CC BY
35
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров.
ВОЗМОЖНАЯ АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ С ХРОМОСОМНЫМИ НАРУШЕНИЯМИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ
Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) — опухолевое заболевание системы крови с выраженной клинико-эпидемиологической гетерогенностью и вариабельностью ответа на терапию. Одними из важнейших факторов прогноза клинического течения ХЛЛ являются хромосомные нарушения лейкозных клеток. К настоящему времени выявлены наиболее часто встречающиеся при данном заболевании хромосомные аберрации: делеции длинных плеч 13 и 11 хромосом (del(13q14) и ёе1(1^22), соответственно), делеция короткого плеча 17 хромосомы ^е1(17)(р13)) и трисомия 12 хромосомы. При этом установлено неблагоприятное прогностическое значение del(17) (р13), del(11)(q22) и комплексных хромосомных аномалий, в то время как отсутствие хромосомных нарушений и наличие del(13q14) в качестве единственной цитогенетической аномалии принято считать благоприятным прогностическим фактором при ХЛЛ.
В последние годы накапливается все больше данных, свидетельствующих о том, что определенный вклад в патогенез злокачественных новообразований, включая ХЛЛ, могут вносить также конституциональные особенности генома, в частности, полиморфизм ферментов генов биотрансформации генов ксенобиотиков (ФБК), участвующих в дезактивации (детоксикации) экзогенных и эндогенных генотоксикан-тов. Среди таких генов следует выделить, прежде всего, ген внепеченочного индуцибельного цитохрома Р450 1А1 (CYP1A1) — фермента 1 фазы ФБК, активирующего полициклические ароматические углеводороды и ароматические амины, — и гены глутатион-8-трансфераз р,1 ^ГМ1), 01 ^ГП) и п1 ^ГР1) — ферментов 2 фазы ФБК, катализирующих конъюгацию
глутатиона с электрофильными группами широкого спектра ксенобиотиков и обеспечивающих благодаря этому нейтрализацию их действия, способного повредить геном. Неполноценные формы отмеченных ферментов, обусловленные полиморфизмом, являются возможным фактором, способным повысить внутриклеточный генотоксический фон и соответственно модулировать стабильность генома как на генном, так и на хромосомном уровнях.
В свете сказанного целью настоящей работы явилось исследование возможной ассоциации полиморфизма вышеуказанных генов ФБК с наиболее часто встречающимися типами хромосомных нарушений лейкозных клеток при ХЛЛ на момент постановки его диагноза.
В анализ были включены результаты исследований полиморфизма вышеуказанных генов и FISH-анализа 69 больных ХЛЛ (средний возраст 61,2 года). Материалом для исследования полиморфизма послужила ДНК, выделенная из гранулоцитов венозной крови больных стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. Детекцию делеционного полиморфизма генов GSTM1 и GSTT1 проводили методом мультиплексной ПЦР. Генотипирование же полиморфизмов A2455G (Ile462Val) и A1578G (Ile105Val) соответственно в генах CYP1A1 и GSTP1 выполняли методом ПЦР с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов.
Анализ наиболее часто встречающихся хромосомных нарушений у больных ХЛЛ проводился FISH-методом с помощью панели ДНК-проб (зондов), состоящей из 2 коктейлей: LSI p53/LSI ATM (SpectrumOrange/ SpectrumGreen) и LSI D13S319/LSI 13q34/CEP 12 (SpectrumOrange/ SpectrumAqua/SpectrumGreen).
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ
Для FISH-анализа использовали препараты с множественными миниатюризованными зонами гибридизации, приготовленными согласно разработанному нами способу (Способ приготовления препаратов клеток для флуоресцентной in situ гибридизации: пат. RU 2 390 776 C1: МПК G01N 33/48, G01N 1/28 / Овсепян В.А., заявитель и патентообладатель ФГУ «КНИИГиПК ФМБА России». — № 2410663; заявл. 14.09.2009; опубл. 27.01.2011, Бюл. № 3. — 7 с.: ил.), значительно увеличивающим эффективность проведения множественных пространственно разобщенных гибридизаций.
В результате проведенного исследования впервые показана возможная ассоциация гомо-
зиготного носительства мажорного (полноценного) аллеля GSTP1*105Ile с прогностически благоприятной моноаллельной интерстициальной делецией 13q14.3 при ХЛЛ, являющейся на момент диагностики единственным хромосомным нарушением в лейкозных клетках, встречающимся с частотой не превышающей 70 % от общего количества проанализированных клеток. Среди больных с подобной делецией гомозиготы по мажорному аллелю GSTP1*105Ile были обнаружены чаще, чем носители хотя бы 1 минорного (неполноценного) аллеля GSTP1*105Val (35,7 % против 64,3 % у гомозигот по GSTP1*105Ile X2 = 4,09, p < 0,05; OR=3,40, 95 % CI = 1,00-11,60).
Овсепян В. А., Росин В. А., Лучинин А. С., Загоскина Т. П.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров.
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ CYP1A1, GSTM1, GSTT1, GSTP1 И РАЗВИТИЕ ПЕРВИЧНОГО МИЕЛОФИБРОЗА
Первичный милофиброз (ПМФ) является клональным миелопролиферативным заболеванием (МПЗ), в основе развития которого лежит трансформация стволовых кроветворных клеток. Ежегодная заболеваемость ПМФ в разных странах составляет 0,5—1,5 случая на 100 000 населения. Генетических аномалий, характерных для ПМФ, не идентифицировано. У 45-70 % больных ПМФ обнаруживается мутация V617F,
выявляемая также при истинной полицитемии и эссенциальной тромбоцитемии. В то же время в последние годы появляется все больше данных, указывающих на то, что определенный вклад в патогенез злокачественных новообразований, включая МПЗ, могут вносить также конституциональные особенности генома, в частности, полиморфизм ферментов генов биотрансформации ксенобиотиков (ФБК), участвующих в дезактивации (детоксикации) широкого круга эндогенных и экзогенных веществ, способных повредить клеточный геном. К числу таких генов следует отнести, прежде всего, ген внепеченочного индуци-бельного цитохрома Р450 1А1 (СУР1А1) — фермента 1 фазы ФБК, активирующего полицикли-ческие ароматические углеводороды и ароматические амины, — и гены глутатион-8-трансфераз ц1 (С8ГМ1), 01 (С8ГГ1) и п1 (С8ГР1) — ферментов 2 фазы ФБК, катализирующих конъюгацию глутатиона с электрофильными группами широ-
кого спектра ксенобиотиков и обеспечивающих благодаря этому нейтрализацию их действия, способного повредить геном. Неполноценные формы отмеченных ферментов, обусловленные полиморфизмом, способны повысить внутриклеточный генотоксический фон и соответственно повысить генетическую нестабильность клетки.
Целью настоящей работы явилось изучение возможной ассоциации полиморфных вариантов вышеуказанных генов с развитием МПФ.
Материалом для исследования полиморфизма послужила ДНК, выделенная из мононуклеаров венозной крови 70 больных МПФ и 235 практически здоровых лиц (контрольная группа) стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. Детекцию делеционного полиморфизма генов GSTM1 и GSTT1 проводили методом мультиплексной ПЦР. Генотипирование же полиморфизмов A2455G (Ile462Val) и A1578G (Ile105Val) соответственно в генах CYP1A1 и GSTP1 выполняли методом ПЦР с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов.
Проведенное исследование не выявило статистически значимых различий в распределении частот полиморфных вариантов изучаемых генов ФБК среди больных ПМФ и здоровых лиц. Из данного факта следует, что полиморфизмы генов €^Ш, GSTM1, GSTT1 и GSTP1, скорее всего, не являются факторами риска развития ПМФ.
