CC BY
49
УДК 616.9-097.036
O. S. Yanchenko1, K. N. Kontorshikova , V. V. Novikov2, A. Yu. Baryshnikov3
INFLUENCE OF OZONOTHERAPY ON LYMPHOCYTES SUBPOPULATIONS AT ENDOMETRIAL CANCER AND UTERINE MYOMA
1 Medical Academy of Nizhny Novgorod 2Lobachevsky State University of Nizhny Novgorod 3N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow
ABSTRACT
The intravenous infusion of ozonated physiologic solution to patients with endometrial cancer during complex standard therapy resulted in elevation of life quality and normalization of increased level of CD16 + peripheral blood cells. At uterine myoma the therapy by ozonated physiologic solution during complex standard therapy was associated with normalization of elevated level of CD8+ and CD20+ peripheral blood lymphocytes. Probably, in patients with endometrial cancer and uterine myoma the positive effect of ozonotherapy connects with normalization of different immune cells subpopulations.
Key words: uterine myoma, endometrial cancer, CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+ cells, ozonotherapy.
1 12 3
О. С. Янченко , К. Н. Конторщикова , В. В. Новиков , А. Ю. Барышников
ВОЗДЕЙСТВИЕ ОЗОНОТЕРАПИИ НА ПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ РАКЕ ТЕЛА МАТКИ И МИОМЕ МАТКИ
1 Нижегородская государственная медицинская академия
2 ННГУ им. Н. И. Лобачевского, Нижний Новгород 3 ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
РЕЗЮМЕ
Введение озонированного физиологического раствора пациентам с раком тела матки на фоне стандартной комплексной терапии наряду с повышением качества жизни больных приводило к нормализации повышенного уровня СБ16+-клеток периферической крови. При использовании озонотерапии на фоне стандартного комплексного лечения пациентов с миомой матки происходила нормализация повышенного относительного содержания СБ8+- и СБ20+-лимфоцитов периферической крови. Вероятно, положительный эффект применения озонотерапии у онкогинекологических больных связан с его иммунокоррегирующим действием, выражающимся в нормализации уровня различных при раке тела матки и миоме матки популяций иммуно-компетентных клеток.
Ключевые слова: миома матки, рак тела матки, СБ3+, СБ4+, СБ8+, СБ16+, СБ20+-клетки, озонотерапия.
ВВЕДЕНИЕ
Доброкачественные и злокачественные опухоли матки и придатков - одна из наиболее часто встречающихся патологий у женщин разных возрастных групп. В комбинированной терапии больных проводится хирургическое лечение с последующим назначением гормоно-, полихимио- или лучевой терапии. Известно, что данные методы имеют целый ряд выраженных побочных эффектов: общетоксическое влия-
ние на организм больной, иммунодепрессивное действие, нарушение баланса про- и антиоксидантных систем организма [3; 5].
В связи с этим представляется важным включение в комплексное ведение послеоперационных больных дополнительных методов лечения, уменьшающих степень интоксикации, коррегирующих уровень анти-оксидантной защиты, нормализующих состояние пе-рекисного окисления липидов, модулирующих имму-
нологическую реактивность организма. Одним из таких методов является озонотерапия, положительный эффект применения которой отмечен при широком спектре заболеваний, в том числе онкологических [1; 4; 5; 6; 7].
Значительную роль в поддержании гомеостатического равновесия организма играют молекулярные и клеточные механизмы иммунных реакций. Для эффективной элиминации опухолевых клеток и восстановления гомеостатических функций организма необходима адекватная и полноценная работа иммунной системы [8; 9]. Наличие или отсутствие изменений в популяционном составе клеток иммунной системы могут определять целесообразность иммунокоррeги-рующей терапии [7; 10].
Целью настоящей работы явилось исследование действия медицинского озона на особенности популяционного состава лимфоцитов больных с доброкачественной и злокачественной патологией внутренних женских половых органов.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В работе использованы образцы гепаринизиро-ванной крови 58 женщин с диагнозом «рака эндометрия» и 42 женщин с миомой матки. Больные находились на лечении в гинекологической клинике Областной клинической больницы им. Семашко г. Нижнего Новгорода.
26 больных раком тела матки и 22 пациентки с миомой матки получали стандартное комплексное лечение без применения озонотерапии. 32 больных раком тела матки и 20 пациенток с миомой матки наряду с комплексной терапией получали озонированный физиологический раствор внутривенно в количестве 200 мл (концентрация озона - 400 мкг/л, 6 процедур через день). Концентрация озона, количество и кратность процедур разработаны и подтверждены как эффективные и безопасные в ранее проводимых исследованиях [1; 4; 6]. Для озонирования физиологического раствора использовался озонатор фирмы «Медозонс».
Иммунофенотип лимфоцитов определяли с помощью моноклональных антител против CD3, CD4, CD8, CD16 и CD20-антигенов в реакции непрямой иммунофлюоресценции [2]. Мононуклеарные клетки крови выделяли в градиенте фиколл-верографина, а затем трижды отмывали средой 199. На обезжиренное предметное стекло, предварительно покрытое пара-филмом (American Can Company) с круглыми перфорациями наносили поли-Ь-лизин (Serva) в концентрации 50 мкг/мл. Предметное стекло инкубировали 30 мин при температуре 37 °С и отмывали физиологическим раствором, забуференным фосфатами, рН 7,4. Суспензию клеток в концентрации 2х106 кл/мл вносили в лунки предметного стекла, выдерживали 30 мин при 37 °C во влажной камере. Затем не прикрепившиеся к стеклу клетки удаляли и наносили в лунки раствор моноклональных антител. В контрольных образцах клетки обрабатывали физиологическим раствором. Инкубировали стекла при 37 °C в течение 30
мин, 5-кратно отмывали, как указано выше, и на клетки наслаивали раствор ФИТЦ-меченных фрагментов поликлональных антител против мышиных иммуноглобулинов с последующей инкубацией на льду в течение 30 мин и 5-кратным отмыванием. Клетки заливали 50%-ным глицерином в физиологическом растворе и закрывали предметными стеклами.
Препараты просматривали с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ-И2. Учитывали свечение лимфоцитов при увеличении объектива х40-100, окуляра х2,5-10. Люминесценцию клеточной поверхности регистрировали визуально. В препарате просчитывали 200-300 клеток. Учитывалось общее количество клеток и антиген-положительных клеток. Затем подсчитывалось относительное содержание антиген-положительных клеток. Статистическую обработку данных проводили с использованием критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При исследовании популяционного состава лимфоцитов у больных раком тела матки было выявлено, что наличие опухолевого процесса сопровождалось снижением относительного содержания СБ3+-лимфоцитов (Т-лимфоциты). Как комплексная терапия, так и терапия, дополненная применением озонированного физраствора, не приводили к нормализации относительного содержания СБ3+-лимфоцитов. Количество СБ4+- и СБ8+-лимфоцитов при раке тела матки оставалось в пределах нормы как до терапии, так и после комплексной терапии. Включение в схему лечения озонированного физраствора также не изменяло процентного содержания СБ4+- и СБ8+-лимфоцитов в периферической крови больных (табл. 1).
Обнаружено статистически достоверное повышение относительного содержания СБ16+-клеток периферической крови больных раком тела матки, которое было увеличено до терапии в 2,3 раза. Последующее комплексное лечение с применением озонотерапии нормализовало содержание СБ16+-клеток. В отсутствии озонотерапии статистически достоверных изменений процентного содержания СБ16+-клеток выявлено не было. Оно оставалось выше нормы и не имело статистически достоверных различий с уровнем СБ16+-клеток у нелеченных больных. Таким образом, озонотерапия, проводимая на фоне стандартного комплексного лечения больных раком тела матки, сопровождалась нормализацией уровня СБ16+-клеток.
Наряду с повышением относительного содержания СБ16+-клеток обнаружено повышение процентного содержания СБ20+-лимфоцитов. У нелеченных больных оно было статистически достоверно выше нормы в 1,9 раза. Терапия как с применением озонированного физраствора, так и без него сопровождалась лишь статистически недостоверной тенденцией к росту уровня СБ20+-лимфоцитов. Можно заключить, что озонотерапия больных раком тела матки на фоне комбинированного лечения сопровождалась нормали-
6
БИОТЕРАПИЯ
Таблица 1
Изменение иммунофенотипа клеток периферической крови у больных раком тела матки
Популяция клеток, % Норма Комплексная терапия, дополненная озонотерапией Комплексная терапия
До терапии После терапии До терапии После терапии
СБ3+ 72,0±7,0 50,4±2,2* 53,5±2,9* 55,4±2,9* 51,7±2,6*
СБ4+ 39,0±5,0 43,5±3,1 43,6±3,4 45,5±3,8 44,2±3,7
СБ8+ 23,0±4,0 24,6±2,3 22,8±1,9 22,1 ±2,4 19,6±2,1
СБ16+ 12,0±6,0 27,1±1,6* 20,2±2,5** 28,2±1,9* 24,3±2,2*
СБ20+ 12,0±3,0 22,3±2,5* 27,8±2,8* 23,5±2,9* 27,5±2,6*
Различия достоверны в сравнении с нормой (р<0,05); Статистически достоверные различия до и после терапии (р<0,05)
зацией уровня СБ16+-клеток на фоне неизменного содержания других популяций клеток.
Относительное количество СБ3+-клеток в периферической крови пациенток с миомой матки было статистически достоверно снижено до того же уровня, который был зарегистрирован для больных раком тела матки. Как до терапии, так и после комплексной терапии с применением озонированного физраствора и без его применения оно было в 1,5 раза меньше, чем в норме. Относительное содержание СБ4+-клеток не отличалось от нормы как до лечения, так и после комплексной терапии. Озонированный физраствор не оказывал влияния на уровень Т-хелперов (табл. 2). В отличие от них относительное содержание СБ8+-лимфоцитов в периферической крови пациенток до начала комплексной терапии было статистически достоверно выше нормы. Комплексное лечение с применением курса озонотерапии приводило к падению
уровня СБ8+-лимфоцитов до нормы. При этом различия в относительном содержании СБ8+-лимфоцитов до и после терапии были статистически значимы. При стандартной комплексной терапии таких различий выявлено не было.
Содержание СБ16+-клеток в периферической крови больных миомой матки было статистически достоверно повышено в 1,7 раза в сравнении со здоровыми женщинами. Заметим, что увеличение уровня СБ16+-клеток оказалось менее выраженным в сравнении с больными раком тела матки. Различия между уровнем СБ16+-клеток у больных миомой матки и раком шейки матки были статистически значимы (р<0,05). Стандартная комплексная терапия пациенток с миомой матки не вызывала нормализации уровня СБ16+-клеток. Наоборот, была зарегистрирована тенденция к росту этой популяции клеток. Дополнение стандартной терапии озонотерапией также не приводило к ста-
Таблица 2
Изменение иммунофенотипа клеток периферической крови у пациенток с миомой матки
Популяция клеток, % Норма Комплексная терапия, дополненная озонотерапией Комплексная терапия
До терапии После терапии До терапии После терапии
СБ3+ 72,0±7,0 50,2±2,6* 50,6±2,7* 48,2±2,8* 48,6±2,4*
СБ4+ 39,0±5,0 41,5±3,4 40,8±3,2 40,42±3,1 40,28±3,1
СБ8+ 23,0±4,0 30,2±2,4* 23,2±1,9** 28,28±2,1* 27,6±2,3
СБ16+ 12,0±6,0 20,8±1,7* 21,8±2,7* 20,57±1,8* 25±2,1*
СБ20+ 12,0±3,0 30,2±2,2* 20,3±2,4*’** 28,2±2,6* 25,4±2,4*
Различия достоверны в сравнении с нормой (р<0,05); Статистически достоверные различия до и после терапии (р<0,05)
тистически достоверным изменениям в относительном содержании CD16+-клеток.
Более выраженные изменения были зарегистрированы в относительном содержании CD20+-лим-фоцитов периферической крови пациенток с миомой матки. До начала терапии уровень CD20+-лимфоцитов был увеличен в среднем в 2,5 раза. Стандартная комплексная терапия не приводила к статистически значимым изменениям в процентном количестве этих клеток. Однако дополнение стандартной терапии озонотерапией сопровождалось статистически достоверным падением уровня CD20+-лимфоцитов в 1,5 раза в сравнении с этим показателем до начала терапии. То есть, у больных миомой матки при использовании озонотерапии на фоне стандартного комплексного лечения была зарегистрирована нормализация относительного содержания цитотоксических CD8+-лимфоцитов и CD20+-клеток (В-лимфоциты). Необходимо отметить, что у больных раком тела матки применение озонированного физраствора приводило к нормализации другой популяции важных для реализации противоопухолевого иммунитета клеток - CD 16+, являющихся натуральными киллерами. Можно полагать, что положительный эффект применения озонотерапии у онкогинекологических больных связан с его иммунокоррегирующим действием, выражающимся в нормализации уровня различных при раке тела матки и миоме матки популяций им-мунокомпетентных клеток.
ВЫВОДЫ
При раке тела матки обнаружена нормализация повышенного уровня CD16+-клеток периферической крови при использовании озонотерапии на фоне стандартного комплексного лечения.
Введение озонированного физраствора пациентам с миомой матки, получавшим стандартное комплексное лечение, сопровождалось нормализацией повы-
шенного относительного содержания CD8+- и CD20+-лимфоцитов периферической крови.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алясова А. В. Клинико-нейрофизиологическая и нейро-иммунологическая характеристика больных раком молочной железы: Дисс. ... д-ра мед. наук. Н. Новгород, 2004. - 338 с.
2. Воробьев В. Г., Новиков В. В., Лебедева А. И. Иммунодиагностика острых лейкозов. - Н. Новгород: НГМА, 1998. - 67 c.
3. Гершанович М. Л. Осложнения химио- и гормонотерапии злокачественных новообразований. - Л., 1982. - 236 с.
4. Гречканев Г. О. Научное обоснование применения медицинского озона в комплексном лечении невынашивания беременности: Автореф. дисс. . канд. мед наук. Иваново, 1995. - 24 с.
5. Гречканев Г. О. Роль озонотерапии в профилактике и лечении осложнений химиотерапии рака яичников // Акушерство и гинекология. - 2002. - С. 57-8.
6. Добротина А. Ф., Перетягин С. П., Контор-щикова К. Н., Шакутина М. К. Влияние различных концентраций озона на метаболические показатели крови у женщин с анемией беременности // Нижегородский медицинский журнал. - 1995. - № 1. - С. 5-8.
7. Мирзоян Ж. В. Применение озона в акушерско-гинекологической практике. // Акушерство и гинекология. - 2000. - С. 45-6.
8. Новиков В. В., Добротина Н. А., Бабаев А. А. Иммунология, 2005. - С. 144-5.
9. Чередеев А. Н., Горлина Н. К., Козлов И. Г. CD-маркеры в практике клинико-диагностических лабораторий // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - № 6. - С. 27-9.
10. Vieban-Haensler R. The use of ozone in medicine. 4th English edition 2002. - P. 30-1.
Поступила 26.09.2006.
