CC BY
89
2012, Т. 2, № 1-2
Санитарная охрана территории
формами бруцеллеза. Выделенные культуры B.meliten-sis направлялись в референс-центр по мониторингу за возбудителем бруцеллеза на базе Ставропольского НИПЧИ. Культуры подтверждены с определением 4 штаммов II биовара, 15 штаммов III биовара.
ХАРАКТЕРИСТИКА МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, ПОЛУЧЕННЫХ К ВИРУСАМ - ВОЗБУДИТЕЛЯМ ГЛПС
Т.К. Дзагурова1, П.Г. Свешников2, О.Н. Солопова2, Н.А. Коротина1, М.В. Баловнева1, О.А. Леонович1, Г.А. Малкин1, Е.А. Ткаченко1
1Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П. Чумакова РАМН, Москва; 2Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва
Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) — острая вирусная, зоонозная инфекция, занимающая одно из первых мест среди природно-очаговых болезней человека, этиологически обусловлена хантавирусами Пуумала (ПУУ), Добрава (ДОБ), Хантаан (ХТН), Амур и Сеул (СЕУ). Со времени изоляции первого хантавируса в 1978 г. моноклональные антитела (мАТ) широко используются как для иммунологической дифференциации хантавирусных штаммов, так и в качестве основы диагностических тест-систем. Целью настоящей работы было получение мышиных моноклональных антител с последующим использованием их в качестве основы тест-систем иммуноферментного анализа (ИФА) для контроля культуральных, цельновирионных, инак-тивированных вакцинных препаратов против ГЛПС.
Мышей линии BALB/c иммунизировали очищенными препаратами вирусов ПУУ, ДОБ, ХТН, СЕУ в дозе 100 мкг/мышь, иммунизацию проводили в подушечки задних лап дважды с двухнедельным интервалом. Клетки подколенных лимфоузлов иммунных мышей гибридизовали с клетками мышиной миело-мы линии sp2/0 по стандартной методике. Антитела выделяли аффинной хроматографией. По результатам скрининга моноклональных антител методами ИФА, непрямого метода флюоресцирующих антител (МФА) и в реакции нейтрализации в культуре клеток (РН) были отобраны 11 клонов гибридом, секретирующих специфические мАТ, включая 4 клона, полученные к вирусу ДОБ, 3 — к вирусу ПУУ и по 2 к вирусам ХТН и СЕУ Вирус нейтрализующей активностью обладал только один клон мАТ nYY/G10. Титр нейтрализующих антител по отношению к гомологичному вирусу составил 1:1024, что соответствовало содержанию 0,5— 1 мкг белка в мл. Как и контрольные анти-ПУУ антитела из сывороток животных, а также реконвалесцен-тов ГЛПС-ПУУ, мАТ ПУУ/GW не нейтрализовали другие хантавирусы, что характеризует их специфическую направленность к одному из эпитопов глико-протеинового комплекса G1:G2. Как известно, глико-протеины G1:G2, составляющие наружную оболочку хантавируса, ответственны за выработку нейтрализующих антител, которые при Пуумала инфекции дают крайне низкие или нулевые перекрестные реакции с другими хантавирусами. Остальные 10 клонов мАТ, принимая во внимание их тесные перекрестные взаимоотношения по результатам МФА и отсутствие нейтрализующей активности, специфичны к эпито-пам нуклеокапсидного белка. Известно, что у ханта-вирусов антитела к нуклеокапсидному белку обладают большой перекрестной реактивностью, так как по сиквенсу аминокислот N белка гомология между хантавирусами составляет более 60%.
ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ШТАММОВ ХАНТАВИРУСОВ - ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГЛПС В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ
Т.К. Дзагурова1, Е.А. Ткаченко1, В.Н. Башкирцев1, Н.М. Окулова1, Н.С. Апекина1, Н.А. Коротина1, Г.А. Малкин1, А.Д. Бернштейн1, Ю.В. Юничева2, И.А. Ходякова3, С.Е. Соцкова1, Д.В. Транквилевский1
'ФГБУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН, Московская обл.; 2Сочинское противочумное отделение ФГУЗ ППЧС Роспотребнадзора, г. Сочи; 3Управление Роспотребнадзора по Липецкой обл., г. Липецк
На территории России среди мелких млекопитающих циркулируют, по крайней мере, 10 ханта-вирусных генотипов: Хантаан, Пуумала, Добрава, Сеул, Амур, Тула, Хабаровск, Топографов, Артыбаш, Алтай. Пять первых в этом списке вирусов являются возбудителями ГЛПС.
В этиологической структуре ГЛПС на большинстве административных территорий Европейской части России преобладает вирус Пуумала, природным резервуаром которого и источником заражения людей является рыжая полевка. Однако, вопреки ранее сложившемуся мнению о существовании на территории Европейской части России только одного возбудителя ГЛПС — вируса Пуумала, к концу 90-х годов стало вполне очевидным довольно широкое распространение вируса Добрава и его этиологическая роль, как возбудителя ГЛПС.
Для выделения хантавирусных штаммов мы использовали клетки перевиваемой линии УЕКО-Е6, которые заражали 10% суспензией легочной ткани грызунов, содержащей хантавирусный антиген по результатам предварительного исследования методом иммуноферментного анализа, или цельной кровью больных ГЛПС в остром периоде болезни, а также в редких случаях — 10% суспензией, приготовленной из секционных материалов погибших от ГЛПС больных. Через 10—12 дней культивирования при 37°С зараженные клетки снимали со стекла и исследовали методом иммунофлуоресценции (МФА) для выявления хантавирусного антигена, после чего ими заражали свежие клетки. Аналогичные процедуры повторяли с той же периодичностью после каждого из 5—6 пассажей инфицированных клеток. В случае обнаружения специфического антигена в клетках проводили сбор культурального вируса, который затем помещали на хранение при температуре —70°С.
Серотипирование вновь выделенных штаммов с референс-вирусами Хантаан, Пуумала, Добрава и Сеул осуществляли с помощью МФА и реакции нейтрализации по 80% подавлению числа фокусобразующих единиц. В качестве источника антител к хантавирусам использовали иммунные сыворотки крови экспериментальных животных и пациентов, переболевших ГЛПС.
В результате проведенных нами исследований было выделено 9 штаммов хантавируса Пуумала и 11 штаммов хантавируса Добрава. Штаммы вируса Пуумала были выделены в Башкортостане и Саратовской области из легочной ткани рыжих полевок (4 штамма), из крови больных ГЛПС (2 штамма) и секционных материалов погибших от ГЛПС (3 штамма). Штаммы вируса Добрава были выделены в Тульской, Воронежской и Липецкой областях от полевых мышей (5 штамма) и из крови больного ГЛПС (1 штамм), а также в районах Большого Сочи от кавказских лесных мышей (4 штамма) и 1 штамм из крови больной, погибшей от ГЛПС.
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
Помимо результатов иммунологических исследований видовая специфичность изолированных штаммов хан-тавирусов была установлена и с помощью молекулярно -генетических исследований. Полученные нами результаты позволяют говорить о существовании в России двух подвидов вируса До брава (ДОБ-Аа и ДОБ-Ар), ассоциированных с двумя видами грызунов (полевая и кавказская лесная мыши) и вызывающих заболевания ГЛПС, отличающихся тяжестью клинического течения болезни.
В этой связи проблема заболеваемости ГЛПС, вызванной новым для европейских очагов России вирусом Добрава, приобретает особую важность для здравоохранения в плане проведения эффективной диагностики, лечения и профилактики этой инфекции.
ПРОФИЛАКТИКА КЛЕЩЕВОГО ВИРУСНОГО ЭНЦЕФАЛИТА В КРАСНОЯРСКОМ КРАЕ
Г.М. Дмитриева
Управление Роспотребнадзора по Красноярскому краю, г. Красноярск
Красноярский край остается крайне напряженным природным очагов клещевого вирусного энцефалита (КВЭ). Уровень заболеваемости КВЭ населения Красноярского края один из самых высоких в Российской Федерации и Сибирском Федеральном округе.
В целях обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения, снижения риска инфицирования КВЭ населения края Управлением Роспотребнадзора по Красноярскому краю совместно с Правительством Красноярского края предприняты определенные меры, обеспечивающие эффективную профилактику КВЭ:
— ежегодно перед началом сезона активности клещей на заседаниях санитарно-противо-эпидемической комиссии при Правительстве края заслушивается вопрос о выполнении профилактических противоклещевых мероприятий;
— утверждается Председателем Правительства края план акарицидных обработок муниципальных территорий высокого риска заражения КВЭ, разработанный на основе результатов энтомологических оценок, с выделением целевого финансирования, объемы которого возросли с 1,0 млн рублей до 9,5 млн рублей;
— проводится работа со страховыми компаниями по обеспечению добровольного медицинского страхования граждан в части иммунизации против КВЭ.
Результатом проведенной в период с 2005 по настоящее время профилактической работы в крае при сохраняющейся активности основных характеристик паразитарной системы природного очага стало:
— увеличение охвата иммунизацией против КВЭ населения края с 11,7 до 27,2% в 2011 г., в том числе детей — с 22,2 до 56,5% в 2011 г.;
— увеличение объемов иммунизации против КВЭ населения в 2,8 раза, в том числе «групп риска» (лиц пенсионного возраста) за счет средств муниципальных бюджетов;
— увеличение объемов акарицидных обработок в 8,5 раз, охват противоклещевыми обработками территорий муниципальных образований (массового отдыха людей, рекреационных зон),
территорий спортивных и оздоровительных баз; учреждений отдыха и промышленных площадок, дачных участков и подходов к ним;
— стойкое на 42,7% (р < 0,05) снижение заболеваемости КВЭ в целом населения и в 2,1 раза (р < 0,05) снижение заболеваемости КВЭ среди детей до 17 лет;
— преобладание более легких форм течения КВЭ (лихорадочных) до 88,5%;
— сокращение летальности до 0,5%, регистрация летальных исходов у непривитых.
ВЛИЯНИЕ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ НА ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КЛЕЩЕВОГО ВИРУСНОГО ЭНЦЕФАЛИТА В КРАСНОЯРСКОМ КРАЕ
Г.М. Дмитриева, Л.В. Салямова
Управление Роспотребнадзора по Красноярскому краю, г. Красноярск
Красноярский край относится к числу территорий с наиболее высокой интенсивностью эпидемического проявления природных очагов инфекций, передающихся иксодовыми клещами. Уровень заболеваемости клещевым вирусным энцефалитом (КВЭ) в Красноярском крае один из самых высоких в Российской Федерации и в Сибирском Федеральном округе.
Начиная с 2002 года, в крае наблюдается стойкое снижение заболеваемости клещевым вирусным энцефалитом (Тсн. = —4,3%): показатель заболеваемости снизился с 36,8+1,15 в 2002 г. до 21,1+0,86 в 2011 г. (р < 0,05) на фоне сохраняющейся активности основных параметров паразитарной системы природного очага. Прослеживается высокая обратная корреляционная связь заболеваемости КВЭ с показателями охвата иммунизацией населения края (г = 0,7): охват населения края прививками против КВЭ возрос с 11,7 до 27,2% в 2011 г., охват детей еще выше — с 22,2 до 56,5% в 2011 г.
Оценивая заболеваемость КВЭ среди привитого и непривитого населения, рассчитан индекс эпидемиологической эффективности вакцины против клещевого энцефалита, который показал, что в период 2005—2010 гг. заболеваемость среди непривитого населения была в 13,3—24,6 раза выше, чем среди привитого населения. Доля заболевших КВЭ из числа привитых не превысила 0,05%, при этом преимущественно регистрировались стертые и лихорадочные формы заболевания и не регистрировались летальные исходы.
Анализ заболеваемости КВЭ среди привитых и непривитых групп населения по социально-профессиональному признаку показал, что наиболее незащищенными являются: группа пенсионеров (заболеваемость в группе непривитых пенсионеров была в 20,5—124,0 раза выше, чем среди привитых), и группа прочих и неработающих (заболеваемость непривитых в этой группе в 32,3—140,0 раз выше, чем среди привитых).
Наиболее значимое в 3,9 раза (р < 0,05) снижение заболеваемости КВЭ наблюдалось среди детского населения в возрастной группе от 7 до 14 лет, что обусловлено высоким уровнем охвата прививками против КВЭ детей этой возрастной группы — 64,2% (г = 0,9), аналогична взаимосвязь динамики заболеваемости КВЭ в группе детей в возрасте 14—16 лет, в которой охват прививками против КВЭ составил 72,0% (г = 0,8).
