Воздействие теплового стресса на микробиоту кишечника

Ажмулдинов Елемес Ажмулдинович; Титов Максим Геннадьевич; Кизаев Михаил Анатольевич; Бабичева Ирина Андреевна; Соболева Наталья Владимировна; Мальчиков Роман Викторович; Холодилина Татьяна Николаевна

УДК 639.92:577.17 DOI: 10.33284/2658-3135-102-4-163

Воздействие теплового стресса на микробиоту кишечника

Е.А. Ажмулдинов1, М.Г. Титов1, М.А. Кизаев1, И.А. Бабичева2, Н.В. Соболева2, Р.В. Мальчиков3,

Т.Н. Холодилина14

1 Федеральный научный центр биологических систем и агротехнологий Российской академии наук (г. Оренбург)

2 Оренбургский государственный аграрный университет (г. Оренбург) 3Пермский институт ФСИН России (г. Пермь)

4 Оренбургский государственный университет (г. Оренбург)

Аннотация. Чрезмерное тепловое воздействие снижает целостность кишечника, что может ухудшить самочувствие и привести к различным заболеваниям. Поэтому целью нашего исследования являлось изучение микробиоты кишечника при тепловом стрессе и разработка методов его нивелирования путём оптимизации микрофлоры микроэлементами у кроликов-самцов 5-месячного возраста со средней живой массой 1551 г. Максимальная температура воздействия во время эксперимента составляла +42 °С. Результаты исследования показали, что у кроликов, подвергшихся тепловому стрессу, увеличивалось общее микробное число в кишечнике по сравнению с контролем на 12,8 % с одновременным преимуществом числа условно патогенных видов микроорганизмов: энте-робактерий - на 11,1 %, энтерококков - на 19,0 %. Можно сделать вывод - тепловой стресс нарушает целостность кишечника, что приводит к повышению кишечной проницаемости для эндотоксина, транслокации кишечных патогенов. Введение УДЧ (ультрадисперсные частицы) серебра в дозе 0,01 мг/кг живой массы кроликам при воздействии теплового стресса приводит к снижению показателей условно патогенной микрофлоры энтеробактерий на 8,6, энтерококков - на 9,9 % и способствует предотвращению термической дисфункции кишечного барьера, что является важным фактором поддержания здоровья кишечника и иммунного статуса животного.

Ключевые слова: кролики, УДЧ серебра, кишечник, проницаемость, тепловое воздействие, стресс, микрофлора.

UDC 639.92:577.17

The effect of heat stress on the intestinal microbiota

Elemes A Azhmuldinov1, Maxim G Titov1, Mikhail A Kizaev1, Irina A Babicheva2, Natalia V Soboleva2, Roman VMalchikov3 Tatyana N Kholodilina14

1 FederalResearch Centre ofBiologcal Systems andAgricultural Technologies ofRussian Academy ofSciences (Orenburg, Russia)

2 Orenburg State Agrarian University (Orenburg, Russia)

3 Perm Institute of Federal Penal Service of Russia (Perm, Russia)

4 Orenburg State University (Orenburg, Russia)

Summary. Excessive heat exposure reduces intestinal integrity, which can worsen well-being and lead to various diseases. Therefore, the aim of our study was to study the intestinal microbiota under heat stress and to develop methods for leveling it by optimizing microflora with microelements in male rabbits of 5 months of age with an average live weight of 1551 g. The maximum exposure temperature during the experiment was +42 °C. The results of the study showed that in rabbits subjected to heat stress, the total microbial number in the intestine increased compared to the control by 12.8% with the simultaneous advantage of the number of conditionally pathogenic types of microorganisms: enterobacteria by 11.1%, enterococci by 19.0 % It can be concluded that heat stress violates the integrity of intestine, which leads to increased intestinal permeability for endotoxin, translocation of intestinal pathogens. The introduction of UFP (ultrafine particles) of silver at a dose of 0.01 mg/kg body weight to rabbits under the influence of heat stress leads to a decrease in the conditionally pathogenic microflora of enterobacteria by 8.6, enterococci by 9.9% and helps to prevent thermal dysfunction of the intestinal barrier, which is an important factor in maintaining intestinal health and animal immune status.

Key words: rabbits, UFP of silver, intestine, permeability, heat exposure, stress, microflora.

Введение.

Животные, испытывающие воздействие высокой температуры, разносят более интенсивно кровь по всему организму, пытаясь максимально рассеивать тепловое излучение, и это перераспределение поддерживается вазоконстрикцией желудочно-кишечного тракта (Brandtzaeg P, 2011; Da-vies RR and Davies JA, 2003; Lambert GP, 2009; Yan YE et al., 2006). В результате снижение потока крови и питательных веществ приводит к гипоксии в эпителии кишечника, что, в конечном итоге, нарушает целостность и его функции (Dokladny K et al., 2006). Следовательно, индуцированная теплом проницаемость кишечника связана с повышенными в крови маркерами эндотоксемии, гипоксии и воспаления (молочная кислота, пировиноградная кислота, среднемолекулярные олиго-пептиды, низкомолекулярные соединения, вазоактивные метаболиты), все из которых могут способствовать синдрому полиорганной недостаточности. Поскольку желудочно-кишечный тракт очень чувствителен к гипертермии, а поражённая слизистая оболочка имеет решающее значение для патобиологии заболеваний, связанных с жарой, многочисленные модели на животных и клеточных культурах использовались для изучения этиологии теплового повреждения кишечника (Gaffin SL and Hubbard R, 1996; Katschinski DM et al., 2002). Тем не менее в нескольких исследованиях изучалось, как высокие температуры окружающей среды влияют на функцию и целостность кишечника (Turner JR, 2009; Yang PC et al., 2007).

Механизмы, с помощью которых тепловой стресс изменяет проницаемость кишечника, до конца не изучены. Дополнительные последствия изменённой проницаемости кишечника могут включать изменения в перевариваемости питательных веществ и всасывании через кишечный эпителий. Поэтому нашей целью было оценить и охарактеризовать влияние теплового стресса на проницаемость и микробиоту кишечника у кроликов (Yang PC et al., 2007; Leon LR, 2007). Кроме того, мы предположили, что острая тепловая нагрузка может нарушить целостность кишечника, что приведёт к усилению стресса.

Цель исследования.

Изучение влияния теплового стресса на проницаемость и микробиоту кишечника у кроликов.

Задачи: определить видовой состав микробиоты кишечника, изменение его в период стрессовой нагрузки и определить способ снижения условно-патогенной микрофлоры у кроликов при воздействии теплового стресса.

Материалы и методы исследования.

Объект исследования. Кролики породы Аляска 5-месячного возраста.

Обслуживание животных и экспериментальные исследования были выполнены в соответствии с инструкциями и рекомендациями Russian Regulations, 1987 (Order No.755 on 12.08.1977 the USSR Ministry of Health) and «The Guide for Care and Use of Laboratory Animals (National Academy Press Washington, D.C. 1996)». При выполнении исследований были предприняты усилия, чтобы свести к минимуму страдания животных и уменьшения количества используемых образцов.

Схема эксперимента. Исследования проводили на 6 кроликах-самцах, которых приобрели на кролиководческой ферме в посёлке Чашкан Соль-Илецкого района Оренбургской области, в стандартных условиях вивария ФНЦ БСТ РАН. Средняя начальная живая масса кроликов - 1551 г. В течение 14 дней они адаптировались к новым условиям содержания. После подготовительного периода их разделили на две группы: контрольную и опытную, по 3 головы в каждой. Животные содержались в деревянных клетках, рацион кормления состоял из ячменя, сена разнотравного и овощей.

Тепловой стресс создавали с помощью тепловой пушки. Продолжительность воздействия составляла 3 часа при температуре +42 °С и влажности 75 %. Влияние стресса наблюдали по поведению животных и исходя из их физиологических и биохимических показателей.

Материалом для исследования служили свежевыделенные фекалии животных. Забор производили утром до кормления. Все манипуляции проводились с соблюдением правил стерильности.

Чистые культуры бактерий получали, высевая 0,1 мл неразведённых и разведённых в 10, 100 и 1000 раз фракций или гомогената на твёрдые питательные среды: «голодный» агар, кровяной агар, 1,5 %-ный мясо-пептонный агар, висмутсульфит агар, среда Эндо и среда Плоскирева. Через 48-72 ч культивирования при температуре +25 °С выросшие колонии пересевали на скошенный питательный агар и идентифицировали. Видовую идентификацию выделенных штаммов осуществляли, используя определители (Berkeley RCW et al., 1994; Weyant RS et al., 1996), на основании морфологических, культуральных и биохимических критериев в соответствии с рекомендациями (Abbott SL et al., 2003, Buller NB, 2004; Непоклонов Е.А., 2004). Морфологические особенности выделенных штаммов изучали в двухсуточных и семисуточных культурах с помощью трансмиссионной электронной микроскопии. Для этого колонии бактерий фиксировали 2,5 %-ным раствором глутарового альдегида на какодилатном буфере (pH 7.2) в течение 1-2 сут, дофиксировали 2 %-ным раствором тетраоксида осмия в течение 1 ч на том же буфере, дегидратировали в спиртах и ацетоне затем материал заливали в смесь эпон-аралдит.

Патогенность выделенных микробных культур определяли постановкой биопробы на белых мышах путём внутрибрюшинного заражения взвесью суточной культуры на физиологическом растворе в дозе 0,5 мл в концентрации 1 млрд микробных клеток в 1 мл изучаемой культуры. Наблюдение вели в течение 10 дней (Мурадова Е.О. и Ткаченко К.В., 2007; Муруева Г.Б. и др., 1994; Нетрусов А.И. и Котов И.Б., 2009; Сидоров М.А. и др., 1995). Для количественной характеристики полезных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов подсчитывали колонии каждого типа на пластинчатых питательных средах по формуле

M=10xNx10n ,

где: М - число живых микробных клеток в 1 г фекалий;

N - коэффициент перерасчёта при высеве 0,1 мл бактериальной взвеси;

10n - разведение, из которого выделен данный вид микроба.

УДЧ серебра были размером до 100 нм (химический и фазовый состав - 99,99 % металлического серебра, адсорбированных газов до 0,01 % - CH4, CO2, Ar, N2, метод получения - электрический взрыв в атмосфере аргона, удельная поверхность - Sw=6,5 м2/г).

Для приготовления инъекционной суспензии в центре «Нанотехнологии в сельском хозяйстве» ФНЦ БСТ РАН наночастицы серебра смешивали с католитом, полученным в аппарате Ak-vaLife, и подвергали диспергированию в ультразвуковом диспергаторе УЗДН-2Т в режиме 0,5 А, 44 кГц.

Опытным животным внутримышечно вводили эмульсию (рН - 9,5, редокс-потенциал Eh=-450 мВ, по данным В.М. Дворникова, 2004) с УДЧ серебра в дозе 0,01 мг/кг живой массы один раз в день в течение семи суток до начала воздействия стресс-фактора (Ажмулдинов Е.А. и др., 2019).

Оборудование и технические средства. Для исследования микробиоты использовались чашки петри, микробная петля, микроскоп люминесцентный «Микромед 3 люм» (ООО «Наблюдательные приборы», г. Санкт-Петербург, Россия).

Статистическая обработка. Основной материал, полученный в исследованиях, обработан с использованием пакета программ «Statistica 10.0» («Stat Soft Inc.», США), достоверность определяли при помощи критерия Стьюдента.

Результаты исследования.

По морфологическим свойствам 107 выделенных микроорганизмов из фекалий животных 27 - грамположительные кокковидной формы и 75 - грамотрицательные палочковидной формы (табл. 1).

Грамположительных микроорганизмов палочковидной формы и грамотрицательных микроорганизмов кокковидной формы не было обнаружено. Образующих капсулы - 11 микробных культур, а не образующих - 94. Спорообразующих микробных культур не выявлено.

При изучении биологических свойств выделенных микробных культур были идентифицированы представители патогенных и условно-патогенных видов микроорганизмов (табл. 2).

Таблица 1. Сводные данные морфологических свойств выделенных микробных культур Table 1. Summary of morphological properties of isolated microbial cultures

Морфология культур/Morphology of cultures Количество/Quantity

Гр.+, кокковидные /Gr. +, Coccoid 27

Гр.+, палочковидные /Gr. +, Rod-shaped -

Гр.-, кокковидные / Gr.-, Coccoid -

Гр.-, палочковидные / Gr.-, Rod-shaped 75

Спорообразующие / Sporiferous -

Не спорообразующие / Non-sporing 107

Капсулообразующие / Capsule forming 14

Не капсулообразующие / N capsule forming 94

Таблица 2. Видовая принадлежность выделенных микроорганизмов Table 2. Species of selected microorganisms

№ выделенной культуры/ isolated culture Наименование микроорганизма/ Name of microorganisms Количество выделенных культур/ Quantity of selected microorganisms

1 Citrobacter freundii 5

2 Enterobacter aerogenes 2

3 Enterobacter cloacae 2

4 Enterobacter agglomerans 6

5 Salmonella enteritidis 2

6 Klebsiella pneumonia subsp. thinoscleromatic 3

7 Klebsiella pneumonia subsp. pneumoniae 3

8 Klebsiella oxytoca 3

9 Enterobacter sakazakii 2

10 Citrobacter amalonaticus 3

11 Citrobacter diversus 2

12 Edwardsiella hoshinae 2

13 Edwardsiella tarda 3

14 Enterobacter gergoviae 2

15 Salmonella gallinarum 2

16 Serratia rubidaea 4

17 Enterococcus faecalis 7

18 Enterococcus faesum 8

19 Escherichia coli 8

20 Staphylococcus aureus 11

21 Staphylococcus epidermidis 4

22 Yersinia enterocoitica 5

23 Klebsiella pneumonia subsp. ozaenae 2

24 Proteus vulgaris 5

№rero:/Total: 107

Было выделено 107 микробных культур, из них Escherichia coli - 7,5 %; а Edwardsiella tarda; Edwardsiella hoshinae; Klebsiella pneumoniasubsp. pneumonia; Klebsiella oxytoca; Citrobacter amalonaticus - по 2,8 % каждая; Enterobacter gergoviae; Enterobacter aerogenes; Enterobacter sakazakii; Enterobacter cloacae; Citrobacter diversus; Klebsiella pneumonia subsp. ozaenae; Salmonella enteritidis, Salmonella gallinarum; Klebsiella pneumonia subsp. thinoscleromatic - по 1,9 %; Enterococcus faecalis - 6,5 %; Enterococcus faesum - 8,4 %; Serratia rubidaea; Staphylococcus epidermidis - 3,7 %; Staphylococcus aureus - 10,3 %; Yersinia enterocolitica; Proteus vulgaris; Citrobacter freundii; Enterobacter agglomerans - по 4,7 % каждая.

Для изучения влияния теплового стресса на микрофлору кишечника кроликов нами были рассмотрены такие показатели, как общее микробное число и количество условно-патогенных бактерий рода Enterococcus и семейство Enterobacteriaceae (табл. 3).

Таблица 3. Количество микрофлоры кишечника кроликов при тепловом стрессе, lg КОЕ/г Table 3. The amount of intestinal microflora in rabbits under heat stress, lg CFU/g

Номер животного/ Animal number Общее микробное число/ Total microbial number Энтеробактерии/ Enterobacteria Энтерококки/ Enterococci

Опытная (стресс)/Experimental (stress)

1 2 3 Среднее/Average 9,43 6,62 6,57 8,65 7,20 6,81 8,85 7,11 7,25 8,98±0,26* 6,98±0,21* 6,88±0,22*

Контрольная/Control

1 2 3 Среднее/Average 8,08 6,72 6,26 8,49 6,43 5,95 7,30 6,63 5,30 7,96±0,24 6,59±0,09 5,84±0,31

Примечание: * - Р<0,05 по отношению к контрольной группе

Note: * - P<0.05 in relation to the control group

Данные таблицы показывают, что при воздействии теплового стресса на количественный состав кишечной микрофлоры кроликов опытной группы происходит увеличение общего микробного числа до 8,98 lg КОЕ/г, что выше по сравнению с контролем на 12,8 % (Р<0,05), Enterobacteriaceae -на 5,9 % (Р<0,05), Enterococcus - на 17,8 % (Р<0,05). Состав микрофлоры контрольной группы, которая не подвергалась воздействию теплового стресса, остался практически без изменений.

Для снижения количества условно-патогенной микрофлоры и прекращения её проницаемости нами были использованы УДЧ серебра, которые зарекомендовали себя как антибактериальные и антистрессовые (табл. 4).

Таблица 4. Количественный и видовой состав микрофлоры кишечника кроликов

при введении УДЧ серебра в дозе 0,01 мг/кг живой массы, lg КОЕ/г Table 4. The quantitative and species composition of the intestinal microflora of rabbits

with the introduction of UFP of silver at a dose of 0.01 mg/kg live weight, lg CFU/g

Номер животного/Animal number Общее микробное число/ Total microbial number Энтеробактерии/ Энтерококки/ Enterobacteria Enterococci

Контрольная группа 1 стресс)/^^^ (stress)

1 2 3 Среднее/Average 9,41 6,43 6,34 9,51 6,62 6,45 9,60 6,48 6,35 9,51±0,06 6,51±0,06 6,38±0,04

Опытная (УДЧ серебра)/ Experimental (Silver UFP)

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

1 2 3 Среднее/Average 8,18 6,00 6,00 8,08 6,17 6,18 8,63 5,60 5,80 8,30±0,19** 5,95±0,19* 5,99±0,11*

Примечание: * - Р<0,05 по отношению к контрольной группе ** - Р<0,01 по отношению к контрольной группе Note: * - P<0.05 in relation to the control group ** - p<0.01 in relation to the control group

При введении УДЧ серебра в дозе 0,01 мг/кг живой массы кроликам при воздействии теплового стресса происходит снижение показателей условно-патогенной микрофлоры на 8,6 (Р<0,05) и 6,1 % (Р<0,05) по сравнению с аналогами, не получавшими данные частицы, у которых количество микробов находилось на относительно высоком уровне.

Обсуждение полученных результатов.

Высокие температуры окружающей среды могут создавать значительные проблемы для здоровья людей и животных (Moeser AJ et al., 2007; Smith F et al., 2010). При воздействии данного стресса желудочно-кишечный тракт является одним из основных поражённых органов. В соответствии с нашим исследованием, отмечалось снижение потребления корма, и это является стратегией минимизации метаболического тепловыделения. Тем не менее важно отметить, что ограничение питательных веществ может привести к изменениям в функции и морфологии кишечника, тем самым увеличить риск развития бактериального сепсиса (Garriga C et al., 2006; Combes S et al., 2011).

Тепловой стресс перераспределяет кровь на периферию, что приводит к снижению притока крови к кишечному эпителию и может привести к гипоксии, окислительному и нитрозативному стрессу, а также апоптозу (Marai IFM et al., 2002; Combes S et al., 2011).

Он является одним из факторов, снижающих барьерную функцию кишечника и, как следствие, вызывающих воспалительные реакции и снижающих продуктивность (Zeng B et al., 2015). Настоящее исследование подтвердило, что тепловой стресс нарушал баланс микрофлоры кишечника, что приводило к повышению количества патогенной микрофлоры и уменьшению доли полезной микрофлоры (Michelland RJ et al., 2010; Ажмулдинов Е.А. и др., 2019).

Происходило увеличение показателя общего микробного числа на 12,9 % по сравнению с контролем с одновременным преимуществом количества Enterobacteriaceae - 5,9 %, Enterococcus - 17,8 %.

Антимикробные свойства УДЧ серебра и его соединений известны и используются на длительном протяжении, выполняя эту функцию до изобретения антибиотиков. УДЧ серебра благодаря подтверждённым антимикробным свойствам (Connor EE et al., 2005; Kim YS et al., 2008; Sawosz E et al., 2007) в настоящее время находят применение в животноводстве (Combes S et al., 2011). На фоне применения эмульсии с УДЧ серебра у кроликов наблюдались положительные изменения микробиоценоза кишечника, приводящие к снижению количества условно-патогенной микрофлоры на 8,6 и 9,9 %, что улучшает целостность и снижает проницаемость кишечника, а значит и иммунные реакции животных (Ажмулдинов Е.А. и др., 2019; Кизаев М.А. и др., 2018).

Вывод.

Таким образом, изучение динамики количественного состава кишечной микрофлоры кроликов показало, что применение УДЧ серебра в дозе 0,01 мг/кг живой массы привело к снижению количества условно-патогенных микроорганизмов - энтеробактерий на 8,6 %, энтерококков - на 6,1 %.

Исследования выполнены в соответствии с планом НИР на 2019-2021 гг. ФГБНУ ФНЦ БСТ РАН (№ 0761-2019-0006)

Литература

1. Ажмулдинов Е.А., Чернышенко Ю.Н., Титов М.Г. Физиологическое состояние и продуктивность животных при воздействии теплового стресса // Вестник Башкирского государственного аграрного университета. 2019. № 3(51). С. 26-31. doi: 10.31563/1684-7628-2019-51-3-26-31 [Azhmuldinov E, Chernyshenko Yu, Titov M. Physiological state and productivity of animals under thermal stress. Vestnik Bashkir State Agrarian University. 2019;3(51):26-31. (In Russ)]. doi: 10.31563/16847628-2019-51-3-26-31

2. Влияние кратковременной тепловой нагрузки на биохимические показатели крови животных / М.А. Кизаев, М.Г. Титов, Т.В. Казакова, О.В. Маршинская, С.В. Нотова // Мясное скотоводство - приоритеты и перспективы развития: материалы междунар. науч.-практ. конф. (г. Оренбург, 25-26 апреля 2018 г.) / под общ. ред. чл.-корр. РАН С.А. Мирошникова. Оренбург: Изд-во

ФНЦ БСТ РАН, 2018. С. 186-189 [Kizaev MA, Titov MG, Kazakova TV, Marshinskaya OV, Notova SV. Vliyanie kratkovremennoi teplovoi nagruzki na biokhimicheskie pokazateli krovi zhivotnykh. (Conference proceedigs) Myasnoe skotovodstvo - prioritety i perspektivy razvitiya: materialy mezhdunarodnoi nauchno-prakticheskoi konferentsii. (g. Orenburg, 25-26 aprelya 2018 g.) / pod obshch. red. chl.-korr. RAN Miroshnikova SA. Orenburg: Izd-vo FNTs BST RAN. 2018:186-189. (In Russ)].

3. Мурадова Е.О., Ткаченко К.В. Микробиология. М.: Эксмо, 2007. 336 с. [Muradova EO, Tkachenko KV. Mikrobiologiya. Moscow: Eksmo; 2007: 336 p. (In Russ)].

4. Муруева Г.Б. Батомункуева Р.Д., Цыдыпов Б.Б. Идентификация микробов семейства эн-теробактериацеа: сб. науч. тр / Бурят. СХИ. Бабушкин, 1994. № 37. С. 52-54 [Murueva GB, Bato-munkueva RD, Tsydypov BB. Identifikatsiya mikrobov semeistva enterobakteriatsea: sb. nauch. tr. Buryat. SKhI. Babushkin; 1994;37:52-54. (In Russ)].

5. Непоклонов Е.А. Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных: метод. рекомендации. № 13-5-02/1043. М., 2004. 37 с. [Nepoklonov EA. Vydelenie i identifikatsiya bakterii zheludochno-kishechnogo trakta zhivotnykh: metod. rekomendatsii. № 13-5-02/1043. Moscow. 2004; 37 p. (In Russ)].

6. Нетрусов А.И., Котов И.Б. Микробиология: учебник для студ. высш. учеб. заведений. Изд. 3-е, испр. М.: Издат. центр «Академия», 2009. 352 с. [Netrusov AI, Kotov IB. Mikrobiologiya: uchebnik dlya stud. vyssh. ucheb. zavedenii. Izd. 3-e, ispr. Moscow: Izdatel'skii tsentr «Akademiya»; 2009: 352 p. (In Russ)].

7. Роль наночастиц серебра при технологических стрессах у бычков / Е.А. Ажмулдинов, М.Г. Титов, М.А. Кизаев, И.А. Бабичева, Н.В. Соболева // Животноводство и кормопроизводство. 2019. Т. 102. № 3. С. 8-18. doi: 10.33284/2658-3135-102-3-8 [Azhmuldinov EA, Titov MG, Kizaev MA, Babicheva IA, Soboleva NV. The role of silver nanoparticles in technological stresses of bulls. Animal Husbandry and Fodder Production. 2019;102(3):8-18. (In Russ)]. doi: 10.33284/2658-3135-102-3-8

8. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов: справочник. М.: Колос, 1995. 319 с. [Sidorov MA, Skorodumov DI, Fedotov VB. Opredelitel' zoopatogennykh mikroorganizmov: spravochnik. Moscow: Kolos; 1995: 319 p. (In Russ)].

9. Стабилизатор водного раствора и водосодержащего сырья с самопроизвольно изменяющимися окислительно-восстановительными свойствами: пат. 2234945 Рос. Федерация / В.М. Дворников. Заявл. 15.10.02; опубл. 27.08.04, Бюл. № 24. [Dvornikov VM. Stabilizator vodnogo rastvora i vodosoderzhashchego syr'ya s samoproizvol'no izmenyayushchimisya okislitel'no-vosstanovitel'nymi svoistvami: pat. 2234945 Ros. Federatsiya. Zayavl. 15.10.02; opubl. 27.08.04, Byul. № 24. (In Russ)].

10. Abbott SL, Cheung WK, Janda JM. The genus Aeromonas: biochemical characteristics, atypical reactions, and phenotypic identification schemes. Journal of Clinical Microbiology. 2003;41(6):2348-2357. doi: 10.1128/JCM.41.6.2348-2357.2003

11. Berkeley RCW, Bock E, Boone DR, et al. Bergey's manual of determinative bacteriology. Holt GH, Krieg NR, Sheath PHA, editors, et al. Baltimore: Williams Wilkins; 1994: 787 p.

12. Brandtzaeg P. The gut as communicator between environment and host: immunological consequences. European Journal Pharmacology. 2011;668(Suppl 1):S16-S32. doi: https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2011.07.006

13. Buller NB. Bacteria from fish and other aquatic animals: a practical identification manual. Oxfordshire: CABI Publ., 2004; 361 p.

14. Combes S, Michelland RJ, Monteils V, Cauquil L, Soulie V, Tran NU, Gidenne T, Fortun-Lamothe L. Postnatal development of the rabbit caecal microbiota composition and activity. FEMS Microbiol. Ecol. 2011;77(3):680-689. doi: 10.1111/j.1574-6941.2011.01148.x

15. Connor EE, Mwamuka J, Gole A, Murphy CJ, Wyatt MD. Gold nanoparticles are taken up by human cells but do not cause acute cytotoxicity. Small. 2005;1(3):325-327. doi: https://doi.org/10.1002/smll.200400093

16. Davies RR, Davies JA. Rabbit gastrointestinal physiology. Veterinary Clinics of North America: Exotic Animal Practice. 2003;6(1):139-153. doi: 10.1016/S1094-9194(02)00024-5

17. Dokladny K, Moseley PL, Ma TY. Physiologically relevant increase in temperature causes an increase in intestinal epithelial tight junction permeability. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2006;290(2):G204-G212. doi: 10.1152/ajpgi.00401.2005

18. Gaffin SL, Hubbard R. Experimental approaches to therapy and prophylaxis for heat stress and heatstroke. Wild Environ Med. 1996;7(4):312-334. doi: 10.1580/1080-6032(1996)007[0312:eattap]2.3.co;2

19. Garriga C, Hunter RR, Amat C, Planas JM, Mitchell MA, et al. Heat stress increases apical glucose transport in the chicken jejunum. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2006;290(1):R195-R201. doi: https://doi.org/10.1152/ajpregu.00393.2005

20. Katschinski DM, Le L, Heinrich D, Wagner KF, Hofer T, et al. Heat induction of the unphos-phorylated form of hypoxia-inducible factor-1a is dependent on heat shock protein-90 activity. J Biol Chem. 2002;277:9262-9267. doi: 10.1074/jbc.M110377200

21. Kim YS, Kim JC, Cho HS, Rha DS, Kim JM, Park JD, et al. Twenty-eight-day oral toxicity, genotoxicity, and gender-related tissue distribution of silver nanoparticles in Sprague-Dawley rats. Inhal Toxicol. 2008;20(6):575-583. doi: https://doi.org/10.1080/08958370701874663

22. Lambert GP. Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects. J Anim Sci. 2009;87(14):E101-108. doi: https://doi.org/10.2527/jas.2008-1339

23. Leon LR. Heat stroke and cytokines. Prog Brain Res. 2007;162:481-524. https://doi.org/10.1016/S0079-6123(06)62024-4

24. Marai IFM, Habeeb A., Gad AE. Rabbits' productive, reproductive and physiological performance traits as affected by heat stress: a review. Livest Prod Sci. 2002;78(2):71-90. doi: https://doi.org/10.1016/S0301-6226(02)00091-X

25. Michelland RJ, Combes S, Monteils V, Cauquil L, Gidenne T, Fortun-Lamothe L. Molecular analysis of the bacterial community in digestive tract of rabbit. Anaerobe. 2010;16(2):61-65. doi: 10.1016/j.anaerobe.2009.05.002

26. Moeser AJ, Ryan KA, Nighot PK, Blikslager AT. Gastrointestinal dysfunction induced by early weaning is attenuated by delayed weaning and mast cell blockade in pigs. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2007;293(2):G413-G421. doi: https://doi.org/10.1152/ajpgi.00304.2006

27. Sawosz E, Binek M, Grodzik M, Zieliska M, Sysa P, Szmidt M, Niemiec T. Chwalibog A. Influence of hydrocolloidal silver nanoparticles on gastrointestinal microflora and morphology of entero-cytes of quails. Arch Anim Nutr. 2007;61(6):444-451. doi: https://doi.org/10.1080/17450390701664314

28. Smith F, Clark JE, Overman BL, Tozel CC, Huang JH, et al. Early weaning stress impairs development of mucosal barrier function in the porcine intestine. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2010;298(3):G352-G363. doi: https://doi.org/10.1152/ajpgi.00081.2009

29. Turner JR. Intestinal mucosal barrier function in health and disease. Nature reviews Immunology. 2009;9(11):799-809. doi: 10.1038/nri2653

30. Weyant RS, Moss CW, Weaver RE, et al. Identification of unusual pathogenic gram-negative aerobic and facultatively anaerobic bacteria. Baltimore: Williams and Wilkins; 1996: 791 p.

31. Yan YE, Zhao YQ, Wang H, Fan M. Pathophysiological factors underlying heatstroke. Med Hypotheses. 2006;67(3):609-617. doi: https://doi.org/10.1016/j.mehy.2005.12.048

32. Yang PC, He SH, Zheng PY. Investigation into the signal transduction pathway via which heat stress impairs intestinal epithelial barrier function. J Gatroenterol Heptaol. 2007;22(11):1823-1831. doi: https://doi.org/10.1111/j.1440-1746.2006.04710.x

33. Zeng B, Han S, Wang P, Wen B, Jian W, Guo W, et al. The bacterial communities associated with fecal types and body weight of rex rabbits. Sci Rep. 2015;5:9342. doi: 10.1038/srep09342

References

1. Azhmuldinov E, Chernyshenko Yu, Titov M. Physiological state and productivity of animals under thermal stress. Vestnik Bashkir State Agrarian University. 2019;3(51):26-31. doi: 10.31563/16847628-2019-51-3-26-31

2. Kizaev MA, Titov MG, Kazakova TV, Marshinskaya OV, Notova SV. The effect of short-term heat load on the biochemical parameters of animal blood. (Conference proceedigs) Beef cattle breeding -priorities and development prospects: international materials. scientific-practical conf. (Orenburg, April 25-26, 2018). under general. ed. RAS Corr. member Miroshnikov SA. Orenburg: Publishing House of the Federal Scientific Center of BST RAS; 2018: 186-189.

3. Muradova EO, Tkachenko KV. Microbiology. Moscow: Eksmo; 2007. 336 p.

4. Muruyeva GB. Batomunkueva RD, Tsydypov BB. Identification of microbes of the enterobac-teriacea family: Collection of scientific works. Buryat. Agr. Inst. Babushkin; 1994;37:52-54.

5. Nepoklonov EA Isolation and identification of bacteria of gastrointestinal tract of animals. method. recommendations. No. 13-5-02/1043. Moscow. 2004. 37 p.

6. Netrusov AI, Kotov IB. Microbiology: manual for students of higher educat. institutions. ed. 3rd, fix Moscow: Publishing. Center "Academy"; 2009: 352 p.

7. Azhmuldinov EA, Titov MG, Kizaev MA, Babicheva IA, Soboleva NV. The role of silver nanoparticles in technological stresses of bulls. Animal Husbandry and Fodder Production. 2019;102(3):8-18. doi: 10.33284/2658-3135-102-3-8

8. Sidorov MA, Skorodumov DI, Fedotov VB. Determinant of zoopathogenic microorganisms: a guide. Moscow: Kolos; 1995. 319 p.

9. Dvornikov VM. The stabilizer of an aqueous solution and water-containing raw materials with spontaneously changing redox properties: Pat. 2234945 Russian Federation. Application 15.10.02; publ. 27.08.04, Bull. Number 24.