CC BY
8
Науковий в1сник Львiвського нацiонального унiверситету ветеринарно'1 медицини та бютехнологш iMeHi С.З. 1жицького. Серiя: Ветеринарнi науки
Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies. Series: Veterinary sciences
ISSN 2518-7554 print ISSN 2518-1327 online
doi: 10.32718/nvlvet9626 http://nvlvet.com.ua
UDC 619:615.3:612.017:636.2
Influence of medication "Membranostabil" on expression of immunoreceptor proteins in small intestine of ruminants during the period of formation of colostral immunity
S.I. Holopura, M.I. Tsvilikhovsky, B.V. Popadiuk
National University of Life and Environmental Sciences of Ukraine, Kyiv, Ukraine
Article info
Received 23.10.2019 Received in revised form
26.11.2019 Accepted 27.11.2019
National University of Life and Environmental Sciences of Ukraine, Potekhina Str., 16, building 12, Kyiv, 03127,Ukraine. Tel.: 8(067) 789-41-27 Tel.: 8(067) 238-05-36 Tel.: 8(098) 994-76-13 E-mail: golopura@ukr.net E-mail: M_Tsvilikhovsky@ukr. net E-mail: bogdana144@gmail.com
Holopura, S.I., Tsvilikhovsky, M.I., & Popadiuk, B.V. (2019). Influence of medication "Membranostabil" on expression of immunoreceptor proteins in small intestine of ruminants during the period of formation of colostral immunity. Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies. Series: Veterinary sciences, 21(96), 147-152. doi: 10.32718/nvlvet9626
The influence of medication ''Membranostabil" on the indexes of content of proteins with MM of 33, 40, and 47 kDa in the plasmolemma of enterocytes ofjejunum of new-born calves during the period from birth till the age of 24-hours was investigated. The research was conducted on calves (males) of Ukrainian black-and-white breed during the spring. Throughout the trial period, the calves of the control and experimental groups were kept on a standard diet for newborn calves, colostrum. In addition, calves of the experimental group got the medication "Membranostabil" based on the soybean lecithin. Proteins of plasmolemma of enterocytes of the jejunum of calves were isolated from the membrane fraction of lysates and examined by electrophoresis. Electrophoretic separation ofproteins ofplasmolemma of the jejunum enterocytes of newborn calves revealed proteins with MM of 37, 40 and 43 kDa on electrophoregram. The data of expression of immunoreceptor proteins with MM of 37, 40, 43 kDa and the dynamics of their changes depending on the time after birth in calves of the control and experimental groups were analyzed. The decrease in the total content of expression of proteins with MM of 37, 40, and 43 kDa in the membrane fraction of lysates of enterocytes of the jejunum of calves at the age of 6 hours compared to the newborn ones was demonstrated. The levels of expression of each immunoreceptor protein are considered with their comparative analysis between the individual fractions in the cytolemma of the enterocytes of the jejunum of newborn calves, which according to their molecular weights correspond to MM isoforms of FcyRIII/CD32. The data obtained showed a significantly higher expression of level of proteins with molecular mass of 37 kDa on the apical membrane of enterocytes, compared with proteins with MM of 40 and 43 kDa, both at birth of calves and at the age of 6 and 24 hours. Based on the data obtained, proteins with MM of 37, 40, and 43 kDa of plasmolemma of the jejunum enterocytes undergo significant changes in the process of postnatal ontogeny in cattle. These changes indicate the synthesis of these proteins in the enterocytes themselves in the process of formation of colostral immunity in newborn calves under the influence of the medication "Membranostabil" used by this research group, compared with calves of the control group. It is shown that the application of medication "Membranostabil" for the new-born calves activates the transport of immu-noglobulins of colostrum in the intestine of these animals, assists the increasing of level of colostral immunity, and prevents the occurrence of digestive disorders. Findings of this research correlate with the results of clinical observation in newborn calves.
Key words: new-born calves, jejunum, proteins of cytolemma of enterocytes, immunoglobulins, mem-branostabil, colostral immunity.
Вплив препарату "Мембраностабьл" на експресш 1мунорецепторних 51нк1в у тонкому кишечнику жуйних у перюд формування колострального 1муштету
С.1. Голопура, М.1. Цвтховський, Б.В. Попадюк
Науковий вкник ЛНУВМБ iменi С.З. Гжицького. Серiя: Ветеринарнi науки, 2019, т 21, № 96 Нацюналъний унгверситет бгоресурав I природокористування Украти, м. Кшв, Укра'та
Досл1джено вплив препарату "Мембраностабт " на показники вм1сту бттв з молекулярными масами 3 7, 40 та 43 кДа у плаз-молем1 ентероцит1в порожнъог кишки новонароджених телят у перюд в1д гх народження I до 24-годинного в1ку. Дослгдження проводили на телятах (самщ) украгнсъког чорно-рябог породи у весняний перюд року. Впродовж усъого досл1дного перюду телят контрольног та дослгдно'г груп утримували на стандартному рацгонг для новонароджених телят - молозивг. Додатково телятам дослгдно'г групи застосовували всередину препарат на основ1 соевого лецитину "Мембраностабт ". Бглки плазмолеми ентероцит1в порожнъог кишки телят видтяли з мембранног фракцп л1зат1в I досл1джували за допомогою електрофорезу. При електрофорети-чному розд1ленн1 бглмв плазмолеми ентероцит1в порожнъог кишки новонароджених телят на електрофореграм( нами були виявле-т бглки з ММ 37, 40 та 43 кДа, Проанал1зоват дат експресгг гмунорецепторних бтмв з ММ 37, 40, 43 кДа та динам1ку гх змт залежно в1д часу тсля народження в телят контролъног та дослгдно'г груп. Показане зменшення сумарного вмгсту експресгг бттв з ММ 37, 40 та 43 кДа у мембраннш фракцп лгзат1в ентероцит1в порожнъог кишки телят у вц 6 годин пор1вняно з щойно новона-родженими та в1дновлення гх р1вня на 24-у годину гх життя. Ро.зглянут1 р1вж експресгг кожного з гмунорецепторних бглмв з гх пор1внялъним аналгзом мгж окремими фракцгями в плазмолем1 ентероцит1в порожнъог кишки новонароджених телят, ят за свог-ми молекулярними масами в1дпов1даютъ ММ 1зоформ ЕсуЕШ/С032. ОдержанI нами дан показали значно вищий р1венъ експресгг бтшв з ММ 37 кДа на апгкалънгй мембран ентероцит1в, пор1вняно з бглками з ММ 40 I 43 кДа, як при народженн1 телят, так I у вщ 6 та 24 години. На основ1 отриманих нами даних бшки з молекулярними масами 37, 40 та 43 кДа плазмолеми ентероцит1в порожнъог кишки великог рогатог худоби в процеЫ постнаталъного онтогенезу тддаютъся значним змгнам. Ц змти вказуютъ на синтез цих бглмв у власне самих ентероцитах у процеЫ формування колостралъного 1мун1тету в новонароджених телят тд впли-вом застосованого нами препарату "Мембраностабт ", поргвняно з телятами контролъног групи. Показано, що застосування новонародженим телятам препарату "Мембраностабт " актив1зуе транспорт (муноглобултв молозива в кишечнику цих тварин, сприяе тдвищенню ргвня колостралъного гмужтету й запоб1гае виникненню розлад1в травлення. ОдержанI нами дан корелюютъ 1з резулътатами клт1чного спостереження за новонародженими телятами.
Ключовi слова: новонароджен1 телята, порожня кишка, протегни плазмолеми ентероцит1в, ¡муноглобулти, мембраностабт, колостралъний ¡мужтет.
Вступ
Одним i3 факторiв, що визначае формування ко-лострального ÎMyriTeTy в новонароджених телят е здатшсть ентероципв тонкого кишечника ефективно адсорбувати iмyноглобyлiни (Ig) з молозива матера Останне визначаеться структурними можливостями плазмолеми ентероципв у перюд новонародженосп, а саме ïï лшщним i бшковим складом, в'язшстю, прису-тнютю полшептидних рецепторiв Ig та актившстю транспортних аденозинтрифосфатаз (Tsvilikhovskyi, 1998). У свою чергу, мшров'язшсть клттинних мембран, яка регулюеться сшввщношенням насичених i ненасичених жирних кислот фосфолшщв, залежить вщ вмюту вгташну А в клгтинних мембранах, а про-цеси окиснення мембранних тпвдш i 1х оновлення в значнш мiрi залежать вщ вгтамша Е (Suraj et al., 1997). Досить часто рацюн корiв у перюд тшьносп не збала-нсований за вгтамшами, тому, новонароджеш телята з молозивом не отримують необхщну 1х кшьшсть.
Так, наприклад, через дефщит у молозивi вгташну А у новонароджених телят порушуеться моторна, секреторна та всмоктувальна функцп шлунково-кишкового тракту через ороговшня слизових оболо-нок i в першi доби життя у телят виникае захворю-вання на диспепаю (Bondi, 1987).
Проведеними нами рашше дослщженнями (Holopura et al., 2017) показано, що застосування новонародженим телятам макрокапсул з фосфолшщного бшару на основi соевого лецитину активуе транспорт Ig у тонкому кишечнику цих тварин у перюд формування колострального iмyнiтетy, що сприяе тдвищенню його рiвня. 1дея цiеï роботи полягала у засто-суванш новонародженим телятам у перюд формування колострального iмyнiтетy макрокапсул iз фосфоль пщного бшару, наповнених водорозчинними формами внушив А i Е.
Мета / завдання досл1дження. Виходячи з означе-ного вище метою роботи було дослщити показники вмюту Гмунорецепторних б1лшв у плазмолем1 ентероципв порожньо! кишки новонароджених телят у перь од формування колострального 1мунпету при засто-суванш з молозивом розробленого нами препарату „Мембраностабш". Завдання дослщження - проаналь зувати динамшу б1лмв з ММ 37, 40 та 43 кДа при електрофоретичному роздшенш гх в плазмолем1 ентероципв порожньоГ кишки новонароджених телят за впливу на тварин препарату "Мембраностабш".
Матерiал i методи дослщжень
Дослщження проводились в НДГ "Великоснпин-ське Гм. О.В. Музиченка" НУБГП УкраГни на новонароджених телятах чорно- рябоГ породи в перюд вщ народження до досягнення 1-добового вшу. Було сформовано контрольну та дослщну групи телят, по 6 тварин у кожнш. Телятам обох груп випоювали молозиво - 2 л шсля народження, а попм по 1,5 л через кожш 6 год впродовж першоГ доби життя тварин. Телята контрольно! групи отримували лише молозиво. Телятам дослщноГ групи перед першим випою-ванням молозива застосовували всередину створений нами на основ! соевого лецитину препарат "Мембраностабш" у доз1 5 мл з теплою водою (37 °С) в об'ем1 50 мл. Препарат "Мембраностабш" являе собою мак-рокапсули з фосфолшщного б1шару, яш наповнен1 водорозчинними формами в1там1н1в А - 4000 МО 1 Е - 15 мг (патент на корисну модель № 92841 вщ 10.09.2014 р., Бюл. № 17 (Tsvilikhovskyi et а1., 2014).
Досл1дн1 зразки ентероцит1в порожньоГ кишки в1д-бирали в1д новонароджених телят до першоГ випойки молозива та через 6 1 24 години тсля народження тварин. За виконання експериментальних дослщжень на новонароджених телятах було дотримано вс1х бюе-
тичних вимог у вщношенш до тварин, що вщповща-ють Закону Украни "Про захист тварин вщ жорсто-кого поводження" (стаття 17) вiд 28.03.2017 р., "£в-ропейськ1й конвeнцiï на захист хребетних тварин" вщ 13.11.1987 р. та Регламенту Ради (£С) № 1099/2009 вщ 24 вересня 2009 року.
Ентероцити отримували за допомогою хiмiчного (цитрат/ЕДТО) методу (Tsvilikhovskyi, 1998). 1з енте-роцитiв спочатку видiляли апiкальнi та базолатeральнi мембрани за схемою описаною Цвiлiховським М.1. (Tsvilikhovskyi, 1998).
Дослiджeння вмiсту протешв у плазмолeмi енте-роцитiв порожньоï кишки новонароджених телят проводили шляхом електрофоретичного роздiлeння в 7,5% полiакриламiдному гeлi з натрiю додецилсуль-фатом за модифшованою методикою з додаванням трицину (Schägger & von Jagow, 1987). У дiапазонi вiд 30 до 50 кДа, нами було виявлено ряд протешв, у т.ч. з молекулярними масами (ММ) 37, 40 та 43 кДа. Вщ-сотковий вмют фракцiй протeïнiв визначали методом дeнситомeтрiï з використанням програмного забезпе-чення TotalLab.
Статистичну обробку рeзультатiв дослiджeнь проводили з використанням комп'ютeрноï програми Microsoft Excel 2003.
Результати та ïx обговорення
При електрофоретичному роздiлeннi бiлкiв плаз-молеми eнтeроцитiв порожньо1' кишки новонароджених телят на eлeктрофорeграмi нами були виявлeнi бiлки з ММ 37, 40 та 43 кДа, що вщповщають рецепторам FcyRIII/CD32. Функ^ цих бiлкiв полягае у зв'язуванш IgG молозива в просвт кишечника i за-бeзпeчeннi однонаправленого 1'х транспорту через плазмолему ентероципв у кров тварин у нативному (нeзмiнeному) виглядi (Jones & Waldman, 1972; Masiuk & Tsvilikhovskyi, 2011).
Одержат нами данi показали значно вищий рiвeнь експресй' бiлкiв з ММ 37 кДа на ашкальнш мембраш eнтeроцитiв, порiвняно з бшками з ММ 40 i 43 кДа, як при народженш телят, так i у вщ 6 та 24 години (рис. 1).
Рис. 1. Рiвeнь експресй' iмунорeцeпторних бшшв на плазмолeмi eнтeроцитiв порожньоï кишки телят пiсля народження та у вщ 6-у i 24-у години: 1 - телята до випойки молозива; 2 i 3 - контроль - 6 та 24 години, вдаовдао; 4 i 5 - дослщ - 6 та 24 години, вдаовщно
Результати дослщження експресй бшшв з ММ 37, 40 та 43 кДа у мембраннш фракци лiзатiв ентероципв порожньо' кишки телят при народжеш вказують на вiдносно високий IX вмiст (рис. 1.1), що свщчить про готовнiсть цих бiлкiв до рецепци Ig молозива та тран-спортування 'х у нативному сташ через ентероцити в кровоносне русло.
Шсля випоювання молозива спостерiгаeться зни-ження експресii бiлкiв з ММ 37, 40 та 43 кДа у плаз-молемi ентероцитiв порожньоi кишки новонароджених телят контрольно].' групи у вiцi 6 годин на 27,8% (Р < 0,01) (рис. 1.2). Це свщчить про iнтенсивне всмо-ктування Ig молозива та 'х транспорт у кишечнику тварин за мехашзмом Ig-рецептор через ентероцит вщ його апiкальноi (АМ) до базолатерально' (БМ) мембрани i далi - в кров тварини. У той же час, вщнов-лення рiвня бiлкiв з ММ 37, 40 i 43 кДа у плазмолемi ентероцитiв телят на 24-у годину 'х життя (рис. 1.3) вказуе на 'х ретранспорт вiд БМ до АМ для послщую-чого здiйснення рецепци ^ молозива.
У плазмолемi ентероципв порожньо' кишки телят дослiдноi групи, яким застосували препарат "Мем-браностабш", нами встановлено зниження на 20,1% (Р < 0,05) експресii бшшв з ММ 37, 40 та 43 кДа у вщ 6 годин та тдвищення на 13,3% у вщ 24 години порь вняно з цим показником у телят при народженш (див. рис. 1.4 i 1.5).
Одержат дат вказують на те, що препарат "Мем-браностабш" активуе експресш iмунорецепторних бiлкiв з ММ 37, 40 та 43 кДа на плазмолемi ентероципв порожньо' кишки новонароджених телят у перюд формування колострального iмунiтету. Таким чином, вiтамiни А i Е у складi лшосом стабiлiзують iмуноре-цепторнi бiлки плазмолеми ентероципв, що забезпе-чують трансмембранний транспорт колостральних iмуноглобулiнiв iз просвiту кишечника в кровоносне русло новонароджених телят.
Одержат нами дат корелюють iз результатами клiнiчного спостереження за новонародженими телятами.
Так, на другу добу життя у 2-х iз 5-ти телят контрольно' групи з'являлися ознаки розладу травлення. Апетит у тварин знижувався, смоктальний рефлекс був пригнiченим, перистальтика кишечника посилю-валася, дефекацiя часта, кал розрщжений, свiтло-жовтого кольору. У телят навколо ануса досить шви-дко з'явилися забруднення каловими масами. Температура тша у телят контрольно' групи на початку захворювання була в межах норми, а з розвитком хвороби температура шшри на окремих мюцях зни-жувалась: нижнi дiлянки кiнцiвок, вуха, носове дзер-кальце - холодт
Телята дослiдноi групи через 24 години шсля народження були активними, ознак дiареi в них не спос-терiгалося. Кал свгглого жовто-коричневого кольору. В однiei тварини спостерталися незначнi розлади травлення шсля застосування препарату "Мембранос-табiл", але на наступну добу вони зникли без медикаментозного втручання. Впродовж всього послщуючо-го перiоду дослщження телята дослiдноi групи були
активними, ознак розлад1в травления та виснаження у них не спостерйалося.
Отримаш нами даш узгоджуються з результатами, що були отримаш шшими дослщниками (Kurtiak & Yanovych, 2004). Ними встановлено, що майже весь ретинол у клгтинних мембранах мщно зв'язуеться з бшками i лише незначна його кшьшсть зв1льняеться при екстракцй' лшвдв. При цьому разом з ретинолом у клгтинних мембранах була виявлена ретиноева кислота, яка мщно зв'язана з !х компонентами. На основГ цих даних було зроблено припущення, що з ретинолом пов'язана структурна i транспортна функцй кль тинних мембран (Kurtiak & Yanovych, 2004). КрГм того, вгтамш A i його похщш дшть на специфГчнГ рецепторш бшки в клгтинних ядрах. У подальшому такий лйанд-рецепторний комплекс зв'язуеться з да-лянками ДНК i викликае дерепресш гешв, регулюю-чи синтез бшшв, ферментiв або компоненпв тканин (Morozkina & Mojsejonok, 2002; Kurtiak & Yanovych, 2004).
Вважаемо за доцшьне розглянути рГвш експресй' кожного з Тмунорецепторних бшшв плазмолеми ентероципв порожньоГ кишки новонароджених телят, яш за своГми молекулярними масами вщповщають ММ ГзоФорм FcyRIII/CD32.
Одержат нами дат свщчать про високий вмют бь лка з ММ 37 кДа в плазмолемi ентероципв порожньоГ кишки новонароджених телят, а також про те, що вмют цього бiлка в мембраш значно змiнюеться в процес формування колострального iмунiтету в цих тварин (рис. 2).
37 кДа
Концентрац1я б1лка з ММ 37 кДа в плазмолем1 ен-тероцит1в порожньоГ кишки телят контрольно! групи на 24-у годину Гх життя не змшилася, тод1 як у телят дослщноГ' групи достов1рно зросла в 1,63 раза (Р < 0,001) (рис. 2.2 1 2.4). При цьому р1зниця в експресй на плазмолем1 ентероципв б1лка з ММ 37 кДа на 24-у годину життя тварин м1ж телятами контроль-ноГ 1 дослщноГ групи склала 28% на користь останньоГ (рис. 2.3 1 2.5). Отримаш нами результати е пщтвер-дженням б1льш активного трансмембранного перене-сення комплексу 1муноглобул1н/рецептор, а також б1льш швидкого вщновлення плазмолеми ентероцит1в та ретранспорту Гмунорецепторного б1лка з ММ 37 кДа вщ БМ до АМ для послщуючого перенесення Ig молозива в кров, що вщбуваеться пщ впливом препарату "Мембраностабш" у телят дослщноГ групи пор1вняно з контрольною.
Результати проведених нами дослщжень свщчать про бшын, шж у 4 рази менший вм1ст б1лка з ММ 40 кДа в плазмолем1 ентероципв новонароджених телят, пор1вняно з бшком з ММ 37 кДа (див. рис. 1).
Р1вень експресй бшшв з ММ 40 кДа на плазмолем1 ентероципв порожньоГ кишки новонароджених телят контрольноГ групи у вщ1 6 годин знизився на майже в 3 рази, (Р < 0,001) пор1вняно з цим показником у телят при народженш (рис. 3; 3.1 1 3.2).
350000
.300000 s
250000
200000
150000
100000 /
50000
40 кДа
1 2 3 4 5
Рис. 2. Р1вень експресй Гмунорецепторних бшшв з молекулярною масою 37 кДа на плазмолем1 ентероципв порожньоГ кишки телят при народженш та на 6-у Г 24-у години Гх життя: 1 - телята до випойки молозива; 2 [ 3 - контроль - 6 та 24 години, вщповщно; 4 [ 5 - дослщ - 6 та 24 години, вщповщно
Так, через 6 годин тсля народження концентрация бшка з ММ 37 кДа у плазмолем1 ентероципв порожньоГ кишки телят контрольноГ групи достов1рно зни-жуеться в 1,24 раза (Р < 0,01), а в телят дослщноГ групи - в 1,40 раза (Р < 0,001). Це вказуе на активну участь бшка з ММ 37 кДа у транспорт! ^ молозива в перюд формування колострального !мунгтету в новонароджених телят ! на те, що цей процес е бшьш ште-нсивним пщ впливом застосованого нами препарату "Мембраностабш".
1 2 i 4 Ь
Рис. 3. Рiвень експресй iмунорецепторних 6Глшв з молекулярною масою 40 кДа на плазмолемi ентероципв порожньо! кишки телят при народженш та на 6-у i 24-у години !х життя: 1 - телята до випойки молозива; 2 i 3 - контроль - 6 та 24 години, вГдповГдно; 4 i 5 - дослщ -6 та, 24 години, вдаовдао
Це е закономiрним явищем з огляду на найб№ш штенсивне всмоктування Ig молозива в кишечнику новонароджених тварин у шршГ 6 годин !х життя. В той же час, ретранспорт 6Глшв з ММ 40 кДа плазмолеми ентероципв порожньо! кишки новонароджених телят контрольно! групи з БМ до АМ затримуеться i вщновлюеться тшьки на 24 годину життя цих тварин (рис. 3.2 i 3.3), чого не спостерiгаеться у телят дослщ-но! групи пщ впливом препарату "Мембраностабш" (рис. 3.4. i 3.5).
Так, рiвень експресй 6Глшв з ММ 40 кДа на плаз-молемi ентероципв порожньо! кишки новонароджених телят дослщно! групи, яким застосовували препарат "Мембраиостабiл", е вищим на 10,9% (Р < 0,05) та
32,3% (Р < 0,01) у вщ 6 i 24 години, вiдповiдно, порь вняно з таким при народженш (див. рис. 3; 3.4 i 3.5).
Рiвень експреси бiлкiв з ММ 43 кДа на плазмолемi ентероципв порожньо! кишки новонароджених телят контрольно! групи був достовiрно нижчим на 19% (Р < 0,01) у вщ 6 годин i повертався до вихщного рiвня у вщ 24 години порiвняно з таким у телят при народженш (рис. 4; 4.2 i 4.3).
1 2 3 4 5
Рис. 4. Р1вень експреси 1мунорецепторних бшшв з молекулярною масою 43 кДа на плазмолем1 ентероципв порожньо! кишки телят при народженш та на 6-у i 24-у години !х життя: 1 - телята до випойки молозива; 2 i 3 - контроль - 6 та 24 години, вщповщно; 4 i 5 - дослщ - 6 та, 24 години, вдаовдао
Рiвень експресi! бшшв з ММ 43 кДа у плазмолемi ентероцитiв порожньо! кишки телят дослщно! групи залишався стабiльним на 6-ту годину життя цих тва-рин та достовiрно пщвищувався 28,3% (Р < 0,01) у вщ 24 години порiвняно з таким у телят при народженш (рис. 4; 4.4 i 4.5). Останне може бути свщчен-ням активного синтезу цих бшшв у власне самих ен-тероцитах у процес формування колострального iму-шгету в новонароджених телят пщ впливом застосо-ваного нами препарату "Мембраностабш", оскiльки на 24-у годину життя телят дослщно! групи вмiст у плазмолемi ентероцитiв порожньо! кишки бшка з ММ 43 кДа був на 22,9% достовiрно вищим (Р < 0,01) порiвняно з телятами контрольно! групи (рис. 4; 4.3 i 4.5).
Таким чином, бшки плазмолеми ентероципв порожньо! кишки новонароджених телят з ММ 37, 40 та 43 кДа володшть iмунорецепторною актившстю по вщношенню до Ig молозива i беруть активну участь у формуванш колострального iмунiтету. Вмют цих бiлкiв i !х актившсть у плазмолемi ентероцитiв тонкого кишечника е визначальним фактором рiвня колострального iмунiтету в органiзмi новонароджених телят для становлення якого выводиться обмежений час (24-36 годин). Можливо й час перебування ко-лостральних Ig у кровi телят, до моменту включення !х власно! iмунно! системи, також обумовлюеться !х зв'язком з iмунорецепторними бiлками плазмолеми ентероципв. Останнi (частково) можуть транспорту-ватися у кров теляти у зв'язаному виглядi з Ig молозива в склащ комплексу Ig-рецептор (Tsvilikhovskyi, 1998) i вони здатш пролонгувати перiод колостраль-
ного iмунiтету та здiйснювати захист органiзму телят ввд дi! стороннiх, у т.ч. патогенних чиннишв. Це шдт-верджуеться отриманими нами ранiше даними щодо молекулярних механiзмiв формування колострального iмунiтету у велико! рогато! худоби (Maryniuk et al., 2014; Holopura & Tsvilikhovskyi, 2014; Holopura et al., 2015).
Так, Ig, яш поступають у шлунково-кишковий тракт теляти з молозивом матер^ зв'язуються на по-верхш ентероцитiв за допомогою Fc-фрагменту власно! молекули з бiлковим рецептором АМ, утворюючи вщповщний комплекс Ig-рецептор. Завдяки штенсив-ним процесам шноцитозу у новонароджених тварин, як1 обумовлеш рядом факторiв, у т. ч. низькою в'язшстю плазматично! мембрани (Tsvilikhovskyi, 1998; Maryniuk et al., 2014), комплекс Ig-рецептор у склащ ендоцитозного пухирця транспортуеться через клiтину в кров теляти.
Утворюючи комплекс Ig-рецептор бшки плазмолеми ентероципв, разом з iмуноглобулiном, у склащ ендоцитозного пухирця транспортуються в кров тва-рини, що призводить до зменшення !х кiлькостi в мембранi. Динамiка цього процесу дуже добре про-глядаеться у новонароджених телят контрольно! групи вже на 6-у годину !х життя (див. рис. 1).
В той же час, застосування новонародженим телятам препарату - "Мембраностабш", що являе собою макрокапсули з фосфолшщного бшару, яш наповнеш водорозчинними формами вггамшв А та Е, стабшзуе плазмолему ентероцитiв i, можливо, сприяе транскри-пцi!' вщповщних генiв з послiдуючою стимуляцiею синтезу рецепторних бшшв та включениям !х у мембрану. Вщповщш даш щодо участi вiтамiну А в про-цесах стимуляцi!' синтезу мембранних бшшв на гене-тичному рiвнi е (Schagger & von Jagow, 1987; Ross & Ternus, 1993). Крiм того, деяш автори вказують, що дефщит вiтамiну А в рацюш тiльних корiв приводить до аборпв i порушення розвитку плода, затримання розвитку плаценти, зниження життездатносп телят i захворювання !х на диспепсш, яка розвиваються вна-слщок порушення синтезу специфiчних гл1копроте!-шв в ентероцитах (Bondi, 1987).
Висновки
На основi отриманих нами даних можна стверджу-вати, що бшки з молекулярними масами 37, 40 та 43 кДа плазмолеми ентероципв порожньо! кишки велико! рогато! худоби в процеа постнатального онтогенезу шддаються значним змшам. На наш погляд, показники експресi! цих бшшв у плазмолемi ентеро-цитiв порожньо! кишки новонароджених телят за умов застосування препарату "Мембраностабш" вщо-бражають сутт^ змiни в мембранному травлеш та транспортi речовин у тонкому кишечнику в першi днi постнатального онтогенезу. Отримаш нами данi до-зволяють висловити думку про позитивний вплив препарату "Мембраностабiл" на формування колострального iмунiтету та запобiгання розвитку роз-ладiв травлення у новонароджених телят.
Перспективи подальших до^джень У перспекти-Bi будуть продовжеш дослщження впливу препарату "Мембраностабш" на бшки шших фракцiй плазмолеми ентероципв порожньо! кишки новонароджених телят.
References
Bondi, A.A. (1987). Animal Nutrition. Chichester, John Wiley & Sons.
Holopura, S.I., & Tsvilikhovskyi, M.I. (2014). Korektsiia vmistu zahalnoho bilka ta sechovyny v syrovattsi krovi novonarodzhenykh teliat u period formuvannia kolostralnoho imunitetu. Visnyk Poltavskoi Derzh. ahrarnoi akademii, 3, 95-97. doi: 10.31210/ visnyk2014.03.18 (in Ukrainian). Holopura, S.I., Maryniuk, M.O., & Tsvilikhovskyi, M.I. (2017). Ekspresiia imunoretseptornykh proteiniv u plazmolemi enterotsytiv novonarodzhenykh teliat u period formuvannia kolostralnoho imunitetu. Biolo-hiia tvaryn, 19(2), 16-22. doi: 10.15407/ animbiol19.02.016 (in Ukrainian). Holopura, S.I., Tsvilikhovskyi, M.I., Zamanbekov, N.A., & Kaziiev, Zh.I. (2015). Rol bilkiv transferynovoi fraktsii syrovatky krovi u formuvanni kolostralnoho imunitetu u novonarodzhenykh teliat. Naukovyi visnyk NUBiP Ukrainy, 51-57.
http://nbuv.gov.ua/UJRN/nvnau_vet_2015_221_11 (in Ukrainian).
Jones, E.A., & Waldman, T.A. (1972). The mechanism of intestinal uptake and transcellular transport of IgG in the neonatal rat. J. Clin Invest, 51(11), 2916-2927. doi: 10.1172/JCI107116. Kurtiak, B.M., & Yanovych, V.H. (2004). Zhyroroz-chynni vitaminy u veterynarnii medytsyni i tvarynny-tstvi. Lviv: Triada plius (in Ukrainian).
Maryniuk, M.O., Holopura, S.I., Yakymchuk, O.M., Nemova, T.V., & Tsvilikhovskyi, M.I. (2014). Riven kolostralnoho imunitetu i rozvytok rozladiv travlennia u novonarodzhenykh teliat. Veterynarna medytsyna Ukrainy, 5, 21-23. http://nbuv.gov.ua/UJRN/ vetm_2014_5_9 (in Ukrainian).
Masiuk, D.M., & Tsvilikhovskyi, M.I. (2011). Modu-liatsiia ekspresii fc-y-retseptoriv enterotsytiv Velykoi rohatoi khudoby u plodovyi period. Naukovi pratsi PF NUBiP Ukrainy "KATU" seriia "Veterynarni nauky", 139, 222-227 (in Ukrainian).
Morozkina, T.S., & Mojsejonok, A.G. (2002). Vitaminy. Minsk: Asar, 58-63 (in Russian).
Ross, C., & Ternus, M.E. (1993). Vitamin A as a hormone: recent advances in understanding the actions of retinal, retinoic acid and beta carotene. J. Am. Diet. Assoc., 93, 1285-1290. doi: 10.1016/0002-8223(93)91956-q.
Schagger, H., & von Jagow, G. (1987). Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Analytical Biochemistry, 166(2), 368-379. doi: 10.1016/0003-2697(87)90587-2.
Suraj, P.F., Buzhin, A.A., Jaroshenko, F.A., & Ionov, I.A. (1997). Zhirorastvorimye vitaminy. Cherkasy (in Russian).
Tsvilikhovskyi, M.I. (1998). Bilky plazmatychnoi membrany epiteliiu tonkoho kyshechnyka velykoi rohatoi khudoby: avtoref. dys. doktora biol. nauk: spets 03.00.04 - biokhimiia. Kyiv, NAU. Kyiv (in Ukrainian).
Tsvilikhovskyi, M.I., Maryniuk, M.O., Hololpura, S.I., Avdieieva, L.Iu., Nemova, T.V., Yakymchuk, O.M., & Zhukotskyi, E.K. (2014). Veterynarnyi preparat "Membranostabil". Patent na korysnu model № 92841. Podano 13.03.2014, Opub. 10.09.2014, Biul. № 17 (in Ukrainian).
