CC BY
13
Литература
1975.—№ 4.
1. Глубин П. А. // Легкая индустрия.—
С. 1—4.
2. Кнаап А. и др. // Европейское о-во по мутагенам внешней среды: Ежегодная конф.: Тезисы докладов.— М., 1984.— С. 247.
3. Козеева Е. Е. Производство и экспериментальные исследования по гигиенической оценке А.: Автореф. дис. ... канд. мед. наук.— М., 1980.
4. Лощенкова И. Ф. // Физиология вегетативной нервной системы.—Куйбышев, 1979.—Т. I.—С. 321—322.
5. Новиков С. М. Вопросы гигиены труда и промышленной токсикологии в производстве и применении акриламида: Автореф. дис. ... канд. мед. наук.— М., 1974.
6. Новиков С. М., Новикова Е. Е. // Гигиена и токсикология высокомолекулярных соединений и химического сырья, используемого для их синтеза.— Л., 1979.— С. 277.
7. Новикова Е. Е. // Проблемы клинической и экспериментальной медицины.— М., 1974.— С. 352—353.
8. Останова И. Ф. Фармакокинетика, токсикология и фарма-кодинамика акриламида, метакриламида и диацетонакрил-амида: Автореф. дис. ... канд. мед. наук.— Ярославль, 1981.
9. Перова Н. М. Токсикологическое изучение полимеров ви-нилкапролактама и акриламида, предполагаемых к использованию в медицине, и их гигиеническая регламентация: Автореф. дис. ... канд. мед. наук.— М., 1977.
10. Румянцев Г. И. и др. // Гиг. и сан.— 1980.— № 9.— С. 38.
И. Dixit R. et al. // Biochem. Pharmacol.— 1982.—Vol. 30.— P. 1739—1744.
12. Edwards P. M. // Chem. biol. Interact.— 1976.—Vol. 12, N 1.— P. 13—18.
13. Hashiya N. et al. // Jap. J. publ. Hlth.— 1981.—Vol. 29.— P. 236—239.
14. Hopkins A. // J. Neurol. Neurosurg. Psychiat.— 1970.— Vol. -33, N 6.— P. 805—816.
15. IA-RC Monographs. Vol. 19: On the Evaluation of the Carcinogenic Risk of Chemical to Humans.— Lyon, 1979.—
16. Ishidata M. et al. // Cann. Monogr. Cancer Res.— 1981.— Vol. 27.— P. 95—108.
17. Kankaanpaa J. et al. // Toxicol. Lett.— 1979.— Vol. 4, N 2.— P. 93—96. .
18. Klimish H., Reininhaus W. // Toxicologist.— 1984.— Vol. 4.— P. 53.
19. Langwordt P. W. et al. // Toxicol, appl. Pharmacol.— 1979.— Vol. 48.— P. 161.
20. Lapin E. P. et al. // J. neurosci. Res.— 1984.— Vol. 11, N 4.— P. 395—404.
21. Lefaux R. Les matieres plastiques dans l'industrie alimentaire.— Paris, 1972.
22. Maurissen J. P. et al. // Toxicol, appl. Pharmacol.— 1983.—Vol. 71, N 2.— P. 266—279.
23. McCollister et al. // Ibid.— 1964.— Vol. 6,N 2.— P. 172— 180.
24. McMahon R. E. et al. // Cancer Res.— 1979.—Vol. 39.— P. 682—692.
25. Miller M. J. et al. // Toxicol, appl. Pharmacol.— 1982.— Vol. 63, N 1.— P. 36—44.
26. Raushan H. et al. 11 Industr. Hlth.— 1987.—Vol. 25,
N J _p jg_28
27. Shelby M. D. et al. // Mutât. Res.— 1986.—Vol. 73, N 1.— P. 35—40.
28. Shiraishi Y. // Ibid.— 1978.—Vol. 57, N 7.— P. 313—324.
29. Tilson H., Cabe P. // Toxicol, appl. Pharmacol.— 1979.— Vol. 47, N 2.— P. 253—260.
30. Waegemackers T. H., Bensink M. P. // Mutat. Res.— 1984.— Vol. 137.— P. 95—102.
31. Zenick H. et al. //J. Toxicol, environm. Hlth.— 1986.— Vol. 17, N 4.— P. 457—472.
Поступила 24.10.88
КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1990 УДК 616.I53.96-02:613.632:678.047.2j-07
Э. Л. Балабанова, Б. А. Курляндский, Н. П. Паринова
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ АКТИВНЫХ ХЛОРТРИАЗИНОВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ С БЕЛКАМИ
СЫВОРОТКИ КРОВИ
Московское научно-производственное объединение НИОПИК
Исследование способности хлортриазиновых красителей вступать в соединение с белками осуществляли путем изучения сорбционной активности красителей и их способности блокировать сульфгидрильные группы.
В опытах использованы образцы органических активных хлортриазиновых красителей: монохлор-триазиновый — активный красный СШ и дихлор-триазиновые — ярко-красный 5СХ и золотисто-желтый 2КХ.
Для получения интерпретируемых с биохимической точки зрения данных опыты in vitro проводили при инкубировании красителей в течение 4 ч при температуре 37 °С с хранившейся длительное время лиофилизированной сывороткой крупного рогатого скота, а также со свежей сывороткой крови (СК) беспородных белых крыс.
Контроль за связыванием красителей с белками СК осуществляли классическим методом равновесного диализа с последующим спектрофотомет-рическим определением свободного красителя в
надосадочной жидкости после осаждения белковых комплексов. Спектры красителей снимали при следующих длинах волн: 5СХ при 514—549 нм, 2КХ при 370—414 нм, СШ при 508—414 нм.
Выявление фракций белка, связывающихся с красителем, осуществляли гель-электрофорезом в полиакриламидном геле в трис-глициновом буфере
рН 8,3.
С целью оценки прочности связи красителя с белком проводили гидролиз окрашенного белкового осадка трипсином, гидролизующим лишь те связи, в образовании которых участвуют карбоксильные группы лизина или аргинина. Перед гидролизом осадок тщательно отмывали водой. Гидролиз осуществляли постадийно в течение 4 сут в условиях термостатирования при 37 °С и ежедневном добавлении к осадку белка свежих порций фермента. Сульфгидрильные группы белка определяли спектрофотометрически [2]. Исследования проводили в опытах in vitro, а также при однократном и повторном субхроническом введении
Таблица 1
Показатели связывания хлортриазииовых красителей с белками при инкубировании с СК крупного рогатого скота
Краситель Введено красителя, мкг/мл Краситель.в СК через 4 ч, мкг/мл Содержание свободного красителя Краситель, связанный с белком СК Соотношение свободного и связанного
мкг/мл /о мкг/мл О/ /О красителя
5СХ
2КХ
СШ
50 44,154-0,9 8,74-0,2 19,7 30,34=0,9 68,6 3,48
150 135,54=2,3 694= 1,9 50,9 53,44-1,9 39,4 0,77
300 261,3=Ь 3,15 156,84-2,6 61,0 70,04=2,4 26,8 0,44
50 43,04= 1,1 7,04=0,15 16,2 30,0±0,85 69,8 4,28
150 127,14-1,9 36±1,2 28,3 71,7=fc 1,3 56,4 1,99
300 256,54-2,9 964-2,0 37,4 123,34-2,9 48,1 1,28
50 46,14-1,05 7,84=0,2 16,9 37,7=Ь 1,3 81,8 4,83
150 129,04-2,45 28,764-0,9 22,3 82,24=2,3 63,7 2,85
300 252,854-3,1 66,85± 1,3 26,5 14524-3,5 57,6 2,17
Таблица 2
Связывание дихлортриазинового красителя 5СХ с белками в опытах in vitro при инкубировании с СК белых крыс
Введено красителя мкг/мл
Краситель СК через 4 ч, мкг/мл
Содержание свободного красителя Краситель, связанный с белками СК
мкг /о мкг /о
Соотношение сво бодного и связан ного красителя
50 48,9=1=1,2 3,74=0,2 7.5 » 45,2: ¿=1,1 90,4 12,2
100 • 97,74-1,9 7,54=0,9 7,5 90,2= tl,7 90,2 12,0
150 145,24=3,1 10,54=1,0 7,0 134,7: ±=3,0 89,8 12,8
200 196,64-4,0 15,04-0,9 7,5 181,6: i=2,3 90,8 12,1
250 242,84=2,7 18,04=1,1 7,2 217,7: 4=5,4 87,0 12,1
300 294,54-5,6 22,5-И, 11 7,5 272,9- 4=4,9 90,7 12,1
красителей беспородным белым крысам внутри-желудочно и интраперитонеально в дозах, близких к среднесмертельным.
Исследование способности трех хлортриазииовых красителей связываться с белками при инкубировании с сывороткой крови крупного рогатого скота в опытах in vitro показало, что в результате 4-часовой инкубации в сыворотке суммарно определяется 85—88 % от введенного количества красителя, Большая часть красителей связывается с белками, меньшая остается в свободном состоянии. При увеличении количества вводимых красителей процент связывания их с белками снижается, содержание свободного красителя увеличивается, что свидетельствует о насыщении свободных связей транспортных белков (табл. 1).
Приведенные в табл. 1 данные позволяют также заключить, что монохлортриазиновый краситель СШ обладает большей по сравнению с 5СХ и 2КХ способностью связываться с сывороточными белками. Степень связывания зависит как от структуры красителя, так и от вводимой дозы (см. рисунок), причем для каждого из красителей соотношение между этими характеристиками различно.
Исследование способности красителей связываться с белками полученной ex tempore СК белых беспородных крыс при добавлении дихлортриазинового красителя 5СХ показало, что он активно связывается с белками, причем процент связывания красителя с белками СК крысы выше, чем с белками СК крупного рогатого скота (табл. 2).
С целью изучения прочности связывания красителя с белком отмытый от свободного красителя
осадок гидролизовали 1 н. №ОН. Исследование показало, что при полном гидролизе окрашенного белка краситель не разрушается, а лишь переходит в оксиформу. Постадийный гидролиз белка трипсином также позволил установить, что происходящее к 4-му дню практически полное разрушение белка не приводит к разрушению красителя, причем темп высвобождения красителя постоянен и не зависит от концентрации.
В субхроническом эксперименте, проведенном при внутрижелудочном введении на 4 группах белых беспородных крыс массой 200—270 г, было установлено, что все 3 красителя вызывают существенное снижение содержания белка в СК:
ЗОО
Z50
zoo
7SO
юо
so
Зависимость содержания свободных красителей в СК (в мкг/мл) от введенной дозы
(в мкг/мл).
1 — СШ; 2 — 2КХ; 3 — 5СХ.
j_L
J_L
10 ЗО SO
70
Таблица 3
Показатели связывания красителей с белками СК белых крыс
при введении в брюшину
Краситель ld50. г/кг Связано с белками СК, % Свободный краситель, %
всего с альбуминами с эугло-булином
• 5сх 0,54 54,6 98,3 1,7 41,4
2кх 0,90 79,2 76,8 32,6 20,8
сш 1,200 97,8 20,1 79,9 3,0
контроль — 7,36±0,11 Г%, 5СХ — 5,94+0,18 г%, 2КХ — 5,42±0,07 г%, СШ — 5,13±0,34 г%. При этом пределы колебаний концентрации красителя в крови экспериментальных животных были незначительны: 0,987—2,87 мг/мл.
Изучение белкового спектра СК высоковольтным гель-электрофорезом и электрофорезом на ацетатных пленках выявило способность всех 3 красителей к сорбции на альбумине. При введении красителей в дозах, близких к среднесмертельным,
в исследуемом ряду повышается связывание их с грубодисперсными эуглобулинами: 5СХ<2КХ<
<СШ. В опытах in vivo, как и in vitro, красители проявляют высокую способность связываться с белками СК (табл. 3).
Установлено, что способность красителей связываться с белками СК находится в обратной зависимости от LD50 и описывается уравнением регрессии: Y=—4,66.10-! + 1,72.10-2х, r=99 %. В свою очередь степень связывания с альбуминами пропорциональна величинам среднесмертельных доз. Эта зависимость определяется уравнением регрессии: У= 1,39—7,83 • 10~3лг, г= 96 %. Указанные соотношения позволяют характеризовать токсичность красителей.
Исходя из роли сульфгидрильных групп в образовании ковалентной связи с ксенобиотиками [1], мы изучили содержание общих и белковых сульфгидрильных групп в СК экспериментальных животных, затравленных внутрижелудочно хлор-триазиновыми красителями в дозе 75 LD50, и безбелковых сульфгидрильных групп (табл. 4). Что касается белковых сульфгидрильных групп, то их
Таблица 4
Содержание сульфгидрильных групп в СК животных, затравленных внутрижелудочно красителями
Краситель, доза Содержание сульфгидрильных групп, ммоль/л
общих белковых безбелковых
5СХ, 1/5 LD50 0,56±0,76* 0,23±0,1 * 0,37±0,056
2КХ, 1/5 LDso 0,83+0,05* 0,19±0,1* 0,64±0,094*
СШ, 1/5 LDso 0,41 ±0,067* 0,02±0,1* 0,09±0,065
Контроль 1,1 ±0,059 0,8±0,015 0,3±0,044
* рС0,05.
содержание не только было сниженным, но и продемонстрировало зависимость от способности красителей связываться с белками {г—93 %).
В заключение следует сказать, что активные хлортриазиновые красители обладают способностью с высокой прочностью адсорбироваться на белке. Можно предположить, что это связано с числом активных групп в молекуле каждого из красителей, которых больше у монохлортриазино-вого СШ и меньше у дихлортриазиновых 5СХ и 2КХ.
Выводы. 1. Активные хлортриазиновые красители в опытах in vivo и in vitro с высокой прочностью адсорбируются на белках сыворотки крови.
2. Токсические свойства указанных красителей коррелируют с их сорбцией на альбуминах и способностью связываться с белковыми сульфгид-рильными группами.
Литература
1. Иванов В. Б. Активные красители в биологии.— М., 1982.— С. 100.
2. Фоломеев В. Ф. // Лаб. дело.— 1981.— № 1.— С. 33.
Поступила 17.10.88
Summary. The study was undertaken to analyze the capacity of organic active chlorotriazine pigments to make contact with blood serum proteins. It was established that pigment toxicity was inversely correlated to the capacity of making contact with blood serum proteins (r=99 %) and directly correlated to the capacity of making contact with albumin (r=96 %).
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1990 УДК 614.31:6351:614.73-07
В. К. Кузнецов, Б. И. Шуховцев, Н. И. Санжарова, Р. М. Алексахин
РАДИАЦИОННО-ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ОВОЩНОЙ ПРОДУКЦИИ И КАРТОФЕЛЯ, ВОЗДЕЛЫВАЕМЫХ ПРИ ОРОШЕНИИ ВОДАМИ, СОДЕРЖАЩИМИ ИСКУССТВЕННЫЕ
РАДИОНУКЛИДЫ
Интенсивное развитие ядерной энергетики ведет к увеличению количества вод, прошедших различные этапы ядерного топливного цикла и вследствие этого оказавшихся обогащенными естественными
и искусственными радионуклидами. Малоактив-. ные жидкие отходы могут поступать в открытую гидрографическую сеть, воды которой применяются для технологического водоснабжения, рыбораз-
