CC BY
37УДК 616.992:576.882.8
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ CANDIDA ALBICANS И LACTOBACILLUS PLANTARUM IN VITRO
Ермоленко Е.И., Ждан-Пушкина C.X., Суворов А.Н
НИИ Экспериментальной медицины РАМН, Россия
© Коллектив авторов, 2004
Изучено взаимодействие Candida albicans АТСС 885653 и Lactobacillus plantarum 8А-РЗ с использованием различных условий культивирования в жидких и агаризован-ных питательных средах. Доказано, что антагонистическая активность лактобацилл зависит от характера среды и условий роста. Наибольишя антагонистическая активность лактобацилл проявлялась в жидкой среде и в двухслойном агаре. Методом совместного культивирования в двухслойном агаре удается количественно охарактеризовать степень антагонистической активности лактобацилл в отношении грибов. На поверхности трип-тозного агара лактобациллы и грибы могут образовывать смешанный газон, в составе которого L. plantarum не проявляют фунгицидную активность и их рост ингибируется Candida sp.
Ключевые слова: антагонизм, кандидоз, пробиотик, Candida albicans, in vitro, Lactobacillus plantarum
IN VITRO INTERACTION BETWEEN CANDIDA ALBICANS AND LACTOBACILLUS PLANTARUM
Ermolenko E.I., Ghdan-Pushkina S.C., Suvorov A.N.
Institute of Experimental Medicine RAMS, St. Petersburg, Russia
© Collective of authors, 2004
Interaction between Candida albicans ATCC 885-653 and Lactobacillus plantarum 8A-P3 was studied employing different liquid and solid media. It is proved that antagonistic activity of lactobacilli depends from the nutrient media and growth conditions. Antagonistic activity was maximum in case of joint cultivation of C. albicans with L. plantarum on liquid media and in double layer agar. The method of joint cultivation in double agar permits to characterize antagonistic activity of lactobacilli quantitatively. It was shown that on the surface of tryptic agar lactobacillus and fungi can form the mixed lawn. In this case antagonistic activity of bacteria was poorly expressed;
C. albicans grown on the surface of the agar noticeably inhibited the growth of lactobacilli.
Key words: antagonism, Candida albicans, candidosis, in vitro, Lactobacillus plantarum, probiotic
ВВЕДЕНИЕ
В организме человека Candida spp. и лактобациллы участвуют в формировании естественного микробоценоза. Особый интерес представляет ситуация, когда эти микроорганизмы оказываются в одной экологической нише при использовании пробиотиков для профилактики и лечения дисбиозов, а также инфекционных заболеваний. Целесообразность применения препаратов, содержащих живые Lactobacillus spp., для лечения кандидозного кольпита подтверждена результатами многочисленных клинических наблюдений и лабораторных исследований микробоценозов влагалища [1-5], а также исследований, проведенных на биологических моделях [6,7] Однако лактобациллы, использованные в лечебных целях, не всегда могут противодействовать чрезмерному росту Candida, а в ряде случаев сами провоцируют возникновение кандидоза [8-11]. Изучение взаимодействия лактобацилл и Candida spp. in vitro проводили при культивировании их в жидкой среде [11,12] или на плотных питательных средах для выявления отсроченного антагонизма методами перпендикулярных штрихов [13] или двухслойного агара [14-16]. Влияния Candida spp. на рост Lactobacillus spp. не обнаружено. В тоже время показано, что лактобациллы способны подавлять адгезию Candida albicans к эпителию слизистых оболочек человека [9,17], препятствовать образованию ростовых трубок [18] и блокировать размножение грибов. Антагонистическая активность лактобацилл по отношению к грибам обусловлена их способностью выделять в окружающую среду органические кислоты [15], пери-оксид водорода [14], бактериоцины [15] и бактерио-циноподобные вещества. [16]. Однако, наряду с фун-гистатическим [15,16] или фунгицидным эффектами [19], оказываемыми Lactobacillus spp., в ряде исследований отмечено их полное отсутствие [12,19] или, даже, возможность стимуляции роста грибов [11]. Остается не ясным, связаны ли полученные противоречивые результаты с особенностями штаммов лактобацилл и грибов, или они обусловлены различиями в условиях проведения экспериментов.
В настоящее время механизмы избыточной колонизации грибами слизистых оболочек человека окончательно не расшифрованы, недостаточно изучено их влияние на других представителей нормальной микробиоты, не создано экспериментальной модели, которая бы адекватно отражала особенности взаимодействия грибов и лактобацилл in vivo.
Целью настоящего исследования было изучение взаимодействия лактобацилл и Candida spp. при различных условиях культивирования.
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектами исследования служили штаммы Lactobacillus plantarum 8А — РЗ («Аактобактерин» НПО «БИОМЕД», Россия) и Candida albicans АТСС 885653.
Для изучения отсроченного антагонизма использовали два методических подхода: посев микробов перпендикулярными штрихами и методом двухслойного агара. Кроме того, взаимодействие С. albicans и L. plantarum исследовали, культивируя их раздельно и совместно на поверхности триптозного агара и в жидкой среде.
Метод перпендикулярных штриховых посевов
Для выяснения степени антагонистической активности лактобацилл на грибы бактерии засевали штрихом по середине чашки Петри с модифицированной средой Рогозы МРС5 (ИВС, Россия) или триптозным агаром (<<FERAI<», Германия). Культуру лактобацилл 5, 6108 КОЕ/мл (КОЕ: количество колониеобразующих единиц) наносили петлей (диаметром 3,5мм). После 24, 48 и 96 часов инкубации на эти же среды засевали грибы (5,5 106 КОЕ/мл) специальной мерной петлей (диаметр — 1,75 мм) перпендикулярно зоне роста антагониста, не касаясь ее. Наличие зон задержки роста грибов и их размеры определяли через 24-72 часа инкубации.
Действие грибов на рост лактобацилл исследовали аналогично, используя обратную схему постановки опыта, засевая С. albicans в количестве 7,8-108 КОЕ/мл по середине чашки со средами МРС5 или триптозным агаром. Затем через 24-96 часов инкубации грибов перпендикулярно их зонам роста наносили лактобациллы (5, 6106 КОЕ/мл).
Метод двухслойного агара. ZXA
Минимальное ингибирующее количество (МИК) лактобацилл, препятствующих размножению грибов, определяли, используя двухслойный агар. В нижний слой, которым служил триптозный агар или среда МРС5, помещали различные количества бактерий (от 10 доЮ8 КОЕ /мл). Верхний слой агара был образован средой Сабуро (Difco, USA), на которую спустя 2, 24 ,48 и 72 часа засевали 10 мкл суспензии С. albicans (106 КОЕ/мл). Через 24-48 часов инкубации проб учитывали наличие роста грибов. Если роста не наблюдали, материал с поверхности этих чашек переносили методом реплик на среду Сабуро, не содержащую лакто бацилл. В случае, если грибы сохраняли свою жизнеспособность и вырастали на среде Сабуро, эффект совместного культивирования с бактериями расценивали как фунгистатический. Если при посеве грибов методом реплик грибы не вырастали, эффект считали фунгицидным.
Влияние грибов на рост лактобацилл оценивали, используя обратную схему постановки опыта, внося их в нижний слой агара (среду Сабуро или триптозный агар) в количестве от 10 до 5,510 8КОЕ /мл. Куль-
туру L. plantarum (10 мкл суспензии, 8,010 6 КОЕ /мл) помещали на поверхность верхнего слоя через 2-72 часа. Учет результатов проводили через 48 часов.
Контролем роста культур служили чашки с двухслойным агаром, не содержащие бактерий или грибов в нижнем слое.
Совместное культивирование в жидкой модифицированной среде Рогозы MPG1
Исследуя взаимодействие в жидкой среде, во флаконы объемом 50 мл с 15 мл среды МРС1 вносили 0,5 мл лактобацилл (от 3,5-102 до 3,5- 107 КОЕ /мл), затем сразу же или спустя 24 часа — 1 мл С. albicans (5,6-106 КОЕ /мл). Контролем роста служили пробы, в которые помещали грибы и лактобациллы отдельно. Количественные высевы из флакона производили сразу после внесения культур, через 24 и 48 часов инкубации на среды Сабуро и МРС5 с 10 мкг/мл амфотери-цина В (Синтез комбинат, Россия) для подсчета КОЕ Candida sp. и Lactobacillus sp., соответственно.
Совместное культивирование на поверхности триптозного агара.
Для получения газона бактерии (8,7 или 4,7 lg КОЕ/мл) и грибы (6,5 lg КОЕ/мл) в виде монокультур и смеси из двух культур высевали на чашки Петри с триптозным агаром и инкубировали в течение 72 часов. Каждые 24 часа осуществляли количественный высев смывов с поверхности триптозного агара на среды Сабуро и МРС5 с амфотерицином В (10 мкг/ мл). Контролем служили пробы, содержащие только лактобациллы или грибы.
Все эксперименты проводили, инкубируя микробы при температуре 37 °С. Для засева использовали культуры в ранней стационарной фазе роста. Хранение культур осуществляли при температуре 70 °С в среде МРС1 или Сабуро.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Изучение взаимодействия лактобацилл и С. albicans методом перпендикулярных штриховых посевов
Методом перпендикулярных штриховых посевов установлено, что L. plantarum 8А-РЗ после предварительной инкубации культуры в течение 72-96 часов на среде МРС5 вызывает образование зоны задержки роста С. albicans размером 10±0,7 мм. На трип-тозном агаре и при подсеве грибов на среду МРС5 в более ранние сроки этот эффект не воспроизводился (зона задержки роста отсутствовала). В данных условиях эксперимента лакто бациллы оказывали на С. albicans только фунгистатическое действие. Зона задержки роста была видна после выращивания грибов до 24 часов, затем грибы захватывали всю часть агара, на которую они были нанесены, и даже разрастались за ее пределами. Вне зависимости от условий эксперимента угнетения роста лактобацилл, засеянных перпендикулярно грибам, не наблюдали.
Изучение взаимодействия лактобацилл и С. albicans методом двухслойного агара
Несколько иная картина обнаружена при исследовании взаимодействия лактобацилл и грибов при использовании двухслойного агара. Культивирование лакто бацилл в толще плотной питательной среды позволило выявить их ингибирующий эффект в значительно более ранние сроки. Наряду с фунгиста-тическим обнаружен фунгицидный аффект, причем не только при выращивании лактобацилл на среде МРС5, но и на триптозном агаре. Как и в предыдущей серии экспериментов, антагонистическая активность L. plantarum при подсевах грибов в более поздние сроки их инкубации возрастала. Это проявлялось в уменьшении значений МИК лакто бацилл, оказывающих фунгицидный эффект.
Таблица 1.
МИК клеток Lactobacillus plantarum, оказывающих фунгицидный и фунгистатический эффекты при различных условиях культивирования на двухслойном агаре
Особенности эксперимента (нижний слой) МИК лактобацилл в зависимости от продолжительности их инкубации до засева грибов (1д КОЕ/мл)
2 час 24 час 48 час 72 час
Триптозный агар 8,61* (7,61 Г 5,61 (3,61) 2,61 (1,61) 1,61 (0,61)
Среда МРС5 6,61 (5,61) 3,61 (2,61) 1,61 (0,61) 0,61
*- значения МИК с фунгицидным эффектом **- в скобках приведены значения МИК с фунгистати-ческим эффектом
Как показано в таблице 1, по мере увеличения времени предварительной инкубации лактобацилл (от 2 до 96 час) до подсева грибов значения МИК уменьшались (от 6, 6 до 2,6 lg КОЕ /мл). Следует отметить, что при культивировании лактобацилл в триптозном агаре МИК были в 10-100 раз выше по сравнению с аналогичными показателями лактобацилл, выращенных в МРС5 среде. Проявление фунгистатического эффекта лактобацилл имело место при более низких концентрациях — в 10-100 раз меньших, чем показатели МИК с фунгицидным эффектом. Candida spp. при культивировании их в нижнем слое триптозного агара или плотной среды Сабуро, вне зависимости от времени предварительной инкубации до подсева лактобацилл, не оказывали ни стимулирующего, ни игибирующего действия на рост последних на среде МРС5 и триптозном агаре.
Совместный рост лактобацилл и грибов в жидкой питательной среде МРС1
Еще в большей степени проявлялась антагонистическая активность лактобацилл при совместном культивирования с грибами на жидкой среде МРС1. В серии экспериментов установлено, что культура!. plantarum (2,5 —7,5 lg КОЕ/мл), добавленная в жидкую среду одномоментно с грибами (6, 7 lg КОЕ/мл), существенно влияла на рост последних в первые 24
часа инкубации. Этот эффект оказался дозозависимым.
2 а о
s
с
□ Lactobacillus plantarum 8А-РЗ
□ Candida albicans 885-653
Рис. 1. Влияние посевной дозы Lactobacillus plantarum на количество жизнеспособных Candida albicans через 24 часа их совместного роста в среде МРС1
На рисунке 1 представлены результаты серии опытов совместного культивирования Candida albicans и L. plantarum в жидкой среде МРС1. Количество грибов, вносимых в пробы, было постоянным. Посевную дозу лактобацилл изменяли.
Верхний ряд столбиков в клетку отражает количество грибов (lg КОЕ/мл ) после 24 часов инкубации с различными количествами лактобацилл в МРС1 среде.
Нижний ряд столбиков отражает количество Lactobacillus sp. (2-7 lg 107 КОЕ/мл), добавленных в среду МРС1 вначале инкубации вместе с С. albicans (5,6-106 lg КОЕ/мл).
Первый верхний столбик слева (контроль) отражает количество жизнеспособных грибов в lg КОЕ/ мл после их инкубации в течение 24 часов без лактобацилл.
Как показано на Рис.1, чем большее количество лактобацилл было помещено в питательную среду, тем меньшее количество Candida albicans сохраняло свою жизнеспособность через 24 часа совместного культивирования. В тех случаях, когда грибы вносили в среду МРС1 не одномоментно с лактобациллами, а спустя 24 часа инкубации последних или спустя 48 часов совместного культивирования, во всех вариантах количественных соотношений грибов и бактерий жизнеспособных С. albicans обнаружить не удавалось. Следует отметить, что культивируя грибы с L. plantarum в жидкой среде, так же как и при использовании методов отсроченного антагонизма, не удалось выявить существенных изменений в скорости роста и жизнеспособности лактобацилл в присутствии грибов рода Candida и без них.
Рост лактобацилл и грибов на поверхности однослойного триптозного агара
Наиболее интересные результаты при изучении взаимодействия лактобацилл и грибов получены при их культивировании на поверхности триптозного агара. Показано, что монокультуры L. plantarum и С. albicans (засеянные в количестве 8,7 и 6,5 lgKOE/
8 а в Б Б
4
; —
2 ■ 4
6
мл, соответственно) образовывали газон спустя 24 часа. В пробах со смесью микробов сначала появлялся тонкий бесцветный газон из лактобацилл, позже (через 48 часов) от периферии к центру разрастался слой, сформированный грибами, легко различимый по белой пигментации. Количественным анализом смывов с поверхности среды оценена динамика роста исследуемых популяций микробов. Показано, что в течение 48 часов инкубации вместе с лактобациллами в смешанном газоне, так же как и в контрольных пробах, при формировании газона культурой С. albicans, количество высеваемых грибов увеличивалось (до 8,0 lg KQE/мл). Однако через 72 часа количество Candida sp., инкубирующихся вместе с Lactobacillus sp„ снижалось более чем в 10 раз, в то время как в случае монокультуры величина КОЁ/мл грибов более не изменялась. Снижение количества жизнеспособных С. albicans при росте на поверхности агара с лактобациллами по сравнению с контрольной культурой было статистически достоверным (р< 0,1). В то же время количество L. plantarum в ходе инкубации возрастало (до 9 lg КОЕ/мл) вне зависимости от присутствия грибов.
Ситуация принципиально изменялась при использовании меньшей посевной дозы лактобацилл (4,7 lg КОЕ/мл). В данном случае (Рис. 2), на протяжении всего периода наблюдений, количество жизнеспособных бактерий, растущих вместе с грибами, увеличивалось значительно медленнее (р<0,05) по сравнению с монокультурой.
0 час. 24 час. 48 час. 72 час.
□ L. plantarum-К QL. plantarum-0 ПС. albicans-K ПС. albicans-O
Рис. 2. Рост Lactobacillus plantarum 8А-РЗ и Candida albicans АТСС 885-653 на триптозном агаре
На рисунке приведены результаты определения числа жизнеспособных лактобацилл и грибов, растущих вместе и отдельно на поверхности триптозного агара. Количественный высев смывов с поверхности плотной среды производили на среды МРС5 и Сабу-ро 1 раз в сутки (0, 24, 48, 72 час).
Обозначения после латинских названий микробов: О. - опыт, К.- контроль
Особенно ярко отмеченная тенденция проявилась при сопоставлении количеств жизнеспособных лактобацилл в смывах с поверхности среды через 72 часа роста. Рассматриваемый показатель был в 1000 раз меньше у бактерий, растущих вместе с грибами, по сравнению с монокультурой (6,3 и 9,4 lg КОЕ/мл, соответственно). В данных условиях эксперимента
статистически достоверного влияния лактобацилл на рост грибов обнаружено не было (р> 1,0).
Обсуждение
В настоящей работе исследовано взаимное влияние двух видов микрорганизмов: Candida albicans (штамм АТСС 885-653) и£.plantarum (штамм 8А-РЗ), выделенного из отечественного пробиотика «лакто-бактерин», активно использующегося в России для лечения и профилактики инфекционных заболеваний и дисбиозов. Изучение взаимодействия штаммов Lactobacillus spp. и грибов рода Candida проводили и ранее, при их культивировании на различных жидких или плотных питательных средах (молочных, томатных, казеиново-дрожжевых триптозно-соевых, МРС). При атом были использованы различные варианты методов прямого и отсроченного антагонизма. Большинство из Этих методических подходов являются общепринятыми и описаны в литературе [11,12,15,16,19]. В отличие от прежних исследований, в данной работе, наряду с традиционными методами изучения микробного взаимодействия, было проведено культивирование грибов и лактобацилл на поверхности плотной среды в составе смешанного газона. Предложенная модель изучения взаимного влияния грибов и лактобацилл, по нашему мнению, наиболее адекватно отражает взаимодействие этих микробов в организме хозяина, так как приближается по своим характеристикам к биопленкам.
Известно, что Candida spp. и Lactobacillus spp. в составе микробоценозов влагалища, ротовой полости, кишок и верхних дыхательных путей, прикрепляясь к рецепторному аппарату эпителия, формируют пристеночную микро биоту [4, 9]. В этом случае микроорганизмы находятся в тесном контакте, конкурируя за сайты прикрепления, питательные вещества, воздействуя друг на друга естественными метаболитами и сигнальными молекулами [4, 20]. Таким образом, формируя газон, микробы находятся в условиях максимально приближенных к тем, которые имеют место in vivo в процессе образования биопленок на поверхности эпителия хозяина [20].
Изучением взаимодействия одних и тех же штаммов лактобацилл и грибов рода Candida на разных моделях доказана четкая зависимость характера антагонистической активности L. plantarum от условий культивирования. Показано, что максимальное ингибирование роста грибов бактериями происходило в жидкой среде и при культивировании лактобацилл в нижнем слое двухслойного агара.
Используя методы отсроченного антагонизма, удалось продемонстрировать влияние состава питательной среды на проявление антагонистической активности. То, что лактобациллы, растущие на триптозном агаре в меньшей степени, чем на МРС5 среде, ингибируют рост грибов, еще раз подтверждает необходимость выбора стандартных условий для изучения микробного антагонизма в лабораториях условиях.
Во всех вариантах постановки экспериментов влияние L. plantarum на рост грибов зависело от их количества. Объяснение этому явлению можно дать с позиций современного толкования соотношения «количества-чувствительности» или «quorum-sensis» [21]. В соответствии с ним, для проявления микробом антагонистической активности необходимо определенное минимальное количество бактерий (это было показано еще А. Флемингом в 30-40-х гг. XX в.). Особенно отчетливо важность количественного соотношения микробов при их взаимодействии проявилась в наших экспериментах с использованием двухслойного агара. Именно количество L. plantarum определяло — какой будет эффект: фунгис-татический, фунгицидный или в данных условиях антагонистическое действие не проявится. Следует отметить, что с помощью предложенного метода количественной оценки антагонистической активности микробов, можно достаточно быстро и более точно, чем ранее, проводить контроль активности будущих и уже существующих пробиотиков в отношении грибов и других микроорганизмов. Это является важным с медицинской точки зрения, так как клетки Candida sp. обладают не одинаковой чувствительностью к Lactobacillus spp. [13]. Недавно показано [22], что среди лактобацилл, представителей нормальной микробиоты кишок, обнаружены штаммы, обладающие избирательным противогрибковым эффектом. Такие культуры Lacobacillus spp., рассматриваются авторами как потенциальные «антифун-гальные пробиотики».
Кроме того, показана важность момента внесения индикаторной культуры. Нельзя исключить, что при засеве ее одновременно с антагонистом, индикаторная культура сама стимулирует выработку последним бактериоцинов или других факторов, противодействующих ее дальнейшему росту. Такие примеры «микробного самоубийства» уже были выявлены ранее [21, 23].
С другой стороны, усиление проявлений антагонистической активности в процессе инкубации лактобацилл может быть связано со скоростью диффузии продуктов метаболизма, выделяющихся в окружающую среду. По-видимому, в жидкой среде эта скорость максимальна, а в плотной — находится в прямой зависимости от времени инкубации антагониста до засева индикаторной культуры. Возможно, существующие «глобальные» регуляторы экспрес-
сии генов обоих микроорганизмов функционируют по-разному в различных физиологических условиях культивирования, что и обусловливает отличия в характере взаимодействия на различных питательных средах.
Неожиданные результаты были получены при исследовании особенностей взаимодействия грибов и лактобацилл на поверхности плотной среды, при формировании смешанного газона. Как уже отмечалось, на поверхности триптозного агара культура С. albicans проявляла низкую чувствительность к антагонистическому действию лактобацилл, и при использовании метода штриховых посевов на этой среде не удавалось обнаружить даже фунгистатичес-кого эффекта. Слабо выраженный фунгистатический эффект лактобациллы оказывали, находясь в тесном контакте с грибами, только при их численном превосходстве по сравнению с количеством грибов, взятом в эксперимент.
Ранее была выявлена способность стафилококков, микрококков и стрептококков ингибировать рост лактобацилл [24]. В результате выполненных нами исследований показано, что грибы рода Candida, не проявлявшие влияния на рост L. plantarum в иных условиях постановки опыта, в составе смешанного газона, проявили бактериостатическую активность.
Обнаруженное взаимное негативное влияние грибов и лактобацилл в условиях in vitro, служит основой для предположения о том, что в организме человека лактобациллы и Candida spp. конкурируют за питательные вещества и места колонизации эпителия.
Выводы
1) Характер взаимодействия лактобацилл с грибами зависит от состава питательной среды, количественного соотношения микроорганизмов и первенства в захвате ареала обитания.
2) Разработан метод, с помощью которого можно количественно охарактеризовать степень антагонистической активности лактобацилл в отношении Candida sp.
3) На поверхности триптозного агара лактобациллы и грибы могут образовывать смешанный газон, в составе которого L. plantarum не проявляют фунгицидную активность и их рост ингибируется Candida sp.
ЛИТЕРАТУРА
1. McGroarty J.A. Probiotic use of Lactobacilli in the human urogenital tract //FEMS Immunol. Med. Microbial.- 1993.-Vol.36.-P.251-264.
2. Hilton E., IsenbergH.D., Alperstein P., et al. Ingestion of yogurt containing Lactobacillus acidophilus as prophylaxis for candidal vaginitis // Ann. of Intern. Med. — 1992.-Vol.116, №56.- P.353-355.
3. Jeavons H.S. Prevention and treatment of vulvovaginal cadidiasis using exogenous Lactobacillus II]. Obstet Gynecol. Neonatal Nurns.- 2003,- Vol. 32,№3,- P. 287-296.
4. Reid G., Bruce AW. Urogenital infections in women: can probiotics help?// Postgraduate Med.}.- 2003.-Vol.79, №934,- P.428-432.
5. Ермоленко Е.И.,Гефен Г.Е.,Дмитриева Е.Н. и др. Некоторые особенности микробиоценоза влагалища у практически здоровых женщин/ в сб. Клеточные сообщества.- СПб: СПбГМУ, 1998.- С.144-149.
6. Wagner R.D., Pierson С., Wagner Т., etal. Biotherapeutic effects of probiotic bacteria on candidosis in immunodeficient mice//
Infect. Immun.- 1997,- Vol. 65,№10,- P.4165-4172.
7. De Petrino S.E, De JorratB.B., Meson O., Perdigon G. Protective ability of certain lactic acid bacteria against an infection with
Candida albicans in a mouse immunosupression model by corticoid//Food Agric. Immunol. -1995.- Vol. 7.- P. 365-373.
8. Коршунов B.M., Кафарская, А.И., Володин H.H., Тарабрина Н.П. Коррекция дисбиотических нарушений вагинальной
микрофлоры с помощью препарата из высокоадгезивных лактобактерий //Журн.микробиол.-1990. — №7.-С.17-19.
9. Кубась В.Г.,Данилова О.П., Чайка Н.А.Кандидоз.- СПб.,1997.- 52 с.
10. Elmer G.W., Surawicz С.М., McFarland L.V. Biotherapeutic agents. A neglected modality for the treatment and prevention of selected intestinal and vaginal infections//JAMA.- 1996.-Vol.275,№11.- P.870-876.
11. Кашковская H.B., Шутова А.П.,Ворошилина H.H., Антонова А.В. Экспериментально-клиническое обоснование к применению бактерийных препаратов при геникологических воспалительных заболеваниях/ в сб. Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция.- 1988.- С.124-131.
12. Young G., Krasner R.I., Yudkofski P.L. Interaction of oral strains of Candida albicans and Lactobacilli!I J.Bacteriol.- 1956.-Vol.72,№36.- P.525-529.
13. Тюрин M.B., Шендеров Б.А., Рахимова Н.Г. и др. К механизму антагонистической активности лактобацилл//Журн. микробиол.-1989.- №2.-С.З-8.
14. Fitzssimmons N, BerryD.R. Inhibition of Candida albicans by Lactobacillu acidophilus: evidence for the involvement of a peroxidase system//Microbios. 1994.-Vol.34.- P.125-13.
15 .Lavermicocca P., Valerio E, EvidenteA., et al. Purification and characterization of novel antifungal copounds from the sourdough Lactobacillus plantarum strain 21 В// Appl. Environ. Microbial.- 2000 .-Vol.66, №9.-P. 4084-4090.
16. Okkers D.J., Dies L.M., Silvester М.,et al. Characterization of pentocin TV35b, bacteriocin-like peptide isolated from Lactobacillus pentosus with a fungistatic effect on Candida albicans 11J. Appl. Microbiol .-1999.- Vol.87,№5.- P.726-734.
17. Reid G., Tieszer C., Lam D. Influence of Lactobacilli on the adhesion of Staphylococcus aureus and Candida albicans to fibers and epithelial cells// J.Ind.Microbiol.-1995.- Vol.15, №3.- P.248-53.
18. Ayger P., Joly J. Factors influencing germ tube production in Candida albicansl/ Mycopathologia.- 1977.- Vol. 61, №3.- P.183-186.
19. Mardh P.A., SolteszL.V. In vitro interactions between lactobacilli and other microorganisms occurring in the vaginal flora // Scand. J. Infect. Dis. Suppl 1983,- Vol.40, №3,- P.47-51.
20. Characklis W.G., MarshallK.G. Biofilms: a basis for an interdisciplinary approach, p. 3-5 in Characklis W.G and Marshall 9-ed Biofilms J.Wiley & Sones.New York.- N.Y., 1990.
21. Risoen P. A., Brurberg M.V.B., Eijsink V.G, NesI.F. Functional analysis of promoters involved in quorum sensing-based regulation of bacteriocin production in Lactobacillus //Mol.Microbiol.- 2000.- Vol. 37.- P619-628.
22. Polishcuk O.I., Koltucova N.V., Cherniavka L.M., et al. The identification of freshly isolated strains, the causative agents of human candidiasis and the search for effective antifungal probiotics]//Miicrobiol Z.-1996.- Vol.l, №4.- P.45-53.
23. Maldsonado A., Ruiz-Barba J.L., Jimenez-Diaz R. Production of plantaricin NC8 by Lactobacillus plantarum NC8 is induced in the presence of different types of Gram- positive bacterin//Arch. Microbiol.- 2003.- Vol.l.- P.29-35.
24. Чахава O.B. Гнотобиология о микрофлоре организма хозяина и антибиотикотерапии.// Антибиотики и медицинская биотехнология .- 1987.-T.XXXII, №3.-1987.-С.170-179.
Поступила в редакцию журнала 15.04.2004 Рецензент: Н.П.Елинов
