CC BY
45
Лктуи.п.н i проблемы сучасно!' медицины
Реферат
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПАРЕНХИМЫ ПРОТОКОВ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЖЕНЩИНЫ РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА Николенко Д.Е.
Ключевые слова: молочная железа, протоковая система, иммуногистохимия эпителия.
Цель исследования - определение иммуногистохимических особенностей паренхимы протоков молочной железы в покое. Материал: аутопсийная ткань молочной железы. Методы исследования: гистологические, гистохимические , иммуногистохимические (рбЗ, bcl-2, a-sma). Выявлены особенности экспрессии данных маркеров в разных отделах протоковой системы молочной железы:экспрессия рбЗ и a-sma миоэпителием всех отделов протоков железы, bcl-2 экспрессируется резервным эпителием.
Summary
IMMUNOHISTOCHEMICAL CHARACTERISTICS OF THE MAMMARY GLAND PARENCHYMAL DUCTS IN CHILDBEARING AGED
WOMAN
Nikolenko D.Ye.
Keywords: mammary gland, ducts system, epithelial immunohistochemistry.
The purpose of the research is to define immunohistochemical characteristics of the ducts epithelium of mammary gland in rest. Materials: mammary gland's autopsia tissues. Methods: histological, histochemical, immunohistochemical (p63, bcl-2, a-sma). There have been found out the peculiarities of the markers' expression in the different parts of mammary glands.
УДК: 616 - 006.5/.6 + 618.146 - 006 ] - 079.4 - 091.8 Плитень О.Н., Марковский В.Д., Яковцова А.Ф.
ЗНАЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ БЕЛКА ПРОЛИФЕРАЦИИ К1-67 В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫХ ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ И РАКА ШЕЙКИ МАТКИ
Харьковский национальный медицинский университет
Исследование экспрессии белка пролиферации К{-67, показателя пролиферативного потенциала клеток, обнаруживает прямую зависимость между показателями его уровня активности и степенью клеточной и тканевой атипии многослойного плоского эпителия шейки матки. Обнаруженные показатели могут служить патоморфологическими критериями в диференциалъной диагностике эпителиальных дисплазий шейки матки, интраепителиальной карциномы и инва-зивного рака.
Ключевые слова: шейка матки, плоскоклеточные интраэпителиальные поражения, интраэпителиальная карцинома, рак, белок
пролиферации Кь67.
Рак шейки матки (ШМ) является одной из наиболее распространенных злокачественных опухолей женских половых органов и продолжает занимать одно из первых мест в структуре онкологической заболеваемости и смертности женского населения. На величину показателя летальности от рака влияет выявление больных с запущенными формами данного заболевания. А своевременное выявление предраковых заболеваний и начальных стадий рака ШМ являются необходимым условием для их успешного лечения [2, 5].
В настоящее время большое значение приобретает анализ экспрессии иммуногистохимических (ИГХ) маркеров для выявления и интерпретации диспластичных клеток. Одним из таких маркеров гиперпролиферативного состояния, связанного с неопластической трансформацией, является белок Кн67 (универсальный маркер для оценки клеточного цикла) [6 - 8, 10, 12].
Целью данного исследования явилось изучение экспрессии белка Кн67 в неизменном мно-
гослойном плоском эпителии (НМПЭ) ШМ, в очагах дисплазий различной степени тяжести, в интраэпителиальной карциноме (CIS) и инва-зивном раке (invCa).
Материал и методы исследования
Материалом для исследования послужили 120 образцов ткани ШМ с различной патологией эк-тоцервикса. Для диагностики поражений ШМ использовали критерии Гистологической классификации опухолей женской половой системы [3], в которой диспластические изменения различных степеней тяжести и преинвазивная карцинома объединены под названием плоскоклеточные интраэпителиальные поражения, подразделяющиеся на степени цервикальной интраэпителиальной неоплазии (cervical intraepithelial neoplasia - CIN): слабую (CIN I), умеренную (CIN II) и тяжелую (CIN III). Последняя включает в себя и рак in situ (преинвазивная карцинома, CIS). Плоскоклеточные карциномы подразделяют на ороговевающий и неороговевающий рак.
В препаратах, обработанных ИГХ методом и
* Данная публикация является фрагментом комплексной научно-исследовательской работы ХНМУ «Разработка и внедрение эффективных методов и средств профилактики, диагностики и лечения важнейших заболеваний и травм» (0101И001Я00)
liiC. I II ¡Ii' ВДНЗУ «Украгнсъка жедична стожатологЬчна акадежШ»
дополнительно окрашенных гематоксилином Майера [4], изучали интенсивность реакции с белком Ki-67 и удельный вес (УВ) клеток с положительной реакцией. Как положительную считали реакцию, проявлявшуюся коричневой окраской ядер клеток эпителиального пласта. Оценка ИГХ реакции основывалась на интенсивности окрашивания и распределении имму-ноположительных клеток согласно рекомендациям других авторов по шкале : «-» - экспрессия отсутствует, «+» - слабая экспрессия, «++» - умеренная экспрессия, «+++» - интенсивное окрашивание [1, 9]. Интенсивность окрашивания также оценивали методом цитофотометрии путем определения оптической плотности (ОП).
Результаты и их обсуждение
В результате проведенного ИГХ исследования обнаружено, что в НМПЭ ШМ положительная реакция Ki-67 выявилась только в отдельных ядрах клеток базального и парабазального слоя, интенсивность реакции была низкой или умеренной.
При CIN I клетки с положительной реакцией располагались преимущественно в парабазаль-ном слое. В некоторых случаях встречались одиночные клетки с более слабо окрашенными ядрами в среднем и поверхностном слоях эпителия.
При CIN II клетки с положительной ядерной реакцией к Ki-67 занимали от 1/3 до 2/3 толщи эпителиального пласта I1IM. Для данной степени CIN характерным было увеличение числа Ki-67-положительных ядер в различных пластах эпителия, при этом основная масса клеток, содер-
жащих ИГХ метку, локализовалась в центральных отделах эпителиального пласта. В большинстве случаев интенсивность реакции была умеренной и высокой. Встречались отдельные случаи, в которых были низкими показатели интенсивности реакции и удельного веса клеток с положительной ИГХ реакцией Ki-67.
При CIN III диспластически измененные клетки с ядрами, положительно реагирующими на Ki-67, выявлялись во всех, преимущественно наружных, слоях эпителия, интенсивность реакции была умеренной и высокой. В некоторых случаях клетки базального слоя были Ki-67-отрицательными.
В случаях с CIS клетки с положительной ядерной реакцией к Ki-67 преимущественно высокой интенсивности выявлялись во всех слоях эпителиального пласта I1IM. В зонах, подозрительных на наличие микроинвазии, почти все ядра клеток были Ki-67-положительными с высокой интенсивностью реакции.
Локализация и интенсивность ИГХ реакции к Ki-67 при invCa варьирует в зависимости от степени дифференцировки. Так, в неороговеваю-щем раке положительная ядерная реакция к Ki-67 выявлялась в большинстве клеток без определенной закономерности, тогда как в орогове-вающем раке, в центральных отделах орогове-вания Ki-67-положительные клетки чередовались с Ki-67-отрицательными.
Показатели УВ клеток с положительной ИГХ реакцией Ki-67 и ОП белка Ki-67 в ядре представлены на рис. 1 и рис. 2 соответственно.
НМПЭ ШМ
/ у s У У У У ,
О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 %
■ средние значения ■ неороговевающий рак □ороговевающий рак
Рис. 1. Степень экспрессии К'1-67 в неизмененном многослойном эпителии и при различных стадиях канцерогенеза шейки
матки (удельный вес клеток с положительной реакцией к Кь67).
Лктуи.п.н i проблеми сучасно!" медицини
160 140 120 100 80 60 40 20
усл.ед.
112,51
135,68
140,2
141,78
124,38
-44в,99
99,65
99,79
НМПЭ CIN I CIN II CIN ШМ
CIS
invCa
•средние значения ороговевающии рак
-неороговевающии рак
Рис. 2. Оптическая плотность К1-67 в ядрах эпителиоцитов неизмененного многослойного эпителия и при различных стадиях канцерогенеза шейки матки.
Таким образом, в нашем исследовании при изучении показателей пролиферативного потенциала по уровню экспрессии Ki-67 было установлено стабильное повышение среднего значения УВ клеток с положительной реакцией к данному белку при увеличении степени поражения эпителия ШМ. Особенно существенной и статистически достоверной (р<0,05) была разница между НМПЭ ШМ и CIN I, CIN I и CIN II и между CIN II и CIN III. В то же время уровень этого показателя в группах CIN III, CIS и invCa не имел достоверных отличий. Наше исследование показало, что более высокие значения УВ клеток с положительной реакцией к Ki-67 среди invCa имеет неороговевающий рак, то есть опухоль с более низкой степенью дифференциров-ки (рис. 1).
Анализ интенсивности реакции с Ki-67 (рис. 2) показал: средняя ОП в CIN I оказалась ниже, чем в НМПЭ ШМ, что обусловлено, вероятно, тем, что в расчет принимались клетки с более слабо окрашенными ядрами в среднем и поверхностном слоях эпителия, наряду с более интенсивно окрашенными ядрами клеток ба-зального и парабазального слоев. По мере утяжеления степени дисплазии показатель средней ОП увеличивается, достигая максимума при CIN III, однако различие в значениях между CIN II и CIN III статистически недостоверно. При CIS и invCa по сравнению с предшествующими группами отмечено снижение среднего значения данного показателя, объясняемое, скорее всего, не снижением экспрессии белка Ki-67, а его распределением в увеличенном в объеме ядре. При этом разница значений средней ОП между CIS и invCa статистически недостоверна, хотя, если принимать в расчет отдельные показатели неороговевающих и ороговевающих раков, то в этих случаях разница достоверна.
При анализе распределения Ki-67-положительных клеток нами выявлено стойкое
увеличение количества клеток в среднем и поверхностном отделах эпителия LLIM при прогрессии дисплазии от легкой до тяжелой степени, что, вероятно, является отображением степени нарушения процессов как пролиферации эпителиальных клеток, так и дифференцировки, что обусловлено нарушением регуляции клеточного цикла. Подобное мнение относительно повышения экспрессии Ki-67 при прогрессии диспластических поражений высказывали ряд авторов [11, 13], хотя в исследованиях этих авторов разница между экспрессией CIN II и CIN III была статистически несущественной [6, 8], что противоречит нашим результатам и данным подобного исследования, проведенным в Днепропетровской государственной медицинской академии Дороховой Е.В. [1].
Выводы
Нашим исследованием установлено, что умеренная экспрессия Ki-67 является специфическим индикатором CIN, тогда как высокая экспрессия является специфичным тестом для выявления CIS и invCa. Использование ИГХ исследования экспрессии Ki-67 в качестве подтвер>кдающего теста позволяет подтвердить наличие диспластических процессов, выявить поражения ШМ с высоким риском дальнейшей прогрессии и может служить скриннинговым показателем опухолей с «агрессивным поведением».
Литература
1. Дорохова О.В. fliamocTHMHe та прогностичне значения експресм маркерш при диспластичних та непластичних процесах шийки матки (¡муноморфолопчш аспекти): автореф. дис. на здобуття наук, ступеня канд. мед. наук.: спец. 14.03.02. «Патолопчна анатом1я» / О.В. Дорохова. - Днтропетровськ, 2007. - 20с.
2. Королев B.C. Особенности заболеваемости и смертности женщин трудоспособного возраста от рака шейки матки / B.C. Королев, В.Я. Горбунов, H.H. Слюсарь // Здравоохранение Российской Федерации. - 1999. - №1. - С. 29-31.
3. Международная гистологическая классификация опухолей. Гистологическая классификация опухолей женского полового тракта. - Женева, 1994.
4. Петров C.B. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / C.B. Петров, Н.Т. Райхлин. - Казань, 2004. - 288 с.
В1СНИК ВДНЗУ «Украгнсъка жедична стожатологЬчна акадежШ»
5. Фролова И.И. Иммуногистохимические исследования дис- 9. Dabbs D.J. Diagnostic immunohistochemistry / Dabbs D.J. - Chur-кератоза и неопластических изменений экзоцервикса при гине- chill Livingstone, 2006. - 828 p.
кологической патологии / И.И. Фролова, Г.М. Местергази, В.Е. ю. Dunton C.J. Ki-67 antigen staining as an adjunct to identifying cer-
Радзинский [и др.] // Архив патологии. - 2002. - №6. - С. 23-26. vical intraepithelial neoplasia / C.J. Dunton, K.H. Van Hoeven, A.J.
6. Al-Saleh W. Assessment of Ki-67 antigen immunostaining in Kovatich [et al.]//Gynecol. Oncol. - 1997. - V.64. - P. 451-455. squamous intraepithelial lesions of the uterine cervix: Correlation 11. Panjkovic M. Ki-67 expression in squamous intraepithelial lesions with the histological grade and human papillomavirus type / W. Al- 0f the uterine cervix / M. Panjkovic, T. Ivkovic-Kapicl // Arch. Oncol. Saleh, P. Delvenne, R. Greimers [et al.] // Am. J. Clin. Pathol. - - 2006. - V.14. - P. 23-25.
1995. - V.104. - P 154-160. 12 Sahebali S. Ki-67 immunocytochemistry in liquid based cervical cy-
7. Agoff S.N. p16 expression correlates with degree of cervical tology: useful as an adjunctive tool? / S. Sahebali, C.E. Depuydt, K. neoplasia: a comparison with Ki-67 expression and detection of Segers [et al ]//J Clin Pathol -2003 -V56 -P 681-686 high-risk HPV'types / S.N Agoff P Lin, J. Morihara [et al.] II Mod. 13 Vo,gareva G Protein p,6 as a marker of dysp|astic and neoplastic Pathol. - ¿UUJ. - V.I b. - P. bbb-b /3. alterations in cervical epithelial cells / G. Volgareva, L. Zavalishina,
8. Brown D.C. Ki-67 protein: the immaculate deception? / D.C. Brown, у Andreeva [et al 1 // BMC Cancer - 2004 - V 4 №1 - P 51-58 K.C. Gatter//Histopathology. - 2002. - V.40. - P.2-11.
Реферат
ЗНАЧЕНИЯ ЕКСПРЕСМ Б1ЛКА ПРОЛ1ФЕРАЦИ KI-67 В ДИФЕРЕНЦ1ЙН1Й Д1АГНОСТИЦ1 ПЛОСКОКЛ1ТИННИХ 1НТРАЕП1ТЕЛ1АЛЬНИХ УРАЖЕНЬ I РАКУ ШИЙКИ МАТКИ Пл1тень О.М., Марковський В.Д., Яковцова А.Ф.
Ключов1 слова: шийка матки, плоскокгптинж ¡нтраеп1тел1альн1 ураження, ¡нтраеп1тел1альна карцинома, рак, бток прол1ферацм Ki-67.
Дослщження експресП' бтка прол1фераци Ki-67, показника прол1феративного потенц1алу клп"ин, ви-являе пряму залежнють м1ж показниками його р1вня активносп та ступенем клп"инноТ та тканинноТ' ати-niV багатошарового плоского ештелш шийки матки. Виявлеы показники можуть служити патоморфоло-пчними критер1ями в диференц1альнП'д1агностиц1 ештел1альних дисплазш шийки матки, ¡нтраеп1тел1а-льноТ' карциноми та ¡нвазивного раку.
Summary
SIGNIFICANCE OF EXPRESSION OF KI-67 PROTEIN IN DIFFERENTIAL DIAGNOSIS OF PAVEMENT INTRAEPITHELIAL LESIONS
AND CANCER OF CERVIX UTERI
Pliten O.N., Markovskiy V.D., Yakovtsova A.F.
Key words: cervix uteri, squamous intraepithelial lesions, intraepithelial carcinoma, cancer, Ki-67 protein of proliferation.
The research of expression of protein Ki-67 as an index of proliferative potential of cells has revealed the direct dependence between indicators of its activity and degree of cellular and tissue atypism of multilayered pavement epithelium of the uterine cervix. These indices can serve as pathomorphological criteria for differential diagnostics of epithelial dysplasia of cervix uteri, intraepithelial carcinoma and invasive cancer.
УДК 616.32-007.272
Слонецький Б. I., Шушкевич Ю.М., Максименко М.В Лобанов С.М., Вербицький I.B.
0KPEMI АСПЕКТИ ПР0ФШАКТИКИ РЕПЕРФУ31ЙНИХ УШКОДЖЕНЬ Т0НК01 КИШКИ
Нацюнальна медична академия пюлядипломноТ освп"и ¡м.П.Л.Шупика, Кшвська мюька кпУчна лкарнм швидкоТ медичноТ допомоги
Експерименталъна робота грунтуешься на результатах досл{дження проведеного на 34 niddocAiduux тваринах (6mi щурЦ у яких моделювали гостру apmepiajibny тоталъну оклюзшну судинну недостаттсть кишечника та вивчали особливост{ розвитку реперфузшних змт, а також окрем{ напрямки гх корекци та особливост{ перебку патолог{чного процесу.
Ключов1 слова: артер1альна окпюзт, гостра судина недостаттсть, реперфузт.
Вступ Р01 артер1альноТ оклюзшноТ недостатносп кише-
Розвиток HOBiTHix технолопй та сучасш досяг- чника' а також вдосконаленя шлязав профтакти-нення фармацевтичноТ галуз! все больше спону- ки Деструктивних змш [2,3,7]. Саме це , стало
кають до пошуку неординарних пщходт та pi-шень у поглиблеы ¡снуючих фрагмент1в скпад-них процеав nepe6iry р1зноман1тних захворю-вань, а також у встановлеы в сучасних умовах окремих природшх аналопй чи досить значних понять. Це торкаеться i проблеми гострих су-динних уражень кишечника, адже лише глибокий анал1з експериментальних ктычних здобутюв у шзнаны патолопчного процесу сприяе вдоско-наленю ¡снуючих та розробц1 нових метод1в опе-ративних втручань [1,4,6].
Одн1ею з складних проблем i надал1 залиша-еться оц1нка репер фузшних 3MiH за умови гост-
пщставою до проведения даного експеримента-льного дослщження.
Мета роботи, яка е фрагментом комплексно'!' науково-дослщноТ тематики кафедри медицини невщкпадних стан1в НацюнальноТ медичноТ ака-демм п1слядипломно'|' освп"и ¡м. П.Л.Шупика МОЗ Украши (№ 0104\/000257), полягае у дослщженн1 реперфуз1йних зм1н при розвитку гостроТ артерн альноТ тотально'!' оклюз1йноТ судинноТ недостат-ност1 кишечника, а також у вивчеш окремих на-прямюв |'х корекцИ'.
