Разработка модели липосомальной лекарственной формы нового отечественного аналога гипоталамического гормона соматостатина, обладающего противоопухолевой активностью Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 577.171.7.014:615.357.012.1:615.277.3.012 Е.В. Санарова1, А.В. Ланцова1, Чжан Си2, М.В. Дмитриева1, А.П. Полозкова1, О Л. Орлова1, З.С. Шпрах1, М.П.Киселева1, Л.М. Борисова1, З.С. Смирнова1, НА. Оборотова1 РАЗРАБОТКА МОДЕЛИ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ НОВОГО ОТЕЧЕСТВЕННОГО АНАЛОГА ГИПОТАЛАМИЧЕСКОГО ГОРМОНА СОМАТОСТАТИНА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ 1ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва 2ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. ИМ. Сеченова МЗ РФ, Москва

Контактная информация

Санарова Екатерина Викторовна, к.фарм.н., старший научный сотрудник лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО

адрес: 115478 Москва, Каширское шоссе, 24; тел.:+7(499)612-81-92 e-mail: [email protected]

Статья поступила 12.10.2015, принята к печати 27.11.2015.

Резюме

В настоящее время аналоги гормона соматостатина вызывают все больший интерес в связи с их активностью в отношении гормонозависимых опухолей, что обусловливает необходимость разработки отечественных препаратов, относящихся к данной группе. В лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России синтезирован новый отечественный пентапептид, АГГС. В ходе предварительных исследований данной субстанции продемонстрирована достаточно высокая противоопухолевая активность АГГС на перевиваемых солидных опухолях мышей. В связи с нерастворимостью данного вещества в воде в качестве альтернативной ЛФ предложена липосомальная, позволяющая повысить биодоступность данного препарата за счет возможности его внутривенного введения, увеличить терапевтическую эффективность и снизить побочные эффекты, путем повышения избирательности действия на опухолевые клетки.

В ходе экспериментов, посвященных разработке липосомальной лекарственной формы АГГС, создана предварительная модель, содержащая в качестве основных компонентов липосомального бислоя яичный лецитин и полиэтиленгликоль-2000-дистеароилфосфатидил-этаноламин в молярных соотношениях 72/1 и в качестве криопротектора сахарозу. При отработке технологических параметров процесса получения ЛФ выяснено, что для обеспечения приемлемого размера получаемых фосфолипидных везикул необходимо порядка 7 циклов экструзии. Отсутствие стабильности липосомальной дисперсии выбранного состава в процессе хранения привело к решению этой проблемы с помощью лиофилизации, которая сохраняла физико-химические показатели ЛФ на первоначальном уровне.

Доказана эффективность данной модельной ЛФ на перевиваемой опухоли мышей - аденокарциноме молочной железы Са-755, которая составила более 60 % ТРО при дозе 5 мг/кг и более 80 % ТРО при дозе 20 мг/кг. Полученные данные биологических экспериментов указывают на перспективность дальнейшего исследования и усовершенствования липосомальной ЛФ с целью получения высокоэффективного отечественного противоопухолевого препарата из группы аналогов соматостатина.

Ключевые слова: аналог гипоталамического гормона соматостатина, липосомы, лекарственная форма, технология получения.

E.V. Sanarova1, A.V. Lantsova1, ZhangXi2, M.V. Dmitrieva1, A.P. Polozkova1, O.L. Orlova1, Z.S. Shprakh1, M.P. Kiseleva1, L.M. Borisova1, Z.S. Smirnova1, N.A. Oborotova1 DEVELOPING A MODEL OF LIPOSOMAL FORMULATION

OF A NEW NATIONAL ANALOGUE HYPOTHALAMIC HORMONE SOMATOSTATIN, WHICH HAS ANTI-TUMOR ACTIVITY

lFSBI «N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow

2I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow

Abstract

At present, the hormone somatostatin analogues is increasing interest in connection with their activity against hormone-dependent tumors, which leads to the need to develop domestic drugs belonging to this group. In the laboratory of chemical synthesis Institute of experimental diagnostics and chemotherapy of FSBI «N.N. Blokhin RCRC» synthesized new domestic pentapeptide somatostatin analogue of hypothalamic hormone (AGGS). In preliminary studies of this substance demonstrated sufficiently high antitumor activity AGGS on transplanted solid tumors of mice. Due to the insolubility of the substance in the water as an alternative liposomal formulation proposed, allowing to increase the

bioavailability of the drug due to the possibility of intravenous administration, increased therapeutic efficacy and reduce side effects, by improving the selectivity of action against tumor cells.

During experiments on the development of the liposomal formulation AGGS pre-established model containing as essential components of the liposomal bilayer and egg lecithin PEG-2000-DSPE in a molar ratio 72/1 and as a cryo-protectant - sucrose. In developing the technological parameters of the process of obtaining dosage form (LF) found that for an acceptable size derived phospholipid vesicles needs about 7 cycles extrusion. The lack of stability of liposomal dispersion selected composition during storage has led to this problem by means of freeze-drying, which kept the physico-chemical parameters LF at the initial level.

The efficacy of the model LF on transplantable tumors of mice - breast adenocarcinoma Ca-755, which was more than 60 % of ITG at a dose of 5 mg / kg and more than 80 % ITG with 20 mg / kg. The findings of biological experiments indicate the prospects for further research and improvement liposomal LF to produce high-performance domestic anticancer drug from the group of somatostatin analogues.

Key words: hypothalamic hormone somatostatin analogue, liposomes, dosage form, technology of production.

Введение

Несмотря на широкий спектр химиотерапев-тических препаратов, применяемых в современной терапии злокачественных новообразований, главным ограничением для применения в клинической практике является выраженная токсичность большинства из них. Это обуславливает перспективность поиска, изучения и разработки лекарственных форм на основе субстанций, обладающих высокой противоопухолевой активностью, но менее выраженными побочными эффектами. К таким веществам относят аналоги пептидного гормона гипоталамуса соматостатина, который, как известно, ингибирует высвобождение гормона роста, тирео-тропина, глюкагона, инсулина, гастрина, а также подавляет пролиферацию многих нормальных и опухолевых клеток [16].

Механизм антипролиферативного действия соматостатинов имеет два компонента: прямой и опосредованный. Прямое противоопухолевое действие обусловлено связыванием с рецепторами со-матостатина на поверхности опухолевых клеток и реализуется путем ингибирования клеточного цикла и эффектов ростовых факторов, а также путем индукции апоптоза. Опосредованное противоопухолевое действие обусловлено ингибированием ангиогенеза и высвобождения ростовых факторов и гормонов [4].

В настоящее время в клинической практике широко применяются такие аналоги соматостатина, как октреотид и лантреотид [17]. Показаниями к их применению в онкологии являются эндокринные опухоли желудочно-кишечного тракта и поджелудочной железы, терапия гормонорезистентного рака предстательной железы. Имеются сообщения об антипролиферативной активности аналогов сома-тостатина в отношении рака молочной железы, рака легкого, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы. Таким образом, создание новых соединений группы соматостатина, изучение их механизма действия и спектра антипролифератив-ной активности, а также разработка их лекарственных форм является перспективным направлением современной науки.

В лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздра-

ва России синтезирован новый отечественный пен-тапептид АГГС. В ходе предварительных исследований данной субстанции выявлена гормональная активность АГГС: он подавлял секрецию сомато-тропного гормона и пролактина.

Также была продемонстрирована высокая противоопухолевая активность АГГС на перевиваемых солидных опухолях мышей: ДМБА-индуцированных опухолях молочной железы крыс, аденокарциноме предстательной железы крыс R-3327-H и перевиваемом раке молочной железы человека РМ-1 у бестимусных мышей [15].

В связи с гидрофобной природой данного препарата на его основе была разработана таблети-рованная лекарственная форма, которая продемонстрировала выраженный противоопухолевый эффект (ТРО более 65 %) на моделях солидных опухолей мышей - РШМ-5, Са-755, АКАТОЛ.

Однако для снижения побочных эффектов и расширения спектра препаратов из этой группы в качестве перспективной предложена липосомаль-ная лекарственная форма АГГС. Выбор липосом в качестве систем доставки для данного препарата обусловлен такими их положительными характеристиками как повышение биодоступности гидрофобных веществ [1; 2; 10-13], увеличение терапевтической эффективности новых и широко применяемых противоопухолевых субстанций [3; 5; 6; 8], в частности за счет повышения избирательности действия [7; 9; 14].

Материалы и методы

Материалы

АГГС (ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России); яичный лецитин E PC S (Lipoid, Германия); холестерин (Sigma, Япония); PEG-2000-DSPE (Lipoid, Германия); сахароза (Химмед, Россия); хлороформ (Химмед, Россия); спирт этиловый 95 % (ФС 42-3072-94).

Приборы и аппаратура

Роторный испаритель BÜCHI Rotavapor R-200 (BÜCHI Labortechnik AG, Швейцария); нано-сайзер Nicomp 380 Submicron Particle Sizer (Particle Sizing Systems, США); экструдер LIPEX™ Northern Lipids, Inc.; Lipex Biomembranes, Inc., Канада); весы

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РАЗРАБОТКА МОДЕЛИ... 75

Sartorius LA 1200 S (Sartorius AG, Германия); ней- ределяли спектрофотометрически с использовани-лоновые мембранные фильтры N66 диаметром 25 ем СО при длине волны 282±3 нм. Определению мм с размером пор 0,45 и 0,22 мкм (Pall Corporation, включения предшествовало отделение «невклю-США; ООО Палл Евразия, Россия); установка суб- чившегося» гидрофобного препарата путем фильт-лимационной сушки "Edwards Minifast DO.2" (Ero рации через нейлоновые фильтровальные мембра-Electronic S.p.A., Италия); ультразвуковая (УЗ) ван- ны Pall с размером пор 0,22 мкм. Кроме того дока-на Trassonic (Elma, Англия). зано, что другие ингредиенты, входящие в состав липосом, лецитин, холестерин и PEG-2000-DSPE Приготовление липосомальной дисперсии также поглощают в этой области. В связи с этим Для получения липосом АГГС использовали измерения проводили против раствора сравнения, «пленочный» метод с модификацией для гидро- представляющего собой «пустые» липосомы, при-фобных веществ. Ингредиенты липосомального готовленные согласно методике получения липо-бислоя яичный лецитин, холестерин, PEG-2000- сом АГГС, только без добавления действующего DSPE растворяли в хлороформе. Субстанцию вещества. АГГС также растворяли в хлороформе и помещали Так как АГГС является гидрофобным веще-в УЗ-ванну на несколько минут, а затем добавляли ством и при получении липосом включается непо-к раствору липидов. Полученный раствор перено- средственно в липидный бислой, количество вклю-сили в круглодонную колбу и отгоняли раствори- ченного препарата (КВП) определяли как соотно-тель при температуре выше температуры фазового шение концентрации препарата в липосомальной перехода лецитина (+37 °С) на роторном испарите- дисперсии после фильтрации к концентрации ле до формирования однородной полупрозрачной АГГС в липосомальной дисперсии, полученной липидной пленки. Полученную пленку сушили под после гидратации липидной пленки. Показатель вакуумом до полного удаления органического рас- выражали в процентах: творителя, а затем гидратировали раствором крио- протектора. В результате формировалась дисперсия Сф больших мультиламеллярных (многослойных) ли- КВП — x Ш%, где посом (БМЛ), которую измельчали с целью получения малых однослойных липосом (МОЛ) на экс- трудере последовательно через нейлоновые фильт- К™ - количество ™™ого препарата, %, Сф - концентрация АГГС в дисперсии после фильтрации, ровальные мембраны с размером пор 0,45 мкм и мг/мл^ г -г г 0,22 мкм. Сп - концентрация АГГС в дисперсии после получения, мг/мл. Определение размеров липосом На всех стадиях получения липосом произ- Ре3ультаты и 0бСуЖдение водили измерение размера везикул на наносайзере Nicomp 380 Submicron Particle Sizer. При этом 1 мл Выбор модельного состава липосом липосомальной дисперсии (в случае с лиофилиза- Выбор компонентов для создания ЛЛФ том его предварительно разбавляли 5,8 мл воды для АГГС основывался на их функциональном назна-инъекций) помещали в мерную колбу вместимо- чении. В качестве основного компонента, форми-стью 100 мл и доводили водой до метки. Далее от- рующего липосомальный бислой, использовали бирали 1 мл липосомальной дисперсии и переноси- яичный лецитин, что объясняется наличием у него ли в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили таких положительных с технологической и биоло-объем водой до метки. Полученный раствор поме- гической точек зрения свойств как приемлемая щали в кювету и проводили измерения. температура фазового перехода (+ 37 °с), хорошая растворимость в органических растворителях, био-ОпределениерНлипосомальной дисперсии совместимость и природное происхождение. Холе-и лиофилизата стерин вводили в состав липосом для придания Проводили потенциометрическое определе- бислою необходимого уровня жесткости и повы-ние значения рН в липосомальной дисперсии и шения стабильности фосфолипидных везикул в лиофилизате. При измерении в лиофилизированной кровотоке. Кроме того, существует проблема, свя-форме содержимое флакона разбавляли 6 мл воды занная с захватом липосом после введения в орга-для инъекций. низм клетками ретикулоэндотелиальной системы, состоящей в основном из макрофагов, и быстрым Определение количества препарата выведением. Одним из способов предотвращения включенного в липосомальный бислой этого явления является создание stealth-липосом, В электронном спектре поглощения спирто- поверхность которых гидрофильна за счет встраи-вого раствора субстанции АГГС в области от 200 вания в билипидный слой фосфолипида, «сшитого» до 800 нм обнаружены максимумы при 282±3 нм, с ПЭГ, что приводит к повышению осмотического 290±3 нм, причем наиболее интенсивным является давления вокруг везикул и препятствует их сбли-пик на уровне 282±3 нм. жению с клетками. Для создания stealth-липосом В связи с этим количественное содержание АГГС в его состав вводили полиэтиленгликоль-АГГС, включенного в липосомальный бислой, оп- 2000-дистеароилфосфатидилэтаноламин (PEG-

№ 4/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

2000-Э8РБ). На базе этих трех компонентов получены модельные составы ЛЛФ. Качество этих составов оценивали по следующим основным параметрам - средний размер липосом после экструзии, рН липосомальной дисперсии, КВП и концентрация АГГС в липосомальной дисперсии. Полученные результаты приведены в табл. 1.

В связи с тем, что за счет особенностей строения стенки опухолевых сосудов в ней преимущественно накапливаются частицы, имеющие диаметр порядка 80-160 нм, данные размеры приняты в качестве оптимальных. Из предложенных модельных составов только составы № 6-8 позволили получить после проведения всех необходимых технологических операций липосомы со средним диаметром меньше 160 нм. Однако из трех составов с приемлемым размером везикул минимальные потери в результате экструзии и фильтрации, а соответственно -и самое высокое количество включенного препарата -наблюдали в составе №7, не содержащем холестерин. В составе №6 соотношение компонентов соответствовало составу №7, но при этом он еще содержал холестерин, что в свою очередь отрицательно сказалось на уровне КВП и концентрации препарата. Увеличение молярного содержания лецитина в составе №8 не позволило увеличить концентрацию препарата, в тоже время КВП по сравнению с составом № 7 снизилось с 96 % до 65 %. Представленные результаты экспериментов обосновывают предварительный выбор состава №7 в качестве объекта для проведения дальнейших исследований.

Выбор раствора

для гидратации липидной плёнки

Поскольку добавление криопротектора, необходимого для проведения стабилизации липосом с помощью лиофилизации, может быть произведено как на стадии гидратации липидной пленки, если это не осложняет дальнейший технологический процесс, так и после экструзии липосомальной дисперсии, проводили исследования по выбору растворителя для гидратации липидной пленки, получаемой на первой технологической стадии в процессе наработки ЛЛФ. В качестве растворителей для этой цели выбрали воду для инъекций, как наиболее часто используемый индифферентный растворитель, и 8 %-ный р-р сахарозы, который использовали в качестве криопротектора. Оценку влияния растворителя на качество липосомальной дисперсии АГГС проводили по параметрам: внешний вид липосомальной дисперсии, средний размер липосом, рН липосомальной дисперсии. Результаты исследования приведены в табл. 2. Сравнивая качественные характеристики полученных липо-сомальных дисперсий можно сделать вывод о возможности введения криопротектора как на стадии гидратации липидной пленки, так и после экструзии. Однако отмечено, что при использовании в качестве р-ра для гидратации воды для инъекций процесс экструзии затрудняется из-за формирования густой липо-сомальной дисперсии с большим количеством пены. В связи с этим наиболее технологичен метод, при котором гидратация проводится р-ром криопротектора.

Разработка технологии получения ЛЛФ

После выбора р-ра для гидратации, оценивали влияние числа циклов экструзии через фильтры с размером пор 0,22 мкм на диаметр липосом. Оказалось, что проведение 7 циклов экструзии позволяет получить липосомы с оптимальным размером около 150 нм (табл. 3). При дальнейшем увеличении числа циклов экструзии уменьшения размеров липосом не отмечалось.

С целью оценки стабильности липосомаль-ной дисперсии, полученной согласно выбранной выше технологии, проводили мониторинг показателей качества (размера липосом, значения рН, концентрации препарата в липосомальной дисперсии) при хранении при температуре +4 °С (табл. 4).

По истечении 3 недель хранения размеры липосом и концентрация препарата в липосомаль-ной дисперсии сохранялись на первоначальном уровне, однако значение рН упало с 7,2 до 6,4. Дальнейшее хранение в течение еще 3 мес привело к выпадению осадка и снижению значения рН до 4,5, а концентрации препарата - на 14 % от первоначального значения. Приведенные данные свидетельствуют о нестабильности липосомальной дисперсии и необходимости проведения ее стабилизации с помощью процесса лиофилизации. В ходе лиофилизации с сахарозой в качестве наиболее эффективного криопротектора для липосомальных дисперсий значительного изменения размеров ли-посом не отмечалось (рис. 1 и 2).

Заключение

В ходе экспериментов, посвященных разработке ЛЛФ нового отечественного АГГС, создана модель, содержащая в качестве основных компонентов липосомального бислоя яичный лецитин и полиэтиленгликоль-2000-дистеароилфосфатидил-этаноламин в молярных соотношениях 72/1 и сахарозу в качестве криопротектора. При отработке технологических параметров процесса получения ЛФ выяснено, что для обеспечения приемлемого размера получаемых фосфолипидных везикул необходимо порядка 7 циклов экструзии. Отсутствие стабильности липосомальной дисперсии выбранного состава в процессе хранения привело к решению этой проблемы с помощью лиофилизации, которая сохраняла физико-химические показатели ЛФ на первоначальном уровне.

Доказана эффективность данной модельной ЛЛФ на перевиваемой опухоли мышей - аденокар-циноме молочной железы Са-755, которая составила более 60 % ТРО при дозе 5 мг/кг и более 80 % ТРО при дозе 20 мг/кг. Полученные данные биологических экспериментов указывают на перспективность дальнейшего исследования и усовершенствования ЛЛФ с целью получения высокоэффективного отечественного противоопухолевого препарата из группы аналогов соматостатина.

Работа поддержана стипендией Президента РФ на 2015-2017гг.

Таблица 1

Модельные^ составы липосомальной лекарственной формы АГГС

Состав № Молярное соотношение компонентов в составе ЛЛФ Средний 0 липосом, нм* рН* КВП, %* Концентрация, мг/мл*

препарат/ лецитин лецитин/ холестерин/РЕО-2000-DSPE

1 1 33 36:14:1 Осадок - - -

2 1 66 52:16:1 192 6,9 78 0,52

3 1 66 18:14:1 - 7,1 83 0,55

4 1 66 72:14:1 191 6,9 88 0,61

5 1 66 146:15:1 192 7,4 89 0,59

6 1 44 72:14:1 149 7,1 79 0,79

7 1 44 72:0:1 151 7,2 96 0,96

8 1 49 109:16:1 157 7,2 65 0,97

*приведены средние значения из 3-х измерений

Выбор растворителя для гидратации липидной пленки при получении липосом АГГС

Таблица 2

№ Растворитель Средний 0 липосом, нм* рН* липосомальной дисперсии

БМЛ МОЛ

1 Вода для инъекций 318 151 6,9

2 Раствор сахарозы 356 156 7,1

* приведены средние значения из 3 измерений

Таблица 3

Влияние экструзии на размер липосом АГГС_

n циклов Средний размер МОЛ, нм*

1 270

3 200

5 161

7 153

9 152

13 150

* приведены средние значения из 3 измерений

Таблица 4

Анализ модельного состава липосомальной лекарственной формы АГГС после получения и в процессе хранения

Параметры качества липосомальных дисперсий

Размеры липосом нм;

Значение рН*

Концентрация препарата, мг/мл*

н

е

F

ул о п ле

с о п

я и н е н а

ъ

Ч е н

я и н е н

а р

X

п е н

н

е

V

ул о п ле

с о п

я и н е н

а р

У

п е н

я и н е н

а р

У

п е н

н

е

V

ул о п ле

с о п

я и н е н

а р

У

п е н

156

149

140

7,2

6,4

4,5

0,83

0,83

0,71

* приведены средние значения из 3 измерений

Рис. 1. Средний размер липосом АГГС после получения: данные наносайзера Nicomp 380 Submicron Particle Sizer (А); данные электронной микроскопии (Б).

Рис. 2. Средний размер липосом АГГС после лиофилизации: данные наносайзера Nicomp 380 Submicron Particle

Sizer (А); данные электронной микроскопии (Б).

Литература

1. Гулякин ИД, Санарова ЕВ, Ланцова А.В. и др. Разработка наноструктурированной модели лекарственной формы производного индолокарбазола ЛХС-1208 // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 78.

2. Гулякин И.Д, Николаева Л.Л, Санарова Е.В. и др. Применение фармацевтической технологии для повышения биодоступности лекарственных веществ // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, №3.

- С. 101-8.

3. Дмитриева МВ, Оборотова НА, Санарова Е.В. и др. Наноструктурированные системы доставки противоопухолевых препаратов // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 4. - С. 21-7.

4. Кубасова И.Ю, Борисова ЛМ, Киселева М.Н. и др. Поиск потенциальных противоопухолевых препаратов среди аналогов гипоталамического гормона соматостатина. // Российский биотерапевтический журнал. -2006. - Т. 5, № 3. - С. 128-33.

5. Ланцова А.В., Барышникова МА, Санарова Е.В. и др. Изучение в системе in vitro наноструктурированной лекарственной формы лизомустина // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 31.

6. Ланцова А.В., Сапрыкина Н.С., Санарова Е.В. и др. Изучение противоопухолевой активности нанострукту-рированной липосомальной формы лизомустина in vivo // Российский биотерапевтический журнал. - 2012.

- Т. 11, № 2. - С. 32.

7. Оборотова Н.А. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35, № 5. - С. 30.

8. Оборотова НА, Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы в клинической онкологии // Успехи современной биологии. - 2009. - Т. 121, № 5. - С. 464.

9. Оборотова НА, Санарова Е.В. Роль новых фармацевтических технологий в повышении избирательности действия противоопухолевых препаратов // Российский химический журнал. - 2012. - Т.ЬУ1, № 3-4. - С. 33-40.

10. Санарова Е.В, Полозкова А.П., Меерович И.Г. и др. Влияние технологических факторов на качество липо-сомальной лекарственной формы нового фотосенсибилизатора - тиосенса // Химико-фармацевтический журнал. - 2011. - Т. 45, № 12. - С. 32-6.

11. Санарова Е.В, Смирнова З.С., Полозкова А.П. Биофармацевтические исследования новой липосомальной лекарственной формы Тиосенса // Биофармацевтический журнал. - 2011. - Т. 3, № 6. - С. 33-6.

12. Санарова Е.В., Ланцова А.В., Оборотова Н.А. Липосомальные системы доставки лекарственных веществ: свойства и технологические особенности получения // Биофармацевтический журнал. - 2014. - Т. 6, № 4. -С. 3-13.

13. Санарова Е.В, Ланцова А.В., Полозкова А.П. и др. Эффективность липосомальной системы доставки гидрофобного противоопухолевого фотосенсибилизатора Тиосенса // Российские нанотехнологии. - 2015. - Т. 10, № 5-6. - С. 136-43.

14. Толчева Е.В, Оборотова НА. Липосомы как транспортное средство для доставки биологически активных молекул // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 1. - С. 54-61.

15. Яворская Н.П., Голубева И.С, Смирнова З.С. и др. Противоопухолевая активность цифетрелина на основе высокодисперсной эмульсии // Российский биотерапевтический журнал. - 2008. - Т. 7, № 1. - С. 33.

16. Dalm V.A., Hoñand L.J., Ferone D. et al. The role of somatostatin and somatostatin analogs in the pathophysiology of the human immune system // J Endocrinol Invest. - 2003. - 26. - Р. 94-102.

17. Danesi R., Agen C, Benelli U. et al. Inhibition of experimental angiogenesis by somatostatin analog octreotide acetate // Clin. Cancer Res. - 1997. - 3. - Р. 265-72.