CC BY
10Кримський терапевтичний журнал -
OpuaiHanbHi досп'!дження
УДК:616.36-002:616.24-008.4-07:616.15:577.17
Взаимосвязь сывороточного уровня провоспалительных цитокинов с результатами 13С-метацетинового дыхательного теста у больных хроническими гепатитами
И.Л. Кляритская, Е.И. Стилиди, Д. Шахбазиди
The relationship between serum proinflammatory cytokines levels and results of 13C-methacetin breath test in patients with chronic hepatitis
I.L. Klyarytskaya, E.I. Stilidi
Государственное учреждение «Крымский государственный медицинский университет имени С.И. Георгиевского», Симферополь
Ключевые слова: хронические гепатиты, метацетиновый дыхательный тест, цитокины, лозартан
Актуальность темы
Повышенный интерес современные исследователи уделяют неинвазивным методам диагностики стадий фиброза, сопровождающего развитие хронических гепатитов (ХГ), что является очень важным диагностическим этапом, поскольку позволяет определять прогноз хронического заболевания печени и контролировать эффективность его лечения [7, 12].
Единая классификация неинвазивных способов диагностики фиброза печени (ФП) у больных ХГ на настоящий момент отсутствует, однако современные разработки активно ведутся и включают: (1) определение в крови больных сывороточных маркеров фиброза печени, (2) дыхательные тесты и (3) развитие методов визуализации печени.
В литературе представлено также множество комбинированных способов неинвазивной диагностики стадий фиброза печени при ХГ с использова-
нием разнообразных сочетаний инструментальных методов, прямых и непрямых сывороточных фибро-маркеров [2, 12].
Данные многих исследователей о патогенезе гепатитов и ФП свидетельствуют о том, что повреждение печени практически всегда сопровождаютсядисфункцией иммунной системы [8, 9], а именно нарушением регуляции выработки провоспалительных и противовоспалительных цитокинов (ЦК). Также известно, что наибольшее значение в развитии заболеваний печени играют такие провоспалительные ЦК, как фактор некроза опухоли альфа (ФНО-а) и интерлейкин-6 (ИЛ-6). В клинических исследованиях показана роль данных цитокинов в патогенезе хронических вирусных гепатитов (ХВГ) [4, 8, 10], неалкогольного
195006, Украина, Симферополь, Крым, бульв. Ленина 5/7, e-mail office@csmu.strace.net
стеатогепатита (НАСГ) [5] и алкогольного гепатита (АГ) [6, 9].
Дыхательные тесты базируются на применении меченых субстратов, в состав которых входит изотоп углерода 13С. Первым из дыхательных тестов с целью диагностики функциональной активности гепатоцитов в отечественной клинической практике начали применять 13С-метацетиновый дыхательный тест (13С-МДТ). Неинвазивность, безопасность, чувствительность, специфичность, отсутствие противопоказаний к проведению дыхательного теста делают его высоко востребованным.
Метацетин [Ы-(4-метоксифенил) ацетамид] -производное фенацетина. По данным литературы, этот тест позволяет определить процент функционирующих гепатоцитов [3, 11, 13], что является невыполнимой задачей для других методов исследования функции печени, используемых в клинической практике. Чувствительность и специфичность 13С-МДТ весьма высокая и составляет более 90%
[13].
Дальнейшая разработка и внедрение ранних методов неинвазивной диагностики для оценки прогноза и эффективности лечения у больных ХГ, при ФП на ранних, латентных, стадиях его развития и разработка эффективных способов консервативной терапии, является чрезвычайно актуальной проблемой современной гепатологии.
На современном этапе необходимо дальнейшее совершенствование методов определения факторов, влияющих на течение ХГ и развитие ФП. Следует сосредоточить внимание на влиянии изменений цитокинового профиля на эффективность лечения и прогноз течения заболевания у пациентов с ХВГ, НАСГ и АГ, а также оценить взаимосвязь различных методов неинвазивной диагностики фиброза печени (сывороточные маркеры фиброза, дыхательные тесты).
Цель исследования: выявить корреляцию провос-палительных цитокинов (ФНО-а и ИЛ-6) с результатами 13С-МДТ, как показателя фиброза, у пациентов с ХВГ, НАСГ и АГ.
Материал и методы
Было обследовано 147 больных ХГ, находившихся на лечении в гастроэнтерологическом отделении Крымского республиканского учреждения "Клиническая больница им. Н.А. Семашко". Пациенты были разделены на 3 группы. Первую группу (группа ХВГ) составили 50 больных ХВГ В и С, средний возраст (36,96±1,66) года, 28 мужчин и 22 женщины; во вторую (группа НАСГ) вошло 49 больных НАСГ, средний возраст (47,06±1,88) года, 32 мужчины и 17 женщин; в третью группу (группа АГ) было включено 48 больных АГ, средний возраст (46,25 ±1,95) года, 31 мужчина и 17 женщин. Контрольную группу составили 25 практически здоровых лиц, у которых при полном клиническом и лабораторном обследовании не было обнаружено патологии печени,
средний возраст (38,72± 2,53) года, 15 мужчин и 10 женщин.
У всех обследованных было получено согласие на участие в исследовании и на анализ их демографических и медико-биологических данных.
Клинические диагнозы ХВГ В и С, НАСГ, АГ устанавливались в соответствии с приказом МЗ Украины № 271 от 13.06.2005 г. (Про затверджен-ня протоколiв надання медично!' допомоги за спещальшстю «Гастроентеролопя») и рекомендациями европейской ассоциации по изучению печени. При сборе анамнеза использовался опросники GAGE и AUDIT.
Всем пациентам, которые принимали участие в исследовании, проводилось общеклиническое обследование, которое включало сбор жалоб, анамнеза, физикальное обследование, комплекс общеклинических, биохимических и инструментальных методов исследований. Специальные лабораторные исследования включали в себя определение сывороточных уровней ФНО-а и ИЛ-6 методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием набора фирмы ЗАО "Вектор-Бест" (Россия).
Кровь для исследования брали из периферической вены натощак в период с 8.00 до 9.00. При взятии венозной крови учитывался ряд факторов способных оказать влияние на результаты гематологического исследования:
- взятие венозной крови осуществлялось после 15-минутного отдыха обследуемого;
- пациент во время взятия крови находился в положении сидя, у тяжелых больных взятие крови осуществлялось в положении лежа;
- курение, прием алкоголя и пищи непосредственно перед исследованием исключались.
Забор венозной крови производился из локтевой вены при помощи одноразовых шприцев с внутренним диаметром иглы 0,55-0,65 мм.
Образцы крови доставлялись в лабораторию в течение не более 60 минут.
Для получения сыворотки крови использовалось следующее оборудование:
1. Центрифужные стеклянные пробирки общим объемом 10-12 мл.
2. Стеклянные палочки (для отделения сгустка).
3. Центрифуга лабораторная (3000 об/мин.).
Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов, отстаивалась в стеклянной пробирке при комнатной температуре (+15°С...+20°С) в течение 30 минут до полного образования сгустка. По окончании образования, сгусток удалялся, после чего образцы крови центрифугировались при 3000 об/мин в течение 10 минут. Полученная сыворотка помещалась во вторичные пластиковые пробирки объемом 10 мл и подвергалась хранению в морозильной камере при температуре -25°С.
Чрескожная пункционная биопсия печени выполнена 46 пациентам. Активность гепатита оценивалась по критериям определения индекса гистологической активности (ИГА), предложенным
Табл. 1
Оценка результатов 13С-МДТ
Суммарная концентрация 13СО2 к 120-й минуте, % Интерпретация результата
20-35 показатели функции печени в пределах нормы (МФГ-100%)
10-20 умеренное нарушение функции печени без цирротических изменений (МФГ-50-100%)
2-10 выраженное нарушение функции печени с цирротическими изменениями (МФГ 20-50%)
< 2 тяжелое нарушение функции печени с цирротическими изменениями (МФГ<20%)
Knodell (1981) и модифицированным Desmet (1995). У пациентов с НАСГ использовали критерии оценки гистологической активности, предложенные Brunt E.M.(1999, 2002). Степень ФП определяли по системе METAVIR (1996).
13С-метацетиновый дыхательный тест проведен 57 пациентам. Принцип метода заключается в том, что меченный нерадиоактивным изотопом 13С-метацетин (производное фенацетина) подвергается в печени ферментативному деметилированию и декарбоксилированию с участием микросомальных ферментов системы цитохрома Р450. Конечным продуктом метаболизма 13С-метацетина является 13СО2, интенсивность выделения которого через легкие позволяет судить о функциональном состоянии микросомальных ферментных систем гепатоцитов.
Процедура 13С-МДТ:
В ходе теста необходимо получить девять дыхательных проб: исходную, до приема тестового завтрака (75 мг 13С-метацетина, растворенного в 200 мл фруктового чая без сахара), а также еще шесть проб в течение первого часа (по одной каждые 10 мин.) и три - в течение второго часа (по одной каждые 20 мин.). Дыхательные пробы анализировали на инфракрасном спектроскопе Iris Wagner
(Германия). Выводы о наличии или отсутствии нарушения функции печени были сделаны на основании сопоставления кривой суммарной концентрации 13СО2 к исходу 120 минут исследования с кривыми, полученными при обследовании здоровых добровольцев, которые отражают верхнюю и нижнюю границы нормы.
В табл. 1 приведены показатели нормальной и патологической суммарной концентрации 13СО2 и ее соотношение с массой функционирующих гепато-цитов (МФГ).
С целью изучения антифибротического действия лозартана были отобраны 96 пациентов: 33 больных ХВГ, 33 больных НАСГ, 30 больных АГ. В числе обследуемых было 59 мужчин и 37 женщин в возрасте от 18 до 77 лет; средний возраст (43,33±1,27) года. Больные были разделены на две подгруппы. Первая подгруппа (39 больных) получала базисную терапию: больные ХВГ - противовирусную терапию согласно общепринятым протоколам, больные НАСГ - урсодезоксихолевую кислоту в среднесуточной дозе 30 мг/кг/д и аторвастатин в дозе 20 мг/ сут, больные АГ- адеметионин ("Гептрал") в дозе 800 мг внутривенно медленно в течение 14 дней с последующим переходом на пероральный прием в дозе 1600 мг в сутки (разделенных на 2 приема).
81,78+4,97*
55,78+5,08*
18,69+2,03
15,4 + 1,72
74,56+6,35*
68,85+4,76*
46,88+3,36*
63,54+5,29*
ИЛ-6 ■ ФНО-а
Контроль ХВГ НАСГ АГ
Примечание: * вероятность различий с показателями контрольной группы, Р <0,01
Рис 1. Средние уровни ФНО-а и ИЛ-6 в группах ХВГ, НАСГ и АГ
о
Табл. 2
Концентрация ФНО-а и ИЛ-6 в группах пациентов с нормальной и нарушенной функции печени по данным 13С-МДТ, М±т
Группа 13С-МДТ ФНО-а, пг/мл ИЛ-6, пг/мл
ХВГ нормальная функция печени (МФГ=100%) 46,75±6,28 27,13±9,17
нарушенная функция печени (МФГ менее 100%) 99,04±8,36 69,44±9,39
НАСГ нормальная функция печени (МФГ=100%) 28,26±6,27 33,06±6,98
нарушенная функция печени (МФГ менее 100%) 52,95±6,89 82,76±8,91
АГ нормальная функция печени (МФГ=100%) 51,89±9,67 42,28±7,69
нарушенная функция печени (МФГ менее 100%) 158,62±15,54 107,32±8,85
Во вторую подгруппу вошли 57 пациентов, которые получали базисную терапию (в зависимости от этиологии заболевания) и антифибротическую терапию (лозартан) в суточной дозе 50 мг ежедневно. Период контролированного лечения вышеуказанными препаратами составил 24 недели. Эффективность лечения контролировали по динамике основных клинических синдромов и лабораторных показателей. Лабораторные показатели, включая ФНО-а и ИЛ-6, определяли в начале лечения и через 24 недели.
Все исследования проводились на сертифицированном оборудовании, прошедшем метрологический контроль, с использованием сертифицированных тест-систем и расходных материалов.
Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью программы STATISTICA 6.0 (Statsoft, Inc., www.statsoft.com). Все показатели приведены в единицах системы СИ и представлены в виде М ± т. Оценка достоверности различий проводилась с использованием непараметрического U-критерия Манна-Уитни. Для оценки корреляционных взаимосвязей между показателями использовался коэффициент корреляции Спирмена (г). Различия между показателями и корреляции считались достоверными при p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Первым этапом настоящего исследования было изучение содержания ФНО-а и ИЛ-6 в сыворотке крови больных ХВГ, НАСГ, АГ. Также был проведен анализ связи провоспалительных цитокинов с результатами С13-метацетинового дыхательного теста. Среднее значение ФНО-а в группе ХВГ составило (81,78±4,97) пг/мл; в группе НАСГ - (68,85± 4,76) пг/мл; в группе АГ - (74,56±6,35) пг/мл. Средний уровень ИЛ-6 в группе ХВГ - (55,78±5,08) пг/мл; в группе НАСГ - (46,88±3,36) пг/мл; в группе АГ -(63,54 ±5,29) пг/мл (рис.1).
Полученные данные свидетельствуют о том, что течение ХВГ В и С, НАСГ, АГ, в том числе с исходом в фиброз печени, сопровождается повышением концентрации ФНО-а, ИЛ-6 в сыворотке крови (р<0,01 по сравнению с контрольной группой).
При анализе уровня изучаемых цитокинов выявлена прямая связь между ФНО-а и ИЛ-6 у пациентов с ХВГ (г=0,62; р<0,01), НАСГ (г=0,86; р<0,01) и АГ (г=0,78; р<0,01).
У пациентов ХВГ, НАСГ и АГ с ростом активности АЛТ происходило снижение кумулятивной дозы 13С02, что свидетельствует о нарушении функции печени и уменьшении процента функционирующих гепатоцитов.Кромеэтого,снижениекумулятивной дозы 13СО2 сопровождалось ростом концентрации ФНО- а убольных ХВГ (г=-0,87; р=0,001), НАСГ (г = -
: ^ ,До лечения
I Базисная тер апия
Базисная терапия + лозартан
Рис 2. Показатели 136-МДТ у больных ХВО- НУбО и НО на фоне различных схем терапии (в %л
0,84; р<0,01), АГ (г = - 0,72; р<0,01) и ИЛ-6 у больных ХВГ (г=-0,65; р=0,001), НАСГ (г = - 0,74; р<0,01), АГ (г =- 0,73; р<0,01). Полученные данные позволяют сделать вывод, что уровень ФНО-а и ИЛ-6 у больных ХГ отражает степень нарушения функции печени.
У больных ХВГ с нормальной функцией печени (МФГ=100%) по результатам 13С-МДТ (табл. 2) сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 составила (46,75±6,28) пг/мл и (27,13±9,17) пг/мл, соответственно, превысив в 2,5 (для ФНО-а) и 1,8 (для ИЛ-6) раза показатели контрольной группы. При нарушении функции печени (МФГ менее 100%) по результатам 13С-МДТ наблюдался резкий подъем сывороточной концентрации провоспалительных цитокинов. Так, уровень ФНО-а и ИЛ-6 у данных больных составил (99,04±8,36) пг/мл и (69,44±9,39) пг/мл, соответственно, превысив в 5,3 (для ФНО-а) и 4,5 (для ИЛ-6) раз показатели контрольной группы.
У больных НАСГ с нормальной функцией печени (МФГ=100%) по результатам 13С-МДТ сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 составила (28,26±6,27) пг/мл и (33,06±6,98) пг/мл, соответственно, превысив в 1,5 (для ФНО-а) и 2,1 (для ИЛ-6) раза показатели контрольной группы. При нарушении функции печени (МФГ менее 100%) по результатам 13С-МДТ наблюдался резкий подъем сывороточной концентрации провоспалительных цитокинов. Так, уровень ФНО-а и ИЛ-6 у данных больных составил (52,95±6,89) пг/мл и (82,76±8,91) пг/мл, соответственно, превысив в 2,8 (для ФНО-а) и 5,4 (для ИЛ-6) раз показатели контрольной группы.
У больных АГ с нормальной функцией печени (МФГ=100%) по результатам 13С-МДТ сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 составила (51,89±9,67) пг/мл и (42,28±7,69) пг/мл, соответственно, превысив почти в 3 раза показатели контрольной группы. При нарушении функции печени (МФГ менее
100%) по результатам 13С-МДТ наблюдался резкий подъем сывороточной концентрации провоспа-лительных цитокинов. Так, уровень ФНО-а и ИЛ-6 у данных больных составил (158,62±15,54) пг/мл и (107,32±8,85) пг/мл, соответственно, превысив в 8,7 (для ФНО-а) и 7,1 (для ИЛ-6) раз показатели контрольной группы.
Таким образом, сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 ассоциирована с количеством функционирующих гепатоцитов и степенью нарушения функции печени, о чем свидетельствуют различия в показателях изучаемых цитокинов в подгруппах пациентов с нормальной и сниженной функцией печени по результатам 13С-МДТ, который является действенным, неинвазивным и динамическим количественным тестом для идентификации развития "жирной печени", цирроза печени с соответствующим ухудшением транспортной функции печени и ее метаболической емкости [1, 11]. В пользу данного утверждения свидетельствует полученная обратная корреляционная связь между изучаемыми цитокинами и суммарной концентрацией 13СО2.
Представленные данные подтверждают высокую значимость ФНО-а и ИЛ-6 для прогнозирования течения и исхода ХВГ, НАСГ и АГ.
Вторым этапом настоящего исследования было изучение эффективности применения лозартана при хронических гепатитах различной этиологии под контролем уровня провоспалительных цитоки-нов и 13С-МДТ.
Было установлено, что применение у пациентов ХВГ, НАСГ и АГ как базисной терапии, так и использование вместе с базисными препаратами лозарта-на, ведет к достоверному снижению концентрации изучаемых провоспалительных цитокинов, СРБ и улучшению показателей 13С-МДТ. Однако, при использовании лозартана вышеуказанные изменения являются более значимыми. Обнаружено, что в
* - разница по сравнению с результатами, полученными после применение базисных препаратов
Рис3. Результаты 13С-МДТ убольныхХГ нафонеразличных схемтерапиивзависимости отстадии фиброзапеченипошкалеMETAVIR (в %)
группе ХВГ на фоне базисной и антифибротической терапии показатель 13С-МДТ увеличился на 30%. Для сравнения, выше представленный показатель на фоне базисной терапии составил 23,5% (рис. 2).
При НАСГ базисная терапия привела к улучшению показателей 13С-МДТ на 16,8%, в то время как применение лозартана улучшило результаты 13С-МДТ на 26,3%.
В группе пациентов с АГ применение лозартана ассоциировалось с улучшением результатов 13С-МДТ на 21,4%, а использование базисной терапии с увеличением показателя данного теста на 12,9%.
При сравнительном анализе эффектов изучаемых схем терапии у больных с различными стадиями фиброза печени по шкале мета^ш, было обнаружено, что использование лозартана вместе с базисной терапией снижает уровень провоспали-тельных цитокинов на 4-20% больше, чем базисные препараты.
При всех стадиях фиброза печени лозартан повышает эффективность базисной терапии в отношении фиброгенеза. По данным 13С МДТ при F3 по шкале мета^ш масса функционирующих гепатоци-тов после использовании лозартана увеличилась на 34%, по сравнению с результатами, полученными после применение базисных препаратов. Для F1 и F2 по шкале мета^ш данная разница составила 13% и 7% (рис. 3).
На основе представленных данных можно сделать вывод, что у больных ХВГ, НАСГ и АГ повышается уровень ФНО-а и ИЛ-6 в ответ на прогрессиро-вание фиброза печени, что сопровождается нарушением функции печени по данным 13С-МДТ.
Использование лозартана в комбинации с базисной терапией у данных пациентов ведет к снижению концентрации изучаемых провоспалительных цитокинов и увеличению массы функционирующих гепатоцитов.
Литература
1. Рапопорт С.И.13С-метацетиновый дыхательный тест в практике гастроэнтеролога / С.И. Рапопорт, НА. Шубина, Н.В. Семенова.-М:Медпрактика, 2007.- 135 с.
2. Bourliere M, Penaranda G., Ouzan D. et al. Optimized stepwise combination algorithms of non invasive liver fibrosis scores including Hepascore in HCV patients // Am. J. Trop. Med. Hyg. - 2010. - Vol. 82, № 3. -P. 454-458.
3. Candelli M, Caz^ato I.A., Nista E.C. et al. 13C-methacetin breath test and oxygen supply // Aliment. Pharmacol. Ther. — 2003. — Vol. 18, № 11-12. — P. 1176.
4. Chen J., Wang Y, Wu X. et al. Down-regulation of PD-1 expression on lymphocytes in chronic hepatitis B patients with pegylated interferon a-2b treatment and the correlation with cytokines // J. Hepatol. - 2010. - Vol. 52, № 1. - P. 239-240.
5. Das K. Role of Cytokines in the Pathogenesis of Non-Alcoholic Fatty Liver Disease / S. K.Das, VBalakrishnan//Ind J Clin Biochem.- 2011.-Vol. 26, № 2.- P.202-209.
6. Gao B. Alcoholic Liver Disease: Pathogenesis and New Therapeutic Targets / B. Gao, R. Bataller // Gastroenterology. - 2011.-Vol. 141, № 5. -P. 1572-1585.
7. Goertz R.S., Zopf Y., Jugl V. Et al. Measurement of liver elasticity with acoustic radiation force impulse (ARFI) technology: an alternative noninvasive method for staging liver fibrosis in viral hepatitis // Ultraschall. Med. -2010. - Vol. 31, № 2. - P. 151-155.
8. Li K., Li N., Wei D. et al. Activation of chemokine and inflammatory cytokine response in hepatitis C virus-infected hepatocytes depends on Toll-like receptor 3 sensing of hepatitis C virus double-stranded RNA intermediates // Hepatology. - 2012. - Vol. 55, № 3. - P. 666-675.
9. Miller A. M., Horiguchi N., Jeong W. I. Et al. Molecular Mechanisms of Alcoholic Liver Disease: Innate Immunity and Cytokines // Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 2011. -Vol. 35, № 5. - P. 787-793.
10. Mishra P., Bhargava A., Vashistha P. et al. Mediators of the immune system and their possible role in pathogenesis of chronic hepatitis B and C viral infections // AsPac. J. Mol. Biol. Biotechnol. - 2010. - Vol. 18, № 3. - P. 341-349.
11. Petrolati A., Festi D., De Berardinis G. et al.13C-Methacetin breath test for monitoring hepatic function in cirrhotic patients before and after liver transplantation // Aliment. Pharmacol. Ther. — 2004. — Vol. 19, № 2.— P. 243.
12. Stauber R.E., Lackner C. Noninvasive diagnosis of hepatic fibrosis in chronic hepatitis C// World J. Gastroenterol. - 2007. - Vol. 13, № 32. -P. 4287-4294.
13. Zipprich A., Meiss F., SteudelN. et al.13C-Methacetin metabolism in patients with cirrhosis: relation to disease severity, haemoglobin content and oxygen supply // Aliment. Pharmacol. Ther. — 2003.— Vol. 17, № 12.— P. 1559-1562.
Выводы
Сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 ассоциирована с количеством функционирующих гепатоцитов и степенью нарушения функции печени, о чем свидетельствуют различия в показателях изучаемых цитокинов в подгруппах пациентов с нормальной и сниженной функцией печени по результатам 13С МДТ, а также наличие обратной корреляционной связи кумулятивной дозы 13СО2 с сывороточным уровнем ФНО-а у больных ХВГ (г=-0,87; р=0,001), НАСГ (г = - 0,84; р<0,01), АГ (г = - 0,72; р<0,01) и ИЛ-6 у больных ХВГ (г=-0,65; р=0,001), НАСГ (г = - 0,74; р<0,01), АГ (г =- 0,73; р<0,01).
Длительное, на протяжении 6 месяцев, применение в комплексной терапии больных ХВГ С и В, НАСГ и АГ лозартана в суточной дозе 50 мг сопровождается более значительным улучшением показателей 13С-МДТ, что свидетельствует об увеличении массы функционирующих гепатоцитов.
Взаимосвязь сывороточного уровня провоспалительных цитокинов с результатами 13С-метацетинового дыхательного теста у больных хроническими гепатитами
И.Л. Кляритская, Е.И. Стилиди
Цель: выявить корреляцию провоспалительных цитокинов (фактора некроза опухоли альфа (ФНО-а) и интерлейкина-6 (ИЛ-6)) с результатами 13С-метацетинового дыхательного теста (13С-МДТ), как показателя фиброза, у пациентов с хроническим вирусным гепатитом (ХВГ), неалкогольным стеатогепатитом (НАСГ) и алкогольным гепатитом (АГ).
Материалы и методы. Было обследовано 147 больных хроническим гепатитом. Пациенты были разделены на 3 группы: I (группа ХВГ) - 50 больных ХВГ В и С; II (группа НАСГ) - 49 больных НАСГ; III (группа АГ) - 48 больных АГ. Контрольная группа - 25 практически здоровых лиц. ФНО-а и ИЛ-6 определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа. Биопсия печени выполнена 46 пациентам. 13С-МДТ проведен 57 пациентам.
С целью изучения антифибротического действия лозартана были отобраны 96 пациентов: 33 больных ХВГ, 33 больных НАСГ, 30 больных АГ. Больные были разделены на две подгруппы. Первая подгруппа (39 человек) получала базисную терапию (в зависимости от этиологии заболевания). Во вторую подгруппу вошли 57 пациентов, которые получали базисную терапию и антифибротическую терапию (лозартан) в суточной дозе 50 мг ежедневно. Период контролированного лечения составил 24 недели.
Результаты и их обсуждение. Обнаружена обратная корреляционная связь кумулятивной дозы 13СО2 с сывороточным уровнем ФНО-а у больных ХВГ (г=-0,87; р=0,001), НАСГ (г = - 0,84; р<0,01), АГ (г = - 0,72; р<0,01) и ИЛ-6 у пациентов с ХВГ (г=-0,65; р=0,001), НАСГ (г = - 0,74; р<0,01), АГ (г =- 0,73; р<0,01). У больных ХВГ с нормальной функцией печени (масса функционирующих гепатоцитов (МФГ) =100%) по результатам 13С-МДТ сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 составила (46,75±6,28) пг/мл и (27,13±9,17) пг/мл, соответственно, превысив в 2,5 (для ФНО-а) и 1,8 (для ИЛ-6) раза показатели контрольной группы. При нарушении функции печени (МФГ менее 100%) по результатам 13С-МДТ наблюдался резкий подъем сывороточной концентрации цитокинов, который превышал в 5,3 (для ФНО-а) и 4,5 (для ИЛ-6) раз показатели контрольной группы. У больных НАСГ с нормальной функцией печени сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 составила (28,26±6,27) пг/мл и (33,06±6,98) пг/мл, соответственно, превысив в 1,5 (для ФНО-а) и 2,1 (для ИЛ-6) раза показатели контрольной группы. При нарушении функции печени уровень ФНО-а и ИЛ-6 составил (52,95±6,89) пг/ мл и (82,76±8,91) пг/мл, соответственно, превысив в 2,8 (для ФНО-а) и 5,4 (для ИЛ-6) раз показатели контрольной группы.
У больных АГ с нормальной функцией печени сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 составила (51,89±9,67) пг/мл и (42,28±7,69) пг/мл, соответственно, превысив почти в 3 раза показатели контрольной группы. При нарушении функции печени уровень ФНО-а и ИЛ-6 составил (158,62±15,54) пг/мл и (107,32±8,85) пг/мл, соответственно, превысив в 8,7 (для ФНО-а) и 7,1 (для ИЛ-6) раз показатели контрольной группы.
По данным 13С-МДТ при F3 по шкале МЕТ^Ш масса функционирующих гепатоцитов после использовании лозартана увеличилась на 34%, по сравнению с результатами, полученными после применение базисных препаратов. Для F1 и F2 по шкале METAVIR данная разница составила 13% и 7%. Выводы. Сывороточная концентрация ФНО-а и ИЛ-6 ассоциирована с количеством функционирующих гепатоцитов и степенью нарушения функции печени. Длительное, на протяжении 6 месяцев, применение в комплексной терапии больных ХВГ, НАСГ и АГ лозартана в суточной дозе 50 мг сопровождается улучшением показателей 13С-МДТ, что свидетельствует об увеличении массы функционирующих гепатоцитов.
Ключевые слова: хронические гепатиты, метацетиновый дыхательный тест, цитокины, лозартан
Взаемозв'язок сироваткового рiвня прозапальних цитоюшв з результатами 13С-метацетинового дихального тестУ у хворих на хрошчш гепатити
1.Л. Кляритська, О.1. CmWdi
Мета: виявити кореляцта прозапальних цитоюшв (фактора некрозу пухлини альфа (ФНП-а) та шгерлейюну-6 (1Л-6)) з результатами 13С-метацетинового дихального тесту (13С-МДТ), як показника ф1брозу, у пащентш з хрончним в1русним гепатитом (ХВГ), неалкогольним стеатогепатитом (НАСГ) i алкогольним гепатитом (АГ). Матер1али i методи. Було обстежено 147 хворих на хрошчний гепатит. Пащенти були розд1лен1 на 3 групи: I (група ХВГ) - 50 хворих на ХВГ В i С; II (група НАСГ) - 49 хворих на НАСГ; III (група АГ) - 48 хворих на АГ. Контрольна група - 25 практично здорових оаб. ФНП-а та 1Л-6 визначали методом твердофазного iмунофер-ментного аналiзу. Бюпая печшки виконана 46 пащентам. 13С-МДТ проведено 57 пащентам.
З метою вивчення антiфiбротичноï дц лозартану були вщбраш 96 пащенпв: 33 хворих на ХВГ, 33 - на НАСГ, 30 - на АГ. Хворi були роздшеш на дт тдгрупи. Перша пiдгрупа (39 оаб) отримувала базисну терапiю (залежно вщ етiологiï захворювання). У другу пщгрупу увiйшли 57 пащенпв, якi отримували базисну i антифiбротичну терашю (лозартан у добовш дозi 50 мг щодня). Перiод контрольованого лiкування склав 24 тижш.
Результати та ïх обговорення. Було виявлено зворотний кореляцшний зв>язок кумулятивноï дози 13СО2 з сироватковим рiвнем ФНП-а у хворих на ХВГ (г = -0,87; р = 0,001), НАСГ (г = - 0,84; р <0,01), АГ (r = - 0,72; р <0,01) та 1Л-6 у пащенпв з ХВГ (r = -0,65; р = 0,001), НАСГ (r = - 0,74; р <0,01), АГ (r = - 0,73; р <0,01). У хворих на ХВГ з нормальною функщею печшки (маса функцюнуючих гепатоцитш (МФГ) = 100%) за результатами 13С-МДТ сироваткова концентрация ФНП-а та 1Л-6 склала (46,75± 6,28) пг/мл i (27,13±9,17) пг/мл, вщповщно, що перевищило в 2,5 (для ФНП-а) i 1,8 (для 1Л-6) рази показники контрольно!' групи. При порушенш функци печiнки (МФГ менш шж 100%) за результатами 13С-МДТ спостери-ався рiзкий пiдйом сироватковоï концентрацiï цитоюшв, що перевищувала у 5,3 (для ФНП-а) i 4,5 (для 1Л-6) раз показники контрольноï групи.
У хворих на НАСГ з нормальною функщею печшки сироваткова концентращя ФНП-а та 1Л-6 склала (28,26 ± 6,27) пг/мл i (33,06±6,98) пг/мл, вщповщно, перевищивши в 1,5 (для ФНП-а) i 2,1 (для 1Л-6) рази показники контрольноï групи. При порушенш функци печiнки рiвень ФНП-а та 1Л-6 склав (52,95±6,89) пг/мл i (82,76± 8,91) пг/мл, вщповщно, перевищивши в 2,8 (для ФНП- а) i 5,4 (для 1Л-6) раз показники контрольноï групи.
У хворих АГ з нормальною функщею печшки сироваткова концентращя ФНП-а та 1Л-6 склала (51,89± 9,67) пг/мл i (42,28 ±7,69) пг/мл, вщповщно, що перевищило майже в 3 рази показники контрольна групи. При порушенш функци печшки рiвень ФНП-а та 1Л-6 склав (158,62±15,54) пг/мл i (107,32± 8,85) пг/мл, вщповщно, перевищивши в 8,7 (для ФНП- а) i 7,1 (для 1Л-6) раз показники контрольноï групи. За даними 13С-МДТ при F3 за шкалою METAVIR тсля використанш лозартану МФГ збшьшилася на 34%, п^вняно з результатами, отриманими пiсля застосування базисних препаратiв. Для F1 i F2 за шкалою METAVIR дана рiзниця склала 13% i 7%. Висновки. Сироваткова концентрацiя ФНП-а та 1Л-6 асоцiйована з кiлькiстю функцюнуючих гепатоцш1в i ступенем порушення функци печшки. Тривале, протягом 6 мгсяцш, застосування в комплекснш терапiï хворих на ХВГ, НАСГ та АГ лозартану у добовш дозi 50 мг супроводжуеться полшшенням показникiв 13С-МДТ, що свiдчить про збiльшення маси функцюнуючих гепатоцитш.
Ключовi слова: хрошчш гепатити, метацетиновий дихальний тест, цитоюни, лозартан
The relationship between serum proinflammatory cytokines levels and results of 13C-methacetin breath test in patients with chronic hepatitis
IL Klyarytskaya, EI Stilidi
Aim: to determine the correlation between proinflammatory cytokines (tumor necrosis
factor alpha (TNF-а) and interleukin-6 (IL-6)) with the results 13c-methacetin breath test (13C-MBT) as an indicator of fibrosis in patients with chronic viral hepatitis (CVH), nonalcoholic steatohepatitis (NASH), and alcoholic hepatitis (AH). Materials and methods. We examined 147 patients with chronic hepatitis. Patients were
divided into 3 groups: I (group CVH) - 50 patients with chronic viral hepatitis B and C; II (group NASH) - 49 patients with NASH; III (group AH) - 48 patients with AH. The control group - 25 healthy individuals. TNF-а and IL-6 was detemiined by ELISA. A 1^г biopsy pe^omed to 46 patients. 13C-MDT was held in 57 patients. To study the antifibrotic action of losartan 96 patients were selected: 33 patients with CVH, 33 patients with NASH, 30 patients with AH. Patients were divided into two subgroups. The firet subgroup (39 patients) received standarf treatment (depending on the etiology of disease). The second subgroup included 57 patients who received standarf treatment and antifibrotic therapy (losartan) in a dose of 50 mg daily. Controlled treatment period was 24 weeks.
Results and discussion. Found an inve^e collation of the cumulative dose of 13CO2 with sernm levels of TNF-а in patients with CVH (г = -0,87; p = 0.001), NASH (г = - 0,84; p <0.01), AH (г = - 0.72, p <0.01) and IL-6 in patients with CVH (г = -0,65; p = 0.001), NASH (г = - 0,74; p <0.01), AH (г = - 0.73, p <0.01).
In CVH patients with nomal 1^г function (functioning hepatocyte mass (FHM) = 100%) on the results of 13C-MDT sernm concentrations of TNF-а and IL-6 was (46,75 ± 6,28) pg / ml and (27,13±9,17) pg / ml, respectively, exceeded 2.5 (йэг TNF-а) and 1.8 (ГЪг the IL-6) times to controls. In abnomial 1^г function (FHM less than 100%) on the results of 13C-MDT was a sha^ rise in sernm cytokine concentrations that exceeded 5.3 (Аэг TNF-а) and 4.5 (Аэг IL-6) times the pe^miance of the control group. In NASH patients with nornal 1^г function, sernm concentrations of TNF-а and IL-6 were (28,26±6,27) pg/ml and (33,06±6,98) pg/ml, respectively, exceeding the 1.5 (йэг TNF-а) and 2.1 (йэг the IL-6) times to controls. In abnomial 1^г function levels of TNF-а and IL-6 were (52,95±6,89) pg / ml and (82,76±8,91) pg/ml, respectively, exceeding the 2.8 (foT TNF-а) and 5.4 ^г IL-6) times to controls.
AH patients with nornal liver function, sernm concentrations of TNF-а and IL-6 were (51,89 ± 9,67) pg / ml and (42,28±7,69) pg/ml, respectively, exceeding by almost 3 times control group. In abnornal 1^г function levels of TNF-а and IL-6 was (158,62±15,54) pg/ml and (107,32±8,85), respectively, exceeding the 8.7 (йэг TNF- а) and 7.1 (йэг IL-6) times to controls.
Acco^ing to 13C-MDT at F3 METAVIR mass of hepatocytes increased by 34%, after the use of losartan, in compare with the results obtained afe the application of basic drngs. For F1 and F2 METAVIR this difference was 13% and 7%.
Conclusions. Sernm TNF-а and IL-6 associated with the amount of hepatocytes and the degree of 1^г dysfunction. Long-tern losartan use (йэг 6 months) in a daily dose of 50 mg in treatment of patients with chronic viral hepatitis, NASH and AH followed by improvements in 13C-MDT, indicating an increase functioning hepatocyte mass. Keywo^s: chronic hepatitis, methacetin breath test, cytokines, losartan
