CC BY
14
связано, скорее всего, с одновременным увеличением количества при уменьшении размеров этих структур. В 100 суточных крыс из ВГТ количественная плотность МПВ превышает показатель не только в 45-ти суточных крыс из ВГТ, но и в контроле. Такое увеличение может отражать усиление трансцитоза и иметь компенсаторную направленность. В 240 суточных крыс с ВГТ происходит существенное уменьшение количества МПВ и их слияния, что является одним из признаков срыва компенсаторных процессов в эндотелии кровеносных капилляров миокарда.
Ключевые слова: врожденный гипотиреоз, крысы, микропиноцитоз, электронная микроскопия, морфометрия.
Стаття надшшла 8.06.2016 р.
that is most probably connected with simultaneous increase of number and decrease of size of these structures. In 100-day rats with IHT the quantitative density of MPV exceeded both 45-day rats with IHT and control levels. Such increase might reflect reinforcement of transcytosis and have compensatory meaning. In 240-days rats with IHT there is a substantial decrease in MPV number and their fusion that is one of the indicators of compensatory processes fail in myocard endothelium blood capillaries.
Key words: innate hypothyroidism, rats, micropinocytosis, electron microscopy, morphometry.
Рецензент Срошенко Г.А.
УДК 612.616-092.9:615.916'175:616-073.7
ВПЛИВ 1НГ1Б1ТОРА АКТИВАЦН ЯДЕРНОГО ФАКТОРА кВ НА ФУНКЦЮНАЛЬНИЙ СТАН СПЕРМИ ЩУР1В ЗА УМОВ ПОеДНАНО1 Д11 НА ОРГАН1ЗМ Н1ТРАТУ НАТР1Ю ТА РЕНТГЕНШСЬКОГО ОПРОМ1НЕННЯ
У експеримени на 21 бшому щурi дослщжено вплив шпб™ра активацп ядерного фактора кВ (ОТ-кБ) - 1$Н-23 (4-метил-Ы-(3-фешлпротл)бензол-1,2^амшу) - на кшьюсш та яюсш показники сперми за умов поеднано! дп на оргашзм штрату натрто (у дозi 200 мг/кг протягом 30 дiб) та рентгешвського опромшення (у дозi 0,08 Гр три рази протягом тижня через день, сумарно 0,25 Гр). Показано, що введення 18Н-23 (у дозi 1 мг/кг, 2 рази на тиждень) за умов експерименту ютотно зменшуе вщсоток нежиттездатних кйтин та !х патологiчних форм (з аномалiями голiвки). При цьому порушуеться рухливiсть сперматозо'дав, що вiдбиваеться у збшьшенш клiтин iз швидким поступальним рухом (нормокiнезiя, категорiя А), а також спермпв з коливальним невпорядкованим рухом (дискiнезiя, категорiя С), зменшенш клiтин з повiльним поступальним рухом (гiпокiнезiя, категорiя В) та нерухомих сперматозо'дав (акiнезiя, категорiя Б).
Ключовi слова: ядерний фактор кВ, штратна iнтоксикацiя, рентгенiвське опромiнення, сперматограма, юнезюграма.
Робота е фрагментом НДР «Роль активных форм кисню, системи оксиду азоту та транскрипцшних факторiву мехашзмах патологiчного системогенезу» (№ держреестрацн 0114и004941).
У наших попередшх публшащях показано, поеднана д1я штратно! штоксикацп та рентгешвського опромшення виявляе бшьш глибою змши, шж штратна штоксикащя та рентгешвське опромшення окремо (збшьшуеться вщсоток нежиттездатних та патолопчних сперматозо!д1в, акшезис) [5]. Це можна пов'язати ¡з посиленням продукцп супероксидного анюн-радикала НАДН-залежним електронно-транспортним ланцюгом, що призводить до неферментативного вшьнорадикального пероксидного окиснення лшщ1в (ПОЛ), пригшчення активност цитохромоксидази та активацп КО-синтази [4].
В останш роки з'ясовано участь транскрипцшного ядерного фактора кВ (ОТ-кВ) в експреси гешв ¡ндуцибельно! КО-синтази (1КО8). Промотор останньо! мютить сайти для зв'язування ОТ-кВ [11]. ОТ-кВ е родиною, що складаеться з п'яти бшюв: ОТ-кВ1 (або р50), ОТ-кВ2 (або р52), Яе1А (або р65), Яе1В 1 с-Яе1, що утворюють 15 комбшацш димер1в [7]. Найбшьш розповсюдженими у тканинах шм'яниюв формами е димер субодиниць р50 з субодиницею р65 [6]. Виявлено участь КБ-кВ у шщ1аци окисного стресу в яечках за умов шемп / реперфузп, що викликае фосфорилювання I деградащю шпб1торного бшка 1кВ-а та ядерну транслокащю ОТ-кВ 1з наступною активащею залежних гешв [9]. Роль активацп КБ-кВ у порушенш чолов1чо! репродуктивно! системи при ди юшзуючо! рад1аци вщм1чають лише одиничш л1тературш джерела. Показано, що КБ-кВ у шм'яниках мишей за умов дп юшзуючо! рад1ацп опосередковуе апоптоз елеменпв сперматогенного ештелда [10].
Проте роль КБ-кВ та його шпбггор1в на функцюнальний стан сперми бших щур1в за умов сукупно! ди на оргашзм штрату натр1ю та рентгешвського опромшення рашше не дослщжувалася. Розв'язання цього питання е важливим для розширення арсеналу засоб1в попередження та лшування репродуктивних розлад1в при ди еколопчно небезпечних чииииюв.
Метою роботи було вивчення ролi NF-kB у змшах кшьюсних та якiсних показниюв сперми бiлих щурiв за умов поеднано1 дй' на opraHi3M штрату натрiю та рентгешвського опромiнення.
Матерiал та методи дослiдження. Дослiди проведеш на 21 щурi лiнiï Вютар. Тварини були розподiленi на три групи: 1 група - штактш щури. 2 група складалась i3 тварин, якi в останнiй тиждень 30-денноï iнтоксикацiï нiтратом натрiю (у щоденнш дозi 200 мг/кг маси тша) пiддавалися рентгенiвському опромiненню (у дозi 0,08 Гр три рази протягом тижня через день, сумарно 0,25 Гр), 3 група - тд час поeднаноï дiï нгграту натрда та рентгенiвського опромiнення у названих режимах щурам внутрiшньоочеревинно вводили шпб™р активацiï NF-kB II - JSH-23 (4-метил-^(3-феншпротл)бензол-1,2-щамш) [8] виробництва «Santa Cruz Biotechnology» (ФРН) у дозi 1 мг/кг маси тварини, 2 рази на тиждень. Тварин декаштували тд ефiрним наркозом.
Сперму отримували iз придаткiв сiм'яникiв [2]. Гомогешзоваш придатки сiм'яникiв розрiзали, розмiшували кожний з 2 мл 0,9% розчину натрiю хлориду. Одержану суспензда використовували для шдрахунку кiлькостi i оцiнки функцiонального стану сперматозо1дав [1, 2]. Суспензiю сперматозо1дав набирали в меланжер до м^ки 0,5 i доводили спецiальним розчином до м^ки 2, змiшували i вносили до камери Горяева. Пщраховували кiлькiсть клiтин у 5 великих квадратах i перемножували на 1000000 (до складу спещального розчину входили 5 г натрда бiкарбонату, формалш i дистильована вода до 100 мл).
Життездатшсть сперматозоïдiв визначали за еозиновим тестом. На предметне скло вмщували 1 краплю 1% розчину суспензи сперматозоïдiв i 1 краплю 1% розчину еозину, перемшували, накривали покривним склом i негайно шддавали мiкроскопiï. Пiдраховували 200 клiтин i визначали серед них вщсоток живих (незабарвлених) i мертвих (забарвлених в рожевий колiр) сперматозоïдiв. Для визначення вiдносноï кiлькостi патологiчних форм сперматозо1дов краплю суспензiï розподiляли на предметному скл^ висушували, фiксували етанолом i фарбували 1% розчином метиленового синього. Мазки дослщжували з iмерсiйним об'ективом мшроскопу. Пiдрахунок проводили на 200 сперматозощах. Патологiчними формами сперматозоïдiв вважали тi, що мали аномалiï голiвки, тiла, хвоста [1]. З метою визначення кшезюграми краплю суспензiï сперматозо1дав переносили на предметне скло. В нативних препаратах за умов св^лово1' мшроскопи з вiконцем Фонiо серед 100 сперматозо1дов пiдраховували вiдсоток кттин iз швидким поступальним рухом (50 мкм/с) (нормокiнезiя, категорiя A), повшьним поступальним рухом (гiпокiнезiя, категорiя В); коливальним невпорядкованим рухом (дискiнезiя, категорiя С) та нерухомих (акiнезiя, категорiя D) [3].
Статистичну обробку здшснювали, використовуючи непараметричний метод - тест Мана-Вiтнi. Статистичнi розрахунки проводили з використанням програм «Microsoft Excel 2007» та «StatisticSoft 6.0».
Результати дослщження та ïx обговорення. Введення iнгiбiтора активацiï NF-kB JSH-23 за умов рентгешвського опромiнення тд час 30-денного введення нiтрату натрда суттево не впливае на середне число сперматозо1дов у порiвняннi з даними друго1' серiï (табл. 1).
Таблиця 1
Вплив шпб^ора активацп NF-kB JSH-23 на кшьккш показники сперми бших щурiв за умов
сукупно'1 дн на органiзм штрату натрiю та рентгенiвського опромiнення (M+m, n=21)
Показники 1нтактш тварини Введення штрату натрш + рентгешвське опромшення
Контроль + JSH-23
Середне число сперматозовдв, х106 48,4+3,1 31,4+ 4,1 p1<0,01 41,3 +2,5
Юльюсть нежиттездатних сперматозовдв, % 10,5+0,22 45,5+0,62 р1<0,001 24,5+1,34 p1<0,001 p2<0,001
Юльюсть патолопчних форм сперматозовдв, % 15,5+0,94 50,0+3,22 р1<0,001 25,0+1,89 р1<0,001 р2 <0,001
Примака. У табл. 1-3: р1 - ймсдаршсть похибки при порiвняннi з даними штактних щурiв; р2 - у пс^внянш з даними другой серiï.
Проте за цих умов ютотно зменшуеться кiлькiсть нежиттездатних сперматозо1дав - до (24,5+1,34)%, що на 46,2% (p<0,001) поступаеться даним другоï серiï. Число патологiчних форм сперматозо1дав за цих умов знижуеться - до (25,0+1,89)%, що на 50,0% (p<0,001) поступаеться величиш другоï групи. Серед патолопчних форм спермiïв, яю утворюються за цих умов, достовiрно зменшуеться вiдсоток спермiïв з аномалiями голiвки - до (64,0+5,55)%, що на 25,6% (p<0,01) поступаеться даним другоï серiï. Вiдповiдно збiльшився вщсоток клiтин з аномалiями шийки та середньоï частини (набухання та зморщування), та хвоста (вiдсутнiсть, подвоення), нероздшених спермiïв у порiвняннi з даними другоï серiï (табл. 2).
Введення mri6itopa активаци NF-kB JSH-23 за умов рештешвського опромiнення пiд час 30-денного введення нiтрату натрiю суттево впливае на показники кiнезiотрами (табл. 3). Ра наведених умов збшьшуеться вщсоток сперматозоfдiв i3 швидким поступальним рухом (нормокiнезiя, катеторiя A) - до (70,6+6,5)%, що на 60,5% (p<0,01) перевищуе результат друто! трупи. Зменшуеться число клiтин з повiльним поступальним рухом (тiпокiнезiя, катеторiя В) - до (12,4+1,3)%, а також нерухомих сиермпв (акiнезiя, катеторiя D) - до (7,3+0,7)%, що вщповщно на 56,3% (p<0,001) та 64,7% (p<0,001) поступаеться даним друто! серн. Число сиермив з коливальним невпорядкованим рухом (дискiнезiя, катеторiя С) - збшьшуеться до (9,7+0,8)%, що на 40,6% (p<0,01) перевищуе результат друто! трупи, але достовiрно не вiдрiзняеться вщ величини iнтактних тварин. Одержанi результати можна пов'язати iз притнiченням експресп iNOS унаслiдок порушення активацi! NF-kB, що призводить до обмеження проявiв окисно-нiтративното стресу, покращення бiоенертетичних ироцешв у сiм'яниках i спермi [4].
Таблиця 2
Вплив шпб^ора активаци NF-kB JSH-23 на розподш патолопчних форм сперматозо'Тщв за морфологiчними ознаками за умов сукупноТ дп на оргашзм нiтрату натрiю та
рентгемвського опромiнення (M+m, n=21)
Морфолопчш ознаки патолопчних форм сперматозо'вдв, % 1нтактш тварини Введення штрату натрш +ренттешвське опромшення
Контроль + JSH-23
Аномалп гол1вки 58,06+2,44 86,00+4,18 р1<0,001 64,0+5,55 Р2 <0,01
Аномалп шийки та тша 16,13+1,30 4,00+0,29 р1<0,001 12,00+0,99 р1<0,05 р2 <0,001
Аномалп хвоста 16,13+1,60 3,00+0,45 р1<0,001 10,00+0,99 р1<0,01 р2 <0,001
Нероздшеш спермп 6,45+1,60 1,00+0,29 р1<0,01 6,0+0,57 Р2 <0,001
Змшана патолопя 3,23+0,92 6,00+0,49 р1<0,02 8,0+1,2 р1<0,01
Таблиця 3
Вплив шпб^ора активацп NF-kB JSH-23 на показники кшезшграми за умов сукупноТ дп на
Показники кinезiотрами, % Inтактni тварини Введення штрату натр1ю +ренттешвське опромinеnnя
Контроль + JSH-23
Нормокinезис 72,6+4,2 44,0+4,9 р1<0,001 70,6+6,5 р2<0,01
Гiпокinезис 12,3+ 0,8 28,4+1,8 р1<0,001 12,4+1,3 р2<0,001
Диск1незис 9,4+0,5 6,9+0,4 р1<0,002 9,7+0,8 р2 <0,01
Акшезис (нерухом1) 5,7+0,4 20,7+2,9 р1<0,001 7,3+0,7 р2 <0,001
1. Введення шпб™ра активацi! NF-kB JSH-23 за умов сукупно! дi! радiацiйното (фракцшне ренттенiвське опромiненнi в сумарнiй дозi 0,24 Гр) та токсичното (30-денна iнтоксикацiя нiтратом натрiю) чинникiв ютотно впливае на кiлькiснi та яюсш показники сперми бiлих щурiв, що вщбиваеться у зменшеннi вiдсотка нежиттездатних клiтин та !х патолотiчних форм.
2. Введення iнтiбiтора активацi! NF-kB JSH-23 за умов поеднано! дп на ортанiзм нiтрату натрiю та рештешвського опромшення iстотно впливае на рухливють сперматозо!дiв бiлих щурiв, що вщбива-еться у збiльшеннi клгтин iз швидким поступальним рухом (нормокiнезiя, катеторiя A), а також спермпв з коливальним невпорядкованим рухом (дискiнезiя, катеторiя С), зменшеннi клгтин з повiльним поступальним рухом (тiпокiнезiя, катеторiя В) та нерухомих сперматозощв (акiнезiя, катеторiя D).
1. Базарнова М. А. Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диатностике / М. А. Базарнова, В.Т. Морозова // - К.: Вища школа, - 1988. - 318 с.
2. Бариляк I. Р. Вивчення тонадотоксично! дп нових лжарських засоб1в та !х впливу на репродуктивну функщю тварин / I.P. Бариляк, Л.В. Неумержицька, Т.Ф. Бишовець [та in.] // - К. : Авщена, - 2001. - С. 139-152.
3. Долтов В. В. Лабораторная диатностика мужското бесплодия / В.В. Долтов, С.А. Лутовская, Н.Д. Фанченко [и др.] // -М. - Тверь: Триада, -2006. - 145 с.
4. Шаталин Б. О. Состояние окислительного метаболизма семенникова на фоне действия нитратной интоксикации и рентгеновского облучения / Б. О. Шаталин, В. А. Костенко // Актуальные проблемы транспортной медицины. - 2014. -№ 3. - С. 56-61.
4. Шаталш Б. О. Показники функцюнальното стану сперми бших щур1в за умов сукупно! дп на орташзм штрату натрш та ренттешвського опромшення / Б. О. Шаталш, В. О. Костенко // Актуальш проблеми сучасно! медицини: Вюн. Укра!нсько! мед. стоматол. академп. - 2016. - Т.16, - №3 - C. 192-195.
6. Delfino F. Stage-specific nuclear expression of NF-kappa B in mammalian testis / F. Delfino, W. H. Walker // Mol. Endocrinol. - 1998. - Vol.12, №11. - P. 1696-1707.
7. Hayden M. S. Shared principles in NF-kappaB signaling / M. S. Hayden, S. Ghosh // Cell. - 2008. - Vol. 132, № 3. - P. 344-362.
8. Kumar A. JSH-23 targets nuclear factor-kappa B and reverses various deficits in experimental diabetic neuropathy: effect on neuroinflammation and antioxidant defence / A. Kumar, G. Negi, S.S. Sharma // Diabetes Obes. Metab. - 2011. - Vol. 13, № 8. - P.750-758.
9. Lysiak J. J. Activation of the nuclear factor kappa B pathway following ischemia-reperfusion of the murine testis / J.J. Lysiak, H.J. Bang, Q.A. Nguyen, T.T. Turner // J. Androl. - 2005. - Vol.26. - P. 129-135.
10. Rasoulpour R. J. NF-kappa B activation elicited by ionizing radiation is proapoptotic in testis / R. J. Rasoulpour, K. Boekelheide // Biol. Reprod. - 2007. - Vol.76, №2. - P. 279-285.
11. Vos T.A. Expression of inducible nitric oxide synthase in endotoxemic rat hepatocytes is dependent on the cellular glutathione status / T.A. Vos, H. Van Goor, L. Tuyt [et al.] // Hepatology. - 1999. - Vol. 29, № 2. - P. 421-426.
ВЛИЯНИЕ ИНГИБИТОРА АКТИВАЦИИ ЯДЕРНОГО ФАКТОРА ^ НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ СПЕРМЫ КРЫС В УСЛОВИЯХ СОЧЕТАННОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОРГАНИЗМ НИТРАТА НАТРИЯ И РЕНТГЕНОВСКОГО ОБЛУЧЕНИЯ Шаталин Б. O., Костенко В. А.
В эксперименте на 21 белой крысе исследовано влияние ингибитора активации ядерного фактора кВ (ЫБ-кВ) - ^Н-23 (4-метил-№ (3-фенилпропил) бензол-1,2-диамина) - на количественные и качественные показатели спермы в условиях сочетанного действия на организм нитрата натрия (в дозе 200 мг/кг в течение 30 суток) и рентгеновского облучения (в дозе 0,08 Гр три раза в течение недели через день, суммарно 0,25 Гр). Показано, что введение ^Н-23 (в дозе 1 мг/кг 2 раза в неделю) в условиях эксперимента существенно уменьшает процент нежизнеспособных клеток и их патологических форм (с аномалиями головки). При этом нарушается подвижность сперматозоидов, что отражается в увеличении клеток с быстрым поступательным движением (нормокинезия, категория А), а также спермиев с колебательным неупорядоченным движением (дискинезия, категория С), уменьшении клеток с медленным поступательным движением (гипокинезия, категория В) и неподвижных сперматозоидов (акинезия, категория Б).
Ключевые слова: ядерный фактор кВ, нитратная интоксикация, рентгеновское облучение, сперматограмма, кинезиограмма.
Стаття надшшла 5.06.2016 р.
INFLUENCE OF NUCLEAR FACTOR kB INHIBITOR ON FUNCTIONAL STATUS OF SPERM IN WHITE RATS UNDER COMBINED EFFECT PRODUCED BY SODIUM NITRATE AND X-RAY IRRADIATION ON THE BODY Shatalin B. O., Kostenko V. O.
This experiment involved 28 white rats was designed to study the effect of nuclear factor kB (NF-kB) inhibitor -JSH-23 (4-methyl-N- (3-phenylpropyl) benzene-1,2-diamine) - on quantitative and qualitative indicators of sperm under the conditions combining chronic intoxication with sodium nitrate (200 mg / kg for 30 days) and exposure to X-rays (in a dose of 0.08 Gy three times a week on alternate days, for a total of 0.25 Gy). It has been shown the administration of JSH-23 (1 mg/kg, twice a week) in experimental conditions significantly reduces the percentage of non-viable cells and their pathological forms (with caput abnormalities). At the same time the motility of spermatozoa becomes impaired that is reflected in the cell increase with the rapid forward movement (normokinesis, category A), as well as sperm cells with oscillating disordered movement (dyskinesis, category C), reducing the cell with a slow forward movement (hypokinesis, category B) and fixed sperm (akinesis, category D).
Key words: nuclear factor kappa B, nitrate intoxication, X-ray irradiation, spermiogram, kinesiogram.
Рецензент Старченко I.I.
УДК 616.453:616.381-002.1-085.362
УЛЬТРАСТРУКТУРНА ХАРАКТЕРИСТИКА КОРИ НАДНИРНИК1В ПРИ ГОСТРОМУ АСЕПТИЧНОМУ ПЕРИТОН1Т1 ТА ЙОГО КОРЕКЦП ВВЕДЕННЯМ КРЮКОНСЕРВОВАНО! ПЛАЦЕНТИ
В робой проведене ультраструктурне дослщження пучково! зони кори наднирниюв при введенш крюконсервовано! плаценти на тт асептичного запалення очеревини. Встановлено, що асептичний перитошт викликае в пучковш зош кори наднирниюв деструктивш змши, яю проявляються на 3 добу спостереження дистрофiчними змшами ядер i органел. До 7 доби експерименту визначаються деструктивш змши з боку органел. Введення крюконсервовано! плаценти на тт гострого перитошту викликае збшьшення лшдних включень та незначш дистрофiчнi змши м^охондрш на 3 добу, та попереджае виникнення деструктивних змш в спонпоцитах вже на 7 добу спостереження, що проявляеться вщновленням ультраструктури м^охондрш та ендоплазматично! Ытки.
Ключовi слова: наднирники, спонгюцити, асептичне запалення, крюконсервована плацента.
Робота е фрагментом НДР „Експерыментально-морфологiчне вивчення ди трансплантатiв крюконсервованоI плаценти та шших екзогенних чиннитв на морфофункщональний стан ряду внутршшх оргашв ", № державноIреестраци 0113и001572.
Специф1чиа морфолопя, функцюнальна активнють та походження з р1зних ембрюнальних джерел основных складових наднирниюв беззаперечно вказуе на те, що даш залози е одними з найважливших оргашв ендокринно! системи. Доведено, що наднирники вщповщають за основш вгальш функци нашого оргашзму. А саме: приймають участь в ус1х видах обмшу речовин, у
