладает способностью снижать вирус-индуцированную стимуляцию гена FoxP3. Введение ГП мышам (без заражения ВКЭ) вызывает меньшие изменения в уровнях иммуноре-гуляторных молекул FoxP3 и NF-kB по сравнению с таким эффектом от введения ФП. Опыты с ВПГ показали, что данный вирус стимулирует экспрессию FoxP3 на 1-е и 2-е сутки после заражения. Введение ФП или ГП существенно замедляет скорость нарастания уровня экспрессии FoxP3, тем самым препятствуя развитию острой инфекции, вызываемой ВПГ у мышей. При заражении животных ВПГ наблюдается стимуляция экспрессии NF-kB на 2-е сутки. При заражении животных ВПГ и последующем введении ФП экспрессия гена NF-kB нарастает только к 4-м суткам, что свидетельствует о снижении скорости и интенсивности развития инфекционного процесса. Установлено, что клинические проявления герпетической инфекции у мышей коррелируют с наличием в головном мозге животных ДНК ВПГ. Отмечено, что величина экспрессии гена FoxP3 в тимусах на 4-е сутки после заражения в группе мышей с выраженной неврологической симптоматикой ВПГ-инфекции значительно превышала контрольные значения (4,95+0,29, p = 0,0358), в то время как в группе без выраженных клинических признаков заболевания достоверных отличий не выявлено.
ПРОТИВОБАКТЕРИАЛЬHАЯ АКТИВHОСТЬ ТИМОЗИHА-АЛЬФА1 И УСЛОВИЯ ЕЕ РЕАЛИЗАЦИИ
С.М. Сафаpова
Республиканская противочумная станция, г. Баку, Азербайджан
Целью исследования являлось определение механизмов, предопределяющих описанную еще 25 лет назад способность тимозина-альфа1 (Tal) при введении мышам, инфицированным некоторыми бактериальными агентами, ограничивать развитие соответствующих инфекций и оказывать терапевтический эффект.
Учитывая отсутствие в литературе данных о наличии у Ta1 прямых антибактериальных свойств, было проведено бактериологическое исследование, в котором оценивалось влияние Ta1 на размножение штаммов 81арИ. aureus и Ps. aeruginosa в жидких и плотных питательных средах. Полученные при этом результаты показали, что Ta1 не обладал способностью тормозить рост этих бактерий in vitro.
Втожевремя,вопытахнамышах,инфицированных St.aureus и Ps.aeruginosa, было показано, что введение Tal обеспечило достоверный антиинвазивный эффект в форме снижения процента гибели животных и увеличения средней продолжительности их жизни по сравнению с контрольной группой. Это означало, что противобактериальная активность Ta1 проявлялась только in vivo.
И, наконец, было установлено, что введение мышам со стафилококковой инфекцией Tal в комбинации с роцефином предотвратило их гибель, а введение мышам, инфицированным Ps. aeruginosa, Ta1
