CC BY
99
УДК 615.282:615.37.03
ВОЗМОЖНОСТИ ПОВЫШЕНИЯ БИОДОСТУПНОСТИ
АНТИМИКОБАКТЕРИАЛЬНОГО ИММУНОМОДУЛЯТОРА - КРИСТАФОНА
Е.С. Рыжова, Д.А. Пантелеев, А.А. Волков, Ю.В. Чудецкая,
Т.В. Саликова, Л.Н. Нистратова, Н.Б. Мельникова,
ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»
Рыжова Елена Семеновна - e-mail: relenas@mail.ru
Методами УФ-, ИК-, Н I3C, 3|Р ЯМР-спектрометрии изучены химические свойства кристафона и его солей с кислотами, трисамином, диметилсульфоксидом и серебра нитратом. Выявлены условия, обуславливающие стабильность лактимной формы кристафона и, соответственно, его высокую биодоступность. Показана возможность создания лекарственных форм кристафона в виде водных растворов, суппозиториев, гелей и мазей.
Ключевые слава: кристафон, таутомерия, биодоступность, пиримидины.
Chemical characteristics of kristaphon and its salts with acids, trisamin, dimethyl sulfide and silver nitrate have been studied with the help of UV, IR, H, C, P and NMR spectrometry. Conditions of lactide form stability of kristaphon and its high bioavailability have been found. Opportunity of creation of water solution, suppository, gel and ointment forms of kristaphon is demonstrated.
Key words: kristaphon, bioavailability, tautomerism, pyrimidine
Производные пиримидина - составная часть молекул витаминов, производных барбитуровой кислоты и ура-цила, нуклеотидов нуклеиновых кислот, а также других лекарственных средств (ЛС) как природного, так и синтетического происхождения [1-8].
Фармакологический спектр действия производных пиримидина определяется их структурой, и особый интерес представляют ЛС, включающие в себя фрагменты оксопи-римидинов (урацильного, тиминового и др.) [3, 8]. Замещение атома водорода в оксопиримидиновом цикле на сульфоновую группу обуславливает противоопухолевые, противовоспалительные, антимикобактериальные, противовирусные и иммуномодулирующие свойства, проявляющиеся на фоне вторичного иммунодефицитного состояния [4, 6-8].
Большой вклад в разработку и исследование иммуномодулирующих ЛС - производных оксопиримидина с сульфоновой группой, обладающих антимикобактериальной активностью, внесли сотрудники школы Голощапова Н.М. [4, 8-11]. Наибольший интерес в этой группе препаратов представляет кристафон (изофон, метилдиоксотетрагидро-пиримидин сульфонизоникотиноил гидразид), применяемый при таких заболеваниях как лепра, туберкулёз, хлами-диоз, трихомонадная, уреаплазменная и герпетическая инфекции [4, 8-17].
Наряду с комплексом ценных фармакологических свойств, присущих производным оксопиримидинов с сульфоновой группой, это соединение обладает плохой растворимостью в
воде, 95% спирте, а также в большинстве органических растворителях и липидных средах. Учитывая тот факт, что растворимость является одним из факторов, определяющих биодоступность, можно предположить и низкую биоусвояемость кристафона. Действительно, при пероральном применении кристафона (капсулы, таблетки) почти 50% препарата выделяется через желудочно-кишечный тракт в неизменном виде. Низкая растворимость кристафона является ограничивающим фактором также для разработки новых лекарственных форм (ЛФ).
Настоящая работа посвящена поиску путей получения новых лекарственных форм на основе фармацевтической субстанции кристафон с улучшенными фармакологическими характеристиками.
В задачи исследования входило: установление факторов, влияющих на связь «структура-активность» сульфоно-оксопиримидинов, изучение лактим-лактамной таутомерии в молекуле кристафона, исследование возможности химической и физико-химической модификации кристафона и разработка новых лекарственных форм с повышенной биодоступностью.
Методика эксперимента
Кристафон, НПП ФГУП «Кристалл», г. Дзержинск Нижегородской области, ФСП 42-0037-4715-03, чистота 99,9%.
Приборы: ИК-спектры получены на ИК спектрофотометре «IRPrestige-21», Shimadzu (Япония), таблетки KBr. 13С, 1Н, 31Р ЯМР спектры регистрировали на спектрометрах «Bruker Advance DPX - 200» и «Bruker DRX SF-500». УФ-спектры кристафона снимали на УФ спектрофотометре «Specord S 100», «Analytik Jena» (Германия) в кварцевых кюветах с толщиной слоя 10 мм. Идентификацию и количественное определение фосфат-ионов проводили методами рН-метрического титрования и фотоколориметрии [18, 19]. Количественное определение ионов серебра проводили по стандартной методике [20].
Получение солей кристафона. Натриевую соль кристафона получали по методике [21]. Серебряную соль кристафона
синтезировали при обработке мелкодисперсной суспензии кристафона серебра нитратом. Реакционную смесь интенсивно перемешивали в течение 15 мин, осадок отделяли на стеклянном фильтре, промывали водой и высушивали при температуре 50-80°С без доступа прямых лучей света. Кислотные комплексы кристафона получали при растворении кристафона в 1 М водном растворе фосфорной или хлористоводородной кислот, температуре 80-85°С и перемешивании в течение 0,5 ч. После охлаждения к раствору добавляли избыток этанола и осадок белого цвета отфильтровывали, промывали этанолом и сушили при 100°С (tm=258°C с разложением).
Микробиоцидную активность кристафона в суппозито-риальной ЛФ изучали методом серийных разведений при использовании типовых штаммов микроорганизмов S. aureus и E. Coli при лечении вагинитов у крыс. Для гистологических исследований использованы парафинированные образцы слизистой влагалища, полученные обработкой в 10% формалине, спиртах и парафине.
Специфическую иммунотропную активность растворов кристафона и его солей исследовали с использованием половозрелых самцов белых беспородных крыс массой 185±2,5 г и самцов мышей гибридов F1 (СВАхС57В16) 21 ±1,5 г. Кровь брали из подъязычной вены животного в объеме 1,01,5 мл после 14-15-часового голодания в соответствии с СОП ЦНИЛ НижГМА. Опытные и контрольные группы состояли из 10 животных (всего 30), полученных из питомника «Столбовая» ГУ НЦ БМТ РАМН.
Оценку неспецифического иммунитета (фагоцитоз) проводили по показателям метаболитической перестройки клеток, фиксируемой методом люминолзависимой хемилюминесценцией (ХЛ) [22]. Для изучения влияния предлагаемых композиций на специфический гуморальный иммунитет животным вводили стандартный антиген и контролировали титр сывороточных антител (IgG). Изменение клеточного иммунитета под действием фосфата кристафона изучали в реакции гиперчувствительности замедленного типа методом иммунизации эритроцитами барана.
Туберкулостатическое действие кристафона в водных растворах в присутствии биологически активных веществ изучали в Свердловском противотуберкулезном диспансере (г. Екатеринбург).
Острую токсичность серебряной соли кристафона определяли по Литчфилду-Уилконсону на самцах мышей внутри-брюшинно.
Результаты и их обсуждение
Компьютерное прогнозирование фармакологических эффектов проведено для таутомерных форм кристафона
(1а, 1в, 1г), типичных для оксопиримидинов [9] (рис. 1) по программе PASS.
Расчеты показали более высокую вероятность (Pa) иммуномоделирующей, антимикобактериальной, в том числе анти-лепрозной, активности для енольной формы 1 г (таблица 1).
ТАБЛИЦА 1.
Фармакологическая активность различных таутомерных форм кристафона (по программе PASS)
Вероятность активности Pa
Активность 1 а 1 в 1 г
(лактамная) (лактимная) (лактимная)
Иммуномодулирующая 0,67 0,59 0,93
Антимикобактериальная 0,51 0,54 0,81
Антилепрозная - 0,34 0,93
Из анализа литературных данных по изучению антимикобактериальной активности препаратов этой группы следует, что кристафон намного превосходит известные аналоги по антилепрозной активности (в относительных единицах) [4]: кристафон >
(++++)
дапсон>
(диамино дифен ил сульфон)
(+++)
диуцифон і
[парапара(2,4-диоксоб-метил пиримидинияб-сульфонамине) дифенил сульфон
(++)
изониазид
(++)
В отличие от этого, противотуберкулёзная активность кристафона существенно уступает известному туберкулостатическому ЛC - изониазиду [А]:
изониазид = дапсон> кристафон > диуцифон
(+++)
(+++)
(++)
(+)
Как следует из представленных данных, изониазидный фрагмент, определяющий противотуберкулёзную активность [11], мало влияет на противолепрозные свойства, а сульфоноксопиримидиновый фрагмент кристафона оказывает решающее влияние при лечении лепры.
Результаты исследований, подтверждающие иммуномодулирующее действие кристафона и его эффективность при лечении лепры и туберкулеза представлены в работах [А, 11-17]. Установлено сильное влияние кристафона и диу-цифона на продукцию антителобразующих клеток у облучённых животных: индекс стимуляции при лечении диуци-фоном увеличился с 0,9 (контроль) до 2,1, а при лечении кристафоном до 3,3, соответственно [А].
Кристафон в ряду анализируемых препаратов является не только наиболее эффективным, но и наиболее безопасным ЛС что показывают параметры ЛД50 (мг/кг) [А]:
кристафон < (6000)
диуцифон < (2600)
дапсон<
(450)
изониазид
(150)
НО
О
н,с
16
но
NH
'МЛ hoa'
Off=^
Н.С
la
Лактамная форма РИС. 1.
Лактим-лактамная таутомерия кристафона; R - изоникотиноил гидразидный фрагмент.
1г
Id
Лактимная форма
Можно предположить, что токсичнось токсофорной изо-ниазидной группы снижается при введении ее в сульфоно-оксопиримидин как в «молекулу-носитель». Такой подход часто используется при синтезе ЛВ.
Сопоставительный анализ экспериментально подтверждённой фармакологической активности кристафона [4] и данных компьютерного прогнозирования (таблица 1) показывает, что высокая антилепрозная и иммуномодулирующая активность зависят от структуры кристафона и максимальны для лактимной формы.
Лактим-лактамная таутомерия в пиримидиновом фрагменте (рис. 1) зависит от рН-среды, силы кислоты или основания, присутствующих в растворе. В лактимной форме кристафона водород гидроксильной группы способен образовывать водородную связь с кислородом сульфогруппы, располагающейся рядом (рис. 1, структура 1д), что способствует ионизации, улучшению растворимости, повышению реакционной способности кристафона в организме человека и его биоусвояемости [9, 23, 24].
Ранее нами показано повышение растворимости кристафона в 50-500 раз в кислых и основных средах по сравнению с водой (0,01 мг/мл или 3,08*10-5 моль/л) [23]. На основе этих данных нами исследована возможность создания ЛФ кристафона в виде раствора с использованием УФ-спектров по зависимости длины волны полосы поглощения карбонильных групп (амидной в изониазидном фрагменте и в пиримидиновом цикле) кристафона от pH среды. В области pH 10-13 преобладают растворимые лактимные формы кристафона с разной степенью ионизации (\тах=270-280 нм), а в области pH 1-3 растворимость кристафона определяется образованием пиридиниевой соли [18].
Нами показано, что кристафон хорошо растворяется в водных растворах таких эндогенных органических кислот, как янтарная, лимонная, щавелевая и уксусная, а также фосфорной и соляной кислот. При этом образуются пиридиние-вые соли с преобладанием лактамной формы в сульфооксо-пиримидиновом фрагменте, о чем свидетельствует полоса с \тах=266 нм в УФ-спектре (рис. 2)
Аотн
0,8 Ч
РИС. 2.
УФ- спектры поглощения кристафона (Кри):
1 - 1,5^10-5М Кри в 0,1 М растворе фосфорной кислоты; 2 - фосфата Кри в воде; 3,4,5 - 5^10-5М Кри в растворах янтарной, лимонной и щавелевой кислотах, соответственно; 6 - 2,5^10-5М Кри в растворе гиалуроновой кислоты.
0,6
0,4
0,2-
0,0
250
300
А, нм
Кристафон также растворяется в водном растворе органического основания - трисамине [(три-(оксиметил)-аминометан, [\1Н2С(СН2ОН)3] и в диметилсульфоксиде (ДМСО), являющихся ЛВ. В УФ спектрах этих растворов наблюдается полоса карбонила, соответствующая лактимной форме кристафона с \тах=270-280 нм (рис. 3).
Аогн
0,8-
0,4-
0,0
250
300
Х,нм
РИС. 3.
УФ-спектры поглощения: 1 - водного раствора, содержащего кристафон и трисамин (1:8);
2 - раствор кристафона в ДМСО.
Структура продуктов взаимодействия кристафона с кислотами и трисамином была установлена методами УФ-, ИК-(таблица 2), 1Н, 13С, 31Р ЯМР-спектроскопии после их выделения в кристаллическом виде.
ТАБЛИЦА 2.
Данные ИК спектров продуктов взаимодействия кристафона с кислотами
Продукты реакции Волновые числа, V см-1
3500-3000 (N4-; ОН-) 1800-1600 (Амид I, Амид II) 1360-1240 (Р-О) 1200-1100 (-Б02)
Кристафон 3307 узк. инт., 3190 ср. пер., 3130 ш. пер., 3065 ш. инт., 1745 и 1726 узк. инт., 1693, 1682, 1658 и 1662 узк. инт. - 1165 узк. инт.
1 3 1 -в-х Е р ис 1=5 * 3292 ср. высокоструктурированная. 1744 узк. инт., 1734 узк. инт., - 1165 или 1163 узк. инт.
несколько полос с главным максимумом 3065 ш. пер. 1676 узк. инт., 1660 и 1608 узк. пер.
Фосфат кристафона 3450 ш. инт., 3237 узк. инт., 3129 ш. пер., 3112 ср. пер., 3049 узк. пер., 1740 узк. инт., 1723 узк. инт, 1699 узк. инт., 1680 узк. инт, 1634 узк. пер. 1355 узк. инт., 1311 узк. инт. 1255 узк. пер. 1183 узк. инт.
На основании ИК-спектров (существенные изменения в диапазоне 4000-3000 см-1 для всех полученных продуктов, появление полос, характеризующих Р-О-связь для фосфата) следует, что взаимодействие в кислой среде происходит с образованием солей по атому азота пиридинового цикла. Это подтверждает данные ПМР-спектров, в которых отмечается появление нового широкого синглета в области пиридинового цикла 8 = 7,15-8,75 м.д. для фосфата, и изменения хим.сдвигов дублетов в пиридиновом цикле (с 7,65 до 7,8 м.д. и с 8,75 до 8,85 м.д.) для хлорида кристафона. ЯМР 13С-спектры продуктов реакции кристафона с кислотами также подтверждают, что комплексо-образование проходит по солевому типу (наблюдаются сдвиги для всех атомов углерода Д8 й 0,5 м.д.).
С учетом того, что биотрансформация пиримидинов часто протекает с участием фосфорной кислоты [24], наибольший интерес в ряду изучаемых солей вызывает фосфат кристафона, структура которого доказана более детально. Общее
содержание фосфора (6,9-7%) и потенциометрическое титрование раствора фосфата кристафона подтверждает, что фосфор в продукте существует в виде фосфат-аниона, причем на 1 молекулу кристафона приходится один фосфат-ион. В спектрах ЯМР 31Р наблюдается один сигнал с химическим сдвигом 8 = 1,27 м.д.
Полученные результаты позволили нам разработать жидкую ЛФ в виде водных растворов солей, наиболее перспективной из которых является фосфат кристафона.
Фосфат кристафона по сравнению с кристафоном в концентрации 0,5 мг/мл показывает более высокую иммуно-тропную активность. Количество IgG антител у мышей (титр реакции), иммунизированных эритроцитами барана, изменялось от 1:36 (контроль) до 1:233 (фосфат кристафона). Для раствора фосфата кристафона отмечено достоверное увеличение интенсивности реакции гиперчувствительности замедленного типа по изменению среднего диаметра отечного участка при постоянстве реактивности (готовности к фагоцитозу) нейтрофилов.
Другим приемом повышения биодоступности ЛВ является коллоидно-химическое растворение их в присутствии биологически-активных веществ (БАВ), способствующих образованию H-комплексов. В качестве БАВ были выбраны полисахариды: декстран и гиалуроновая кислота.
Растворимость кристафона в растворах гиалуроновой кислоты и декстрана увеличивается примерно в 50 раз (до 1,8*10-3 моль/л) в воде и ещё в 2 раза при рН 8,4 [25].
Исследованиями in vitro установлено, что наибольшей туберкулостатической активностью - 0,45 активности изо-ниазида, обладает водный раствор, содержащий криста-фон, гиалуроновую кислоту и триптофан. Учитывая, что кри-стафон в 40 раз менее токсичен изониазида, полученный результат является весьма значимым [25].
Предпринята попытка улучшения биодоступности кристафона за счёт введения в его молекулу ионов натрия [21, 23] и получения растворимой кристаллической соли. Нами показано, что полученная первоначально-растворимая динатриевая соль кристафона с течением времени теряла свою высокую растворимость [23]. Кроме того, прогнозирование фармакологических свойств по компьютерной программе PASS показало, что динатриевая соль обладает множеством отрицательных свойств, в том числе канцерогенными, тератогенными и эмбриотоксическими.
Для усиления антимикробных свойств нами синтезирована серебряная соль кристафона [патент 26]. Ион серебра в серебряной соли кристафона включается в сульфооксопи-римидиновый фрагмент молекулы, что подтверждают данные ИК-, 1Н, 13С ЯМР-спектроскопии [27]. В отличие от комплексов кристафона с кислотами, полоса 1743 (1726) см-1 (лактамной -С=О) в ИК-спектре отсутствует. В ПМР-спектре серебряной соли кристафона отмечается сдвиг протонов 8 пиридинового кольца с 7,65 м.д. (кристафон) до 7,8 м.д. (серебряная соль), сдвиг триплетов СН3 группы с 2,3-2,5 м.д. (кристафон) до 2,0 м.д. (серебряная соль), появляется новый дуплет с 8 = 10,7; 10,8 м.д. и новый синглет в § области фенольной группы 8 = 5,2 м.д. н
Ад
Серебряная
соль
кристафона
Антимикробная активность серебряной соли кристафона в отношении S. aureus, E. coli, Ps. aeruginosae и активность в отношении Candida albicans значительно превышает активность кристафона (таблица 3). Учитывая токсичность серебряной соли кристафона (ЛД50), нами рекомендовано использовать в ЛС наружного применения смесь кристафо-на и его серебряной соли.
ТАБЛИЦА 3.
Антимикробные свойства кристафона и его серебряной соли
ЛС S.aureus E.coli Ps.Aeruginosae Candida albicans
кристафон ++
Ag-кристафон +++ +++ +++ +
кристафон: Ag-кристафон 1:1 +++ +++ +++ +
кристафон: Ag-кристафон 4:1 ++ +++ +++
Противомикробная активность серебряной соли кристафона и ее смеси с иммуномодулятором - кристафоном 1:1 (таблица 3) позволили нам разработать ЛФ наружного применения (суппозитории вагинальные, мази, кремы, гели, медицинские карандаши) для лечения инфекционных заболеваний местного характера в гинекологии и дерматологии.
Нами предложена гидрофильная основа, состоящая из ПЭ0-400 и ПЭ0-1500 в соотношении 1:19, соответственно. В состав суппозиториев, наряду с кристафоном или его солями (предпочтительно фосфатом кристафона), могут быть включены ксимедон, кверцетин, эвкалиптовое масло и др. [28].
Для суппозиториев вагинальных с кристафоном выбрана основа Витепсол, марок Н-15 и W-35 в соотношении 1:1 как более мягкая и не оказывающая раздражающего действия на слизистую оболочку влагалища [28].
Исследования показали, что лечение бактериального вагинита, используя суппозитории вагинальные, содержащие смесь Ад-кристафона и кристафона, более эффективно в сравнении с известным препаратом Бетадин и позволяют рекомендовать эту ЛФ для регистрации и применения в медицинской практике.
Рассмотренные выше результаты по эффективности действия фармацевтической субстанции кристафон в ЛФ свидетельствуют о том, что для создания эффективного ЛС связь «структура - активность» недостаточна и необходимо учет связи «ЛФ - структура - активность».
Выводы
1. Проанализирована связь «структура-активность» для антибактериальных иммуномодуляторов из группы сульфо-ноксопиримидинов. Высокая антилепрозойная и иммуномодулирующая активность кристафона зависят от его структуры и проявляются в лактимной форме.
2. Методами УФ-, ИК-, 1Н, 13С, 31Р ЯМР-спектрометрии изучены химические свойства кристафона и его солей с кислотами, трисамином, диметилсульфоксидом и с серебра нитратом. Выявлены факторы, определяющие биодоступность кристафона и его производных, и возможности их использования как фармацевтических субстанций в различных лекарственных формах.
3. Показана возможность создания лекарственных форм с высокой концентрацией кристафона в виде: водных растворов, используя кислоты (гиалуроновую, янтарную,
щавелевую и фосфорную), трисамин, диметилсульфоксид; суппозиториев на гидрофильной и жировой основе; гелей и мазей. ЕЦ
ЛИТЕРАТУРА
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: РИА «Новая волна»: Издатель Умеренков, 2008. С. 1206.
2.Граник В.Г. Лекарства. Фармакологический, биохимический и химический аспекты. Монография. М.: Вузовская книга, 2001. С. 408.
3.Каркищенко Н.Н., Хайтин М.И., Страдомский Б.В. Основы клинической фармакологии. Пиримидины: учебное пособие. Ростов на Дону: РОДНМИ, 1985. С. 130.
4. Голощапова Е.Н. Новые иммуномодуляторы с антимикобактериальной активностью. Автореф-т диссертации на соискание ученой степени д. м. н. М. 1997. С. 32.
5.Камилов Ф.Х., Лазарева Д.Н., Плечев В.В. Пиримидины и их применение в медицине. Уфа. 1992. 156 с.
6. Elderfield R.C. and Prasad R.N. J. Org. Chem. 1961. Р. 3863-3867.
7. Регистр лекарственных средств России РЛС. Энциклопедия лекарств. Под ред. Г.Л. Вышковского. М.: РЛС-2008, 2007. 1456 с.
8. Buckheit R.W, Jr., Hartman T.L., Watson К.М., Sun-Gan Chung and Eui-Hwan Cho, Antimicrobial agents and chemotherapy. Jan. 2008. Р. 225-266.
9. Кереселидзе Дж.А., Заркуа Т.Ш., Кикалишвили Т.Дж., Чургулия Э.Дж., Макаридзе М.С. Некоторые новые представления о механизме таутомерных превращений. Успехи химии. 2002. № 71 (12). С. 1120-1131.
10. Патент РФ 2141322. Иммуномодулятор с антимикобактериальной активностью «Изофон», способ его получения и применения. Голощапов Н.М., Голощапова Е.Н. Опубл. 20.11.99. Бюл. 32. 12.
11. Голощапов Н.М. и др. Новый иммуномодулятор Изофон с антибактериальной активностью. Фармация в XXI веке: инновации и традиции: Тезисы докладов международной научной конференции. Санкт-Петербург, 7-8 апреля. 1999. СПб.: СПХФА, 1999. 146.
12. Голощапова Е.Н. Иммунотропная активность антимикобактериальных средств. Иммунология. 1989. № 5. С. 78-80.
13. Кривонос П.С. и др. Влияние Изофона в комплексном лечении больных туберкулезом легких на иммунологические показатели крови. Медицинская иммунология. 2001. Т. 3. № 2. С. 224-225.
14. Кривошеева Ж.И., Кривонос П.С., Борткевич Л.Г., Емельянова Н.А. Новые подходы в этиопатогенетическом лечении туберкулёза органов дыхания у детей и подростков. Белорусский государственный медицинский университет. Белорусский медицинский журнал. 2005. № 1.
15. Кривонос П.С., Калечиц О.М., Авдеев Г.С. и др. Изофон - новый препарат для лечения больных туберкулёзом легких. Рецепт. 2001. № 4. С. 89-93.
16. Борткевич Л.Г., Космачева С.М., Кривонос П.С. и др. Продукция гамма-интерферона лимфоцитами больных туберкулёзом легких под влиянием изофона и изодинафона. Х Конгресс «Человек и лекарство»: Сборник резюме. М.: 2003. 124 с.
17. Голощапов Н.М. Изофон - новое лекарство от туберкулеза. Фармацевтический вестник. 1998. № 23. С. 114.
18. ГФ XI. Выпуск 1. Общие методы анализа. М.: Медицина, 1987. С. 164.
19. Уильямс У. Дж Определение анионов. Справочник. М.: Химия, 1982.
С. 462, 484.
20. Пятницкий И.В., Сухан В.В. Аналитическая химия серебра. М.: Наука, 1975.
21. Пат. 2191015 РФ, МПК А 61 К 31/505 Динатриевая соль ^(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-^-изоникотингидразида, проявляющая антимикробную и иммунотропную активность, и лекарственное средство на её основе. Голощапов Н.М., Филипских Т.П. РФ. 99123407/14; Заявлено 05.11.99. Опубл. 20.10.02. 8 с.
22. Tono-Oka T., Veno N., Matsumoto T. Immunol. Immunopatol. 1983. Vol. 26 (1). Р. 66-75.
23. Рыжова Е .С., Пантелеев ДА., Чудецкая Ю.В., Волков А.А.,
Мельникова Н.Б., Гуленова М.В., Османов В.К., Борисов А.В. Хим.-фарм. журнал. 2010. № 4. том 44. С. 43-50.
24. Мецлер Д.Е. Биохимия. Химические реакции в живой клетке. М.: Мир, 1980. С. 408.
25. Мельникова Н.Б., Чудецкая Ю.В., Волков А.А. Известия вузов. Химия и хим. технология. 2008. Т. 51. Вып. 10. С. 65-68.
26. Патент РФ 2368909. Серебряная соль ^(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-^-изоникотингидразида, проявляющая иммунотропную, противогрибковую, противомикробную активность, и лекарственное средство на её основе. Роснецов Л.Д., Шварцман Я.Ю., Яшнова О.К., Мельникова Н.Б., Чудецкая Ю.В., Волков А.А. 27.09. 2009.
27. Чудецкая Ю.В., Волков А.А., Мельникова Н.Б. Синтез и свойства соли серебра пиримидинового производного - Кристафона. Известия высших учебных заведений. Химия и химическая технология. Иваново. 2009. Т. 52. № 3. С. 117-120.
28. Чудецкая Ю.В. Разработка новых лекарственных препаратов на основе кристафона и его серебряной соли. Автореф-т диссертации на соискание ученой степени к. х. н. КХТУ. 2009. С. 22.
