ВЫДЕЛЕНИЕ И ОТБОР МЕДЛЕННОРАСТУЩИХ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ RHIZOBIUM LUPINI Текст научной статьи по специальности «Сельское хозяйство, лесное хозяйство, рыбное хозяйство»

BIOLOGICAL SCIENCES

ВЫДЕЛЕНИЕ И ОТБОР МЕДЛЕННОРАСТУЩИХ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ RHIZOBIUM

LUPINI

Картыжова Л.Е.

Институт микробиологии НАН Беларуси, ведущий научный сотрудник, кандидат биологических наук

Самбук Е.А. студентка

Белорусский государственный университет

ISOLATION AND SELECTION OF SLOWLY-GROWING NODULATING BACTERIA RHIZOBIUM

LUPINI

Kartyzhova L.,

Institute of Microbiology, NAS of Belarus leading researcher, Ph. D. in biology Sambyk E.

Belarusian State University

Аннотация

Выделение и отбор активных штаммов медленнорастущих клубеньковых бактерий Rhizobium lupini и разработка на их основе микробного препарата для применения в агротехнике возделывания люпина является одним из путей повышения производства растительного белка в Беларуси. Необходимым условием для создания эффективной микробо-растительной системы Lupinus: Rhizobium lupini является инокуляция семян люпина активными штаммами клубеньковых бактерий. В лабораторных условиях методом «host plant trapping» выделено 25 изолятов Rhizobium lupini.

Abstract

The isolation and selection of active strains of slowly-growing nodulating bacteria Rhizobium lupini and the development of the derived a microbial preparation to be applied in lupine cultivation technology is one of the ways to increase plant protein production in Belarus. An essential prerequisite for the functioning of an effective microbial-plant system Lupinus: Rhizobium lupini is the inoculation of lupine seeds by active strains of nodulating bacteria. Under laboratory conditions, 25 Rhizobium lupini variants were isolated by the "host plant trapping" technique.

Ключевые слова: Protein, lupine (Lupinus), медленнорастущие клубеньковые бактерии Rhizobium lupini, микробные препараты.

Keywords: Protein, lupine (Lupinus), slow-growing nodulating bacteria Rhizobium lupini, microbial preparations.

Для сельского хозяйства Беларуси, специализирующегося на производстве продукции животноводства, решение проблемы кормового белка имеет исключительно-важное значение. Однако, в силу ряда причин, проблема белка в кормах в республике пока еще не решена. Поиск новых научных решений снижения дефицита растительного белка является актуальным.

В Беларуси пристальное внимание уделяется возделыванию высокобелковых культур [11, 12, 14, 15]. Одной, из которых является люпин (узколистный, желтый и белый). В его семенах в среднем содержится 30-40% белка с высоким качеством и хорошей переваримостью. Зерно и сухое вещество зеленой массы различных видов люпина, представляющие собой природные растительные концентраты, содержат 36-45% и 18-23%, соответственно, хорошо перевариваемого практически равного по качеству соевому белка, 50% которого составляют незаменимые аминокислоты. По пере-

вариваемому протеину люпин в 2,5-5 раз превосходит зерновые и зернобобовые культуры (горох, вику, кормовые бобы). Производство животного белка является более затратным, так как использует в 13 раз больше энергии и в 4 раза пахотной земли, чем на производство растительного белка. Установлено, что выход белка с урожаем зерна у люпина может составлять от 12 до 14 ц/га, а с вегетативной массой от 13 до 16 ц/га и более [12]. Благодаря уникальной биологической способности фиксировать атмосферный азот с помощью клубеньковых бактерий и способности оставлять после себя на поле значительное количество растительной массы люпин в полеводстве является отличным предшественником для любых других небобовых культур, накапливая в своей биомассе от 200 до 300 кг/га и более экологически безопасного азота. При сиде-ральном использовании в почву запахивается 40 -50 т/га зеленой массы, равноценной органическому удобрению. Таким образом, на посевах люпина в почве сохраняется положительный баланс гумуса.

Люпин не требователен к почве, так как имеет мощную корневую систему с высокой усвояющей способностью [13]. Зеленую массу и семена люпина используют в земледелии, животноводстве, лесоводстве, садоводстве, цветоводстве, почвозащитном деле, медицине, парфюмерии, лакокрасочной и пищевой промышленности. Однако, высокие хозяйственные и экономические возможности люпина полностью не используются. Основными причинами этого длительное время были: отсутствие, устойчивых к болезням (антракнозу и др.), сортов и микробных препаратов на основе активных штаммов клубеньковых бактерий. В связи с этим в начале XX века было значительное сокращение посевных площадей желтого, белого и узколистного люпина. В настоящее время в Беларуси созданы новые сорта желтого, узколистного и белого люпинов, которые проявляют высокую устойчивость к фузариозу, имеющие разную направленность использования (зернового, силосного, сидерального), различных морфотипов, в т.ч. детерминантные сорта, которые имеют короткий вегетационный период, что позволяет снизить поражение антракно-зом. Созданные за последнее время новые сорта желтого, узколистного и белого люпинов проявляют высокую устойчивость к фузариозу. Современные сорта разных направлений использования (зернового, силосного, сидерального), различных морфотипов, в том числе детерминантные имеют короткий вегетационный период, что позволяет им уходить от поражения антракнозом. В настоящее время в Государственный реестр Беларуси включено 23 сорта люпина, возделываемых в Беларуси: Миртан (1998г.), Глатко (2000 г), Владлен (2002г.), Хвалько (2002 г.), Гуливер (2005 г.), Михал (2005 г.), Прывабны (2007 г.), Дзiуны (2008 г.), Ян (2009 г.), Добрыня (2009 г.), Жодзшсю (2010 г.), Ранний (2010 г.), Геркулес (2011 г.), Василёк (2012 г.).

Эффективное использование перспективных сортов люпина, то есть получение высоких урожаев зеленой массы и зерна возможно при создании симбиоза растения- хозяина с микросимбионтом. Разработка новых технологических решений в этом направлении позволит приблизиться к решению проблемы дефицита растительного белка.

На сегодняшний день клубеньковые бактерии являются одним из главных объектов биотехнологии современного сельского хозяйства [10]. Их способность фиксировать атмосферный азот за счет симбиоза с растением-хозяином обеспечивает получение прибавки урожая семян и зеленой массы. Одним из показателей, отражающим эффективность симбиотического взаимодействия макро и микросимбионтов является увеличение фитомассы растений, которое проявляется уже в начале роста и развития люпина: ускоряются процессы прорастания семян, и увеличивается процент всхожих. Всходы люпина выглядят дружными и крепкими, отмечается ростстимулирующий эффект.

В Беларуси создана серия микробных препаратов на основе клубеньковых бактерий, а также в сочетании с фосфатмобилизующими микроорганизмами, обеспечивающих получение высоких урожаев и повышение качества получаемой высокобелковой растениеводческой продукции:

Ризофос марки «Галега», «Люцерна», «Клевер»; биоудобрение СояРиз [3-5]. На сегодняшний день отсутствует в республике микробный препарат на основе активных штаммов медленнорастущих клубеньковых бактерий ЯИгюЫыт ¡ырШ. Известно, что местные штаммы ЯИгюЫыт являются наиболее приспособленными, так как их отбор осуществлялся из естественной популяции на основании «сапрофитной конкуренции», т.е. способности образовывать колонии в почве в отсутствии растения-хозяина [3], что подтверждает их высокую конкурентную, нодулирующую и азотфиксирую-щую способность [1, 2, 6-9,16].

Целью настоящих исследований явилось выделение и отбор активных штаммов медленнорастущих клубеньковых бактерий люпина. В задачи наших исследований входило:

1) Выделение и отбор активных штаммов клубеньковых бактерий ЯИгюЫыт ¡ырт1;

2) отбор эффективных комплементарных пар (Ьиргпш'+ЯИгюЬтт ¡ырШ), обеспечивающих реализацию ценных свойств люпина: азотфиксирую-щую (фиксация атмосферного азота клубеньковыми бактериями в симбиозе с растениями) и фос-фатмобилизующую (мобилизация труднодоступных соединений фосфора и превращение их в доступные для растений соединения) способности в лабораторных условиях;

3) проверка эффективности применения отобранной ассоциации (оптимизация доз и способов) в полевых условиях при возделывании разных сортов люпина;

4) разработка технологических параметров культивирования отобранной ассоциации (лабораторный и опытно-промышленный регламенты получения инокуляционного материала);

5) разработка микробного препарата для инокуляции семян люпина ;

6) разработка эффективной биотехнологии применения микробного препарата на основе клубеньковых и фосфатмобилизующих бактерий.

Для выполнения первой задачи наших исследований и выделения клубеньковых бактерий люпина в разных областях Беларуси были отобраны образцы разных типов почвы (торфяная, дерново-подзолистая) на которой возделывался люпин. Отбор образцов по вариантам опыта одного поля проводили на расстоянии 50 м друг от друга. В лабораторных условиях заложен опыт в светокультуре с проростками люпина сорта «Василёк», инокулиро-ванными почвенной суспензией (разведение от 10-1до 10-10, повторность 5-ти кратная). По фазам роста и развития люпина проводили оценку биометрических показателей роста с целью отбора мощных растений с образовавшимися клубеньками на их корнях. Оценка биометрических показателей роста показала стимулирующий эффект инокуляции проростков люпина почвенной суспензией как торфяной, так и дерново-подзолистой почвы. Отбор растений для выделения изолятов клубеньковых бактерий люпина проводили по максимальной высоте роста люпина, сырому и сухому весу фитомассы и по наличию крупных розовых клубеньков, сформировавшихся на корнях растений (рисунок 1-4).

Рисунок 1 - Рост и развитие люпина в условиях светокультуры (инокуляция семян почвенной суспензией, апрель 2021 г.)

А Б

Рисунок 2 - Фаза стеблевания люпина Примечание: К - контроль, Т - торфяная почва, Д-П - дерново-подзолистая почва;

А - апрель, Б - май

U H о

CS

a

a н о

<J

л Ю

40 35 30 25 20 15

10 Н 5

27,4

О

29,4 ♦

31,5 ♦

33,9 ♦

35 ♦

27

О

29,1

О

30,25

о

31,35

29,25

v О

33,05

о

л J J J J J J J

t; <и <и <и <и <и <и <и <и <и <и

о. (В (С (С (С (С (С (С (С (С (С

X ю ю ю ю ю ю ю ю ю ю

о

. (N m . ш . (N m . ш

Вода Дерново-подзолистая почва Торфяная почва

Рисунок 3- Высота роста растений люпина сорта Василёк, светокультура ФПримечание: - растения с клубеньками, 0 - растения без клубеньков

к 16 а

а> m

2,50 2,00 1,50 1,00 0,50 0,00

1,54 1,50 1,55

1,71

1,95

Вода

1,50

1,39

Дерново-подзолистая почва

1,62

1,35 1,32

1,54

Торфяная почва

А

к 16

I

0,45 0,40 0,35 0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0,00

0,21

0,41

0,30 0,32

0,28 0,27

Вода

0,29 п

Дерново-подзолистая почва

0,40

0,35

0,29

0,26

Торфяная почва

Б

Рисунок 3 - Вес зеленой массы люпина сорта Василёк, светокультура Примечание: А - сырая фитомасса, Б - сухая фитомасса;

- растения с клубеньками, Й-растения без клубеньков, Ц]- контрольные растения

0

На рисунках 3-4 отмечены варианты опыта, в которых зафиксирован симбиоз между растением -хозяином и спонтанным штаммом клубеньковых бактерий люпина. Необходимо отметить, что в вариантах с использованием торфяной почвы растения развивались хорошо, их биометрические показатели роста превышали контрольные, но наличие клубеньков на корнях этих растений не было зафиксировано. Сформировавшиеся на корнях люпина клубеньки, в вариантах с дерново-подзолистой почвой, послужили объектами для выделения изолятов R. lupini. Методом «hostplant trapping» из клубеньков, сформировавшихся на корнях люпина, в условиях светокультуры было выделено 25 изолятов, которые представляли собой гетерогенную культуру. Получение чистой культуры осуществляли методом истощающего посева, трижды. Чистоту культуры определяли микроскопированием культуры из отдельной, хорошо сформированной, колонии. Морфологическое описание колоний отобранных изолятов и интенсивность их роста на специфических средах, на которых осуществляли:

1. выделение клубеньковых бактерий люпина (Маннитно-люпиновая);

2. определение принадлежности к олиго-нитрофильной группе микроорганизмов (Эшби), представлено в таблице.

Для отбора штаммов клубеньковых бактерий из спектра, выделенных из клубеньков, изолятов был заложен вегетационный опыт в светокультуре.

Cхема опыта:

1. семена люпина без инокуляции (контроль);

2. семена люпина + № изолята (опыт)

Простерилизованные семена люпина проращивали и внедряли в агаризованную среду Йен-сена, через cутки проводили инокуляцию пророст-

ков люпина культуральной жидкостью бактериальных изолятов, которую готовили следующим образом: биомассу 3-х суточной культуры (изолята) смывали 10-ю мл стерильной жидкой маннитно-люпиновой среды со скошенной агаризованной среды в пробирке. Инкубировали в термостате в течение 30 минут и затем инокулировали проростки, интродуцированные в среду Йенсена. Пробирки с инокулированными проростками через сутки из темной комнаты переносили в стерильные условия светокультуры. Повторность опыта 5-тикратная, объем культуральной жидкости изолята составлял 0,5 мл/1 раст. На рисунке 5 представлено фото ино-кулированных проростков люпина на 1 и 5 сутки роста после инокуляции в условиях светокультуры.

Отбор активных штаммов ризобий люпина, обеспечивающих формирование эффективной мик-робо-растительной системы Lupinus: Rhizobium Ш-pini будет проводится на основании, полученных в условиях светокультуры, данных: биометрических показателей роста растений и симбиотической активности (нодулирующая способность, вирулентная и азотфиксирующая активность, окраска клубеньков) штаммов клубеньковых бактерий люпина.

Таким образом, на первом этапе наших исследований из клубеньков, образовавшихся на корнях люпина в условиях светокультуры, выделено 25 бактериальных изолятов. Получены чистые культуры изолятов, заложен опыт в светокультуре по отбору изолятов, обеспечивающих ростстимулиру-ющий эффект и формирование клубеньков на корнях растений. В настоящее время проводится учет биометрических и симбиотических показателей растений. Дальнейшие исследования позволят приблизиться к решению поставленных задач и информировать о полученных результатах.

Таблица

Морфологическое описание колоний юолятов Л./ирйи, выделенных из клубеньков люпина__

Помер изолята Морфология колоний Интенсивность роста на средах

Размер, см Форма Цвет/блеск Поверхность Профиль Край Консистенция Структура маннитно-люпиновая Ошби

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

11 0,6 круглая кремовый гладкая плоский зубчатый слизистая однородная +++++ ++

12 0,3 круглая бело-серый/глянцевый гладкая вогнутый ровный слизистая однородная +++++ +, '/2 +

13 0,4 круглая бело-серый/глянцевый гладкая выпуклая ровный слизистая однородная +++++ +++++

14 0,1-0,2 круглая белый/не блестящий гладкая выпуклая ровный слизистая однородная ++++ ++

15 0,3-0,4 круглая бесцветный/ блестящий гладкая выпуклая ровный слизистая однородная +++++ +++

16 0,2 круглая белый/матовый гладкая плоский ровный слизистая однородная ++++ ++, '/2 +

21 0,3 круглая белый в центре, прозрачный по краям гладкая выпуклая ровный слизистая однородная ++++ +++

22 0,5 ризоидная бело-серый/глянцевый гладкая выпуклая неровный слизистая однородная +++++ ++++

23 0,1-0,2 круглая молочный/не блестящий гладкая ровная ровный слизистая однородная ++++ +, '/2 +

24 0,5 круглая кремовый/не блестящий гладкая ровная ровный слизистая однородная ++++ ++

25 0,2-0,3 круглая белый/матовый гладкая вогнутая ровный слизистая однородная +++++ +++

31 0,2 круглый белый с желтым оттенком /блестящий гладкая выпуклая ровный слизистая однородная ++++ ++

32 0,4 ризоидная бело-серый/глянцевый гладкая вогнутая неровный слизистая однородная +++++ +++

33 0,3 круглая бело-серый/глянцевый гладкая выпуклая ровный слизистая однородная ++++++ +++

34 0,5 круглая бело-серый/глянцевый гладкая выпуклая ровный слизистая однородная +++++ ++++

35 0,1 круглая белый/глянцевый гладкая выпуклый зубчатый слизистая однородная ++++ +

36 0,2 круглая бело-серый/глянцевый гладкая выпуклый ровный слизистая однородная ++++ +

37 0,2 плоская кремовый/глянцевый гладкая плоский зубчатый слизистая однородная ++++ ++

38 0,1 плоская белый /не блестящий зернистая выпуклая ровный слизистая однородная ++++ ++

41 0,5 ризоидная бело-серый/глянцевый гладкая выпуклый неровный слизистая однородная +++++ +++

42 0,2 круглая молочный/блестящий гладкая ровный ровный слизистая однородная ++++ ++

43 0,3 круглая кремовый/глянцевый гладкая ровный ровный слизистая однородная +++++ +++

44 0,2-0,3 круглая белый/матовый зернистая вогнутый ровный слизистая однородная ++++++ +++

45 0,2 круглый светло- желтый оттенком /блестящий гладкая выпуклый ровный слизистая однородная ++++ ++

46 0,4 ризоидная бело-серый/глянцевый гладкая вогнутый неровный слизистая однородная +++++ +++

Примечание: Интенсивность роста: + + + ++- интенсивный рост, + + + +- обильный рост, + + +- средний рост, ++ - слабый рост, + - очень слабый рост

1 сутки 5 сутки

Рисунок 5- Рост люпина в условиях светокультуры

Список литературы

1. Bromfield E.S.P., Jones D.G. Studies on double strain occupancy of nodeules and the competitive ability of Rhizobium trifolii on red and white clower grown in soil and agar / E.S.P. Bromfield, D.G. Jones // Ann. Appl. Biol. - 1980. - Vol. 94, №1. - P.51-59

2. Kartyzova L., Sambyk E./ Relevance of research: isolation and selection of slowly-growing nod-ulating bacteria Rhizobium lupini // Polish journal of science: collection of scientific works of Kozminski University; edited by Jan Kaminski (editor in chief) -Poland, 00-033, Warszawa: Kozminski University, № 39, Vol. 1.- 2021. - P. 13-19.

3. Картыжова Л.Е., Алещенкова З.М. Пути создания и применения энергосберегающей технологии производства микробного удобрения для возделывания галеги восточной // Ресурсо- и энергосберегающие технологии и оборудование, экологически безопасные технологии: материалы междунар. науч.-техн. конф, Минск, 24-26 ноября 2010 г.: сб. докладов в 2 ч. / М-во обр-ния РБ, УО «Белорус. гос. технологичский ун-т»; редкол.: И.М. Жарский (гл. ред.) [и др.] - Минск, 2010. - Ч. 1. - С. 300-303

4. Картыжова Л. Е. Специфичность симбиоза Rhizobium galegae с Galega orientalis Lam. и его эффективность в почвенно-климатических условиях Беларуси // Микробные технологии: фундаментальные и прикладные аспекты: сб. науч. тр. / Ин-т мик-робиол. НАН Беларуси, БРФФИ, Белор. общ-ное объединение микробиологов; редкол.: Э.И. Коло-миец, А.Г. Лобанок (отв. ред.) [и др.]. - Минск, 2011. - Т.3. - С. 141-151.

5. Картыжова, Л.Е., Алещенкова З.М., Семенова И.В., Ломоносов Т.Т., Ихваненко Н.Н., Босак Н.В., Колоскова Т.В. Эффективность применения биоудобрения СояРиз на фоне минеральных удобрений при возделывании сои в почвенно-климати-ческих условиях Беларуси // Экологическое состояние природной среды и научно-практические аспекты современных агротехнологий: материалы межд. научно-практ. конф., Рязань, 22-23 марта 2018 г.: в 2 ч. / Министерство сельского хозяйства Российской Федерации; Министерстово сельского хозяйства и продовольствия Рязанской области; ФГБУ ВО РГАТУ; Рязанский аграрный науч.-ис-след. универ. комплекс; Рязанский гос. агротехнол. ун-т им. П.А. Костычева. - Рязань: ФГБУ ВО РГАТУ, 2018. - Ч. 1. - С. 158 -163.

6. Kartyzhova L.E. Efficiency of applying collection strains and natural sources of Rhizobium galegae to ensure legume - Rhizobial symbiosis with Galega orientalis Lam. / L.E. Kartyzhova // Biotechnology: State of the Art and Prospects for Development, 2008/ Library of Congress Cataloging in Publication Data; редкол.: ed. G.E. Zajkov [et.al]. - NJ: Nova Science Publishers, Inc., 2008. - Chapter 15. - P.135-143. URL: https://books.google.by/books?id=3pr6VnKkzwUC&p g=PA13 4&dq=Development+of+Rhizobium+galegae +Lam.+under+Extreme+Conditions&hl=ru&sa=X&ve d=2ahUKEwiyz6rWkY_vAhXDyqQKHYXDCTYQ6 AEwAXoECAkQAg#v=onepage&q=Development%2 0of%20Rhizobium%20galegae%20Lam.%20under%2 0Extreme%20Conditions&f=false

7. Kartyzhova L.E., Aleschenkova Z.M. Development of Rhizobium galegae Lam. under Extreme Conditions / L.E. Kartyzhova, Z.M. Aleschenkova // Heavy Metals and Other Pollutants in the Environment. Biological aspects; ed.: G. E. Zaikov, L.I. Weisfeld, E.M. Lisitsyn, S.A. Bekuzarova. - Apple Academic Press, Inc., 2016.- Chapter 16. - P.315 -330.URL: https://books.google.by/books?id=YD4PEAAAQBAJ &pg=PA327&dq=Development+of+Rhizobium+gale gae+Lam. +under+Extreme+Condi-tions&hl=ru&sa=X&ved=2ahUKEwj -

1 aOi6tfvAhXlhf0HHQNiBbkQ6AEwAHoECAU-QAg#v=onepage&q=Development%20of%20Rhizo-bium%20galegae%20Lam.%20under%20Ex-treme%20Conditions&f=false

8. Kartyzhova Liliya E. Efficient strain of slow-growing nodulating bacteria Bradyrhizobium japoni-cum 84kl as a basis of biofertilizer soyarhiz / Liliya E. Kartyzhova, Irina V. Semyonova [et. all] // Biological Systems, Biodiversity, and Stability of Plant Communities, November 2015 / NJ, USA; Larissa I. Weisfeld [et.al]. - Waretown: HAP, 2015. -Chapter 15. - P. 232239. URL: https://books.google.by/books?id=nt4_CQAAQBAJ& pg=PA231&dq=Efficient+strain+of+slow-growing+nodulating+bacteria++Bradyrhizobium+japo nicum+84kl+as+a+basis+of+biofertilizer+soyarhiz&h l=ru&sa=X&ved=2ahUKEwi 19oHm6dfvAhWng_0H HcTPAHMQuwUwAHoECAEQCA#v=onepage&q= Efficient%20strain%20of%20slow-growing%20nodulating%20bacteria%20%20Bradyrhi zobium%20japonicum%2084kl%20as%20a%20basis %20of%20biofertilizer%20soyarhiz&f=false

9. Kartyzhova Liliya E. Selection of competitive and efficient strains of Rhizobium galegae / Liliya E Kartyzhova // Biological Systems, Biodiversity, and Stability of Plant Communities, November 2015 / NJ, USA; Larissa I. Weisfeld [et.al]. - Waretown: HAP,

2015. - ^pter 16. - P. 241-250. URL: https://books.google.by/books?id=nt4_CQAAQBAJ& pg=PA243&dq=S%D0%B5lection+of+competitive+a nd+efficient+strains+of+Rhizobium+galegae&hl=ru& sa=X&ved=2ahUKEwiPzOSu6NfvAhXC8bsIHY_mC qwQ6AEwAHoECAYQAg#v=onepage&q=S%D0%B 5lection%20of%20competitive%20and%20efficient% 20strains%20of%20Rhizobium%20galegae&f=false

10. Кожемяков А.П, Доросинский Л.М. Эффективность использования препаратов азотфиксиру-ющих микроорганизмов в сельском хозяйстве/ А.П. Кожемяков, Л.М. Доросинский // Тр. ВНИИСХМ. -1989. - Т. 59. - С. 5-13

11. Перспективы развития: прогнозы на 2021 год /Департамент международного и регионального сотрудничества (Дайджест / Счетная палата Российской Федерации.) - М., 2020.- 35с.

12. Серая Т.М. Продуктивность люпина узколистного на дерново-подзолистой супесчаной почве / Т.М. Серая, Е.Г. Мезинцева, Е.Г. Богатырева, О.М. Бирюкова, Р.Н. Бирюков, М.Э. Родина //Почвоведение и агрохимия. - 2011.- №1 (46). - С. 192- 201.

13. Такунов И.П. Люпин в земледелии России /И.П. Такунов - Брянск: Придесенье, 1996. - 372 с.

14. Таранухо, В.Г. Люпин / В.Г. Таранухо. -Горки: Белорусская государственная сельскохозяйственная академия, 2009. - 52 с.

15. Шемаханова Н.М. Роль бобовых растений в эффективном симбиозе с клубеньковыми бактериями/ Н.М. Шемаханова // Микробиол. - 1976. - Т. 45, вып. 6. - С.1071-1074

16. Chanel D.L. Greenwood R.M. The colonization of host-rood and soil by Rhizobia. Il.Stain differences in the species Rhizobium trifolii/ D.L. Chanel, R.M. Greenwood //Soil Biol. and Biochem. - 1973b.-Vol.5, № 4. -P. 433-440