CC BY
11
DOI 10.31718/2077-1096.21.4.153 УДК 616.68:599.323.4:612.018
Стецук 6.В., Акмов О.6., Вльхова О.В., Сл'нська А.М., Мщенко А.В. Скотаренко Т.А. КОРЕЛЯЦ1ЙН1 СП1ВВ1ДНОШЕННЯ ЕКСПРЕСП РЕЦЕПТОРА CD68 ТА АКТИВНОСТ1 МАРКЕРНИХ ФЕРМЕНТ1В ПОЛЯРИЗАЦIÏ МАКРОФАГ1В В С1М ЯНИКАХ ЩУР1В ПРИ ТРИВАЛ1Й БЛОКАД1 СИНТЕЗУ ЛЮТЕÏНIЗУЮЧОГО ГОРМОНУ ТРИПТОРЕЛ1НОМ
Полтавський державний медичний уыверситет
ЛютеУшзуючий гормон та тестостерон мають значний вплив на поляриза^ю макрофаг'т. Змна поляризацИ' макрофагiв може спричиняти морфологiчнi та метабол'чш змни в рiзних органах та тканинах. Рецептор CD68 асо^юеться /з прозапальною поляриза^ею макрофаг'т. На даний час в науковй л'1тератур'1 наведено обмежену ктьюсть даних щодо взаемозв'язку експрес'УУ рецептора CD68 на макрофагах с'ш'яник'т та активностi маркерних ферментiв поляризацИ' макрофагiв при тривалiй депривацИ' синтезу лютеУшзуючого гормону. Метою дано)' роботи було встановити коре-ля^йн сп'тв'дношення мiж к'тьк'ютю CD68+ клiтин в iнтерстицiальному просторi та судинах с'ш'яник'т та активнстю iндуцибельно'/' NO-синтази, аргiнази та продук^ею супероксидного анон-радикалу на 270 та 365 день центрально'!' блокади синтезу лютеЫзуючого гормону трипторелi-ном. Матерiали та методи. Дослiдження проведене на 30 статевозрлих щурах-самцях лЫУ «В/стар». Тварини були рандом'зовано розподтеы на 2 групи: контрольна (10 тварин) та експеримен-тальна (20 тварин). Тваринам експериментальноУ групи вводили розчин трипторелiну ацетату iз розрахунку 0,3 мг д'ючо'У речовини на кг ваги тварини для моделювання центрально'!' деривацИ синтезу лютеЫзуючого гормону. Тварин iз експериментальноУ групи виводили iз експерименту на 270 та 3б5 день моделювання центрально'!' деривацИ синтезу люте'Ушзуючого гормону. Гiстологiчне до-сл/'дження с'ш'яник'т проводили псля виготовлення парафiнових зр'з'т. Для проведення 'шуног'юто-хiмiчного досл'дження макрофагiв с'ш'яник'т на наявнсть CD68 рецептор'т нами псля виготовлення парафiнових блок'т, була проведена депарафiнiзацiя зр'з'в з посл/'дуючим демаскуванням антиге-нв. В 10% гомогенат'! с'ш'яник'т визначали активнсть iндуцибельно'/' NO-синтази, аргiнази та про-дук^ю супероксидного анон-радикалу. Також визначали юльюсний показник розповсюдження рецептора CD68 у ттерстицИ та судинах с'м'яник'т. Псля визначення розподлу досл'джуваних параме-трiв був проведений кореля^йний аналiз за методом Сп1'рмена та визначено кореляцю рангiв до-сл'джуваних параметр'в та УУ статистичну значущсть. Результати. Продукц/'я супероксидного анон-радикалу прямо пропорщйно сильно сп/'вв/'дноситься з експресею CD68 на макрофагах iнтер-сти^ю та судин. Статистично значущих кореля^йних спiввiдношень м/ж розповсюджен'ютю рецептора CD68 у ттерстицИ та судинах с'ш'яник'т та активностями iндуцибельноУ NO-синтази та аргiнази на 270 день центрально'!' депривацИ' синтезу люте'Ушзуючого гормону трипторелiном не виявлено. Продукця супероксидного анон-радикалу, активнсть ндуцибельно'У NO-синтази та аргi-нази та розповсюджен'ють рецептора CD68 у ттерстицИ та судинах с'ш'яник'т на 365 день центрально'!' депривацИ' синтезу люте'Ушзуючого гормону не мають статистично значущих коре-ля^йних спiввiдношень. Висновки. Експреш рецептора CD68 на iнтерстицiальних та пристнкових макрофагах ам'яниюв призводить до гперпродукцУУ супероксидного анон-радикалу на 270 день центрально'!' депривацИ' синтезу люте'Ушзуючого гормону трипторелiном. Розповсюджен'ють CD68 на 365 день центрально'!' депривацИ' синтезу лютёУшзуючого гормону трипторелiном не впливае на активнсть маркерних ферментiв поляризацИ' макрофаг'т.
Ключов1 слова: трипторел1н, CD68, оксид азоту, супероксидний анюн-радикал, арпназа, лютеТызуючий гормон Дослiджёння е фрагментом iнiцiативноï НДР кафедри гстологП] цитологи та ёмбрiологiï ПДМУ «Експёримёнтальнё мор-фологiчнё дослiджёння трансплантантiв крiоконсёрвованоï плаценти, впливу диферелну, етанолу та 1% метакриловоТ ки-слоти на морфофуницональний статус у рядi внутрiшнiх органiв», № державно)'реестрацИ' 0119U102925.
Вступ тестостерону вщбуваеться шпбування поляри-
п .. . - ,п„ зацп макрофапв по прозапальному фенотипу
Люте1шзуючий гормон (ЛГ) е центральним ре- ^ ^ ^ 3 ^ ... 3
- с f (М1), що проявляеться у зниженш продукци мак-
гулятором, який контролюе продукшю чоловмого V Щ у опилчспп, и^У^Ч"
3 ^ ^ ^ 3 ^ рофагами таких цитоюшв як штерлейкш 1В (1Л-1 статевого гормону - тестостерону, та стимулюе
^ . , .-Г _u- В) та штерлейкш 6 (1Л-6) [3]. З шшого боку, тес-
рют та розвиток ам'яниш. В умовах дефщиту w> н v . у 1 J ^
пгст тостерон стимулюе змшу поляризаци макрофа-
ЛГ, обумовлено! введенням метатрексату, вщ- ■ „.i, Т
буваеться загибель клггин ам'яних к^алыЬв пв у 6il< переважання протизапальн°го (М2ффе-3 ^ нотипу, навпъ за умов стимуляцп макрофапв
внаслщок активацп апоптозу та стресу ендопла- к . 3 3 г., -,- ^
зматичного ретикулумо [1]. Збт ыШення ко^цент- бактер'сльним лтополюахаридом [4]. "ta чь-
^ ■ пг к ном тестостерон мае виражений протизапаль-
рацп тестостерону пiд впливом ЛГ обумовлене ^ _ ^ . ^
V-,1- _u ■ ний та iмуномодулюючий ефекти, а за умов його
ЛГ-стимульованою ПрOЛiфераЬiеЮ iHTерCTИЬiа- imjnumuHJniuiuimi а оа ymuo
' . , . . ^ м дефiьиту можливий розвиток ушкодження тка-
льних ендокриноьитiв (кл^ин бейдiга) [2]. ^м . . ^ .. 3 ... . .
T^стпДг"^рон мЬит з 1начний вплив н^ J(функьiо- ни HМBH,аlC31iД0K оад[^]р но1 ПOЛяризаьil макрофагiB к . . 4 за М1 фенотипом [5].
нальний стан макрофапв оргашзму. Пiд впливом ^ L J
Експресiя на поверхн макрофагу рецептора CD68 свщчить про поляризацiю дано''' кттини по М1 фенотипу [6]. В нашш попереднiй роботi ми встановили, що експреая на макрофагах сiм'яникiв рецептора CD68 за умов центрально!' деприваци синтезу ЛГ трипторелшом протягом 180 дшв призводить до пперпродукци активних форм кисню та азоту [7]. На даний час в науко-вш лiтературi наведено обмежену ктькють да-них щодо взаемозв'язку експреси рецептора CD68 на макрофагах ам'яниш та активностi маркерних ферментiв поляризаци макрофагiв при бiльш тривалiй деприваци синтезу люте'ш-зуючого гормону.
Метою дано' роботи було встановити коре-ляцiйнi сшввщношення мiж кiлькiстю CD68+ клн тин в штерсти^альному просторi та судинах ам'янимв та активнiстю шдуцибельно''' NO-синтази (iNOS), аргiнази (Arg) та продук^ею супероксидного анiон-радикалу (Sar) на 270 та 365 день центрально' блокади синтезу люте'шзую-чого гормону трипторелшом.
Матерiали та методи
Дослщження проведене на 30 статевозртих щурах-самцях лiнiТ «Вютар». Тварини були ран-домiзовано розподiленi на 2 групи: контрольна (10 тварин) та експериментальна (20 тварин). Тваринам експериментальноТ групи вводили розчин трипторелшу ацетату iз розрахунку 0,3 мг дшчо!' речовини на кг ваги тварини для моделю-вання центрально!' дериваци синтезу люте'шзу-ючого гормону [8]. Тварин iз експериментальноТ групи виводили iз експерименту на 270 та 365 день моделювання центрально' дериваци синтезу люте'шзуючого гормону. Виведення тварин iз експерименту проводилось пщ передозуван-ням кетамiном шляхом декаштаци. Сiм'яники тварин використовувались для подальшого iму-ногiстохiмiчного та бiохiмiчного дослщження.
Пстолопчне дослiдження сiм'яникiв проводили пюля виготовлення парафiнових зрiзiв. Фраг-менти печiнки фiксували у 10% розчиш форма-лiну. В подальшому фрагменти препарату зне-воднювали в спиртах зростаючоТ концентраци. Готовi препарати фарбували гематоксилшом та еозином для гютолопчного i морфологiчного дослщження.
Для проведення iмуногiстохiмiчного дослн дження макрофапв сiм'яникiв на наявнiсть CD68 рецепторiв нами пiсля виготовлення парафшо-вих блокiв, була проведена депараф^за^я зрн зiв з послiдуючим демаскуванням антигешв.
В 10% гомогенатi ам'яниш визначали актив-нiсть iNOS, Arg та продукцш Sar. Активнiсть ш-дуцибельноТ NO-синтази визначали за приростом штри^в пiсля iнкубацiТ в буферному розчиш, що мютить L-аргшш та НАДФН2 [6]. Активнiсть аргшази визначали по приросту концентрацiТ L-орнiтину пiсля 20 годинноТ шкубаци у фосфатному буферному розчиш (рН=7,0), що мiстить надлишок L-аргшшу [9]. Продукцiю супероксидного анюн-радикалу визначали по приросту концентраци диформазану, що утворюеться в реак-ци нiтросинього тетразолiю з супероксидним анюн-радикалом [10].
Кiлькiсний показник розповсюдження рецептора CD68 (CD68i) у штерстици сiм'яникiв розра-ховували наступним чином: проводився пщраху-нок ктькосп клiтин, на яких виявлено рецептор CD68 i якi локалiзувались у штерсти^альнш тка-нинi, у 10 полях зору у кожного щура. Далi N розраховувався як середне арифметичне для кожного щура. Отриманий показник N викорис-товувався для подальшого визначення кореля-цшних вщношень. Аналопчно розраховували CD68v - показник розповсюдження рецептора CD68 у судинах ам'яниш.
Пюля визначення розподiлу дослщжуваних параметрiв (iNOS, Arg, Sar, CD68i та CD68v) був проведений кореляцшний аналiз за методом Спiрмена та визначено кореляцш рангiв дослн джуваних параметрiв (Rho) та Vi статистичну значущють (Р).
Результати та обговорення
Пюля проведення статистичного аналiзу ко-реляцiйних спiввiдношень мiж активнiстю фер-ментiв циклу оксиду азоту, продук^ею Sar та розповсюдженiстю рецептора CD68 у iнтерстицiТ та судинах ам'яниюв на 270 день центрально'' деприваци синтезу люте'шзуючого гормону було встановлено, що продук^я Sar прямо пропор-цiйно сильно спiввiдноситься з експреаею CD68 на макрофагах iнтерстицiю та судин (Таб. 1).
Таблиця 1.
Кореляцiйнi спiввiдношення мiж до^джуваними 6ioxiMi4HUMU параметрами та клькстю CD68+ клimuH у судинах та iHmep-
сти^альному npocmopi на 270 день центральноТ деприваци синтезу лютеТшзуючого гормону.
Дослщжуваш сшввщношення t-статистичне Rho P
iNOS/CD68v -1,232 -0,580 0,306
iNOS/CD68i -1,232 -0,580 0,306
Arg/CD68v 0,473 0,264 0,668
Arg/CD68i 0,473 0,264 0,668
Sar/CD68v 5,196 0,949 0,014
Sar/CD68i 5,196 0,949 0,014
Статистично значущих кореляцшних сшввщ-ношень мiж розповсюдженютю рецептора CD68 у штерстици та судинах ам'яниш та активностями iNOS та Arg на 270 день центрально' деприваци синтезу люте'шзуючого гормону трип-
торелшом не виявлено.
Пюля проведення статистичного аналiзу кореляцшних сшввщношень мiж активнютю фер-мен^в циклу оксиду азоту, продук^ею Sar та розповсюдженютю рецептора CD68 у штерстици
та судинах ам'янимв на 365 день центрально!' тистично значущих стввщношень не виявлено деприваци синтезу люте!шзуючого гормону ста- (Таб. 2).
Таблиця 2.
Кореляцiйнi спiввiдношення мiж дослджуваними бiохiмiчними параметрами та клькстю CD68* клiтин у судинах та iнтер-
сти^альному просторi на 365 день центральноТ деприваци синтезу люте'íнiзуючого гормону.
Дослщжуваш сшввщношення t-статистичне Rho P
iNOS/CD68v 0,473 0,264 0,668
iNOS/CD68i -0,473 -0,264 0,668
Arg/CD68v 0 0 1
Arg/CD68i 0 0 1
Sar/CD68v 0,188 0,108 0,863
Sar/CD68i -0,188 -0,108 0,863
На 270-й день центрально!' деприваци синтезу ЛГ ми спостер^али збтьшення сполучнотка-нинних просторiв, пов'язане як з якюним, так i з ктькюним складом змшених штерсти^альних кл^ин i мiкроциркуляторного русла [11]. Структурна перебудова штерсти^ально!' тканини являла собою збтьшення ктькосп артерюл, венул i капiлярiв. Також ми спостер^али морфологiчнi ознаки ендотелiальноï' дисфункци, порушення гемодинамiки, периваскулярний фiброз зi змен-шенням об'ему мiкросудинного русла з подаль-шим фiброзом штерстицш в цiлому [11]. Тому продук^я активних форм кисню, пов'язана з CD68+ макрофагами може бути мехашзмом, який вивiльняe простiр в штерстици ам'янимв для проростання судин. Вщсутнють статистично значущих кореляцiйних спiввiдношень мiж активностями iNOS та Arg з розповсюдженням рецептору CD68 на пристшкових та iнтерстицiальних макрофагах ам'яниш свiдчить про те, що змши в активностях цих ферметчв на даний термiн експерименту не залежать вщ макрофагiв, якi поляризован по М1 фенотипу.
На 365 день центрально!' деприваци синтезу ЛГ ми виявили бтьш значне, при порiвняннi з 270 днем, збтьшення сполучнотканинних прос-торiв сiм'яникiв [12]. Що було пов'язано з якюним i ктькюним складом змшених кттин i мiжклiтин-но!' речовини штерстицш. Було виявлено значне збiльшення ктькосп артерiол та венул, проте кь лькiсть капiлярiв не змiнювалася, при порiвняннi iз контрольними тваринами [12]. Враховуючи вiдсутнiсть статистично значущих кореляцшних сшввщношень мiж дослiджуваними параметрами на 365 день експерименту можна дшти ви-сновку, що виявлен змiни в активностях iNOS та Arg, а також продук^я Sar, не залежать вщ макрофапв, якi поляризованi по М1 фенотипу.
Осктьки змiни в структурi ам'яниш на 270 та 365 день центрально!' деприваци синтезу ЛГ характеризуются надмiрним розростанням сполу-чно!' тканини, то можна припустити, що це пов'язано iз переважанням на цих термшах поляризаци' макрофапв по М2 фенотипу. В науко-вiй лiтературi наведенi данi, що стимуля^я ак-тиваци Wnt/ß-катенiн сигнального каскаду при-зводить до розвитку фiброзу у нирках шляхом змши поляризаци макрофапв в сторону перева-жання М2 фенотипу [13]. При блокадi сигнального шляху трансформуючого фактора росту ß
(TGF-p), який е характерною ознакою поляризаци макрофагiв по М2 фенотипу, штенсивнють фiброзу легень значно зменшуеться [14]. Тому перспективним напрямком подальших дослн джень е вивчення ролi макрофапв, що поляризоваш по М2 фенотипу у розвитку морфолопч-них та метаболiчних змiн сiм'яникiв за умов три-вало! деприваци синтезу ЛГ трипторелшом.
Висновки
Експреая рецептора CD68 на штерсти^аль-них та пристшкових макрофагах ам'янимв при-зводить до пперпродукци супероксидного анюн-радикалу на 270 день центрально! деприваци синтезу люте!'шзуючого гормону трипторелшом.
Розповсюдженють CD68 на 365 день центрально! деприваци синтезу люте'шзуючого гормону трипторелшом не впливае на активнють мар-керних ферметчв поляризаци макрофапв.
Лтература
1. Karabulut D, Ozturk E, Kaymak E, et al. Vitamin B12 suppresses GADD153, prevents apoptosis and regulates the testicular function in methotrexate treated rat testis. Biotech Histochem. 2021 Aug; 9:1-8.
2. Baburski AZ, Andric SA, Kostic TS. Luteinizing hormone signaling is involved in synchronization of Leydig cell's clock and is crucial for rhythm robustness of testosterone production. Biol Reprod. 2019; 100(5): 1406-15.
3. Son BK, Kojima T, Ogawa S, Akishita M. Testosterone inhibits aneurysm formation and vascular inflammation in male mice. J Endocrinol. 2019; 241(3): 307-317.
4. Ren X, Fu X, Zhang X, et al. Testosterone regulates 3T3-L1 pre-adipocyte differentiation and epididymal fat accumulation in mice through modulating macrophage polarization. Biochem Pharmacol. 2017; 140: 73-88.
5. Okamura T, Hamaguchi M, Bamba R, et al. Immune modulating effects of additional supplementation of estradiol combined with testosterone in murine testosterone-deficient NAFLD model. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2020; 318(6): G989-G999.
6. Dancsok AR, Gao D, Lee AF, et al. Tumor-associated macrophages and macrophage-related immune checkpoint expression in sarcomas. Oncoimmunology. 2020; 9(1): 1747340.
7. Stetsuk EV, Shepitko VI, Solovyova NV, Akimov OY. Rol' retseptora CD68+ u zminakh aktyvnosti markernykh fermentiv polyaryzatsiyi makrofahiv v sim yanykakh shchuriv pry tryvaliy blokadi syntezu lyuteyinizuyuchoho hormonu tryptorelinom [The role of the CD68+ receptor in changes in the activity of macrophage polarization marker enzymes in the testes of rats during prolonged blockade of luteinizing hormone synthesis by triptorelin]. Visnyk problem biolohiyi ta medytsyny. 2021; 3: 277281. (Ukrainian)
8. Liu FH, Yang DZ, Wang YF, et al. Making of the animal model with sterilized testes. Zhonghua Nan Ke Xue. 2007; 13(2): 125-9.
9. Yelinska AM, Akimov OYe, Kostenko VO. Role of AP-1 transcrip-tional factor in development of oxidative and nitrosative stress in periodontal tissues during systemic inflammatory response. Ukr. Biochem. J. 2019; 91(1): 805. doi: 10.15407/ubj91.01.080.
10. Akimov OYe, Kostenko VO. Superoxide and peroxynitrite production in gastric mucosa of rats under combined nitrate-fluoride intoxication. Journal of Grodno State Medical University. 2018; 16(6): 730-734.
11. Stetsuk YeV, Akimov OYe, Shepitko KV, et al. Role of nitric oxide in development of fibrotic changes in rats' testes after 270 day
central deprivation of testosterone synthesis. World of medicine 13.
and biology. 2020; 73(3): 211-215. 12. Stetsuk YeV, Akimov OYe, Shepitko VI, Goltsev AN. Influence of
prolonged central deprivation of testosterone synthesis on produc- 14.
tion of reactive oxygen and nitrogen species and morphological structure of rat testes. World of medicine and biology. 2020; 74(4): 210-214.
Реферат
КОРРЕЛЯЦИОННЫЕ СООТНОШЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРА CD68 И АКТИВНОСТИ МАРКЕРНЫХ ФЕРМЕНТОВ ПОЛЯРИЗАЦИИ МАКРОФАГОВ В СЕМЕННИКАХ КРЫС ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ БЛОКАДЕ СИНТЕЗА ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА ТРИПТОРЕЛИНОМ
Стецук Е.В., Акимов О.Е., Вильховая Е.В, Елинская А.Н., Мищенко А.В., Скотаренко Т.А.
Ключевые слова: трипторелин, CD68, оксид азота, супероксидный анион-радикал, аргиназа, лютеинизирующий гормон
Лютеинизирующий гормон и тестостерон оказывают значительное влияние на поляризацию макрофагов. Изменение поляризации макрофагов может приводить к морфологическим и метаболическим изменениям в различных органах и тканях. Рецептор CD68 ассоциируется с провоспалительной поляризацией макрофагов. В настоящее время в научной литературе приведено ограниченное количество данных по взаимосвязи экспрессии рецептора CD68 на макрофагах семенников и активности маркерных ферментов поляризации макрофагов при длительной депривации синтеза лютеинизи-рующего гормона. Целью данной работы было установить корреляционные соотношения между количеством CD68+ клеток в интерстициальном пространстве и сосудах семенников и активностью ин-дуцибельной NO-синтазы, аргиназы и продукцией супероксидного анион-радикала на 270 и 365 день центральной блокады синтеза лютеинизирующего гормона трипторелином. Материалы и методы. Исследование проведено на 15 половозрелых крысах-самцах линии «Вистар». Животные были рандо-мизировано распределены на 2 группы: контрольная (5 животных) и экспериментальная (10 животных). Животным экспериментальной группы вводили раствор трипторелина ацетата из расчета 0,3 мг действующего вещества на кг веса животного для моделирования центральной деривации синтеза лютеинизирующего гормона. Животных из экспериментальной группы выводили из эксперимента на 270 и 365 день моделирования центральной деривации синтеза лютеинизирующего гормона. Гистологическое исследование семенников проводилось после изготовления парафиновых срезов. Для проведения иммуногистохимического исследования макрофагов семенников на наличие CD68 рецепторов нами после изготовления парафиновых блоков была проведена депарафинизация срезов с последующим демаскированием антигенов. В 10% гомогенате семенников определяли активность ин-дуцибельной NO-синтазы, аргиназы и продукции супероксидного анион-радикала. Также определяли количественный показатель распространения рецептора CD68 в интерстиции и сосудах семенников. После определения распределения исследуемых параметров был проведен корреляционный анализ методом Спирмена и определена корреляция рангов исследуемых параметров и ее статистическая значимость. Результаты. Продукция супероксидного анион-радикала прямо пропорционально сильно соотносится с экспрессией CD68 на макрофагах интерстиции и сосудов. Статистически значимых корреляционных соотношений между распространенностью рецептора CD68 в интерстиции и сосудах семенников и активностями индуцибельной NO-синтазы и аргиназы на 270-й день центральной де-привации синтеза лютеинизирующего гормона трипторелином не выявлено. Продукция супероксидного анион-радикала, активность индуцибельной NO-синтазы и аргиназы и распространенность рецептора CD68 в интерстиции и сосудах семенников на 360-й день центральной депривации синтеза лю-теинизирующего гормона не имеют статистически значимых корреляционных соотношений. Выводы. Экспрессия рецептора CD68 на интерстициальных и пристеночных макрофагах семенников приводит к гиперпродукции супероксидного анион-радикала на 270-й день центральной депривации синтеза лютеинизирующего гормона трипторелином. Распространенность CD68 на 365-й день центральной депривации синтеза лютеинизирующего гормона трипторелином не влияет на активность маркерных ферментов поляризации макрофагов.
Summary
CORRELATIONS BETWEEN CD68 RECEPTOR EXPRESSION AND ACTIVITY OF MACROPHAGE POLARIZATION MARKER ENZYMES IN RAT TESTES DURING PROLONGED BLOCKADE OF LUTEINIZING HORMONE SYNTHESIS BY TRIPTORELIN Stetsuk Y.V., Akimov O.Y., Vilhova O.V., Yelins'ka A.M., Mischenko A.V., Skotarenko T.A. Key words: triptorelin, CD68, nitric oxide, superoxide anion radical, arginase, luteinizing hormone
Luteinizing hormone and testosterone have a significant effect on the polarization of macrophages. Changing the polarization of macrophages can cause morphological and metabolic changes in various organs and tissues. The CD68 receptor is associated with proinflammatory polarization of macrophages. Currently, the scientific literature provides limited data on the relationship between the expression of the CD68 receptor on testicular macrophages and the activity of markers of macrophage polarization enzymes during long-term deprivation of luteinizing hormone synthesis. The aim of this study was to establish correlations between the number of CD68+ cells in the interstitial space and testicular vessels and the activity of inducible NO synthase, arginase and superoxide anion radical production after 270 and 365 days of central blockade of luteinizing hormone synthesis by triptorelin. Materials and methods. The study was performed on 15 adult
Feng Y, Ren J, Gui Y, et al. Wnt/p-Catenin-Promoted Macrophage Alternative Activation Contributes to Kidney Fibrosis. J Am Soc Nephrol. 2018; 29(1): 182-193.
Wang J, Xu L, Xiang Z, et al. Microcystin-LR ameliorates pulmonary fibrosis via modulating CD206+ M2-like macrophage polarization. Cell Death Dis. 2020; 11(2): 136.
male Wistar rats. Animals were randomly divided into 2 groups: control (5 animals) and experimental (10 animals). Animals of the experimental group were injected with a solution of triptorelin acetate at the rate of 0.3 mg of active substance per kg of animal weight to model the central derivation of luteinizing hormone synthesis. Animals from the experimental group were removed from the experiment on days 270 and 365 of the simulation of central derivation of luteinizing hormone synthesis. Histological examination of the testes was performed after preparation of paraffin sections. To perform immunohistochemical study of testicular macrophages for the presence of CD68 receptors we performed, after the manufacture of paraffin blocks, deparaffinization of sections was with subsequent unmasking of antigens. Inducible NO synthase activity, ar-ginase and superoxide anion radical production were determined in 10% of testicular homogenates. Quantitative distribution of the CD68 receptor in the interstitium and testicular blood vessels was also determined. After determining the distribution of the studied parameters, a correlation analysis was performed by the Spearman method and the correlation of the ranks of the studied parameters and its statistical significance were determined. Results. The production of superoxide anion radical is directly proportionally strongly correlated with the expression of CD68 on interstitial and vascular macrophages. There were no statistically significant correlations between the prevalence of CD68 receptor in the interstitium and vascular vessels and the activity of inducible NO synthase and arginase on day 270 of central deprivation of luteinizing hormone synthesis by triptorelin. The production of superoxide anion radical, inducible NO synthase and arginase activity, and the prevalence of the CD68 receptor in the interstitium and blood vessels of testes on day 365 of central deprivation of luteinizing hormone synthesis do not have statistically significant correlations. Conclusions. Expression of the CD68 receptor on interstitial and parietal testicular macrophages leads to hyperpro-duction of superoxide anion radical on day 270 of central deprivation of luteinizing hormone synthesis by triptorelin. The prevalence of CD68 on day 360 of central deprivation of luteinizing hormone synthesis by triptorelin does not affect the activity of macrophage polarization marker enzymes.
