CC BY
30
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Онкоиммунология и гемобластозы Cancers and hematological malignancies
ПАТОГЕНЕЗ, ДИАГНОСТИКА И ИММУНОТЕРАПИЯ ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ
ОНКОИММУНОЛОГИЯ И ГЕМОБЛАСТОЗЫ
ВЗАИМОСВЯЗЬ МЕЖДУ ЭКСПРЕССИЕЙ РЕЦЕПТОРА NKG2D НА ЛИМФОЦИТАХ И ЕГО ЛИГАНДАМИ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА И КИШЕЧНИКА
Абакушина Е.В., Пасова И.А., Неприна Г.С., Каприн А.Д.
Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба — филиал ФГБУ«Национальный медицинский исследовательский радиологический центр» Министерства здравоохранения РФ, Обнинск, Россия
На современном этапе развития онкологии важной задачей является поиск дополнительных диагностических маркеров и точек приложения для биотерапии опухолей. В настоящее время эффект ускользания опухоли от иммунного надзора изучен не полностью, но некоторые механизмы этого феномена уже достаточно хорошо известны. Одним из таких механизмов является феномен сбрасывания значимых опухоле-ассоциированных молекул с поверхности трансформированных клеток, например, стресс-индуцированных молекул MICA, которые должны распознаваться цитотоксическими лимфоцитами через NKG2D и уничтожаться. В данном случае лиганд рецепторное взаимодействие имеет важное значение.
Цель. Выявление взаимосвязи между уровнем MICA в сыворотке крови онкологических больных с различным распространением процесса и экспрессией рецептора NKG2D на лимфоцитах.
Материалы и методы. В работе использовали периферическую кровь 60 первичных больных с гистологически подтвержденным диагнозом: I группа — рак желудка (T1_4N0_3M0_1) — 21 человек и II группа — рак кишечника (T2 4N0 2M01) — 39 человек. Метастазирование процесса было обнаружено у 8 (13,3%) больных раком желудка и 19 (31,7%) больных раком кишечника. Контрольную группу составили 20 условно здоровых добровольцев.
Содержание растворимых форм молекул sMICA в сыворотке крови при помощи ИФА (Abcam, США) по инструкции. Субпопуляционный состав Т-, NK- и NKT-лимфоцитов периферической крови и маркера активации NKG2D на Т- и NK-клетках оценивали на проточном цитофлуориметре FACScan (Becton Dickinson, США) с использованием меченых антител анти CD45-PE, CD3-PC5.5, CD16/56-FITC (Beckman Coulter, Франция). Анализировали не менее 5000 событий в секторе живых клеток. Экспрессию NKG2D (CD314-PE) (eBioScience, США) анализировали на поверхности CD56+ и CD3+ лимфоцитов.
Результаты. У большинства больных раком желудка и кишечника уровень sMICA в 4,6 раз превышает контрольные значения, что может служить одним из диагностических маркеров (р < 0.05). Содержание NK-клеток в обобщенной группе больных при раке желудка и кишечника почти в 3 раза превышает референсные значения. Также в обеих группах наблюдается значимое увеличение экспрессии активирующего рецептора NKG2D на лимфоцитах и NK-клетках — с 9,1% до 19,7%. При этом экспрессия NKG2D была повышена в большей степени у больных раком желудка (в 2,6 раза). У больных раком кишечника значимо снижено содержание NKT-лимфоцитов с 2,9±2,1% до 1,8±1,7% (Р = 0,03) по сравнению с группой больных раком желудка.
Также нами были проанализированы результаты фе-нотипирования лимфоцитов у больных с наличием метастазов и без них. При раке желудка с метастазами значимо повышено количество NK-клеток и экспрессия рецептора NKG2D на лимфоцитах и NK-клетках. В группе больных раком кишечника с метастазами также наблюдалось увеличение доли NK-клеток и CD314+NK-клеток, но отличия от группы без метастазов были не достоверны. Среднее содержание активирующего рецептора NKG2D у пациентов обеих групп составило более 50%, что выше чем в контрольной группе. Выявилось достоверное увеличение CD8+T-лимфоцитов у больных раком желудка с распространенным процессом до 32,8±9,8% по сравнению с подгруппой без метастазов — 27,1±17,9% (Р = 0,047). При раке кишечника с метастазированием содержание NKT-лимфоцитов снижено (Р = 0,03). Показано, что CD314 экспрессируется на более чем 87% NK-клеток как у пациентов с раком желудка, так и у пациентов с раком кишечника, что выше, чем у здоровых доноров.
Таким образом, повышение сывороточного уровня sMICA в группах больных раком желудка и раком толстого кишечника сопровождалось ростом доли NK-клеток и увеличением поверхностной экспрессии NKG2D в популяции лимфоцитов у этих больных. При анализе субпопуляции Т-лимфоцитов было показано, что доля NKG2D+T-клеток достоверно снижена в обобщенной группе больных за счет вклада низких показателей больных раком желудка. Таким образом, растворимые молекулы MICA в большей степени оказывают негативное влияние на экспрессию NKG2D на Т-клетках, чем на NK-клетках.
Заключение. В работе обнаружена взаимосвязь между уровнем лигандов стресс-индуцированных молекул MICA и экспрессией NKG2D на лимфоцитах крови у больных раком желудка и кишечника. Показано, что с повышением уровня sMICA у больных раком желудка увеличивается количество циркулирующих NK-клеток, а при раке
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
кишечника наоборот уменьшается что, вероятно, связано с различным механизмом иммунного ответа и патогенезом данных злокачественных новообразований. Также можно сделать вывод о том, что высокий уровень иммунорегуля-торных молекул MICA, лигандов NKG2D и увеличение их концентрации в сыворотке крови при метастазировании, а также повышение процента цитотоксических лимфоцитов и NKG2D+NK-клеток, у большинства больных ЗНАО может служить фактором неблагоприятного прогноза.
Исследование выполнено за счёт гранта Российского научного фонда (проект № 14-35-00105) и гранта Президента НШ-9069.2016.4.
ОПЫТ ПРОВЕДЕНИЯ АДОПТИВНОЙ ИММУНОТЕРАПИИ АКТИВИРОВАННЫМИ ЦИТОТОКСИЧЕСКИМИ ЛИМФОЦИТАМИ У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ
Абакушина Е.В.1, Пасова И.А.1, Козлов И.Г.2' 3, Каприн А.Д.4
1 Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба — филиал ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский радиологический центр» Министерства здравоохранения РФ, Обнинск, Россия
2 ФГБУ «Национальный научно-практический центр детской гематологии, онкологии и иммунологииим. Д. Рогачева, Москва, Россия
3 ГБОУВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет» им. Н.И. Пирогова, Москва, Россия
4 ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский радиологический центр» Министерства здравоохранения РФ, Обнинск, Россия
Как известно, методы иммунотерапии, основанные на стимуляции лимфоцитов опухолевым антигеном, ци-токинами, индукторами пролиферации и дифференци-ровки или сочетанием данных воздействий достаточно известны и хорошо себя зарекомендовали при лечении различных злокачественных новообразований. В данной работе представлен опыт применения адоптивной иммунотерапии (АИТ) аутологичными активированными ци-тотоксическими лимфоцитами у различных онкологических больных после комплексного лечения.
Цель. Оценка переносимости и эффективности АИТ у онкологических больных на различных этапах противоопухолевой терапии.
Материалы и методы. АИТ была проведена 82 онкологическим больным обоего пола с морфологически под-
ТАБЛИЦА (К ТЕЗИСАМ АБАКУШИНОЙ Е.В. И ДР.)
твержденным диагнозом, подписавшим информированное согласие (табл.).
Для получения большого количества активированных лимфоцитов выделенные из периферической крови больного мононуклеарные клетки культивировали на протяжение 10-14 дней в питательной среде с добавлением IL-2 и IL-15 в СО2 инкубаторе во влажной атмосфере при 37 оС. Введение клеток в количестве от 2 до 20 млн проводили каждые 2-3 дня. Далее АИТ продолжали клеточным продуктом по индивидуальной схеме. Исследование было одобрено этическим комитетом МРНЦ им. А.Ф. Цыба.
Результаты. В работе клинически доказана эффективность применения АИТ с использованием активированных аутологичных лимфоцитов среди которых доля NK-клеток составляла от 30 до 98%, а цитотоксических лимфоцитов более 70%. Побочных явлений выявлено не было. Появлении реактивных лимфоузлов является отражением процесса активации лимфоцитов in vivo во вторичных лим-фоидных органах. Результаты исследования показали объективный ответ на терапию у больных меланомой в 9,8% случаев, стабилизацию болезни у большей части пациентов в 58,8% случаев. У больных с ОЖКТ в 42,9% наблюдалась стабилизация процесса. У одной пациентки был зафиксирован частичный ответ. У больных раком легкого, РМЖ и РЛ диагностирована стабилизация процесса в 70% случаев. Таким образом, среди 82 онкологических больных объективный эффект достигнут у 7,3% больных, а стабилизация процесса зафиксирована более чем у половины испытуемых в 56,1% случаев. У пациентов без объективного ответа на АИТ отмечено увеличение продолжительности безрецидивного периода, контроль над опухолью достигнут у 46 пациентов (56,1%). Большинство больных отмечали уменьшение побочных эффектов от химиотерапии, которые ранее проявлялись наличием диспепсии, тошноты, рвоты, нарушением дефекации, депрессией и упадком сил.
Заключение. АИТ активированными аутологичны-ми цитотоксическими лимфоцитами является безопасным методом лечения. Проведение АИТ у онкологических больных с неблагоприятным прогнозом наиболее эффективна при минимальном объеме опухолевой массы и при продолжительном (более 2-х месяцев) и непрерывном лечении без длительных перерывов в курсах АИТ. Положительные отзывы пациентов дают основание полагать, что АИТ активированными лимфоцитами может применяться для улучшения качества жизни онкологических больных.
Нозология/ характеристика Группа I Группа II Группа III
Меланома Опухоли ЖКТ Рак молочной железы Рак почки Рак легкого Всего
Количество пациентов, чел. (%) 51 (62,2) 21 (25,6) 5 (6,1) 4 (4,9) 1 (1,2) 82 (100)
Средний возраст (интервал), 52±13 54±13 54±15 57±8 60 56±12
лет (26-82) (25-79) (36-79) (48-66) (26-82)
Наличие метастазов, чел. (%) 43 (84,3) 15 (71,4) 3 (60) 4 (100) 1 (100) 63 (75,9)
Количество курсов АИТ 107 40 12 5 3 170
Время наблюдения (интервал), 11,8 13,9 12,7 21,5 12 14,4
мес. (1-33) (4-37) (2-30) (6-28) (1-37)
