ЗМІНИ АКТИВНОСТІ ІНДУЦИБЕЛЬНОЇ NO-СИНТАЗИ ТА АРГІНАЗИ, ЇХНІЙ ЗВ’ЯЗОК ІЗ РІВНЕМ ПРОТА ПРОТИЗАПАЛЬНИХ ЦИТОКІНІВ В ЦЕРВІКАЛЬНОМУ СЛИЗУ У ВАГІТНИХ З ЕКСТРАКОРПОРАЛЬНИМ ЗАПЛІДНЕННЯМ ТА ЗАГРОЗОЮ ПЕРЕДЧАСНИХ ПОЛОГІВ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

DOI 10.31718/2077-1096.21.3.21

УДК 618.146-003.218:[618.177-089.888.1+618.396-037]-092-07

Лiхачов В.К., Шиманська Я.В., Добровольська Л.М., Акмов О.6., Макаров О.Г. ЗМ1НИ АКТИВНОСТ11НДУЦИБЕЛЬНО1 NO-СИНТАЗИ ТА АРГ1НАЗИ, 1ХН1Й ЗВ'ЯЗОК 13 Р1ВНЕМ ПРО- ТА ПРОТИЗАПАЛЬНИХ ЦИТОК1Н1В В ЦЕРВ1КАЛЬНОМУ СЛИЗУ У ВАГ1ТНИХ 3 ЕКСТРАКОРПОРАЛЬНИМ 3АПЛ1ДНЕННЯМ ТА ЗАГРОЗОЮ ПЕРЕДЧАСНИХ ПОЛОГ1В

Полтавський державний медичний уыверсттет

Вступ. Оксид азоту волод/е широким спектром борегуляторноУ д/У. Порушення сп/в/дношення активност'/ iндуцибельноУ NO-синтази та арг/нази на користь iндуцибельноУ NO-синтази може при-звести до прозапальноУ реакцИ. При загрозi передчасних пологiв п/двищуеться р/вень прозапальних циток/н/в як на локальному, так i на системному рiвнях. Мета досл/дження. Вивчити взаемозв'язок зм/н вм/сту про- та протизапальних циток/н/в i активностi iндуцибельноУ NO-синтази та аргiнази в слизу цервкального каналу ж/нок з екстракорпоральним заплiдненням (ЕКЗ), у яких реал/зувались кл/н/чн/ ознаки загрози передчасних полог/в. Матер/али i методи досл/дження. Гоупу досл/дження склали 37 ж/нок, у яких ваг/тн/сть настала в результатi екстракорпорального запл/днення та на-явн/стю прогностичних ознак, як.i св/дчать про високий ризик виникнення загрози передчасних полог/в в подальшому. Групу здоровi ваг/тнi - склало 20 ж/нок з ф/золог/чною ваг/тн/стю, яка наступила без застосування допом/жних репродуктивних технолог/й. В 28-34 тижнi ваг/тностi Ум було проведене визначення показник/в активностi iндуцибельноУ NO-синтази та загальноУ арг/назноУ активност.i, а також досл/джений р/вень про- та протизапальних циток/н/в у слизу цервкального каналу. Результати досл/дження та Ух обговорення. Активн/сть iндуцибельноУ NO-синтази в групi досл/дження значно зб/льшилась (в 2.57 рази) пор/вняно iз здоровими ваг/тними, тодi як активн/сть арг/нази, навпаки, пом/тно (в 1,91 рази) зменшилась. Виявлене достов/рне зростання р/вн/в прозапальних циток/н/в INF-y та TNF-a у ваг/тних групи досл/дження, концентрац/я ж протизапального циток/ну IL-10 значно знижувалась. В групi досл/дження в цервкальному слизу виявлен/ позитивнi кореляц/йнi зв'язки м/ж зростанням концентрацУУ прозапального цитоюну INF-y та зб/льшенням активност.i iндуцибельноУ NO-синтази, м/ж пад/нням р/вн/в концентрацУУ IL-10 i активностi арг/нази та негативний зв'язок м/ж зб/льшенням активностi iндуцибельноУ NO-синтази та зменшенням активностi арг/нази. Висновки. Виявлений циток/новий дисбаланс у ваг/тних з екстракорпоральним запл/дненням та загрозою передчасних полог/в разом iз порушенням сп/вв/дношення iндуцибельноУ NO-синтази та арг/нази св/дчить про неналежний р/вень iмуносупрес/У у таких ваг/тних. Ц /мунн зм/ни, активуючи кл/тинн/ реакцУУ материнського iмун/тету, можуть сприяти виникненню явищ передчасних полог/в.

Ключов1 слова: екстракорпоральне заплщнення, загроза передчасних полопв, цитокши, ¡ндуцибельна NO-синтаза, арпназа. Тема НДР кафедри акушерства i янекологи №2 Полтавського державного медичного ушверситету «Роль хрошчного /нфь кування матки та нижшх в/ддл/в статевих шлях/в у формуваннi акушерськоУ та гнеколог/чноУ патологи» (№ держреестрацИ' 0117U005276, терм/н виконання 2017-2022 роки).

Вступ пщтримки адекватних реолопчних властивос-

Впродовж останшх роив активно вивчаеть- бей кров та тонус ^Р^них судин, щ° (за

ся д1ясистеми оксиду азоту (МО) в бюпроцесах безпечуе правильну роботу дано' ^^ (до-

„,„1, ,;„,,„ о.™™..,/ ставку необхщно, ктькост кисню та поживних

людського оргашзму. Виявлено, що вш пред- 3 .,„, „

к . . гм речовин до плода)[1]. Зниження ж вмюту окси-

ставляе собою ушкальний медiатор мiжклiтин- ^ . . 3

3 . ^ к ду азоту в органiзмi вагiтних ж1нок порушуе

но, взаемоди, приймаючи ^лсл, у робоTi нра- йроцеси плацеентацП", сприяе затримцi розвитку вово1 системи, несучи роль нейротрансмiттера, м ч > г ^ "i ^ j

- ^ ^ плода та призводить до високого ризику його

активн° заблучении до проце с1в розвит ку злпл- внyтpiшньо^тробXоV затбелк

лення, роботи загортально, системи, iмyнно, 1rr ■

. . ... 0 3 Продyкцiя оксиду азоту здiйснюеться шд дi-

вiдп0вiдi та регyляцil кровоплину. За рахунок ею конститутивно/синтазТ (cNOS) та шдуцТбе-пiдтримки адекватних реолопчних властивос- .. 3 ■ ■

- ^ • • льно, МО-синтази (iNOS) iмyнними клiтинами,

тей кров^ тонусу артерiальних судин, МО за- . к ' 3 . ..

безпечуе правильну роботу фетоплацентарноТ ИокРнми, макрозфагами та нейтроф1лами, ц 1ЦО

_ _ е ^[1] активoванi прозапальними цитoкiнами. Цей

ш, [ ]. ■ процес вщбуваеться в епiтелiальних клiтинах

Потужна ДiЯ оксиду азоту вiдбyваеться че- пнич^ ^^оаото;, о ышииалопил |\л,,ипал

3 3 Г судинно, стшки дихальних шляхiв. Субстратом

рез гальмування нуклеарного фактора транс-

крипц^, блокування стимульованоТ цИтoкiXами для у'тв орення ^иду иИ()ту е, -■-РрПhПi3. 33 залу-

^ м ... 3 3 м ченням ензиму МО-синтази з L-арпншу утворю-

експресi, адгезивних молекул ендотелш 3 . „ JL3 ^ .

(VCAM-1, Е-селектин, МСР) i хемотаксичних ^ оксид азОтy та еЯД°телiH-1. rifW^

4 . . . оксиду азоту здшснюеться 2 шляхами, за учас^

пептидiв мoнoцитiв та реалiзyеться протизапа- м^о мЛо ^ - ■ ■

ст _u r„ ™ сМOS та iNOS. Оксид азоту, утворений пiд дiею

льним та антитромбогенним ефектами [1,2]. 114аои|?' ' н м м .

п. ^ „и сМOS, направлений на пщтримку визначено,

Дiя оксиду азоту на фетоплацентарну сис- ^ . . .. ^ 3

тему (ФПС) у вагiтXих в^Зуваеться за рахунок рiвн0ваги в балансi речовини, продукт же

iNOS, впливу пiдтримуe численнi патофiзюло-гiчнi процеси в органiзмi вагггноТ ж1нки[1,2,3].

Утворення оксиду азоту по NO-синтазному шляху прямо залежить вщ кiлькостi L-aргiнiну. Вмiст L-аргiнiну в клiтинах, що синтезують N0, збiльшують ^^ та ^-1р, якi також прискорю-ють надходження L-аргiнiну всередину клiтин i пiдвищують активнiсть аргiнiнсукцинатлiази, яка запускае ресинтез L-аргiнiну з L-цитрулiну. В свою чергу, ^-4 та ^-10 активiзують аргiназу, що призводить до зниження вмюту L-аргiнiну в N0-синтезуючих клiтинах.

Доведена роль iмунологiчних зсувiв на рiвнi мiжклiтинних зв'язкiв у генезi порушень геста-цiйного процесу. Ц зсуви генеруються змiнами балансу цитомшв. Регулюючи мiжклiтиннi вза-емовщносини в ендометри, процеси швазп трофобласта, система цитомшв вiдiграе важ-ливу роль протягом ваеТ вагiтностi.[4,5].

Цитокши продукуються Т-хелперами (Тh), серед яких видтяють Th1- та Th2-типу. Проза-пальнi цитокiни ^-1р, TNF-a, ^-т, для яких притаманна стимуляцiя процеав клiтинного iмунiтету, продукуються Th1-клiтинами. Проти-запальнi цитокiни, зокрема IL-10,якi гальмують реакцiТ' клiтинного iмунiтету та сприяють синтезу антитiл, продукуються ^2-кл^инами[6,7].

З раннiх термiнiв фiзiологiчноТ ваптносл спостерiгаеться переважання цитокiнiв ^2-типу у кровi матерi i це е нормою. Саме ц регуляторы цитокши посилено продукуються де-цидуальною тканиною плаценти впродовж уаеТ ваптностк В свою чергу, надлишкова експресiя прозапальних цитокiнiв клiтинами ^1-типу об-межуе iнвазiю трофобласту та затримуе розви-ток плаценти Правильне сшввщношення мiж Тh1- та ^2-кл^инами сприяе успiшнiй iнвазiТ трофобласту [5,8].Вщповщно до сучасних нау-кових даних, принцип iмунного забезпечення вагiтностi зводиться до змши балансу мiж Т-хелперами 1 типу та Т-хелперами 2 типу в бк пригшчення Тh1 клп~инноТ активностi та збть-шення Тh2 клiтинноТ реактивностi. За рахунок посиленоТ продукцiТ протизапальних цитомшв, зокрема IL-10, забезпечуеться достатнiй рiвень iмуносупресiТ, що е необхiдною передумовою сприятливого переб^у вагiтностi [6,7].

Слщ вiдмiтити, що цитокiни Тh1-профiлю посилюють протромбшову активнiсть та катал^ зують мехашзми коагуляци, вiдповiдно, це призводить до тромбозiв i вщшарування трофобласту й реалiзацiТ загрози переривання вапт-ностi [7,8,9]. При такому стаж пщвищуеться р^ вень прозапальних цитомшв як на системному, так i на локальному рiвнях. Значне пiдвищення вмiсту прозапальних цитомшв виявлено i при невдалому застосуваш екстракорпорального заплiднення [7,10,11].

Мета дослщження

Вивчити взаемозв'язок змiн вмiсту про- та протизапальних цитокЫв i активност шдуци-

бельноТ N0-синтази та аргшази в слизу церв^ кального каналу жшок з екстракорпоральним заплiдненням (ЕКЗ), у яких реалiзувались кл^ шчш ознаки загрози передчасних пологiв.

Матерiали i методи дослiдження

37 жiнок, вагiтнiсть у яких настала в результат ЕКЗ та виявленими прогностичними озна-ками високого ризику виникнення передчасних полопв склали групу дослщження (ГД). Форму-вання ГД проводилось в 18-20 тижшв+6 тижшв вагiтностi при проведеннi другого бiохiмiчного скринiнгу. Критерiями включення було вияв-лення порушень показникiв «потршного» бюхь мiчного тесту, наявний позитивний тест на фе-тальний фiбронектин, сонографiчне визначен-ня скорочення довжини шийки матки (<25 мм), вiдсутнiсть шфкування нижнiх вiддiлiв статево-го тракту. Жшки, вiднесенi до ГД, вщмовились вiд запропонованоТ нами терапи i отримували лiкарськi засоби вiдповiдно нормативним на-становам. В 28-30 тижшв ваптносп Тм було проведене визначення показниш активностi шдуцибельноТ N0-синтази та загальноТ аргша-зноТ активностi у слизу цервкального каналу; також було проведено визначення рiвня цито-кЫв INF-Y, TNF-a, 1Ь-10.

В групу здорових ваптних (ЗВ) увiйшли 20 жшок з нормальною ваптнютю, яка наступила без екстракорпорального заплщнення, з вщсу-тнiстю факторiв ризику виникнення передчасних полопв.

Дослщження проводилось на базi кафедри акушерства i гшекологи №2 Полтавського державного медичного ушверситету- у Перинатальному центрi КП «ПОКЛ iм. М.В.С^фосовського ПОР». Дослiдження акти-вностi шдуцибельноТ N0-синтази та аргiнази в слизу цервкального каналу проводилось на кафедрi патологiчноТ фiзiологiТ Полтавського державного медичного ушверситету.

З метою визначення загальноТ активносл N0-синтаз (gN0S) вiдбирали 0,2 мл розчину цервкального слизу, додавали до нього 2,5 мл 0,2М трис-буферного розчину, 0,3 мл водного розчину L-аргiнiну та 0,1 мл 1мМ водного розчину НАДФН2. Дану сумш iнкубували при t=37,0°C протягом 30 хв. Загальну активнють N0-синтаз визначали за приростом концентра-цiТ нiтритiв до та пюля шкубаци. Активнiсть gN0S виражали в мкмольN02-/хв/ на г бiлка цервкального слизу. Активнiсть iN0S та арп-нази вивчали за методом, запропонованим Елiнською А.Н. и спiвавт. [13] Активнють iN0S вираховували як результат вщшмання вiд по-казникiв загальноТ активност N0-синтази величину активност конститутивних iзоформ (cN0S). Активнiсть аргшазн вираховували за рiзницею концентрацiй L-орнiтина до та пiсля iнкубацiТ при t = 37,0°С протягом 20 годин та виражали у мкмоль L-орнiтину/хв/ на г бтку цервкального слизу [14]

З метою визначення цитомшв 3a6ip слизу цервкального каналу проводили при гшеколо-пчному дослiдженнi шийки матки, стерильною щ^очкою, яку (пiсля забору слизу) збер^али у буферному розчинi в замороженому виглядi при температурi -40°С до моменту дослщжен-ня. Для визначення концентраци цитокiнiв за допомогою iмуноферментного аналiзу викорис-товували вiдповiднi стандарты комерцшш на-бори реактивiв фiрми «Вектор БЕСТ», методики згщно iнструкцiй фiрми-виробника.

Математичний аналiз виконувався статис-тичною програмою Statistica (Stat Soft Inc., США).

Результати дослщження та 1х обговорення

При дослщженш активностi iNOS та аргiнази в цервкальному слизу у здорових ваптних та у вагiтних ГД було знайдено, що активнють шду-цибельноТ NO-синтази в дослiднiй групi зросла в 2.6 рази порiвняно iз ЗВ: до 3,08±0,32 мкмоль/хв/1 г бтка порiвняно iз 1,20±0,20 мкмоль/хв/1 г бiлка у ЗВ; Р<0,001. Активнiсть аргiнази зменшилась майже в 2 рази, з 2,16±0,20 мкмоль/хв/1 г бiлка в ГП до 1,13±0,10 мкмоль/хв/1 г бiлка в ДГ; Р<0,001.

Дослiдження рiвнiв про- та протизапальних цитокiнiв продемонструвало, що у ваптних з ЕКЗ та загрозою ПП зросли рiвнi прозапальних цитомшв inf-y (з 10,3 ± 0,5 пг/мл у ЗВ до 14,2± 0,7 пг/мл у ваптних ГД; Р<0,001) та TNF-a (з 3,4± 0,2 пг/мл у ЗВ до 6,15± 0,39 пг/мл у ваптних ГД; Р<0,001).

Рiвень протизапального цитокiну IL-10 зни-зився в ГД до 5,0±0,4 пг/мл в порiвняннi iз гру-пою ЗВ 9,4±0,6 пг/мл (Р<0,001). Показник коефiцieнту TNF-a/IL-10 зрiс в 3 рази (з 0,4±0,02 в груш ЗВ до 1,2±0,1 в ГД (Р<0,001).

Виявлений кореляцiйний зв'язок мiж збть-шенням вмiсту inf-y в цервiкальному слизу в ГД та зростанням активност iNOS в цш групi (r=0,72; Р<0,001).

Пошук можливих зв'язкiв мiж змiнами актив-ностi аргiнази в цервiкальному слизу у жшок з ЕКЗ та загрозою передчасних полопв, з одного боку, та концентра^ею у них в цервкального слизу протизапального цитокшу^-Ш активню-тю iNoS, з другого боку, показав наявнють до-стовiрних кореляцiйних зв'язкiв мiж цими пока-зниками: позитивний зв'язок мiж падшням рiв-нiв концентраци IL-10 i активностi аргiнази (r=0,57; Р<0,05) та негативний зв'язок мiж зб^ льшенням активностi iNOS та зменшенням ак-тивностi аргiнази (r=-0,50; Р<0,05).

Тобто, у ваптних жшок ГД мае мюце дисбаланс цитокЫв iз перевагою прозапальних. Це знаходиться в причинному зв'язку iз порушен-ням балансу активност iNOS та аргшази.

Нами було враховано той факт, що в II три-мес^ вагiтностi збiльшення концентрацiТ прозапальних цитомшв та активацiя iндуцибельноТ

NO-синтази стимулюють вироблення децидуа-льних макрофапв субпопуляцiТ М1, якi сприя-ють порушенню функцiТ плаценти та виникнен-ню загрози передчасних пологiв [3,7].

Висновки

1. У ваптних з екстракорпоральним заплщ-ненням та загрозою передчасних полопв вияв-лене достовiрне зростання концентраци прозапальних цитомшв, асоцшованих з активнiстю Th1 (INF-y - в 1,4 рази i TNF-a - в 1,8 рази) та падшня концентрацiТ протизапального цитокшу IL-10, асоцiйованого з активнiстю Th2 (в 1,9 рази) в слизу цервкального каналу.

2. Активнють шдуцибельноТ NO-синтази в групi ваптних з ЕКЗ, як не приймали запропо-нованого нами лiкування, зросло в 2.6 рази по-рiвняно iз здоровими вагiтними. Активнiсть же аргшази в цш групi ваптних, навпаки, в 1,9 рази зменшилась.

3. Такий цитокшовий дисбаланс у обстеже-них ваптних разом iз порушенням сшввщно-шення iNOS та аргшази свщчить про неналеж-ний рiвень iмуносупресiТ у них. Саме ц iмуннi змiни, активуючи клiтиннi реакци материнсько-го iмунiтету, можуть сприяти виникненню явищ передчасних полопв.

Лпература

1. Drukker NA, Selyutina SN, Yermolova NV et al. Znacheniye oksida azota i kakhektina v patogeneze prezhdevremennykh rodov. [The importance of nitric oxide andcachectin in the pathogenesis of preterm labor]. Akusherstvo i ginekologiya. 2020;3:72-78. (Russian)

2. Kokoyeva FB, Torchinov AM, Tsakhilov SG, et al. Rol' okis-litel'nogo stressa v patogeneze preeklampsii (obzor literatury). [The role of oxidative stress in the pathogenesis of preeclampsia (a review).].Problemy reproduktsii. [internet]; 2014;(4):7-10. (Russian)

3. Likhachov VK, Shymans'ka YaV, Dobrovol's'ka LM et al. Porushennya balansu detsydual'nykh makrofahiv subpopulyatsiy m1 ta m2v platsentakh zhinok z ekstrakorporal'nym zaplidnennyam, u yakykh polohy vidbulys' peredchasno. Visnyk problem biolohiyi i medytsyny. 2021;2(160):105-109.

4. Mikhaylova VA, Bazhenov DO, Khokhlova YeV et al. Tsitotoksi-cheskaya aktivnost' NK-kletok perifericheskoy krovi v otnoshenii kletok trofoblasta. Eksperimental'nyye modeli. Spetsial'nyy vy-pusk. [internet];2017;19:49. (Russian)

5. Katkova NYu, Bodrikova OI, Sergeyeva AV et al. Sostoyaniye lokal'nogo immunnogo statusa prirazlichnykh variantakh prezhdevremennykh rodov. Vestnik RGMU. 2017;3:57-62.

6. Shymans'ka YaV, Likhachov VK, Dobrovol's'ka LM et al. Osoblyvosti klitynno-humoral'noho imunitetuu zhinok z ekstrakorporal'nym zaplidnennyam i zahrozoyu peredchasnykh polohiv. Aktual'ni problemy suchasnoyi medytsyny. 2021 ;1 (73):60-64.

7. Drannyk HN, Kaydashev YP, Hospodarskyy YYа et al. Vzhlyad ymmunoloh anaproblemu ymmunokorrektsyy v hynekolohyy. [ The view of the immunologist on the problem ofimmunocorrec-tion in gynecology]. Medychni aspekty zdorov"yazhinky. 2017;5(110):18-23. (Ukrainian).

8. Levkovich MA, Linde VA, Nefedova DD. Rol' pro- i protivo-vospalitel'nykh tsitokinov i polimorfizma ikh genov pri nevy-nashivanii beremennosti rannego sroka. Rossiyskiy immu-nologicheskiy zhurnal. 2015;18(3):125-127.

9. Mal'gina GB, Fassakhova AF, Tret'yakova TB et al. Sverkhranniye prezhdevremennyye rody i istmikotservikal'naya nedostatochnost' pri beremennosti, nastupivshey v rezul'tate vspomogatel'nykh reproduktivnykh tekhnologiy [Earlypreterm labor and isthmic-cervical insufficiency in pregnancy resulting from assisted reproductive technologies]. Akusherstvo i ginekologiya. 2018; 5: 44- 48. (Russian).

10. Yiwei Z, Tao Z, Xi G et al. Successful implantation is associated with a transient increase in serum proinflammatory cytokine profile followed by a switch to antiinflammatory cytokine profile prior to confirmation of pregnancy. Fertility and Sterility [Internet]. 2020. Available from:

11. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S00150282 14 20325450

12. David R, Maria de la C, Rainer Bet al. Male fetal sex is associated with low maternal plasma anti-inflammatorycytokine profile in the first trimester of healthy pregnancies. Cytokine. [Internat]. 15 2020;136. Availeble from:

13. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S10434666 20303069

Реферат

ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТИ ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ NO-СИНТАЗЫ И АРГИНАЗЫ, ИХ СВЯЗЬ С УРОВНЕМ ПРО- И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ В ЦЕРВИКАЛЬНОЙ СЛИЗИ У БЕРЕМЕННЫХ С ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНЫМ ОПЛОДОТВОРЕНИЕМ И УГРОЗОЙ ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫХ РОДОВ. Лихачев В.К., Шиманская Я.В., Добровольская Л.М., Акимов О.С., Макаров О.Г.

Ключевые слова: экстракорпоральное оплодотворение, угроза преждевременных родов, цитокины, индуцибельная NO-синтаза, аргиназа.

Вступление. Оксид азота обладает широким спектром биорегуляторного действия. Нарушение соотношения активности индуцибельной NO-синтазы и аргиназы в пользу индуцибельной NO-синтазы может привести к провоспалительной реакции. При угрозе преждевременных родов повышается уровень провоспалительных цитокинов как на локальном, так и на системном уровнях. Цель исследования. Изучить взаимосвязь изменений содержания про- и противовоспалительных цитокинов и активности индуцибельной NO-синтазы и аргиназы в слизи цервикального канала женщин с экстракорпоральным оплодотворением и угрозой преждевременных родов. Материалы и методы исследования. Группу исследования составили 37 женщин, у которых беременность наступила в результате экстракорпорального оплодотворения и наличием прогностических признаков, свидетельствующих о высоком риске возникновения угрозы преждевременных родов в дальнейшем. Группа сравнения- здоровые беременные - 20 женщин с физиологической беременностью, наступившей без применения вспомогательных репродуктивных технологий. В 28-34 недели беременности им было проведено определение показателей активности индуцибельной NO-синтазы и общей аргиназной активности, а также исследован уровень про- и противовоспалительных цитокинов в слизи цервикального канала. Результаты исследования и их обсуждение. Активность индуцибельной NO-синтазы в группе исследования увеличилась (в 2.57 раза) по сравнению со здоровыми беременными, активность аргиназы, напротив, заметно уменьшилась (в 1,91 раза). Выявлено достоверное повышение уровней провоспалительных цитокинов INF-Y и TNF-a у беременных исследуемой группы, концентрация же показателей противовоспалительного цитокина IL-10 - снижалась. В группе исследования в цервикальной слизи обнаруженные положительные корреляционные связи между ростом концентрации провоспалитель-ных цитокинов INF-Y и увеличением активности индуцибельной NO-синтазы и между падением уровней концентрации lL-10 и активностью аргиназы и отрицательная связь между увеличением активности индуцибельной NO-синтазы и уменьшение активности аргиназы. Выводы. Обнаружен цитокино-вый дисбаланс у беременных с экстракорпоральным оплодотворением и угрозой преждевременных родов вместе с нарушением соотношения индуцибельной NO-синтазы и аргиназы свидетельствует о ненадлежащем уровне иммуносупрессии у таких беременных. Эти иммунные изменения, активируя клеточные реакции материнского иммунитета, могут способствовать возникновению явлений преждевременных родов.

Summary

CHANGES IN THE ACTIVITY OF INDUCIBLE NO-SYNTHASE AND ARGINASE, THEIR RELATIONSHIP WITH THE LEVEL OF PRO-AND ANTI-INFLAMMATORY CYTOKINES IN CERVICAL MUCUS IN PREGNANT WOMEN, WHO UNDERWENT IVF AND ARE AT RISK OF PRETERM CHILDBIRTH

Likhachov V. K., Shymanska Ya. V., Dobrovolska L. M., Akimov O. Ye., Makarov O. H.

Key words: in vitro fertilization, risk of preterm childbirth, cytokines, inducible NO-synthase, arginase.

Introduction. Nitric oxide (NO) produces a wide range of bioregulatory effects. Imbalance in the ratio of the activity of inducible NO-synthase and arginase in favor of iNOS can lead to a pro-inflammatory reaction. At the risk of preterm childbirth, the content of proinflammatory cytokines increases both at the local and systemic levels. The aim of this work is to study the relationship between changes in the content of pro- and anti-inflammatory cytokines and the activity of inducible NO-synthase and arginase in the cervical mucus of women with in vitro fertilization (IVF), who are at risk of preterm childbirth. Materials and methods. The test group (TG) included 37 women, who underwent IVF and presented prognostic signs, indicating a high risk of preterm birth in the future. The control group (CP) consisted of 20 healthy pregnant women, who did not undergo assisted reproductive technologies. We determined the indicators of inducible NO-synthase activity and total arginase activity, as well as the level of pro- and anti-inflammatory cytokines in the mucus of the cervical canal of the participants at their 28-34 weeks of pregnancy. Results and discussion. The activity of iNOS in TG significantly increased (in 2.57 times) compared to healthy pregnant women (CP), while the activity of arginase, on the contrary, decreased significantly (in 1.91 times). There was a significant increase in the levels of pro-inflammatory cytokines INF-y and TNF-a in the TG women, while they demonstrated the significantly reduced concentration of anti-inflammatory cytokine IL-10. In cervical mucus taken from TG

Yelins'ka AM, Akimov OYe, Kostenko VO. Role of AP-1 transcriptional factor in development of oxidative and nitrosative stress in periodontal tissues during systemic inflammatory response Ukr.Biochem. J. 2019;91:80-85. Akimov OY, Kostenko VO. Functioning of nitric oxide cycle in gastric mucosa of rats under excessive combined intake of sodium nitrate and fluoride Ukr. Biochem. J. 2016;88(6):70-75.

women, positive correlations were found between an increase in the concentration of the proinflammatory cytokine INF-y and an increase in iNOS activity, between a decrease in IL-10 levels and arginase activity, and a negative relationship between an increase in iNOS activity and a decrease in arginase activity. Conclusions. The detected cytokine imbalance in pregnant women, who underwent in vitro fertilization and were at risk of preterm childbirth, together with a impaired ratio of iNOS and arginase, indicates an inappropriate level of immunosuppression. These immune changes, by activating cellular responses of maternal immunity, can contribute to preterme childbirth.

DOI 10.31718/2077-1096.21.3.25 УДК 616-053.31 +618.3]:575-07

Похилько В.1., Чернявська Ю.1., Цвiренко С.М., Россоха З.1., Яковенко О.В. КЛ1Н1КО-ГЕНЕТИЧН1 ДЕТЕРМ1НАНТИ ПЕРИНАТАЛЬНО* ПАТОЛОГИ У НОВОНАРОДЖЕНИХ

Полтавський державний медичний уыверситет

Державний заклад «Референс-центр з молекулярно!' дiагностики МОЗ Украши», м. КиТв

Актуальною проблемою медицини в даний час е використання метод'т молекулярноТ генетики, спрямованих на виявлення / оцнку генетичних фактор'т ризику / вчасноТ д'агностики перинатальноТ патологи. В результатi проведених численних досл'джень визначен фактори ризик, як впливають на стан здоров'я новонароджених. Метою досл'дження було вивчення асоц/ац^й мiж розвитком перинатально!' патологи у передчасно народжених / доношених новонароджених з пол1'морф1'змом генв с'шейства глютатон-трасфераз (GSTT1, GSTМ1, GSTР1), ренн-ангютензиновоУ ситеми (АСЕ, AGT2R1). Маmерiали > методи. У дослдження було включено 110 доношених дтей з асфксею, 30 -здорових доношених дтей для групи контролю, а також 125 передчасно народжених дтей з нфек-цгями перинатального пероду, 21 передчасно народжена дитина з бронхолегеневою дисплаз1'ею, / 70 умовно здорових передчасно народжених дтей. Було проведено комплекс рутинних клiнiко-лабораторних метод'т досл'дження та визначення полiморфiзму генв. Результати. З наявнстю нефункцонального алелю гену GSTT1 та DD вар'анту АСЕ гену у новонароджених пов'язаний роз-виток тяжко!перинатальноТ асфкс! (р=0,006 та р=0,003 в/'дпов/'дно). Дти з GSTT1 "-" i АС АG2ТR1 генотипами мають достов'рно вищий р'тень д'астол'чного тиску в першу добу псля народження, нiж дти з функцональними генотипами цих генв (р<0,05). Медiанний показник середньоТтривало-ст'! штучно! вентиляцп легень та СРАР-терапИ у дтей з генотипом GSTT1 «-» був достов'рно ви-щим за аналог'чний показник у дтей з генотипом GSTT1 «+» (р=0,01 та р=0,001 в'дпов'дно). Висно-вок. Дослiдження полiморфiзму генв глютатон-трансфераз та ренн-анготензиновоУ системи може бути використане для предикцИ тяжкост'! стану дитини псля народження. Ключов1 слова: пол1морф1зм геыв, новонароджеж, перинатальна патолопя, асфнкст, артер1альна ппотенз1я

Зв'язок публiкацii' з плановими науково-домдними роботами. Робота е фрагментом науковоТ теми НДР кафедри педiаmрii' № 1 з пропедевтикою та неонатоло^ею на 2020-2024 рр.: «Розробити клiнiко-лабораmорнi критерп, методи прогнозування та запобiгання метаболчних порушень у дimей раннього вiку». Державний реестрац/йний номер - 0120и102856.

ВстуП тичних факторiв ризику i вчасноТ дiагностики

0 . с ........ перинатально!' патологи. В результат проведе-

За останн 5 рош в Укратш вщбупося знач- ■ _Т

ио.стп, ... о лч^тт ощ^улиот, опсл них численних дослщжень визначеш фактори

не зростання захворювань, що призводять до ^ г

. . ^ ^ ризику як впливають на стан здоров'я новона-швалщносл — ктькють таких випадш серед

роджених. Генетичш порушення, що виникають

дитячого населення зросла на 20 тисяч. Згщно ^ . ^ . ^

егг-,0,- у перюд новонародженост^ можуть мати знач-

Зi статистичними даними, близько 2% вщ зага- Г, ,,„ '

... . -ло нии вплив на захворюванють та смертнiсть.

льнот кiлькостi дитячого населення у вiцi до 18 ... ^ ^

„ 3 м Рання дiагностика може полегшити своечасне рокiв — це дгги з iнвалiднiстю. Кожна одинадця-

та новонароджена дитина мае порушення ста- Bр0Гн0CтичiПe консультування родин та можлИ-

, вють прицiльнoгo лiкування, що покращуе ре-

ну здоров я, що призводить до формування ^ . г/, х/ ■

хРонГчних захворювань т? дитяЛоТ iHвалiДнocтi. зультоти. ^^^ [1]. У ^ розширення ^

,Г ^ " cтупнocтi дiагнocтичнoгo тестування кожен л^

Незалежнии експерт з питань сошальнот пoлi- 3 3

тики П.В. Розенко зазначае, що на 22% збть- Рар-неон ^^ мае належно ^о«"^ а™ та

. . рoзумiти методи генетичного cкринiнгу. Саме

шилася мережа загальнoocвiтнiх навчальних ^ 3 ^ 3.. к

ЗaкЛaдiв для дiтей Зi складним порушенням ^^ сеРед напPямKiB наУкoBo-ДocЛiДнo' Poбo-

закладт для дiтей з складним порушенням ти на кафедрi педiатрiТ №1 з пропедевтикою та

розвитку, зокрема збтьшилося число учшв в г

них. Я^о у 2015 — 2016 роц таких з?^в неон атолооею були ^ що стосувауися пи

було 58 то у 2016-2017 роц!- вже 71. тань розробки комплексу раннiх ™увально-

Актуальною проблемою медицини в даний дагн°стичних та п^таи™™-

час е використання метод1в молекулярно! генетики, спрямованих на виявлення i оц1нку гене-

реаб^тацшних заходiв для попередження по-лiорганних уражень у передчасно народжених