CC BY
10
DOI 10.31718/2077-1096.20.3.185 УДК 57.043:615.014.41:579
Ананына Г.6., СтепанюкЛ.В., Висеканцев 1.П., Петров 1.В.
ВПЛИВ УМОВ Г1ПОТЕРМ1ЧНОГО I НИЗЬКОТЕМПЕРАТУРНОГО ЗБЕР1ГАННЯ НА ЖИТТеЗДАТН1СТЬ 1ММОБ1Л1ЗОВАНОГО ПРОБ1ОТИКА BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM
1нститут проблем крюбюлоги i крiомедицини НАН Укра'ни, м.Хармв
Актуальною проблемою медицини в наступний час е дисбози, як виникають в зв'язку з д'ею на ор-ганзм людини ряду негативних фактор'т, а також зниження '¡мунного статусу. Проритетним на-прямком сучасно)' б'1отехнологи е створення iммобiлiзованих в гелевих носях проботичних препа-ратiв, що можуть використовуватися для корекци дисб'оз'т. lммобiлiзацiя клтин проботиюв в гранулах альгнатного гелю захищае )х в'д пошкоджуючоi ди бар'ерних функщй шлунково-кишкового тракту. Мета досл'дження - вивчення впливу г'тотерм'чного та низькотемпературного зберган-ня на життездатнсть 'шмоб'т'зованого в гранулах альгнатного гелю проботика Bifidobacterium bifidum. Бактер'альнi клiтини iммобiлiзували в гранулах немодифкованого гелю (1%-ний розчин альгнату натрю) та в гранулах модифкованого захисним сахарозо-молочно-лактозним середо-вищем гелю. Гоанули з iммобШзованими бактер'альними клтинами розкладали в крiопробiрки. Зра-зки збергали при температурах 4, -12, -20, -80 та -196°С протягом 12 м'юяц^в (термн дослджен-ня). Встановлено, що збергання при температурах -80 та -196°С забезпечувало високу житте-здатнсть проботика протягом всього термiну досл'дження. В процес збергання при температурах 4 та -12°С загибель бактерш в'дзначали через 1-3 мсяц в залежностi в'д складу гелевого нося, а при температурi -20°С - через 6-9 мсящв. Висновки: Встановлено, що на життездатнсть клтин культури B. bifidum, iммобiлiзованих в гранулах альгнатного гелю, впливають як темпера-турн'1 режими збергання, так i модифка^я гелю введенням в його склад сахарозо-молочно-лактозного середовища. При температурах -80, -196 °С 'шмобШзоваш бактери не гинуть протягом року (термiн спостергання). Пд час збергання при температурах 4, -12, -20 °С бльш висок показники життездатностi i бiльшi термiни збереженостi клтин б'ф 'добактерш спостергали в зразках гранул альгнатного гелю, модифкованого сахарозо-молочно-лактозним середовищем. Показано, що в процес збергання за низьких температур клтин B.bifidum, iммобiлiзованих в немоди-фкованому i модифкованому доданням сахарозо-молочно-лактозного середовища альгнатному гел'!, )х культуральн'1 та морфологiчнi властивостi не змнювалися.
Ключовi слова: пробютики, iMMo6ini3ai^, reneBi гранули, rinoTepMi4He збертання, низькотемпературне збер^ання, сахарозо-молочно-лактозне захисне середовище, життездатнють. Робота виконана в рамках 6!6омчо( теми НАН УкраГни «Вивчення механiзмiв ^опошкоджень мiкроорганiзмi6, !ммо6ь лiзо6аних 6 гелевих ноаях з рiзними фiзико-хiмiчними влас-тивостями, п!6 час низькотемпературного зберiгання та лiофiлiзацii'» (№ держреестрацп 0118 U 001187).
Вщомо, що у кишечнику дорослоТ людини мн ститься коло 500 в^Фв бактерш-симбюни^в, як приймають безпосередню участь у процеа тра-влення. В здоровому органiзмi якюний i ктькю-ний шдивщуальний склад мiкробiоти залишаеть-ся в стаж ^зюлопчно'Т рiвноваги - нормобюце-нозу (еубюзу) [1].
В останнш час значна увага придтяеться проблемi дисб^в, як виникають пщ дiею на ор-гашзм людини ряду негативних факторiв таких, як використання достатньо токсичних лкарських засобiв (антибютики, хiмiопрепарати), а також зниження iмунного статусу та розвитку стреав рiзного генезу. Вс ц фактори можуть призводи-ти до порушення рiвноваги ктькюного i якюного стану кишковоТ флори (дисбюзу), що негативно впливае на здiбнiсть кишечника до травлення та е основою ключного прояву багатьох хвороб [1,2].
Вщновлення порушеного мiкробiоценозу кишечника е перспективним напрямком у комплексному лкуванш цтого ряду захворювань, що су-проводжуються дисбюзом. Використання пробн отиш, дiя яких обумовлена, насамперед, анта-
гонютичною активнютю щодо умовно-патогенних бактерш, е одним з найбтьш фiзiологiчних ме-тодiв корекци дисбюзу [3,4].
Одним з прюритетних напрямш сучасно' бю-технологп е створення препара^в iммобiлiзова-них в гранулах альпнатного гелю клiтин пробю-тикiв, що дозволяе захистити кл^ини пробiотикiв вiд пошкоджуючо'' дм природних захисних бар'ерiв ШКТ, транспортувати до бютопу лока-льнi дози пробютиш, пiдвищити шанси на коло-шзацш вiдповiдних дiлянок бiотопу пробютич-ними штамами [5,6]. Вплив умов гiпотермiчного та низькотемпературного зберiгання на життездатнють i властивостi iммобiлiзованих в гелевих ноаях пробютиш, зокрема Bifidobacterium bifidum, вивчено недостатньо.
В зв'язку з цим метою дано' роботи було про-ведення дослщжень щодо визначення впливу умов гiпотермiчного та низькотемпературного збер^ання на життездатнiсть iммобiлiзованого в гранулах альпнатного гелю пробютика Bifidobac-terium bifidum.
Матерiали та методи дослiдження
Об'ектом дослщжень були бактери Bifidobacterium bifidum, штам 1 (B.bifidum), що були отри-ман з ФБУН «Московський науково-дослiдний iнститут епщемюлоги i мiкробiологil iм. Г.Н. Габ-
рiчевського» Росспоживнагляду (РФ).
Культуру бактерш B.bifidum вирощували у нашвагаровому поживному середовищi Блауро-кка [7] при температурi 37°С впродовж 48 годин.
Кл^ини B.bifidum iммобiлiзували в альпнат-ному гелi методом йонотранспортного гелеутво-рення в модифкаци [8].
Бактерп вщмивали тричi фiзiологiчним розчи-ном вщ ростового середовища шляхом центри-фугування при 2000д та ресуспендували у фiзi-ологiчному розчинi для отримання бактерiальноl суспензи, яку змiшували з 2% розчином альпна-ту натрш у вiдношеннi 1:1 (немодифiкований гель).
Для iMMo6mi3a^'i кттин в модифкованому гелi |'х суспендували у розчиш K0Mn0HeHTiB саха-розо-молочно-лактозного (СМЛ) середовища [9].
Отримаш сумiшi набирали в шприц фiрми Becton Dickinson (Ымеччина) з об'емом 2 мл i дь аметром голки 0,6 мм та крапали в 0,2М розчин CaCl2 для утворення гранул, як витримували у хлоридi кальцiю впродовж 20 хв для 'х стабтн зацп Ca-альгiнатною оболонкою [10,11].
Пюля стаб^зацп у розчинi CaCl2 гранули промивали стерильним фiзiологiчним розчином i пiдсушували на стерильному фiльтрувальному паперi (рис. 1).
Рис. 1. lMMo6rni3oeaHi кл'¡тини B.bifidum в гранулах немодифкованого гелю (а); iMMo6rni3oeaHi клiтини B.bifidum в гранулах модифкованого середовищем СМЛ гелю (б).
Концентра^я кл^ин бiфiдобактерiй в гранулах альпнату натрш становила 10 кл/мл, а в гранулах альпнату натрш з доданням середо-виша СМЛ - 108 кл/мл.
Пiсля iммобiлiзацil клiтин гранули розкладали по 10 шт. у крiопробiрки фiрми Nunc (США) з ро-бочим об'емом 1,0 мл i розмiщали 'х на довго-строкове зберiгання при температурах 4; -12; -20; -40; -80; -196°С. Охолодження зразш до 4°С i заморожування до -12; -20; -40 та -80°С проводили з неконтрольованими швидкостями шляхом вмщення крiопробiрок у холодильш камери. Заморожування зразкiв до -196°С проводили безпосереднiм зануренням крiопробiрок до рiд-кого азоту.
Контролем були iммобiлiзованi клiтини куль-тури пробiотика B. bifidum в гранулах немодифн кованого гелю (контроль №1) та в гранулах гелю, модифкованого середовищем СМЛ (контроль №2) до збер^ання.
Вiдiгрiв зразш пiсля заморожування i зберi-гання при низьких температурах проводили на водянiй банi при 37°С.
Гелевi гранули з iммобiлiзованими клiтинами розчиняли в 4% розчиш ЕДТА (ЕДТА-№2 2H2O, Торговий Дiм "Хотей", Китай ) [12], для чого 10 гранул вмщали в 10 мл розчину ЕДТА. Пюля розчинення гранул iз отримано' суспензи робили
сершш розведення на фiзiологiчному розчиш з подальшим культивуванням в поживному сере-довищi Блаурокка.
Життездатнiсть культури B. bifidum визначали шляхом пщрахунку макроколонш, якi формува-лися у нашвагаровому середовищi Блаурокка ш-сля шкубування зразкiв при температурi 37°С протягом 48 годин (колонiеутворюючi одиниц -КУО).
Зразки зберiгали при температурах 4; -12; -20; -40; -80; -196°С протягом 12 мюя^в (термш спостереження).
Культуральнi властивосл B. bifidum визначали по вiзуальному спостереженню макроколонiй, що сформувалися у поживному середовищi Блаурокка.
Морфологiчнi властивост мiкробних культур пробiотикiв вивчали за допомогою св^ловоТ мк-роскопи мазш, що були забарвленi за Грамом.
Статистичну обробку результат проводили з використанням програми «Exel» («Microsoft», США). Даш наводили у lg числа КУО/мл. Вщмшносп, що спостерiгалися, вважали стати-стично значущими при р <0,05 [13].
Результати та обговорення
Було проведено 2 сери експеримешпв.
а) - збер^ання кл^ин B.bifidum, що були
б
а
iммобiлiзованi в гранулах немодифкованого гелю (BapiaHT 1);
б) - збеpiгaння кттин B.bifidum, що були iммобiлiзовaнi в гранулах 1%-го гелю, модифкованого середовищем СМЛ (вapiaнт 2).
Встановлено, що пщ час збеpiгaння бiфiдобa-ктерш, iммобiлiзовaних в гранулах немодифко-ваного гелю протягом одшеТ доби при 4, -12, -20°С ÏX життездатнють значуще знизилася з 9,52
(контроль №1) до 7,39-7,3 lg КУО/мл. Життездатнють iммобiлiзовaних бiфiдобaктеpiй пiсля збе-piгaння протягом 1 доби при темпеpaтуpi -80 та -196°С залишалася на вихщному piвнi.
Модифiкaцiя складу гелю середовищем СМЛ забезпечувала збереження через 1 добу ктько-ст життездатних штин на вихiдному piвнi при вах температурах збеpiгaння (рис. 2).
В. bifidum
12
10
> 8
S 6
S 4
Контроль
-12 -20 Температура збер!гання, "С
-80
-196
Рис. 2. Життездатнсть iммобiлiзованих клiтин B.bifidum пюля зберiгання за рiзних температур протягом 1 доби: ■ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах немодифкованого гелю; □ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах модифкованого середовищем СМЛ гелю; * - рiзниця статистично значуща по вiдношенню до контролю №1 (p <0,05).
Рис. 3. Життездатшсть 'шмоб'л'зованих клтин B.bifidum тсля зберiгання при температурi 4"С: ■ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах немодифкованого гелю; □ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах модифкованого середовищем СМЛ гелю; * - рiзниця статистично значуща
по вiдношенню до контролю №1; # - рiзниця статистично значуща по вiдношенню до контролю №2 (p <0,05)
Життездатнють iммобiлiзовaних бiфiдобaкте-рш (вapiaнти 1,2), що збер^алися при темпера-туpi 4°С протягом 1 мюяця, знизилася з 9,52 до 3,3 lg КУО/мл та з 8,85 до 3,9 lg КУО/мл вщповн дно. Через 3 мюяц збер^ання в цих умовах бактерп загинули (рис. 3).
Життездатнють iммобiлiзовaних бiфiдобaкте-рш (вapiaнти 1,2), що збер^алися при темпера-
туpi -12°С протягом 1 мюяця, знизилася з 9,52 до 3,54 lg КУО/мл та з 8,85 до 4,25 lg КУО/мл вщповщно. Через 3 мюяц збер^ання в цих умовах бактери, iммобiлiзовaнi у немодифкованому гелi (вapiaнт 1) загинули (рис. 4).
Рис. 4. Життездатшсть 'шмоб'л'зованих клтин В.ЫМит тсля зберiгання при температур'!-12°С: ■ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах немодифкованого гелю; □ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах модифкованого середовищем СМЛ гелю; * - рiзниця статистично значуща по вiдношенню до контролю №1; * - р'зниця статистично значуща по в'дношенню до контролю №2 (р <0,05)
В.ЬИШит
12
10
И [*1 #
¿1 #
« Л
I 1 * ■
1 1 1 1
Контроль
12
ТерыНн збер1гання, м1с.
Рис. 5. Життездатнсть iммобiлiзованих клiтин В.ЫМит псля зберiгання при температурi -20°С: ■ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах немодифкованого гелю; □ штини бiфiдобактерiй в гранулах 1%-го гелю, модифкованого доданням середовища СМЛ; * - рiзниця статистично значуща по вiдношенню до контролю №1; * - р'зниця статистично значуща по в'дношенню до контролю №2 (р <0,05)
Пщ час збер^ання бiфiдобактерiй, що були iммобiлiзованi в гранулах 1%-го альпнатного гелю, модифкованого середовищем СМЛ, при те-мпературi -12°С протягом 3 мюя^в показники життездатносл знизилися з 8,85 1д числа КУО до 1,75.
При температурi -20°С кшьмсть життездат-них iммобiлiзованих в гранулах 1% альпнатного гелю кл^ин бiфiдобактерiй через 1 мюяць пони-
зилася з 9,52 до 4,65 1д КУО/мл, а через 6 мюя-^в - до 3,0 1д КУО/мл (рис. 5). 1з збтьшенням термшу збер^ання дослщы зразки (варiанти 1,2) загинули.
Життездатнють iммобiлiзованих бiфiдобакте-рш (варiанти 1,2), що збер^алися при темпера-турi -80 та -196°С протягом 12 мюя^в не в^з-нялася вiд контролю (рис. 6,7).
B.bifidum
rfl J-. 1 i i «
Контроль 1 3 6 9 12
Термш зберкання, Mic.
Рис. 6. Життездатшсть 'шмоб'л'зованих клтин B.bifidum тсля зберiгання при температурi -80"С: ■ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах немодифкованого гелю; □ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах 1%-го гелю, модифкованого доданням середовища СМЛ; * - рiзниця статистично значуща по вiдношенню до контролю №1; # - рiзниця статистично значуща по вiдношенню до контролю №2 (p <0,05)
Рис. 7. Життездатшсть 'шмобШзованих клтин B.bifidum тсля зберiгання при температурi-196С: ■ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах немодифкованого гелю; □ - клiтини бiфiдобактерiй в гранулах 1%-го гелю, модифкованого доданням середовища СМЛ; * - рiзниця статистично значуща по вiдношенню до контролю №1; # - рiзниця статистично значуща по вiдношенню до контролю №2 (p <0,05)
Пщ час вивчення культуральних та морфоло-пчних властивостей пробютика B.bifidum пюля iммобiлiзaцiï в гранулах немодифкованого та модифкованого альпнатного гелю та збер^ання при piзних температурах було встановлено, що склад гелю не впливав на характеристики мак-роколонш бiфiдобaктеpiй та динамку Тх форму-вання. Макроколони B.bifidum пюля iммобiлiзaцiï i пюля збер^ання за вказаних температурних pежимiв мали вигляд комет i не в^^знялися вщ контролю.
При мiкpоскопiï мазкв, як були забарвлен за Грамом, у полi зору виявлялися Грам-негативн палички, як в^знялися полiмоpфiзмом: палич-ки потовщенi на кiнцiвкaх ^фуркаци, булави) або у виглядi букви V. Рiзницi у моpфологiï мiж
контрольними зразками, та зразками, як зберн галися у piзних умовах, не визначалося.
Висновки
1. Показано, що на життездатнють кл^ин культури B. bifidum, iммобiлiзовaних в гранулах альпнатного гелю, впливають як температуры режими збер^ання, так i модифка^я гелю доданням до його складу захисного середовища СМЛ. При температурах -80, -196°С iммобiлiзовaнi бактерп не гинуть протягом року (термш спостер^ання).
2. Пiд час збер^ання при температурах 4, -12, -20°С бiльш високi показники життездaтностi i бiльшi теpмiни збеpеженостi клiтин бiфiдобaкте-piй спостеpiгaли в зразках гранул альпнатного
10.
11.
12.
13.
Ding WK, Shah NP. Effect of various encapsulating materials on the stability of probiotic bacteria. J Food Sci. 2009 Mar;74(2):M100-7. doi: 10.1111/j.1750-3841.2009.01067.x. Liaskovskiy TM, Podgorskiy VS. Otsenka probiotikov, soglasno rekomendatsiiam mizhdunarodnykh organizatsiy (FAO/WHO) [Текст] [Evaluation of probiotics according to the recommendations of international organizations]. Mikrobiol.zhurn. 2005; 67(6):104-112. (Russian).
Poliak MS, Sukharevich VI, Sukharevich ME. Pitatel'nyie sriedy dlia mieditsinskoy mikrobiologii [Culture media for medical microbiology]. SPb; 2002. 80 s. (Russian).
Jen-Horny Tsen, Hui-Ying Huany, V. An-Erl King. Enhancement of freezing-resistance of Lactobacillus rhamnosus by the application of cell immobilization. The Journal of General and Applied Microbiology. 2007; 53(3): 215-219.
Pat. №56674 Ukraina MPK C12N 1/04. Sposib konservuvannia kul'tury Bifidobacterium bifidum LVA-3. Ananina GiE, Gol'tsev AM, Vysekantsev IP ta in. Zaiavl. 18.06.2010. Opubl. 25.01.2011. Biul. №2. (Ukraian).
Zelikin AN, Ehrhardt C, Healy AM. Materials and methods for delivery of biological drugs. Nature Chemistry. 2016; 8, (11): 9971007.
Sharma A, Sharma S, Khuller GK. Lectin-functionalized poly (lac-tide-co-glycolide) nanoparticles as oral/aerosolized antitubercular drug carriers for treatment of tuberculosis. J. Antimicrob. Chemother. 2004; 54(4): 761-766.
Peek L J, Middaugh CR, Berkland C. Nanotechnology in vaccine delivery. Adv. Drug Deliv. Rev. 2008; 60(8): 915-928. Lakin GF. Biometriia. Uchebnoie posobiie dlia biol. spets. vuzov [Biometrics. Study guide for biol. specialist. Universities]. M: Vysshaia shkola. 1990. 352 s. (Russian).
гелю, модифкованого середовищем СМЛ.
3. Показано, що в процеа збер^ання за низь-ких температур штин B.bifidum, iммобiлiзованих в немодифкованому i модифкованому середовищем СМЛ альпнатному гел^ ïx культуральн та морфолопчы властивосл не змшювалися.
Представлен в статт результати можуть бути використан в подальшому в розробц теxнологiй виробництва пробiотичниx препаратiв, продук^в дieтичного харчування.
Лiтература
1. Flint HJ, Scott KP, Louis P, Duncan SH. The role of the gut microbiota in nutrition and health. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2012 Sep 4;9(10):577-89. doi: 10.1038/nrgastro.2012.156. eCollection 2012.
2. Tkach SM, Puchkov KS, Sizenko AK. Kishechnaia microbiota v norme i pri patologii [ Intestinal microbiota in health and disease. Modern approaches to the diagnosis and correction of intestinal dysbiosis]. K: Tvisa LTD; 2014. 149 s. (Russian).
3. Vorob'ov AA, Bondarenko VM, Lykova EA, Grogor'iev AV, Ma-tsulevich TM. Mikroekologicheskiie narusheniia pri klinicheskoy patologii i ikh korrektsiia bifidocoderzhashchimi probiotikami [Microecological disorders in clinical pathology and their correction with bifid-containing probiotics]. Vestnik RAMN. 2004; 2:13-17. (Russian)
4. Tokareva NV. Korrektsiia i profilaktika disbakterioza [Correction and prevention of dysbiosis]. Effektivnaia farmakoterapiia. Gastroenterologiia. 2011; 3:77-85. (Russian).
Реферат
ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ГИПОТЕРМИЧЕСКОГО И НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОГО ХРАНЕНИЯ НА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ ИММОБИЛИЗОВАННОГО ПРОБИОТИКА BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM Ананьина А.Е., Степанюк Л.В., Висеканцев И.П., Петров И.В.
Ключевые слова: пробиотики, иммобилизация, гелевые гранулы, гипотермическое хранение, низкотемпературное хранение, сахарозо-молочно-лактозная защитная среда, жизнеспособность.
Актуальной проблемой медицины в настоящее время являются дисбиозы, которые возникают в связи с воздействием на организм человека ряда негативных факторов, а также снижения иммунного статуса. Приоритетным направлением современной биотехнологии является создание иммобилизованных в гелевых носителях пробиотических препаратов, которые могут использоваться для коррекции дисбиозов. Иммобилизация клеток пробиотиков в гранулах альгинатного геля защищает их от повреждающего действия барьерных функций желудочно-кишечного тракта. Цель исследования - изучение влияния гипотермического и низкотемпературного хранения на жизнеспособность иммобилизованного в гранулах альгинатного геля пробиотика Bifidobacterium bifidum. Бактериальные клетки иммобилизовали в гранулах немодифицированного геля (1% -ный раствор альгината натрия) и в гранулах модифицированного защитной сахарозо-молочно-лактозной средой геля. Гранулы с иммобилизованными бактериальными клетками раскладывали в криопробирки. Образцы хранили при температуре 4, -12, -20, -80 и -196°С в течение 12 месяцев (срок исследования). Установлено, что хранение при температурах -80 и -196°С обеспечивало высокую жизнеспособность пробиотика в течение всего срока исследования. В процессе хранения при температурах 4 и -12°С гибель бактерий отмечали через 1-3 месяца в зависимости от состава гелевого носителя, а при температуре -20°С - через 6-9 месяцев. Выводы: Установлено, что на жизнеспособность клеток культуры B. bifidum, иммобилизованных в гранулах альгинатного геля, влияют как температурные режимы хранения, так и модификация геля введением в его состав сахарозо-молочно-лактазной среды. При температурах -80, -196°С иммобилизованные бактерии не погибают в течение года (срок наблюдения). Во время хранения при температурах 4, -12, -20°С более высокие показатели жизнеспособности и большие сроки сохранности клеток бифидобактерий наблюдали в образцах гранул альгинатного геля, модифицированного сахарозо-молочно-лактозной средой. Показано, что в процессе хранения при низких температурах клеток B.bifidum, иммобилизованных в немодифицированном и модифицированном добавлением сахарозо-молочно-лактозной среды альгинатном геле, их культуральные и морфологические свойства не изменялись.
Summary
IMPACT OF HYPOTHERMAL AND LOW TEMPERATURE STORAGE CONDITIONS ON VIABILITY OF IMMOBILIZED PROBIOTICS BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM
Ananina G.E., Stepanyuk L.V., Vysekantsev I.P., Petrov I.V.
Key words: probiotics, immobilization, gel granules, hypothermic storage, low-temperature storage, sucrose-milk-lactose protective environment, viability.
Dysbiosis is among the challenges the healthcare is facing now. This condition results from to the combined impact of a number of negative factors on the human body, and immune status weakening. The priority of current biotechnology is the elaboration of probiotics immobilized in gel particles that can be used to correct dysbiosis. Immobilization of probiotic cells in alginate gel granules protects them from the damaging effects of barrier functions of the gastrointestinal tract. The aim of the study was to investigate the effect of hypothermic and low-temperature storage on the viability of the probiotic Bifidobacterium bifidum immobilized in granules of alginate gel. Bacterial cells were immobilized in granules of unmodified gel (1% sodium alginate solution) and in granules of modified sucrose-milk-lactose gel. Granules with immobilized bacterial cells were placed into cryotubes. The samples kept at temperatures of +4, -12, -20, -80 and -196 ° C for 12 months (study period). It was found that storage at temperatures -80 and -196°C provided high viability of the probiotic throughout the study. During storage at temperatures of +4 and -12 ° C, the death of bacteria was observed in 1 - 3 months, depending on the composition of the gel particles, and at a temperature of -20°C the death occurs in 6-9 months. Conclusions: It has been established that the viability of B. bifidum culture cells immobilized in alginate gel granules is influenced by both storage temperature modes and gel modification by the introduction of sucrose-milk-lactose medium. At temperature ragnes of -80 and -196°C, immobilized bacteria do not die during the year (observation period). When storing at the temperatures +4, -12, -20°C, higher viability rates and longer shelf life of bifidobacterial cells were observed in samples of alginate gel granules modified with sucrose-milk-lactose medium. The study has shown that being kept at the low temperature values, B. bifida cells immobilized in unmodified and modified with sucrose-milk-lactose medium do not change their cultural and morphological properties.
