CC BY
16
70
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
Цель исследования — поиск экзосомальных маркеров РПЖ и разработка нового метода скрининга и ранней диагностики.
Материалы и методы. ЭС были выделены из образцов плазмы пациентов с РПЖ и плазмы здоровых доноров методом дифференциального ультрацентрифугирования. Верификация структурных и биохимических особенностей (экспрессия экзосомальных маркеров CD9, CD81) проводилась с помощью методов корреляционной спектроскопии, атомно-силовой микроскопии и вестерн-блоттинга. Потенциальные белковые маркеры выбраны на основе анализа базы данных ExoCarta. Оценка экспрессии белковых маркеров ЭС проведена методом проточной цитоме-трии. Для оценки профиля экспрессии 179 молекул экзосомальных микроРНК использован «пул» образцов экзосомальной РНК, анализ проведен методом ОТ-ПЦР (Exosome focused miRNA panel/Exiqon).
Результаты. Анализ баз данных позволил выделить ряд поверхностных экзосомальных белков — потенциальных маркеров РПЖ: TM9SF4, AXL, EpCAM, CD44v6, Glypi-canl. Уровень экспрессии EpCAM на поверхности ЭС плазмы статистически значимо отличался в группах РПЖ и контроля. Для 18 (из 179) молекул микроРНК показано значимое отличие уровня экспрессии в тестируемых группах. При валидации результатов по индивидуальным молекулам подтверждено статистически значимое повышение уровня экспрессии микроРНК-155 (miR-155) в ЭС пациентов с РПЖ относительно здоровых доноров. В результате исследования установлена разница уровня экспрессии молекулы клеточной адгезии (EpCAM) и ми-кроРНК-155 в исследуемых группах пациентов с РПЖ и здоровых доноров.
Заключение. ЭС, секретируемые клетками РПЖ и циркулирующие в плазме, представляют собой естественные и биохимически стабильные комплексные онкомаркеры, диагностический потенциал которых определяется возможностью изоляции из плазмы интактных ЭС и параллельного анализа экзосомальных маркеров различной природы.
Е.В. Санарова1, Си Чжан2, А.В. Ланцова1, О.Л. Орлова1, А.П. Полозкова1, Н.А. Оборотова12, З.С. Шпрах1 ВЫБОР КРИТЕРИЕВ ДЛЯ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ОТЕЧЕСТВЕННОГО АНАЛОГА ГИПОТАЛАМИЧЕСКОГО ГОРМОНА СОМАТОСТАТИНА
ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия;
2ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, Москва, Россия
Введение. В лаборатории разработки лекарственных форм ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России разработана модель липосомальной лекарственной формы (ЛЛФ) отечественного аналога гипоталамического гормона соматостатина (АГГС), содержащая в качестве основных компонентов липосомального бислоя яичный лецитин и полиэтиленгликоль-2000-дистеароилфосфатидил-этано-ламин в молярных соотношениях 72/1 и в качестве крио-
протектора — сахарозу. Доказана эффективность данной модельной ЛЛФ на перевиваемой опухоли мышей — аде-нокарциноме молочной железы Са-755.
Цель исследования — выбрать критерии для оценки качества разработанной ранее модели ЛЛФ АГГС.
Материалы и методы. АГГС (ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России), яичный лецитин (Lipoid, Германия), полиэтиленгликоль-2000-дистеароил-фосфатидил-этаноламин (Lipoid, Германия), сахароза («Химмед», Россия). Спектрофотометрия в УФ-области, динамическая лазерная спектроскопия, потенциометрия, гравиметрия.
Результаты. На основании статей государственной фармакопеи и ранее проведенных аналитических исследований критериями для оценки качества ЛЛФ АГГС выбраны: 1) описание внешнего вида — сухая пористая масса светло-желтого цвета; 2) подлинность — электронный спектр поглощения при длине волны 282 ± 3 нм; 3) средний диаметр липосом — 130—170 нм; 4) рН липосомальной дисперсии — 6,8—7,4; 5) концентрация препарата в липосомальной дисперсии — 0,90—1,10 мг/мл; 6) потеря в массе при высушивании — не более 3 %; 7) средняя масса содержимого флакона — 0,674—0,734. Для оценки правильности выбранных показателей качества нарабатывали 3 серии ЛЛФ, которые анализировали по всем предложенным параметрам. В результате показано, что все серии соответствовали заявленным критериям качества, что позволило заложить их на хранение для проведения дальнейших химико-фармацевтических и биологических исследований.
Заключение. Выбраны критерии для оценки качества ЛЛФ АГГС, которые будут использованы в дальнейшем для создания фармакопейной статьи предприятия.
Работа поддержана стипендией Президента РФ на 2015-2017гг.
К.Н. Саунина1, Н.Н. Гундилович2, Л.Н. Николаевич1, Ю.Г. Павлюкевич2
РАЗДЕЛЕНИЕ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ГЛИОМЫ КРЫСЫ С6 НА СУБПОПУЛЯЦИИ С ПОМОЩЬЮ КВАРЦЕВЫХ ФИЛЬТРОВ И ОЦЕНКА ИХ ПРОЛИФЕРАЦИИ
Институт физиологии НАН Беларуси, Минск, Республика Беларусь;
2Белорусский государственный технологический университет, Минск, Республика Беларусь
Введение. Одним из актуальных научных подходов в химиотерапии опухолей головного мозга является разделение гетерогенных популяций опухолевых клеток на субпопуляции и оценка их чувствительности к противоопухолевым препаратам.
Цель исследования — разработать тест-систему для фракционирования субпопуляций опухолевых клеток головного мозга с использованием кварцевых фильтров.
Материалы и методы. Перевиваемая линия клеток глиомы крысы С6. Исходная концентрация гетерогенной популяции — 460000 клеток/мл (контроль). Фракционирование клеток С6 проводили последовательно: 1-й этап — исходную гетерогенную популяцию клеток С6 пропускали через стерильный кварцевый фильтр с диаметром
Спецвыпуск / том 16 / 2017
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
