CC BY
219
УДК: 613.281:614.31:615.281
В.В. Закревский, С.Н. Лелеко
ЗАГРЯЗНЕННОСТЬ МЯСНОГО СЫРЬЯ НИТРОФУРАНАМИ - ОДИН ИЗ ИНДИКАТОРОВ НЕБЕЗОПАСНОСТИ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ
ДЛЯ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ1
Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И.Мечникова, Санкт-Петербург, vzakr@list.ru
В статье представлены результаты мониторинга нитрофуранов в различных видах мясного сырье поступающего на современные мясоперерабатывающие предприятия Санкт-Петербурга. Исследования проводились с использованием метода иммуноферментного анализа, обладающего высокой чувствительностью, быстротой получения результатов и большой производительностью.
Введение. Нет необходимости доказывать, что здоровье человека напрямую связано с одним из факторов окружающей среды - питанием. По мере осложнения экологической и экономической ситуации, все более обостряется проблема качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов [1,2]. Их контаминация различными ксенобиотиками в большей степени зависит от уровня загрязненности окружающей среды. От 20% до 90% загрязнителей поступает в организм человека с пищей. Это связано с тем, что ксенобиотики, попадая в окружающую среду в результате антропогенной деятельности человека, способны накапливаться в почве, грунтовых водах, водоемах с последующей миграцией в растения и организм животных [4].
В сельском хозяйстве для откорма животных широко применяются стимулирующие рост лечебно-профилактические антибактериальные средства в виде кормовых добавок, в том числе препараты нитрофурановой группы. Экономические выгоды от их применения очевидны, так как они в значительной степени снижают себестоимость конечной продукции. Однако при этом возникает возможность загрязнения ими животноводческой пищевой продукции [7].
Нитрофураны - группа антибактериальных лекарственных средств, полученных из 2 замещенного фурана присоединением к нему нитрогруппы в пятом
1V.V.Zakrevskiy, S.N.Leleko.Oontamination of raw meat nitrofurans - one of the indicators unsafe food products to consumers.
положении. По химическому строению они относятся к 5 - нитро-2-фурфулиденгидрозонам или 5 нитро-2-фурил (в-акрилиден) гидрозонам [3,5]. Они эффективны в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также некоторых крупных вирусов, трихомонад, лямблий. В зависимости от химического строения отдельные соединения этого ряда несколько различаются по спектру действия [5]. Из многочисленных синтезированных в 50-е гг. ХХ века в Институте органического синтеза АН Латвии производных нит-рофурана в качестве химиотерапевтических средств наиболее широко применяются: нитрофурал (фурацилин), нитрофурантоин (фурадонин), фуразолидон, фуразидин (фурагин). Исходный продукт синтеза производных 5-нитрофурана - фурфурол (а - фурилальдегид) [9].
Многие лекарственные препараты, попадая в организм животных и человека, образуют метаболиты. Препараты нитрофурановой группы являются лег-кометаболизирующими веществами, которые быстро распределяющиеся по организму [10]. Период полураспада в организм исходных препаратов составляет от 7 до 63 минут [13], при этом метаболиты образуют стабильные связи с белками, в результате чего удерживаются в организме в течение длительного времени. Например, 3-амино-2-оксазолидинон (АОЗ) является основным метаболитом фуразолидона, 3-амино-5-морфолинометил-2-оксазолидинон (АМОЗ) -фуралтадона, 1 - аминогидантоин (АГД) - фурадонина и семикарбозид (СЕМ) -фурацилина [11,14]. Данные метаболиты являются первичными и наиболее типичными, однако более токсичны вторичные метаболиты. Например, АОЗ в процессе обмена может образовывать в-гидроксиэтилгидразин, который обладает мутагенным и канцерогенным действием [12].
С 1995 года полностью запрещено использование нитрофуранов в животноводческом производстве в Европейском Союзе (Постановление Комиссии, 1995) из-за опасений канцерогенности остатков препарата и их потенциально вредных воздействий на здоровье человека. Несмотря на установленное законом запрещение использования нитрофуранов в этих и других странах, они продолжают оставаться доступными для использования в ветеринарии, как в странах Европейского Союза, так и во многих развивающихся странах по причине их эффективности и доступности, что подтверждается системой Кар1ёА1е118ув1еш&гЕооёап<1Еееё - (КАЗБЕ) [15].
Цель исследования - провести мониторинг остаточных количеств метаболитов нитрофуранов АМ07 и А07 в мясном сырье, поступающем на мясопе-
рерабатывающие предприятия Санкт-Петербурга.
Материал и методы. В проводимой работе использовались следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы: программно -аппаратный комплекс для иммуноферментного анализа: портативный стрипо-выйридер «BETTY» для одноволновых измерений с фильтром на 450 нм, программное обеспечение RIDA@SOFTWin (Артикул Z9999); испаритель QS-S ЕВА ЭКО, центрифуга лабораторная медицинская ОПн-3 с ротором (Россия), аналитические лабораторные весы ВЛР-200 (Россия), вортексМ^К-3500, дис-пергатор (Г ермания) тест-системы для количественного определения метаболитов нитрофуранов (AMOZ и AOZ) RIDASCREEN Nitrofuran AMOZ и AOZ (ООО «Системные решения Стайлаб» R-Biopharm).
Исследования методом иммуноферментного анализа (ИФА) выполнялся в соответствии с методическими рекомендациями утвержденные Минсельхозом России за номером 5-1-14/1005 от 11.10.205г. В основе теста - взаимодействие антигенов с антителами. Лунки стриповмикротитровального планшета покрыты антителами захвата, связывающимися с анти-АОЗ антителами (AMOZ).
Из основных этапов анализа можно выделить: пробоподготовку, деривати-зацию и обработку полученных результатов.
Пробоподготовка: бралась навеска 1 г гомогенизированной пробы смешивали её с 3,8 мл дистиллированной воды, добавляли 0,5 мл 1М HCL и 300 мкл10 мМ 2- нитробензальдегида (в ДМСО) затем энергично встряхивали.
Дериватизация - процесс получение производных анализируемого вещества, обладающих иными (лучшими) аналитическими свойствами. Пробы инкубировали при температуре 50°С в течение 3-х часов, либо в течение 16 часов (в течение ночи) при 37°С. После инкубации добавляли: 5мл 0,1 М К2НР04, 0,4 мл 1М КаОН и 5 мл этилацетата и 30 секунд энергично встряхивали. После этого центрифугировали при комнатной температуре (20 - 25°С) в течение 10-ти минут при 3000 g. После центрифугирования переносили 2,5 мл этилацетатной фазы (верхний слой) в новую чистую пробирку и испаряли досуха. Затем растворяли сухой остаток в 1 мл n-гексана и тщательно перемешивали с 1 мл буфера для проб. После этого подвергали пробу центрифугированию при комнатной температуре (20 - 25 °С) в течение 10-ти минут при 3000g. и в итоге для анализа использовали 50 мкл раствора (нижняя водная фаза) на лунку планшета.
При проведении тестирования бралось необходимое количество лунок для
анализа. В первые шесть парных лунок добавляли пипеткой 50 мкл стандартных растворов, в остальные лунки вносили исследуемые пробы. Затем в каждую лунку добавляли по 50 мкл ферментного конъюгата, по 50 мкл раствора антител и перемешивали с последующей инкубацией при комнатной температуре (20 - 25° С) в течение 1-го часа. После этого промывали лунки 3-х кратно моющим буфером. После промывки добавляли по 100 мкл субстрата/хромогена в каждую лунку, перемешивали и оставляли на инкубацию при комнатной температуре (20 - 25° С) в течение 15 минут в темноте. Заключительным этапом было добавление в каждую лунку по 100 мклстоп-раствора, с последующим измерением на фотометре.
Для единичных измерений при обработке результатов иммуноферментного анализа мы использовали модель вероятности с логистическим распределением, а для двойных или нескольких определений применялся кубический сплайн. Стандартная кривая прилагается к каждому набору ИФА.
оптическая плотность стандартного раствора (или пробы) оптическая плотность нулевого стандарта
х 100 = % опт. плотности
Нулевой стандарт приравнивается, таким образом, к 100%, а величины оптической плотности указываются в процентах. По величинам относительной оптической плотности, вычисленным для стандартных растворов, и соответствующим значениям концентрации АОЗ (нг/кг) или (АМОЗ) строится калибровочная кривая (рис.1) в полулогарифмической системе координат. Для того чтобы вычислить концентрацию АОЗ в нг/кг или (АМОЗ) в исходной пробе, величину концентрации АОЗ (АМОЗ), полученную по калибровочной кривой, следует умножить на соответствующий фактор разбавления. При выполнении анализа в соответствии с приведенной методикой фактор разбавления равен 2 [6].
Для обработки результатов также использовалась лицензионная программа RIDA@SOFTWin (Артикул Z9999), которая позволила обработать большое количество проб, исключить математические ошибки и проанализировать результаты различными математическими методами (линейной регрессии, Logit/Log, сплайн-интерполяции и обработка результатов методом 4-параметров).
Совместно с Управлением Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по городу Санкт-Петербургу
проводился отбор проб на четырех мясоперерабатывающих заводах Санкт-Петербурга по ГОСТу Р 51447-99 (ИСО 3100-1-91). Было отобрано 33 пробы различного вида мяса (индейка, говядина, калтык, свинина, телятина, ягнятина, курица), в том числе 3 пробы готовой продукции: ветчина из куриной грудки, сервелат классический, колбаса сырокопченая "Богородска". Мясное сырье поступала на заводы из стран: Россия, Бразилия, Парагвай, Аргентина, Испания, США, Ирландия, Австралия, Дания, Новая Зеландия, Уругвай и Г ермания.
В соответствии с решением Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 №299 (ред. от 15.01.2013) «О применении санитарных мер в таможенном союзе» содержание нитрофуранов (включая фуразолидон) не допускается в продукции животного происхождения на уровне определения методов [8]. Используя метод иммуноферментного анализа, который обладает высокой чувствительностью, можно идентифицировать метаболиты нитрофуранов на пределе обнаружения от 0,2 мкг/кг. Поэтому положительными пробами в исследовании считались те, в которых уровень был выше 0,2 мкг/кг [6].
Результаты и обсуждение.
Исследованию на содержание остаточных количеств метаболитов ЛМ07 и Л07 нитрофурановых препаратов подвергались 33 исследуемых проб (табл. 1). В 21 случае (63%) был обнаружен метаболит ЛМ07, в концентрации от 0,308 до 16,2 мкг/кг. Наибольшие концентрация была выявлена в сырье, поставляемом из Уругвая, Германии, Аргентины, Испании и России. При определении второго метаболита - Л07, было выявлено 12 положительных проб (63%), в концентрации от 0,336 до 16,2 мкг/кг. В полученных результатах обращает на себя внимание, что 5 проб (15,5%) содержали как метаболит ЛМ07 так и -Л07. При исследовании готовой продукции, такой как ветчинаиз куриной грудки, сервелат классический, колбаса сырокопченая "Богородска", метаболит ЛМ07 присутствовал во всех пробах в концентрациях от 0,308 до 0,460 мкг/кг, А07 отсутствовал.
При сравнении показателей содержания метаболита ЛМ07 в мясном сырье импортного (Бразилия, Парагвай, Аргентина Испания США, Ирландия Австралия, Дания, Новая Зеландия, Германия, Уругвая) и отечественного производства определено, что в 23 исследованных импортных образцах мясного сырья обнаружены в 14 случаях (60%), а в 10 отечественных образцах мясного сырья - в 7 случаях (70%).
Таблица 1
Показатели (в абс. цифрах) выявляемости метаболитов АМО7 и АО 7 в мясном сырье, поступившем на мясоперерабатывающие предприятия Санкт-Петербурга в 2012-2013 гг. из разных стран мира
Страна происхож- дения Объект исследования Метаболиты Количество положительных проб
ЛМ07 мкг/кг Л07 мкг/кг ЛМ07 Л07
Бразилия Филе бедра индейки <0,2 <0,2 0 0
Мясо говядины бескостное замороженное <0,2 <0,2 0 0
Свинина бескостная замороженная 0,393 0,901 1 1
Г овядина бескостная охлажденная - оковалок говяжий <0,2 <0,2 0 0
Г овядина бескостная (мороженная боенская) 1,07 <0,2 1 0
Свинина <0,2 0,595 0 1
Парагвай Г овядина бескостная замороженная >16,2 >16,2 1 1
Г овядина бескостная замороженная внешняя часть бедра <0,2 <0,2 0 0
говядина бескостная толстый край >16,2 >16,2 1 1
Россия Г овядина "Пикантная" <0,2 <0,2 0 0
Ветчина из куриной грудки 0,460 <0,2 1 1
Сервелат классический 0,348 <0,2 1 0
Колбаса сырокопченая "Богород-ска" 0,308 <0,2 1 0
Г рудка куриная <0,2 0,421 0 1
Филе курицы <0,2 0,581 0 1
Курица /филе/ 1,69 <0,2 1 0
Курица /филе/ 2,07 <0,2 1 0
Курица /филе/ 2,95 <0,2 1 0
Курица /филе/ 2,09 <0,2 1 0
Аргентина Замороженный говяжий калтык >16,2 >16,2 1 1
Испания Свинина на кости <0,2 <0,2 0 0
США Мясо говядины бескостное замороженное 0,365 0,336 1 1
Замороженная бескостная говядина- оковалок 0,461 <0,2 1 0
Ирландия Шея свиная бескостная, замороженная, 0,352 <0,2 1 0
Австралия Телятина бескостная (вырезка) охлажденная 0,998 0,589 1 0
Таблица 1 (продолжение)
Страна происхож- дения Объект исследования Метаболиты Количество положительных проб
ЛМ07 мкг/кг Л07 мкг/кг ЛМ07 Л07
Ягнятина на кости охлажденная в в/у (отбивная ягненка на 4-х ребрышках) <0,2 0,601 0 1
Дания "Лопатка" говядина охлажденная, бескостная - вакуум. <0,2 0,858 0 1
Новая Зеландия Ягнятина <0,2 0,921 0 1
Г ермания Свинина (триминнг) 1,82 <0,2 1 0
Свинина (триминнг) 2,05 <0,2 1 0
Свинина (триминнг) 2,31 <0,2 1 0
Уругвай говядина - триминнг, мороженое 0,890 <0,2 1 0
Г овядина - триминнг, мороженое 0,775 <0,2 1 0
Итого: 21 12
Содержание метаболита AOZ в импортной продукции обнаружено в 9 пробах (39%), а в отечественной - 2 (20%) (рис 1).
120
100 80 60 40
го о
Рис 1. Частота обнаружения метаболитов нитрофуранов AMOZ и AOZ в мясном сырье поступающего на мясокомбинаты Санкт-Петербурга, %
Заключение.
В результате проведенных исследований по определению метаболитов нитрофуранов AMOZ и AOZ в мясе и мясной продукции можно сделать вывод, что как в странах-поставщиках мясного сырья в Россию, так и в самой России в животноводстве используются такие нитрофураны, как фуралтадон и фуразо-лидон, что приводит к контаминации мясной продукции метаболитами этих
антибактериальных препаратов. Это может быть связано с лечением больного животного или с целью ростостимулирующего эффекта, а также вследствие нарушения ветеринарных правил предубойной подготовки животных (запрещено отправлять на убой животных, которым применяли антибиотики и другие лекарственные средства в течение 14 дней после их применения).
Проведенные исследования мясного сырья на содержание нормируемых санитарным законодательством РФ нитрофуранов выявили их превышение в мясе и мясной продукции, импортируемой в Россию из некоторых стран мира (Уругвая, Г ермании, Аргентины, Испании), и показали, что мониторинг за препаратами нитрофуранового ряда в этой группе продуктов является актуальной проблемой, так как пищевые продукты, контаминированные нитрофуранами, оказывают негативное влияние на здоровье потребителей.
Литература:
1. Закревский В.В. Безопасность пищевых продуктов и биологических активных добавок к пище. Практическое руководство по санитарноэпидемиологическому надзору. - СПб.:ГИОРД, 2004. - 280с.
2. Закревский В.В., Лелеко С.Н. Состояние загрязненности мясного сырья нитрофуранами в условиях традиционного животноводства.// Профилактическая и клиническая медицина. - 2012.- №3(44). -С. 96-99.
3. Ковалев В.Ф. Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии: справочник / Ковалев В.Ф., Волков И.Б., Виолин Б.В. М.: Агропромиздат, 1988. -240с.
4. Лаврик О.Л. Законодательное регулирование качества пищевых продуктов /О.Л. Лаврик, С.В. Морозов //ГПНТБ. Новосибирск, 1997.-136с.
5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: РИА «Новая волна»: Издатель Умеренков, 2007. - 1206 с.: ил.
6. МУ 5-1-14/1005 "Методические указания по количественному определению антибактериальных препаратов в продовольственном сырье и продуктах питания животного происхождения методом конкурентного иммунофермент-ного анализа». - М. -2012.
7. Припутина Л.С Гигиеническое значение использования кормовых антибиотиков в животноводстве /Л.С Припутина, О.Д. Ольшевская, Т.В. Воробьева, Ж.Я. Жильская // Вопросы питания. 1982. - № 1. - С. 50 - 53.
8. Решение Комиссии Таможенного союза от 28 мая 2010 г. № 299 (ред. от 15.01.2013) «О применении санитарных мер в таможенном союзе».
9. Соколов В.Д. Перспективы применения химиопрепаратов //Ветеринарная практика. - 1997. №1.-С. 6-14.
10. Тимофеев Б.А. Профилактика лекарственных осложнений у сельскохозяйственных животных. - М.: Росагропромиздат, 1989.-160 с.
11. Fin zi J.K. et al.// J. of Chromatography. 2005, B, 824.
12. Mottier P. Et al. // J. of Chromatography A, 1067(2005) 85-91.
13. Nouws J.F.M., Laurensen J.: Postmortal degradation of furazolidone and fural-
tadone in edible tissues of calves. // Veterinary Quarterly, 12, 1990, 56-59.
14. Vass M., Hruska K., Franek M.: Nitrofuran antibiotics: a review on the appli-
cation, prohibition and residual analysis// VeterinarniMedicina 53, 2008 (9): 469-500 Review Article, Veterinary Research Institute, Brno, Czech Republic.
15. http://ec.europa.eu/food/food/rapidalert/members en.htm
Ключевые слова: метаболиты нитрофуранов, пищевые продукты, показатели безопасности.
Key words: metabolites of nitrofurans, food products, the safety record.
Работа выполнена на средства именного гранта Э.Э.Эйхвальда.
Ю.В.Занегина
ЗДОРОВЬЕ ПОЛОСТИ РТА КАК КРИТЕРИЙ КАЧЕСТВА ЖИЗНИ1
Кировская государственная медицинская академия, кафедра внутренних болезней, г. Киров
Введение: Здоровье полости рта является критерием качества жизни в цивилизованном мире. Состояние зубов и тканей пародонта играет очень важную роль в обеспечении жизненного комфорта. Кариозные поражения зубов, заболевания десен, атрофия альвеолярной кости субъективно доставляют массу неприятных ощущений: болевые ощущения, неприятный запах изо рта, повышенную чувствительность зубов к различным раздражителям (химическим, физическим, термальным), кровоточивость десен, расшатывание зубов и др. Но самое главное,
1Zanegina Y.V. Oral health quality of life as a criterion.
389
