CC BY-ND
17
ЦШШ №12 (261) ЗНиСО
41
г-Ь
держания циркуляции вируса среди переносчиков. Другой механизм появления гетерогенности в 3' нетранслируемой области генома вируса КЭ может объяснятся процессами приспособления вируса к новому хозяину. Известно, что вирус КЭ циркулирует в природе посредством циклической передачи от клеща к мелким млекопитающим и возвращением в клещей, где вирус сохраняется и размножается длительное время. Стадия выживания вируса в клетках млекопитающих является необходимой, но несущественной по времени [10, 11]. Удаленный в клетках млекопитающих фрагмент вирусного генома не может вновь появиться в клетках клеща в чередующихся циклах передачи вируса от клеща к млекопитающим и вновь к клещам. Этот факт может означать, что удаление фрагмента 3' нетранслируемеого участка генома не является количественным, поэтому часть вирусной популяции в клетках млекопитающих имеет полноразмерный 3' нетранслируемый участок.
ЛИТЕРАТУРА
Онищенко Г.Г. Клещевой и другие вирусные энцефалиты //Материалы конференции Эпидемиологическая обстановка и стратегия борьбы с клещевым энцефалитом на современном этапе. М., 2003. С. 5—8 Онищенко Г.Г. и др. Организация надзора за клещевым вирусным энцефалитом и меры по его профилактике в Российской Федерации / Г.Г. Онищенко, Ю.М. Федоров, Н.Д. Пакскина //Вопросы вирусологии. 2007. 5. С. 8—10. Беликов С.И. и др. Кодирующие нуклеотидные последовательности штаммов вируса клещевого энцефалита, изолированных из крови людей без клинических проявлений
1.
инфекции / С.И. Беликов, Г.Н. Леонова, И.Г. Кондратов, Е.В. Романова, Е.В. Павленко Генетика. 2010. 46 (№ 3). С. 356—363.
4. Belikov S.I., Kondratov I.G., Potapova U.V., Leonova G.N. The relationship between the structure of the tick-borne encephalitis virus strains and their pathogenic properties. PLoS One 2014. 9 (4): e94946. doi:10.1371/journal.pone.0094946
5. Татаринова Л.Г. Характеристика очагов клещевого энцефалита в Приморском крае /Автореф. дис. ... канд. мед. наук. Л., 1962.
6. MillerS., Kastner S., Krijnse-Locker J. et al. The nonstructural protein 4A of dengue virus is an integral membrane protein inducing membrane alterations in a 2K-regulated manner. The Journal of Biological Chemistry. 2007. 282 (12): 8873-8882
7. Umareddy I., Chao A., Sampath A., Gu F., Vasudevan S.G. Dengue virus NS4B interacts with NS3 and dissociates it from single-stranded RNA. Journal of General Virology. 2006. 87 (9): 2605-2614.
8. Wallner G., Mandl C.W., Kunz C., Heinz F.X. The flavivirus 3 -noncoding region: extensive size heterogeneity independent of evolutionary relationships among strains of tick-borne encephalitis virus. Virology. 1995. 213 (1): 169-178
9. KhasnatinovM.A., Katarina Ustanikova, Frolova T.V., Pogodina V.V., Bochkova N.G., Levina L.S. et al. Non-Hemagglutinating Flaviviruses: Molecular Mechanisms for the Emergence of New Strains via Adaptation to European Ticks. PLoS ONE 2009. 4(10): e7295. doi:10.1371/journal.pone.0007295
10. Nuttall P.A., Dynamics of infection in tick vectors and at the tick-host interface. Advances in Virus Research. 2003. 60: 233-272.
11. Robertson S.J., Mitzel D.N., Taylor R.T., Best S.M., Bloom M.E. Tick-borne flaviviruses: dissecting host immune responses and virus countermeasures. Immunologic Research. 2009. 43 (1-3): 17
Контактная информация: Contact information:
Кондратов Илья Геннадьевич, Kondratov Ilya, тел.: 8 (3952) 51-18-74, е-mail: igkondratov@rambler.ru
V-
phone: 8 (3952) 51-18-74, e-mail: igkondratov@rambler.ru
УДК 579.61: 616.993-002.942.1
ВЫЯВЛЕНИЕ ПАТОГЕННЫХ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА МИКРООРГАНИЗМОВ В КЛЕЩАХ, ОТЛОВЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ В СЕЗОН 2014 ГОДА
О.Р. Князева, А.Г. Красько
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии
и микробиологии, г. Минск, Республика Беларусь
Материалы серии статей доложены на научной конференции с международным участием «Актуальные аспекты природной очаговости болезней» (г. Омск, 12—13 ноября 2014 г.), организованной при частичной поддержке гранта РФФИ № 14-04-20351
Изучено присутствие в клещах, снятых с людей в различных регионах Республики Беларусь в сезон 2014 г., наиболее актуальных патогенов, таких как Borrelia burgdorferi sensu lato, вирус клещевого энцефалита, Anaplasma phagocytophylum, Ehrlichia chaffeensis/ Ehrlichia muris. В результате исследований выявлены ДНК Borrelia burgdorferi sensu lato (37,33 % случаев), Anaplasma phagocytophylum(4%), РНК вируса клещевого энцефалита(11,33 %). ДНК Ehrlichia chaffeensis/Ehrlichia muris в исследуемых образцах не выявлена.
Ключевые слова: Borrelia burgdorferi sensu lato, вирус клещевого энцефалита, Anaplasma phagocytophylum, Ehrlichia chaffeensis/Ehrlichia muris, ПЦР.
O.R. Kniazeva, A.G. Krasko □ INVESTIGATION OF TICK-BORNE PATHOGENS IN TICKS REMOVED FROM PATIENTS IN BELARUS □ Republican Research and Practical Center for Epidemiology and Microbiology, Minsk, Belarus.
To investigate the presence ofpathogens Borrelia burgdorferi sensu lato, Tick-borne encephalitis virus, Anaplasma phagocytophylum, Ehrlichia chaffeensis/Ehrlichia muris, in ticks removed from patients in Belarus. The studies revealed the presence of DNA Borrelia burgdorferi sensu lato (37,33 %), Anaplasma phagocytophylum (4%) and RNA of the tick-borne encephalitis virus (11,33 %). DNA of Ehrlichia chaffeensis /Ehrlichia muris in the samples was not detected.
Key words: tick borne pathogens, Borrelia burgdorferi sensu lato, Tick-borne encephalitis virus, Anaplasma phagocytophylum, Ehrlichia chaffeensis/Ehrlichia muris, PCR.
Клещи являются основными переносчиками инфекционных заболеваний человека и животных в природных условиях Беларуси и способны передавать больше патогенов, чем любые другие членистоногие (болезнь Лайма, клещевой эн-
цефалит, анаплазмоз, риккетсиозы, туляремия, Ку-лихорадка и др.) [1]. Циркуляция патогенных микроорганизмов поддерживается, как правило, в стабильных природных циклах, связанных с клещами, дикими животными и/или домашними
42
ЗНиСО pm №12 (261)
животными, в то время как люди являются случайными хозяевами. В 2013 г. в учреждения здравоохранения страны с жалобами на присасывание иксодовых клещей обратилось более 54 тысячи пациентов. Природно-очаговые трансмиссивные клещевые инфекции, такие как болезнь Лайма, клещевой энцефалит и др., представляют серьезную проблему для здравоохранения Республики Беларусь. В последнее десятилетие заболеваемость этими инфекциями неуклонно растет. Наличие смешанных природных очагов КЭ, ЛБ, риккет-сиоза и анаплазмоза увеличивает риск заражения людей одновременно несколькими патогенами, усложняет их диагностику и профилактику и требует комплексного подхода [2, 3].
Цель исследования: изучить присутствие в клещах, снятых с людей в различных регионах Республики Беларусь, наиболее актуальных патогенов, таких как Borrelia burgdorferisensu lato, вирус клещевого энцефалита, Anaplasma phagocytophylum, Ehrlichia chaffeensis/Ehrlichia muris.
Материалы и методы. С использованием метода ПЦР в реальном времени исследовано 300 клещей Ixodes ricinus, снятых с пациентов в период с мая по июль 2014 г. Определение видовой принадлежности клещей велось по таблицам Померанцева и Филипповой.
Выделение ДНК и ПЦР-амплификации. Клеща промывали в 70 %-м спирте, затем в стерильном фосфатно -солевом буфере, высушивали стерильной фильтровальной бумагой для того, чтобы избежать загрязнения. Клещей гомогенизировали в 150 мкл фосфатно-солевого буфера. Выделение ДНК-РНК проводили с помощью комплекта реагентов Рибо-преп (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия) в соответствии с инструкциями изготовителя; к-ДНК получали с использованием набора Реверта-L. Все клещи были проанализированы на наличие вируса клещевого энцефалита, боррелий, анаплазм и эрлихий, с использованием набора реагентов для выявления РНК/ДНК возбудителей инфекций, передающихся иксодовыми клещами методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® TBEV, B. burgdorferi s.l., A. phagocytophillum, E. chaffeensis/E. muris-FL» или аналогичным набором, разработанным в РНПЦ эпидемиологии и микробиологии, в соответствии с инструкцией производителя.
Результаты и обсуждение. С целью оказания профилактической помощи пациентам, обращающимся по поводу присасывания клещей, в РНПЦ эпидемиологии и микробиологии организовано исследование клещей на присутствие возбудителей трансмиссивных инфекций (ЛБ, КЭ, анаплазмоз, эрлихиоз).
Методом ПЦР амплификации диагностически значимых участков геномов (ОТ-ПЦР для КЭ) показано, что из 300 обследованных клещей в 37,33 % случаев (112 проб) определялось наличие ДНК Borrelia burgdorferi sensu lato, в 11,33 % (34 пробы) случаев детектировалось РНК вируса клещевого энцефалита, в 4 % (12 проб) — ДНК Anaplasma phagocytophylum. ДНК Ehrlichia muris не обнаружена.
Исследования на возможность смешанного инфицирования переносчиков несколькими патогенами одновременно показали, что сочетание боррелий с вирусом клещевого энцефалита встречалось в 17 пробах (5,6 % случаев), сочетание бор-релий и анаплазм выявлено в 3 пробах (1,0 % случаев), вируса клещевого энцефалита и анаплазм — в 1 пробе (0,33 % случаев).
Таким образом, основную угрозу населению страны в первой половине сезона 2014 г. представляли возбудители болезни Лайма и клещевого энцефалита. Всем пациентам, в клещах от которых было выявлено присутствие боррелий и анаплазм, рекомендован профилактический курс химиотерапии.
Полученные результаты несколько отличаются от аналогичных данных сезона активности клещей 2013 г., в котором зараженность клещей боррелиями составила 29,7 %, вирусом клещевого энцефалита — 19,8 %, зараженность клещей анаплазмами не превысила 3 %. Что позволяет сделать предварительные выводы о некотором увеличении зараженности переносчиков борре-лиями и анаплазмами и относительном снижении их зараженности вирусом клещевого энцефалита. По данным проведенного молекулярно-генетического анализа, в клещах I. ricinus, отловленных на территории Республики Беларусь в 2013 г., определялась циркуляция четырех видов спирохет рода Borrelia, три из которых являются патогенными для человека (B. burgdorferi s.s., B. garinii, B. afzelii), один вид обладает условной патогенностью (B. valasiana). Доминирующий вид на исследуемых территориях представлен B. afzelii(45,0 %), в меньшей степени распространены B. burgdorferi s.s.(32,5 %), B. garinii (12,5 %), B. valasiana (2,5 %).
Таким образом, высокий процент выявляемо-сти патогенных для человека боррелий в переносчиках обусловливает актуальность исследования клещей, снятых с людей, с целью назначения своевременной профилактики и снижения заболеваемости населения Республики Беларусь болезнью Лайма.
ЛИТЕРАТУРА
1. Балашов, Ю.С. Иксодовые клещи — паразиты и переносчики инфекций. СПб.: Наука, 1998. 287 с.
2. Князева О.Р. и др. Эпидемиологическая ситуация по Лайм-боррелиозу на территории Республики Беларусь в 2011—2013 гг. / О.Р. Князева, А.Г. Красько //Проблемы медицинской микологии. Спб., 2014. Т. 16. № 2. С. 86
3. Красько А.Г. и др. Патогенные микроорганизмы, выявленные в клещах Ixodes ricinus, собранных на территории Республики Беларусь / А.Г. Красько, О.Р. Князева, Е.П. Счесленок, П.А. Семижон, А.Л. Веденьков, С.А. Дра-кина //Медицинская вирусология. М., 2013. Т. XXVII(1). С. 60
Контактная информация:
Князева Ольга Рашидовна, e-mail: ol1207@tut.by
г-Ь
Contact information: Kniazeva Olga, e-mail: ol12G7@tut.by
