CC BY
41
2012, Т. 2, № 1-2
Санитарная охрана территории
формами бруцеллеза. Выделенные культуры B.meliten-sis направлялись в референс-центр по мониторингу за возбудителем бруцеллеза на базе Ставропольского НИПЧИ. Культуры подтверждены с определением 4 штаммов II биовара, 15 штаммов III биовара.
ХАРАКТЕРИСТИКА МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, ПОЛУЧЕННЫХ К ВИРУСАМ - ВОЗБУДИТЕЛЯМ ГЛПС
Т.К. Дзагурова1, П.Г. Свешников2, О.Н. Солопова2, Н.А. Коротина1, М.В. Баловнева1, О.А. Леонович1, Г.А. Малкин1, Е.А. Ткаченко1
1Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П. Чумакова РАМН, Москва; 2Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва
Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) — острая вирусная, зоонозная инфекция, занимающая одно из первых мест среди природно-очаговых болезней человека, этиологически обусловлена хантавирусами Пуумала (ПУУ), Добрава (ДОБ), Хантаан (ХТН), Амур и Сеул (СЕУ). Со времени изоляции первого хантавируса в 1978 г. моноклональные антитела (мАТ) широко используются как для иммунологической дифференциации хантавирусных штаммов, так и в качестве основы диагностических тест-систем. Целью настоящей работы было получение мышиных моноклональных антител с последующим использованием их в качестве основы тест-систем иммуноферментного анализа (ИФА) для контроля культуральных, цельновирионных, инак-тивированных вакцинных препаратов против ГЛПС.
Мышей линии BALB/c иммунизировали очищенными препаратами вирусов ПУУ, ДОБ, ХТН, СЕУ в дозе 100 мкг/мышь, иммунизацию проводили в подушечки задних лап дважды с двухнедельным интервалом. Клетки подколенных лимфоузлов иммунных мышей гибридизовали с клетками мышиной миело-мы линии sp2/0 по стандартной методике. Антитела выделяли аффинной хроматографией. По результатам скрининга моноклональных антител методами ИФА, непрямого метода флюоресцирующих антител (МФА) и в реакции нейтрализации в культуре клеток (РН) были отобраны 11 клонов гибридом, секретирующих специфические мАТ, включая 4 клона, полученные к вирусу ДОБ, 3 — к вирусу ПУУ и по 2 к вирусам ХТН и СЕУ Вирус нейтрализующей активностью обладал только один клон мАТ nYY/G10. Титр нейтрализующих антител по отношению к гомологичному вирусу составил 1:1024, что соответствовало содержанию 0,5— 1 мкг белка в мл. Как и контрольные анти-ПУУ антитела из сывороток животных, а также реконвалесцен-тов ГЛПС-ПУУ, мАТ ПУУ/GW не нейтрализовали другие хантавирусы, что характеризует их специфическую направленность к одному из эпитопов глико-протеинового комплекса G1:G2. Как известно, глико-протеины G1:G2, составляющие наружную оболочку хантавируса, ответственны за выработку нейтрализующих антител, которые при Пуумала инфекции дают крайне низкие или нулевые перекрестные реакции с другими хантавирусами. Остальные 10 клонов мАТ, принимая во внимание их тесные перекрестные взаимоотношения по результатам МФА и отсутствие нейтрализующей активности, специфичны к эпито-пам нуклеокапсидного белка. Известно, что у ханта-вирусов антитела к нуклеокапсидному белку обладают большой перекрестной реактивностью, так как по сиквенсу аминокислот N белка гомология между хантавирусами составляет более 60%.
ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ШТАММОВ ХАНТАВИРУСОВ - ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГЛПС В ЕВРОПЕЙСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ
Т.К. Дзагурова1, Е.А. Ткаченко1, В.Н. Башкирцев1, Н.М. Окулова1, Н.С. Апекина1, Н.А. Коротина1, Г.А. Малкин1, А.Д. Бернштейн1, Ю.В. Юничева2, И.А. Ходякова3, С.Е. Соцкова1, Д.В. Транквилевский1
'ФГБУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН, Московская обл.; 2Сочинское противочумное отделение ФГУЗ ППЧС Роспотребнадзора, г. Сочи; 3Управление Роспотребнадзора по Липецкой обл., г. Липецк
На территории России среди мелких млекопитающих циркулируют, по крайней мере, 10 ханта-вирусных генотипов: Хантаан, Пуумала, Добрава, Сеул, Амур, Тула, Хабаровск, Топографов, Артыбаш, Алтай. Пять первых в этом списке вирусов являются возбудителями ГЛПС.
В этиологической структуре ГЛПС на большинстве административных территорий Европейской части России преобладает вирус Пуумала, природным резервуаром которого и источником заражения людей является рыжая полевка. Однако, вопреки ранее сложившемуся мнению о существовании на территории Европейской части России только одного возбудителя ГЛПС — вируса Пуумала, к концу 90-х годов стало вполне очевидным довольно широкое распространение вируса Добрава и его этиологическая роль, как возбудителя ГЛПС.
Для выделения хантавирусных штаммов мы использовали клетки перевиваемой линии УЕКО-Е6, которые заражали 10% суспензией легочной ткани грызунов, содержащей хантавирусный антиген по результатам предварительного исследования методом иммуноферментного анализа, или цельной кровью больных ГЛПС в остром периоде болезни, а также в редких случаях — 10% суспензией, приготовленной из секционных материалов погибших от ГЛПС больных. Через 10—12 дней культивирования при 37°С зараженные клетки снимали со стекла и исследовали методом иммунофлуоресценции (МФА) для выявления хантавирусного антигена, после чего ими заражали свежие клетки. Аналогичные процедуры повторяли с той же периодичностью после каждого из 5—6 пассажей инфицированных клеток. В случае обнаружения специфического антигена в клетках проводили сбор культурального вируса, который затем помещали на хранение при температуре —70°С.
Серотипирование вновь выделенных штаммов с референс-вирусами Хантаан, Пуумала, Добрава и Сеул осуществляли с помощью МФА и реакции нейтрализации по 80% подавлению числа фокусобразующих единиц. В качестве источника антител к хантавирусам использовали иммунные сыворотки крови экспериментальных животных и пациентов, переболевших ГЛПС.
В результате проведенных нами исследований было выделено 9 штаммов хантавируса Пуумала и 11 штаммов хантавируса Добрава. Штаммы вируса Пуумала были выделены в Башкортостане и Саратовской области из легочной ткани рыжих полевок (4 штамма), из крови больных ГЛПС (2 штамма) и секционных материалов погибших от ГЛПС (3 штамма). Штаммы вируса Добрава были выделены в Тульской, Воронежской и Липецкой областях от полевых мышей (5 штамма) и из крови больного ГЛПС (1 штамм), а также в районах Большого Сочи от кавказских лесных мышей (4 штамма) и 1 штамм из крови больной, погибшей от ГЛПС.
